白藜芦醇通过核因子-κB信号通路抑制脑缺血基质金属蛋白酶功能上调

目的 揭示白藜芦醇抑制脑缺血基质金属蛋白酶(MMP)-9功能上调的分子机制及其与核因子(NF)-κB信号通路联系.方法 建立大鼠四动脉前脑缺血模型,采用免疫印迹技术观察缺血后再灌海马脑区MMP-9蛋白水平和NF-κB核易位的变化;给予自由基清除剂白藜芦醇或NF-κB抑制剂吡咯二硫氨基甲酸酯(DTC),识别NF-κB信号通路是否参与了白藜芦醇对脑缺血MMP-9蛋白表达的调控.结果 脑缺血/再灌诱导海马脑区MMP-9蛋白水平和NF-κB核易位增加(P＜0.05).PDTC能一定程度的抑制缺血后MMP-9基因表达(P＜0.05).白藜芦醇能显著抑制脑缺血NF-κB核易位和MMP-9表达上调(P＜0.05).结论 脑缺血再灌,诱导MMP-9依赖NF-κB通路的蛋白水平增加,白藜芦醇能通过抑制NF-κB通路下调MMP-9的功能,继而阻断MMP-9激活介导的胞外基质降解及海马脑区损伤.     

基质金属蛋白酶-9在脑缺血过程中的双重作用

基质金属蛋白酶-9(MMP-9)是MMP家庭中的一员,可特异性降解细胞外基质。脑缺血早期(1～3d),MMP-9可通过降解基底膜及内皮细胞紧密连接破坏血脑屏障,导致继发性脑水肿和脑出血。脑缺血后期(7～14d),MMP-9则能促进神经血管再生,有利于损伤脑组织的恢复。     

脑心通胶囊对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤及MMP-2、MMP-9表达的影响

目的观察脑心通胶囊对大鼠局灶性脑缺血再灌注脑组织病理变化及MMP-2、MMP-9表达的影响，并探讨其可能的保护机制。方法建立大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型，应用HE及S-P免疫组化法分别观察模型组及用药组大鼠全脑组织的病理改变及MMP-2、MMP-9表达的变化。结果假手术组大鼠脑组织形态结构正常，MMP-2、MMP-9见少量散在阳性表达或不表达；模型组大鼠大脑缺血再灌注区组织明显水肿、蜕变、坏死伴少量炎细胞浸润，对大脑相应区及双侧小脑轻度水肿，MMP-2、MMP-9表达较假手术组对应区显著升高（P〈0．01或P〈0．05），其中缺血侧大脑以坏死区边缘脑组织表达为甚，且较对侧大脑及双侧小脑明显升高（P〈0．05）；脑心通用药组大鼠大脑缺血区组织水肿、蜕变、坏死较模型组明显减轻，对侧大脑相应区及双侧小脑脑组织形态结构正常，MMP-2、MMP-9表达较模型组对应区显著降低（P〈0．05）。结论脑心通胶囊对大鼠局灶性脑缺血再灌注后包括病灶在内的全脑损伤有保护作用，其作用机制可能与降低MMP-2、MMP-9表达有关。     

基质金属蛋白酶-9在脑缺血中的作用

基质金属蛋白酶-9（MMP-9）是参与细胞外基质降解的重要酶类。研究证实，脑缺血时MMP-9能分解细胞外基质和基底膜，破坏血脑屏障，最终导致神经元凋亡。其表达与脑缺血后血管源性脑水肿的发生、溶栓治疗后的出血性转化、脑白质降解等关系密切，在脑缺血后继发性损伤方面具有重要作用。     

尿激酶溶栓对大脑中动脉血栓栓塞模型大鼠MMP-9、血脑屏障通透性和脑出血的影响

目的 观察栓塞性脑缺血后及应用尿激酶(urokinase,UK)溶栓后基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)的表达及对脑出血量和血脑屏障通透性的影响,探讨MMP-9与血脑屏障通透性和溶栓后脑出血之间的关系.方法 通过颈动脉内注射自体血制作大鼠血栓栓塞性大脑中动脉闭摩模型,缺血6h后静脉应用UK,24 h后分别采用免疫组化法检测脑组织MMP-9表达、伊文思蓝渗出法检测血脑屏障通透性、TTC染色法检测脑梗死体积、分光光度法检测脑出血量.结果 脑缺血组MMP-9表达显著高于假手术组(P＜0.01),UK溶栓组显著高于脑缺血组(P＜0.01).脑缺血组伊文思蓝含量为(5774.00±1659.70)ng/g,显著高于假手术组的(643.33±151.34)ng/g(P＜0.01),UK溶柃组为(6283.83±1099.28)ng/g,有高于脑缺血组的趋势.UK溶柃组和脑缺血组脑出血量分别为(3.16±8.84)μl(中位数±四分位数)和(0.00±1.48)μl,脑出血发生率分别为25.00%和4.17%.结论 UK溶栓可能上调 MMP-9表达,MMP-9表达与BBB通透性增加与溶栓后脑出血有关.     

糖尿病脑梗死患者血清IL-18、MMP-9水平与脑缺血损伤的关系

目的探讨2型糖尿病脑梗死患者血清白介素18（IL-18）和基质金属蛋白酶-9（MMP-9）水平与脑缺血损伤程度的关系及作用机制。方法采用ELISA法检测2型糖尿病脑梗死患者（DMCI组）、单纯脑梗死患者（CI组）、单纯2型糖尿病患者（DM组）和正常对照者（NC组）的血清IL-18、MMP-9水平,并与空腹血糖（FPG）、神经功能缺损评分、脑梗死体积进行相关分析。结果 DMCI组患者发病24 h内血清IL-18、MMP-9水平显著高于其他三组（P均〈0.01）,且DMCI组中不同神经功能缺损程度、脑梗死体积患者之间血清IL-18、MMP-9水平差异均有统计学意义（P均〈0.01）,血清IL-18、MMP-9水平与FPG、神经功能缺损评分（卒中分值）、脑梗死体积均呈显著正相关。结论 2型糖尿病患者超负荷血糖诱导IL-18、MMP-9高表达,促进了脑缺血后的炎症反应,可能是导致其加重脑缺血损伤的机制之一。     

基质金属蛋白酶与缺血性脑损伤

动物模型研究显示,脑缺血再灌注时,基质金属蛋白酶(MMP)表达异常,提示其与脑缺血再灌注损伤有关,尤其是MMP-2、MMP-3和MMP-9,在急性缺血性脑血管病的发病机制中起着重要作用.了解MMP在脑缺血再灌注损伤中的表达、作用、影响其表达的因素及有关抗体的研究和应用,可为脑梗死的早期诊断、预防和治疗提供一种新的选择.     

金纳多对脑缺血再灌注损伤大鼠MMP-9活性和血脑屏障通透性的影响

目的探讨金纳多对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法采用线栓法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型,将成模大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组、金钠多治疗组,各组按缺血再灌注6、12、24 h三个时间点分为3个亚组,每组10只。用RT-PCR方法测定损伤侧脑组织中MMP-9活性变化,用伊文思蓝方法测定同侧脑组织血脑屏障通透性。结果 (1)随缺血再灌注时间延长,MMP-9含量、EB含量开始逐渐增加,各组之间表达差异均具有统计学意义(P<0.05)。(2)金纳多治疗组MMP-9活性及EB含量各个时间点明显低于缺血再灌注组(P<0.05)。结论金纳多通过抑制脑缺血再灌注大鼠MMP-9的活性,减轻血脑屏障通透性,可能是其发挥脑保护作用的机制之一。     

胸腺素β4对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后血脑屏障的影响

目的：观察胸腺素β4对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后血脑屏障的影响,并探讨其作用机制。方法将72只SD大鼠随机分为假手术组、对照组、胸腺素β4组各24只。采用线栓法制作大鼠大脑中动脉闭塞局灶性脑缺血再灌注模型,再灌注24 h后,采用干湿重法测定缺血脑组织含水量,通过检测伊文蓝渗透到缺血侧脑组织的含量观察血脑屏障的通透性,应用RT-PCR法检测缺血脑组织紧密连接蛋白5（ Claudin-5）和基质金属蛋白酶-9（MMP-9） mRNA表达。结果脑缺血再灌注损伤24 h后,与假手术组比较,对照组缺血侧脑含水量、伊文蓝含量、MMP-9 mRNA表达明显增加,Claudin-5 mRNA表达显著减少（ P均＜0．01）;与对照组比较,胸腺素β4组缺血侧脑组织含水量、缺血侧伊文蓝含量、MMP-9 mRNA明显降低,Claudin-5 mRNA表达明显升高（P均＜0．01）。结论胸腺素β4对大鼠脑缺血再灌注损伤后的血脑屏障具有保护作用,其作用机制可能是通过促进Claudin-5 mRNA表达和抑制MMP-9 mRNA表达实现的。     

胡黄连苷Ⅱ在大鼠脑缺血损伤中治疗剂量和时间窗的优化

目的探讨胡黄连苷Ⅱ治疗大鼠脑缺血损伤的最佳治疗剂量和时间窗。方法应用双侧颈总动脉结扎法建立大鼠脑缺血模型,将48只大鼠模型,按二因素四水平[L16(45)]正交试验设计分组。治疗时间窗设定缺血1.0、1.5、2.0、2.5 h,共4个水平,治疗剂量设定5、10、20、40 mg/kg共4个水平。按照设定剂量经腹腔注射胡黄连苷Ⅱ干预治疗,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清和脑组织水通道蛋白4(AQP-4)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)和环氧合酶2(COX-2)的水平,评价胡黄连苷Ⅱ治疗大鼠脑缺血损伤的疗效。结果①根据血清和脑组织AQP-4水平分析结果,胡黄连苷Ⅱ治疗脑缺血损伤的最佳治疗时间窗和剂量分别为脑缺血2.0 h,腹腔注射20 mg/kg;脑缺血1.5 h,腹腔注射20 mg/kg。②根据血清和脑组织MMP-9水平分析结果,最佳治疗时间窗和剂量分别为脑缺血1.5 h,腹腔注射20 mg/kg;脑缺血2.0 h,腹腔注射20 mg/kg。③根据血清和脑组织COX-2水平分析结果,最佳治疗时间窗和剂量分别为脑缺血1.5 h,腹腔注射10 mg/kg;脑缺血1.5 h,腹腔注射20 mg/kg。结论根据用药剂量最小化和治疗时间窗最大化的原则综合评价,根据AQP-4、MMP-9、COX-2测定结果,胡黄连苷Ⅱ治疗脑缺血损伤的最佳治疗时间窗和剂量为脑缺血1.5～2.0 h,腹腔注射剂量10～20 mg/kg。     

健脾补土法对大鼠脑缺血再灌注后层黏连蛋白降解的影响

目的探讨健脾补土法对大鼠脑缺血再灌注后神经细胞周围层黏连蛋白(LN)的降解机制及其脑保护作用。方法 38只大鼠随机分为:假手术组8只,模型组10只,健脾补土传统汤剂组10只,健脾补土超微剂型组10只,大脑中动脉栓塞再通法建立脑缺血再灌注模型。进行神经功能症状评分,脑组织病理形态学观察,采用TUNEL法检测凋亡神经元,免疫组织化学法检测LN和基质金属蛋白酶9(MMP-9)阳性表达。结果与假手术组比较,模型组神经功能症状评分、细胞凋亡指数、MMP-9阳性细胞表达数明显升高,LN表达明显降低(P0.01)。与模型组比较,健脾补土传统汤剂组和健脾补土超微剂型组神经功能症状评分、细胞凋亡指数、MMP-9阳性细胞表达数明显降低,LN表达明显升高(P0.05,P0.01)。结论 LN降解在脑缺血再灌注损伤中起重要作用,健脾补土法可能通过抑制MMP-9和减少LN降解减轻缺血再灌注所致神经元损伤。     

缺血预处理对大鼠脑缺血再灌注损伤的抑制作用

目的观察缺血预处理在大鼠脑缺血再灌注模型中对核因子(NF)-κB、基质金属蛋白酶(MMP)-9表达的影响。方法将60只健康雄性大鼠平均分为3个实验组(n=20):假手术(SH)组、缺血再灌注(IR)组及缺血预处理+缺血再灌注(IP)组,相应处理后,予行为学评分,得到的标本组织通过免疫组化、蛋白质印迹法分析大鼠海马组织中NF-κB、MMP-9的表达差异。结果 SH组神经功能评分正常,少见NF-κB、MMP-9的表达;IR组较SH组神经功能学评分及NF-κB和MMP-9的表达均显著升高(P0.01);IP组神经功能学评分及NF-κB、MMP-9表达较IR组显著降低(P0.01)。结论缺血预处理可以抑制大鼠NF-κB、MMP-9的表达抑制细胞外基质破坏起到减轻脑缺血再灌注损伤的作用,从而发挥其脑保护功能。     

高脂血症对脑缺血大鼠模型脑皮质MMP-2表达和神经元凋亡的影响

目的 探讨高脂血症病理条件对脑缺血大鼠脑皮质MMP-2和神经元凋亡的影响.方法 线栓法建立大鼠大脑中动脉缺血模型(MCAO),免疫组化法检测大鼠脑皮质缺血边缘区MMP-2、Bcl-2和Bax的表达.结果 与正常及假手术组相比,MMP-2在单纯脑缺血组、高脂血症组和复合脑缺血组的表达显著增多(P＜0.05);与高脂血症及高脂血症假手术相比,复合脑缺血组的MMP-2的表达也是明显增多的(P＜0.05),且MMP-2在复合脑缺血7d组的表达显著高于在单纯脑缺血组的表达.Bcl-2、Bax在伴有脑缺血模型各时间点均有高表达,复合脑缺血组和单纯脑缺血组与相应假手术组组内比较,差异显著(P＜0.05);复合脑缺血组与单纯脑缺血组比较,表达下降,缺血后3、7d组间差异显著(P＜0.05);Bcl-2/Bax比值升高,在缺血后7d组间差异显著(P＜0.05).结论 高脂血症的病理基础条件下,MMP-2表达的增加可能对脑缺血后神经元有修复和保护作用.     

脑缺血预处理对脑缺血再灌注大鼠血脑屏障通透性和基质金属蛋白酶-9表达的影响

目的 探讨脑缺血预处理(ischemic preconditioning,IP)对脑缺血再灌注大鼠血脑屏障通透性和基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)表达的影响.方法 154只Wistar大鼠随机分为假手术组(14只)、非缺血预处理(non-ischemic preconditioning,NIP)组(70只)和IP组(70只),后两组再随机分为5个亚组,每组14只.线栓法建立大脑中动脉闭塞模型,缺血预处理10 min,分别在IP后1、3、7、14和21 d进行再次缺血2 h再灌注22 h.采用2,3,5-氯化三苯基四氮唑(2,3,5-triphenyltetrazolium chloride,TTC)染色测定脑梗死体积,通过测定渗出血管外的伊文思蓝(Evans blue,EB)含量评价血脑屏障通透性,采用于湿重法评价脑水肿程度,免疫组化染色和原位杂交法检测MMP-9蛋白和mRNA表达.结果 与NIP组相应亚组比较,IP组缺血预处理1、3和7 d亚组神经功能缺损评分显著降低,脑梗死体积显著缩小,EB含量和脑水含量显著降低,MMP-9蛋白和mRNA表达均显著下调(P＜0.05或P＜0.01).IP组1、3和7 d亚组梗死体积和MMP-9 mRNA表达较IP组14 d和21 d亚组显著缩小或下调,3 d和7 d亚组EB含量、脑水含量和MMP-9蛋白表达较其他亚组显著降低,其中以3 d亚组降低最显著(P＜0.05).结论 缺血预处理诱导的血脑屏障通透性改变和MMP-9表达下调在脑缺血耐受中发挥着重要作用.     

脑溢安对脑缺血大鼠脑组织MMP-2，9表达的影响

目的 观察脑溢安对脑缺血大鼠脑组织的基质金属蛋白酶(MMPs)表达的影响.方法 采用大脑中动脉线栓法制备脑缺血再灌注模型,参考Longa5分制法在动物麻醉清醒后进行评分,免疫组化染色检测脑组织MMP-2,9蛋白的表达.结果 脑缺血组大鼠伤侧脑组织基质金属蛋白酶(MMP-2,9)的表达水平明显高于假手术组(P<0.05).治疗组基质金属蛋白酶(MMP-2,9)的表达水平明显低于脑缺血组(P<0.05).结论 脑溢安能抑制大鼠脑缺血再灌注后脑组织中MMP-2,9蛋白表达,减轻缺血再灌注损伤.     

高血压对脑缺血再灌注后大鼠脑组织中MMP-2、MMP-9表达的影响

用肾血管性高血压大鼠（RHR,A组）和正常血压SD大鼠（B组）复制大脑中动脉缺血模型,分别于大脑中动脉缺血3h（A2、B2组）、6h（A3、B3组）后再灌注,1d后处死,假手术组（A1、B1组）不阻塞大脑中动脉。常规病理检查,并应用免疫组织化学和原位杂交方法检测脑组织中的基质金属蛋白酶（MMP）-2、MMP-9蛋白及其mRNA。结果显示,A组存在脑血管的基础病理损害,小动脉透明变性,偶有微动脉瘤形成,缺血再灌注后多见红细胞漏出,在A1组出现了MMP-2和MMP-9的阳性表达。脑缺血再灌注后,各组MMP-2和MMP-9均表达增加,不同血压和缺血时间对MMP-2表达无明显影响,A3组MMP-9和A组MMP-9mRNA、MMP-2mRNA的表达均较相应B组明显增加（P〈0.05）,且随缺血时间延长,A组MMP-9mRNA的表达明显增加（P〈0.05）。认为高血压可以造成对脑血管的基础损伤并引起脑组织MMP-2和MMP-9的表达,在缺血再灌注后高血压可以增加MMP-9和MMP-9mRNA、MMP-2mRNA的表达,这可能是高血压引起血管再通后出血和损伤的机制。     

MMP-9与短暂性脑缺血发作演变为脑梗死的相关性

目的分析血浆基质金属蛋白酶-9（MMP-9）与短暂性脑缺血发作（TIA）演变为脑梗死的相关性，探讨rrJA演变为脑梗死的可能机制。方法采集96例，TIA患者的临床资料及血标本，采用双抗夹心酶联免疫吸附法测定血浆MMP-9水平，收集常规实验室指标如凝血指标、血常规、血糖、血脂、肌酐等，分析血浆MMP-9、相关实验室指标与TIA演变为脑梗死的相关性。结果96例患者中发生脑梗死15例，发生率15．63％。发生脑梗死者与未发生脑梗死者的MMP-9水平有统计学差异（P=0．009）。相关性分析显示，MMP-9与TIA演变为脑梗死呈显著正相关（OR=12．093，P=0．032）。结论MMP-9是TIA发展为脑梗死的独立危险因素，其水平升高可作为TIA近期卒中风险的预测指标。     

丁苯酞对脑缺血再灌注损伤大鼠血脑屏障的影响

目的探讨丁苯酞对脑缺血再灌注损伤大鼠血脑屏障的保护作用机制。方法 72只雄性成年SD大鼠随机分为假手术组、模型组、治疗组(丁苯酞80mg/kg),每组24只。模型组和治疗组采用线栓法制作脑缺血再灌注损伤模型,缺血2h、再灌注24h,测定脑组织含水量和伊文思蓝(EB)含量,透射电镜下观察血脑屏障病理形态学变化,实时荧光定量PCR法检测基质金属蛋白9(MMP-9)及基质金属蛋白酶组织抑制因子1(TIMP-1)mRNA表达的变化。结果与假手术组比较,模型组脑组织含水量明显增多[(79.14±1.65)%vs(73.06±0.68)%,P<0.01],EB含量明显增加[(9.45±0.94)μg/g vs(3.45±0.45)μg/g,P<0.01],MMP-9mRNA表达上调,TIMP-1mRNA表达少量增加(P<0.01);与模型组比较,治疗组脑组织含水量明显减轻,EB含量显著减少,血脑屏障损伤减轻,MMP-9mRNA表达下调,TIMP-1mRNA表达上调(P<0.01)。结论丁苯酞可减轻脑缺血再灌注损伤大鼠血脑屏障损伤程度,可能与调整MMP-9/TIMP-1的表达有关。     

东菱克栓酶对大鼠脑缺血再灌注损伤后基质金属蛋白酶-9表达的影响

目的探讨东菱克栓酶(DF-521)对大鼠脑缺血再灌注损伤后脑组织基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的影响。方法雄性Wistar大鼠随机分为假手术组、模型组及DF-521低(4 BU/kg)、中(8 BU/kg)、高(16 BU/kg)剂量组,用线栓法建立大鼠局灶性脑缺血再灌注模型。观察再灌注48 h后脑梗死的面积,通过HE染色观察脑组织病理学改变,通过免疫组化法观察MMP-9的表达情况。结果 DF-521高剂量及中剂量组大鼠脑组织正常细胞较模型组明显增多,仅少数细胞出现核固缩样改变。与模型组比较,DF-521高剂量及中剂量组的脑梗死面积明显减少(P<0.01;P<0.05),MMP-9的表达量明显降低(P<0.01;P<0.05),且DF-521高剂量组效果较低剂量组更明显(P<0.05)。结论 DF-521能明显减少缺血再灌注损伤大鼠脑组织病理损伤及梗死面积,降低MMP-9的表达,减轻脑损伤,其效应具有剂量依赖性。     

脑梗死患者血清MMP-9与颈动脉粥样硬化斑块稳定性的关系

目的研究脑梗死患者血清基质金属蛋白酶-9(MMP-9)水平及颈动脉粥样硬化斑块,探讨颈动脉粥样硬化斑块稳定性与MMP-9水平的关系。方法对82例颈内动脉系统的急性脑梗死患者(CI组)及20例短暂性脑缺血发作患者(TIA组)通过彩色多普勒超声检查颈动脉粥样硬化斑块,同时检测患者血清MMP-9水平,并与健康对照组(40名)比较。根据斑块性质将CI组分为不稳定斑块组、稳定斑块组及无斑块组三个亚组,再进行组内比较。结果 CI组、TIA组斑块检出率、不稳定斑块率及血清MMP-9水平均明显高于对照组(P<0.05);脑梗死不稳定斑块组MMP-9水平又显著高于稳定斑块组,稳定斑块组较无斑块者明显增高(P<0.05)。结论颈动脉粥样硬化斑块及其稳定性与脑梗死发生有密切关系,MMP-9可能是不稳定性粥样硬化斑块及脑梗死的一个潜在的血清标志物。