凝胶色谱法在中药多糖纯化及成分分析中的应用研究进展

全面总结凝胶色谱法在多糖分离纯化及分析中的研究进展,介绍目前用于纯化多糖的凝胶色谱法。其中葡聚糖凝胶色谱法和丙烯酰胺凝胶色谱法在多糖的纯化中应用广泛,高效凝胶渗透色谱法和其他技术的联用在测定多糖的相对分子质量及其分布上具有较好的应用前景。     

寡糖分离纯化和鉴定方法的研究进展

寡糖作为近年来备受关注的中药活性成分之一，具有广泛的药理活性和开发应用前景。寡糖种类多样、组成复杂，存在多种异构体，分离纯化和结构鉴定存在较大难度。采用文献分析法，系统梳理了近20年有关寡糖研究的相关文献，归纳了寡糖分离纯化的主要方法，包括色谱法（凝胶色谱法、离子交换色谱法、反相高效液相色谱法、活性炭色谱法、石墨化碳色谱法、亲水作用色谱法）、毛细管电泳法、膜分离技术等，以及寡糖结构鉴定的主要方法，包括紫外光谱法、红外光谱法、核磁共振波谱法、质谱法、色谱法、色谱-质谱联用技术等，并分析了这些方法的适用范围和发展趋势。     

枳壳均一多糖CALB-2结构表征及生物活性

目的:从枳壳中分离纯化枳壳均一多糖CALB-2,并对其进行结构分析、形态表征及生物活性的研究。方法:采用热水提取法从中药枳壳中提取枳壳粗多糖(CALB),经阴阳离子交换树脂、离子交换琼脂糖凝胶以及丙烯葡聚糖凝胶等分离纯化技术得到枳壳均一多糖CALB-2;利用高效液相色谱法(HPLC)测定CALB-2的相对分子质量,采用甲基化分析和Smith降解对CALB-2进行单糖组成分析,通过红外光谱扫描(IR)分析和电镜扫描技术(SEM)对CALB-2进行结构分析及形态表征,并通过H2O2诱导心肌细胞氧化损伤模型对CALB-2抗氧化活性进行研究。结果:经HPLC测定CALB-2为均一多糖,其相对分子质量为3. 57×107Da。综合运用IR光谱分析、甲基化分析和Smith降解得到CALB-2为多支结构的酸性多糖,且主要以1→3,4键型存在。分子形态考察结果显示CALB-2为非晶态固体。体外活性结果表明CALB-2可明显减缓H2O2所致心肌细胞的氧化损伤作用。结论:枳壳多糖CALB-2为多支结构的均一酸性多糖,且具有一定抗心肌细胞氧化损伤的作用,以上发现为枳壳多糖进一步地深入研究奠定了理论基础。     

竹节参化学成分、药理活性及分析方法研究进展

对关于竹节参的化学成分、药理活性及分析方法的文献进行了归纳和总结。竹节参主要化学成分为三萜皂苷,其中齐墩果烷型皂苷含量最高;药理活性包括对中枢神经系统、消化系统、心脑血管系统以及免疫系统等方面的作用;分析方法研究主要为薄层色谱法、紫外分光光度法以及高效液相色谱法等。     

积雪草中降血糖多糖的研究

 目的研究中药积雪草(Centellaasiatica)全草中的降血糖活性多糖组分。方法采用DEAE-纤维素柱色谱和凝胶渗透色谱进行分离纯化,化学及光谱方法进行结构分析,并进行免疫及降血糖药理活性测试。结果积雪草多糖组分S5X相对分子质量为1.17×10⁵,含阿拉伯糖、半乳糖、木糖、葡萄糖以及半乳糖醛酸、葡萄糖醛酸等残基,是一个结构复杂的含肽的多糖组分,具有一定免疫和降血糖活性。结论S5X首次从该植物分得的杂多糖,具有降血糖作用。     

黄芪多糖的组成分析

目的:为了对黄芪多糖的种类和相对分子质量的分布情况有一个大致的了解。方法:本实验通过高效凝胶渗透色谱技术和乙醇分级法,分析了黄芪多糖相对分子质量的分布情况。结果:黄芪多糖按照相对分子质量分布,明显分成2部分。结论:黄芪多糖低相对分子质量部分是一个纯度很高的多糖,具有一定的开发价值。     

丹参多糖的组成分析

目的:了解丹参多糖种类和相对分子质量的分布情况。方法:通过高效凝胶渗透色谱技术,分析了丹参多糖相对分子质量的分布情况。结果:丹参多糖按照相对分子质量分布,明显分成两部分。结论:丹参多糖低相对分子质量部分是一个纯度很高的多糖,具有一定的开发价值。     

白花蛇舌草总多糖的分离纯化、结构鉴定及初步免疫活性分析

目的:分离纯化白花蛇舌草总多糖,研究其对环磷酰胺致免疫低下小鼠的免疫增强活性。方法:采用超滤技术分离纯化白花蛇舌草总多糖,高效凝胶渗透色谱-示差检测器方法测定相对分子质量,柱前衍生化HPLC分析其单糖组成;采用环磷酰胺致免疫低下小鼠碳粒廓清试验研究其免疫活性。结果:从白花蛇舌草中分离得到1个单一多糖组分ODP-1,其相对分子质量20.88 k Da,单糖组成为甘露糖-鼠李糖-半乳糖醛酸-葡萄糖-半乳糖-阿拉伯糖,摩尔比0.005∶0.033∶0.575∶1.000∶0.144∶0.143;免疫活性试验结果表明,ODP-1可升高环磷酰胺致免疫低下小鼠廓清指数、吞噬指数、胸腺指数和脾指数。结论:白花蛇舌草多糖ODP-1为均一多糖,具有免疫增强活性。     

白茅根多糖IC1的分离及其相对分子质量和单糖组成的测定

目的:分离纯化白茅根多糖,建立白茅根多糖相对分子质量的测定方法,并通过高效液相色谱法测定其单糖组成和摩尔比.方法:通过多次醇沉的方法对白茅根多糖进行分离纯化,得到白茅根多糖IC1;采用高效液相色谱法,以右旋糖酐为标样,绘制多糖分子量的标准曲线,测定白茅根多糖IC1的相对分子质量;通过酸水解,使IC1水解成单糖,分析这些单糖的组成及其摩尔比.结果:经测定,白茅根多糖IC1的相对分子质量为8 292.2;白茅根多糖IC1由鼠李糖,木糖,果糖,甘露糖,葡萄糖5种单糖组成,其摩尔比为1∶11.45∶1.26∶1.02∶59.23.结论:多次醇沉的方法对白茅根多糖进行分离,效果良好,操作简便.高效液相法测定白茅根多糖分子质量及单糖组成灵敏度高,重复性好.     

SE-HPLC测定刺糖多糖相对分子质量及纯度

目的建立高效液相凝胶色谱法(SE-HPLC)测定刺糖多糖相对分子质量和纯度的方法;分析刺糖多糖的相对分子质量分布及并进行含量测定。方法采用水提醇沉法及AB-8大孔吸附树脂和DEAE Sepharose CL-6B阴离子交换树脂分离纯化不同相对分子质量的多糖组分,用TSK-GEL G4000PWXL,7.8mm×300mm色谱柱,2414示差折光检测器,测定其相对分子质量分布和纯度。结果得到刺糖多糖组分AP2-4,其多糖相对分子质量为4.9×10~4,纯度含量为(93±3)%;相对分子质量分布:重均分子量(M_r)为4.973 3;数均分子量(M_n)为4.951 8;峰值分子量(M_p)为6.311 2,4.873 2;多分散度(D)为1.0043。结论建立了简便、快捷、精密度高的凝胶色谱柱方法,可较准确地测定刺糖多糖的纯度和相对分子质量分布。     

五倍子多糖相对分子质量和单糖组成的测定

目的:研究五倍子多糖精细组分的相对分子质量、单糖组成。方法:五倍子多糖经提取纯化后得到GCP-1,GCP-2和GCP-3 3种精细组分。用高效凝胶渗透色谱(HPGPC)分析其相对分子质量;采用三氟乙酸(TFA)水解和1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)柱前衍生化的高效液相色谱(HPLC)分析其单糖组成。结果:HPGPC试验结果显示,GCP-1,GCP-2,GCP-3的相对分子质量分别为182,2.1×10~4,6×10~4;单糖组成试验表明,GCP-2和GCP-3的单糖组成类型基本一致,主要为半乳糖、半乳糖醛酸、葡萄糖醛酸等。结论:用HPGPC和PMP柱前衍生法测得五倍子多糖精细组分的相对分子质量和单糖组成,方法简便可行,可用于五倍子多糖的研究。     

黄芪多糖在体内代谢形式研究

目的:以黄芪多糖为研究对象,研究其通过口服给药后在动物体内的代谢形式。方法:采用醇沉试验和斐林反应等化学鉴别法和高效凝胶渗透色谱法鉴定黄芪多糖在SD大鼠体内的代谢形式。结果:黄芪多糖体内代谢物醇沉试验为阴性,表明未检测到多糖;斐林试剂反应为阳性,表明在含药血清样品中可检测到多糖代谢物。高效凝胶色谱法测定黄芪多糖体内代谢物分子量与单糖标准品基本一致。结论:黄芪多糖经口服后在动物体内分解为单糖或低聚糖。     

不同来源、不同等级猪苓饮片中总多糖的含量测定

目的:建立猪苓饮片总多糖的含量测定方法,分析不同来源、不同等级猪苓饮片中的总多糖含量,为制定猪苓饮片含量限度及饮片商品等级划分标准提供参考依据。方法:采用高效凝胶色谱法-示差折光-多角度激光检测器联用技术测定猪苓多糖的相对分子质量及其分布情况,选择与总多糖相对分子质量相近的葡聚糖为对照品,采用正交试验和单因素试验优化猪苓总多糖含量测定的前处理条件,采用蒽酮-硫酸显色法,在630 nm处测定13批不同产地猪苓饮片和39批不同等级猪苓饮片中总多糖的含量。结果:含量测定方法学考察的线性关系、稳定性、精密度、重复性及加样回收率结果均符合要求。不同产地猪苓饮片中总多糖的质量分数在0. 87%～1. 39%。不同等级猪苓饮片中总多糖质量分数为一等饮片1. 40%,二等饮片1. 21%,三等饮片1. 03%。结论:建立的含量测定方法灵敏度高、重复性好,可用于猪苓饮片的总多糖含量测定。不同来源的猪苓饮片总多糖含量有一定差异。不同等级猪苓饮片总多糖含量呈现一定的规律性,一等饮片中总多糖含量最高,二等饮片总多糖含量次之,三等饮片总多糖含量最低,对于制定猪苓饮片含量限度及饮片商品等级划分标准具有重要参考价值。     

北豆根多糖的单糖组成分析及分子量研究

目的:分析北豆根多糖的单糖组成及分子量。方法:采用水提醇沉获得北豆根粗多糖,用TCA-正丁醇除蛋白后得到北豆根多糖样品,采用气相色谱法(GC)测定其单糖组成,高效凝胶渗透色谱法(HPGPC)测分子量。结果:北豆根多糖是由D-阿拉伯糖(D-Ara)、L-岩藻糖(L-Fuc)、D-甘露糖(D-Man)、D-葡萄糖(D-Glc)和D-半乳糖(D-Gal)组成,其摩尔比为13.04∶1.00∶1.69∶8.99∶4.32,重均分子量为4826。结论:用GC和HPGPC可以测得北豆根多糖的单糖组成和分子量,方法简便可行,可以用于北豆根多糖的研究,为北豆根多糖的深入研究奠定基础。     

柱前衍生HPLC分析黄连多糖的单糖组成

目的:建立柱前衍生HPLC测定黄连多糖中的单糖组成,并分析3种黄连多糖的单糖差异。方法:采用水提醇沉法提取黄连多糖,经硫酸水解后,用1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)柱前衍生,再利用HPLC法分析单糖的PMP衍生物。结果:黄连多糖主要由甘露糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖7种单糖组成,其中半乳糖醛酸含量最高,葡萄糖次之。另外,雅连多糖、云连多糖和味连多糖中的7种单糖的平均摩尔比分别为1∶2.34∶0.38∶17.58∶12.40∶6.11∶5.93,1∶2.43∶0.25∶16.76∶15.18∶6.51∶9.78和1∶3.25∶0.40∶22.35∶12.96∶6.66∶10.28。结论:建立的方法简便、准确,重复性好,可用于黄连多糖中单糖的组成分析和含量测定。雅连多糖、云连多糖和味连多糖中的7种单糖含量有差异。     

当归多糖组分的高效液相色谱分析

 目的：分析当归多糖AP-Ⅰ,AP-Ⅱ,AP-Ⅲ,AP-Ⅳ各组分的重均相对分子质量分布及其电荷特性;探讨多糖类生物大分子的组效关系研究方法。方法：采用高效凝胶过滤色谱法、阴离子交换色谱法、二极管阵列检测器进行检测;改良苯酚-硫酸法测定糖分部;Serva Blue-G 染料结合法测定蛋白质分部。结果：当归多糖AP-Ⅰ,AP-Ⅱ,AP-Ⅲ,AP-Ⅳ分别由4～5个具有不同重均相对分子质量分布及电荷特性的多糖组分组成;4种多糖中还分别含有一定量的游离或结合蛋白质。结论：当归多糖AP-Ⅰ,AP-Ⅱ,AP-Ⅲ,AP-Ⅳ为组成成分不同的多糖;该方法可为多糖组效关系研究提供简便、实用的分析方法。     

三七多糖的含量测定方法及不同部位多糖的含量变化研究

目的:建立三七多糖的检测方法,分析测定三七茎叶、筋条、花和剪口的多糖含量,为三七的质量评价提供依据.方法:用80％乙醇提取还原性糖,然后用水提取三七多糖,采用蒽酮-硫酸比色法于528 nm波长处用分光光度法测定多糖的含量.结果:三七不同部位中多糖含量有明显差异,三七筋条中多糖含量最高,三七茎叶中多糖含量最低.结论:所用含量检测方法简便、快速、准确,可用于不同部位三七多糖的质量检测和控制,三七筋条、花、茎叶和剪口都有一定的多糖开发价值.     

荧光凝胶色谱法测定大鼠单次口服麦冬多糖MDG-1排泄变化

目的:探讨单次口服麦冬多糖MDG-1后排泄量的变化.方法:采用异硫氰酸荧光素(FITC)对麦冬多糖MDG-1进行标记( F-MDG-1),测定取代度.采用高效凝胶色谱法(HPGPC)对粪便及尿液内MDG-1含量进行测定.SD-雄性大鼠,给药组按照300 mg· kg-给予F-MDG-1,空白组给予纯水,分别在0,4,12,24,48,72 h收集尿液及粪便.测定含量.结果:在单次给予F-MDG-1量300 mg· kg-1后,尿液中含量测定在12 h时达到最大排泄量0.808 7 mg,而后逐渐减少,至72 h最低0.105 3 mg;在粪便测定中在12h达到最大排泄量为21.332 4 mg,而后逐渐减少,至72 h最低0.506 5 mg.结论:采用FITC对MDG-1进行标记,并采用荧光色谱法对MDG-1在排泄物内的含量变化进行研究是可行的.MDG-1基本不被人体吸收,其主要经粪便排泄.