羊膜联合自体穹隆结膜移植治疗睑球粘连的实验研究

目的 通过动物实验研究羊膜移植联合对侧健眼穹隆部结膜移植治疗单眼重症化学烧伤所致睑球粘连的疗效。方法 将两组实验动物家兔单眼制成重度碱烧伤模型。实验组患眼施行角膜缘自体移植，羊膜移植联合对侧健眼穹隆部结膜移植，对照组患眼仅施行角膜缘自体移植，羊膜移植，于术前，碱烧伤后1个月，术后3个月分别行眼表面印痕细胞学检查和病理学检查。结果 实验组睑球粘连缓解明显优于对照组，睑球粘连缓解病例术后3个月羊膜表面皆有上皮细胞长入。结论 羊膜移植联合对侧健眼穹隆部结膜移植对睑球粘连及大面积结膜缺损有效。且优于单纯羊膜移植。     

羊膜移植术治疗兔重度角结膜碱烧伤后遗血管性角膜白斑

目的探讨羊膜移植术在重建眼表面、治疗重度角结膜碱烧伤后遗血管性角膜白斑的作用。方法采用甘油保存的人羊膜移植术治疗兔重度角结膜碱烧伤后遗血管性角膜白斑１０例（１０眼）。结果４例羊膜上皮面朝上者，术后１５～２０ｄ角膜表面上皮被覆完整，３０ｄ病理显示结膜上皮向角膜上皮转化；５例朝下和１例羊膜水肿者，术后羊膜被破坏，眼表面重建失败。结论羊膜移植术可用于重度角结膜碱烧伤晚期眼表面重建，支持羊膜无抗原性、有助于角膜上皮形成的观点     

羊膜移植术在严重眼部碱烧伤中的临床应用

目的 评价羊膜移植术治疗严重眼部碱烧伤的效果。方法 采用羊膜移植术治疗严重眼部碱烧伤23例29眼。结果 29眼中25眼重建成功，术后羊膜固定好，角膜局部炎症减轻，角结膜逐渐愈合。4眼术后4～10天内出现羊膜脱落、融解。结论 羊膜移植术可以使碱烧伤的角结膜创面迅速上皮化，控制角膜的进一步环死和融解，减少新生血管的形成，但对角膜水肿、浑浊严重的病例，羊膜移植术的效果欠佳。     

羊膜移植术治疗严重眼表碱烧伤

目的 观察羊膜移植术对治疗严重眼表碱烧伤的临床疗效。方法 对10例严重角膜碱烧伤患者，根据不同病情施行新鲜羊膜和保存羊膜材料移植治疗，并通过观察患者术后视功能情况及眼表的完整性来评价疗效。结果 羊膜移植术重建活动期眼表碱烧伤可促进眼表上皮快速愈合，防止持续性上皮缺损和角膜基质坏死发生。抑制新生血管形成，避免睑球粘连。结论 羊膜移植术对治疗严重的眼表碱烧伤有较好的疗效。     

重度眼部碱烧伤早期多次羊膜移植治疗疗效分析

目的 探讨重度眼部碱烧伤早期多次羊膜移植的适应证及治疗效果.方法 回顾性分析我院2004年7月至2007年5月20例(24只眼)重度眼部碱烧伤患者早期采用两次及以上羊膜移植治疗效果.术后对眼表稳定情况、上皮愈合情况及新生血管、视力等进行观察随访.进一步探讨重度眼部碱烧伤早期羊膜移植的次数及适应证.结果 20例(24只眼)患者中,9只眼在行2次羊膜移植术后7-14 d之间羊膜开始溶解,拆线后羊膜脱落.眼表炎症基本控制,荧光素钠染色角膜上皮完整.角膜缘缺血基本改善.11只眼2次羊膜术后表现为角膜上皮未愈合,直径大于3 mm以上,角膜缘缺血大于1/4象限,再行第3次移植,3只眼行4次羊膜移植,1只眼行5次羊膜移植.其中2只眼在行2次羊膜移植后,3只眼分别在3、4、5次羊膜移植后上皮仍缺损,且眼睑部分缺损,球结膜缺血明显,故给予永久性睑裂缝合术;各有2只眼在行第3、4、5次羊膜移植时发现角膜基质已出现自溶,故及时改为板层角膜移植术;1只眼行3次羊膜移植时,角膜基质自溶且溃疡在角膜周边,故改为结膜瓣遮盖术.结论 重度眼部碱烧伤早期应积极采取羊膜移植进行治疗,多次羊膜移植对早期眼表的稳定十分有效,但应密切观察,防止盲目多次羊膜移植下的角膜溃疡扩大和穿孔的发生.     

羊膜移植术在碱烧伤急性期重建结膜表面的实验研究

目的:(1)研究羊膜移植在治疗兔眼大面积结膜碱烧伤,重建健康结膜表面中的作用.(2)探讨碱烧伤急性期施行羊膜移植术的可行性.方法:选用30只家兔,制作角膜缘上方球结膜至穹隆部的碱烧伤的动物模型.实验组于碱烧伤后1wk时(急性期)行保存的人羊膜移植术及穹隆成形术.术后1,2,3,4,8,12wk时做光镜观察移植部位的结膜上皮生长情况,并于术后1,4,8wk时取移植区结膜做电镜观察其超微结构,同时与碱烧伤后行结膜下注射维生素C及应用抗生素眼药水点眼治疗的对照组结膜作对照观察.并在上述相应时期摄眼外观像、做上角膜缘至上方穹隆部宽度的测量.结果:(1)羊膜移植术后1wk时,光镜、电镜可见羊膜上有结膜上皮细胞长入,4wk时,含有杯状细胞的结膜上皮完全覆盖羊膜,接近于正常的结膜组织,12wk时,羊膜上结膜上皮细胞排列整齐,穹隆部结膜上皮下纤维结缔组织较为疏松,无增生.而对照组1wk时见结膜上皮细胞坏死脱落,未见有含杯状细胞的结膜上皮长入,4～8 wk时所见为大量纤维结缔组织增生,伴炎性细胞浸润.12wk时,穹隆部纤维结缔组织增生明显,未见有正常结膜上皮覆盖.(2)外观眼表可见,12wk时实验组移植区结膜光滑无瘢痕,上穹隆形成良好,穹隆深达7.6～8.2 mm,接近正常穹隆深度8.0～8.5 mm.而对照组结膜表面不光滑,有结膜肉芽肿形成,瘢痕增生明显,上方穹隆明显变浅,穹隆深度为1.0～4.5 mm.结论:以甘油保存的羊膜可作为一种底物载体,提供健康的基底膜,有利于周围正常结膜上皮的粘附、移行和分化,进而重建正常结膜表面.结膜碱烧伤后早期行羊膜移植可重建正常结膜表面,有效地防止睑球粘连的发生.     

深低温保存人羊膜移植兔眼结膜重建后的组织学改变

目的：探讨深低温保存羊膜移植修复兔眼结膜缺损术后的组织学变化。方法：取12只新西兰白兔,做右眼结膜缺损模型,然后进行深低温保存的羊膜移植。在术后1周,3周,5周,12周分别处死动物取材,取术区标本（包括植片和植床）进行组织学检查,包括HE染色和PAS染色,并对术后12周的术区标本进行透射电镜检查。结果：所有术眼外观均生长良好,无植片脱落、溶解、瘢痕化或睑球粘连。术后1周,羊膜植片的死亡上皮细胞覆盖基底膜;术后3周植片原有的上皮被小而圆的结膜上皮细胞替代,有杯状细胞分化,复层或单层分布,羊膜开始溶解;术后5周结膜上皮细胞分化良好,术后12周羊膜溶解消失。透射电镜所见：术后12周上皮细胞分层排列良好,细胞内含丰富的线粒体和粗面内质网,表层细胞有大量微绒毛,细胞之间有丰富的桥粒,基底膜完整,细胞与基底膜之间见半桥粒结构。结论：深低温保存的羊膜移植修复结膜术后,不仅外观良好,而且组织结构与正常结膜一致。因此,深低温保存羊膜是一种有应用价值的结膜替代物。     

兔角膜碱烧伤新鲜羊膜移植后的角膜病理学及超微结构观察

目的观察兔角膜碱烧伤立即行新鲜羊膜移植后的角膜病理学和超微结构变化。方法40只新西兰白兔中随机取4只作为正常对照组,剩余36只制作双眼碱烧伤模型,右眼立即行新鲜羊膜移植术,左眼不做羊膜移植。分别在术后7、14、28d取材分别行HE染色和透射电镜观察。结果光镜、电镜结果显示:羊膜移植组与未移植组相比,上皮愈合好,基质纤维排列整齐,炎细胞浸润轻,新生血管少。结论兔角膜碱烧伤急性期行新鲜羊膜移植可以减少炎症反应、促进角膜上皮愈合、减轻角膜瘢痕形成、减少角膜新生血管形成。     

羊膜移植在眼表疾病的临床应用

目的 探讨和评估新鲜羊膜移植治疗眼表疾病的疗效.方法 对结膜肿物,睑球粘连,碱烧伤,酸烧伤,热灼伤共24例(28眼)施行新鲜羊膜移植术,术后观察眼表重建情况,羊膜植片情况,术后视力情况,随访4-18个月.结果 24例(28眼)均未发生新鲜羊膜植片的排斥反应.2 5眼一次羊膜移植术后结膜、角膜上皮化痊愈,眼表重建成功.睑球粘连的患者第三眼位复视消失.1眼发生睑球粘连,2眼角膜部分上皮缺损,再次行羊膜覆盖术,术后随访完成上皮化,术后视力不同程度提高.结论 新鲜羊膜移植能有效的促进上皮细胞的分化移行、抑制局部的炎症反应、阻止新生血管和瘢痕的形成、阻止烧伤的病理发展,是治疗眼表疾病的一种积极有效的治疗方法.     

羊膜移植行结膜囊成形术的临床病理研究

目的 评价保存人羊膜移植在结膜囊成形术中的疗效。方法 17例(17只眼)结膜囊缩窄患者行结膜囊成形术时，结膜缺损用羊膜移植。术后6-10月剪除少量结膜及结膜下组织做常规病理检查及CD20、CD45RO、PCNA免疫组化研究。选择13例无羊膜移植正常大小结膜囊中央结膜作对照。结果 术后22—30天移植的羊膜被结膜上皮覆盖，无继发感染及排异反应，16例放置正常大小义眼片，外观满意，1例于术后4月出现结膜囊轻度收缩。在移植术后6—10月的常规病理检查及CD20、CD45RO及PCNA的表达上与无狭窄之结膜囊无明显差别。结论 保存人羊膜移植治疗结膜囊缩窄取材方便，移植后的结膜组织在结构和功能上与结膜组织无明显差别，治疗效果好。     

几丁糖防治结膜瘢痕与睑球粘连的实验研究

目的探讨2％医用几丁糖在角结膜碱烧伤后防治结膜瘢痕、睑球粘连及促进创面愈合中的作用。方法26只新西兰大白兔,按随机数字法取21只制作兔重度角结膜碱烧伤模型,设右眼为几丁糖治疗组,左眼为模型对照组;另5只兔按随机数字法取5只眼作为正常对照组。观察角结膜碱烧伤后炎性反应、结膜瘢痕及睑球粘连发生情况。于烧伤后20、30d行组织病理学观察,烧伤后30d行天狼猩红染色比较结膜组织中胶原含量和纤维化瘢痕情况。结果医用几丁糖治疗组较模型对照组结膜修复快,结膜瘢痕和睑球粘连程度轻（u=2．1159,P〈0．05）;天狼猩红染色示烧伤后结膜胶原含量增高,瘢痕形成明显,但几丁糖治疗组瘢痕轻,胶原含量（Q=32．1450,P〈0．01）和吸光度值（Q=22．4767,P〈0．01）明显低于模型对照组。结论几丁糖可减轻角结膜碱烧伤后结膜瘢痕与睑球粘连的形成。     

Effect of amniotic membrane transplantation on rabbit conjunctival surface reconstruction at the recovering stage of alkali burn

AIM: To investigate the effect of amniotic membrane transplantation(AMT) on rabbit conjunctival surface recon- struction with severe alkali burns.(2) To evaluate the possibility of AMT treatment for ocular alkali burns during recovering stage. METHODS: Animal models were established on 30 eyes of rabbits by creating severe alkali burns on the conjunctiva from the upper corneal limbus to the upper conjunctival fornix. Preserved human amniotic membrane transplantations and reconstruction of conjunctival fornix were performed at one week after injury (recovering stage). Epithelium growth of burned area after transplantation was observed using light microscope at 1, 2, 3, 4, and 8 weeks. Conjunctival tissue in transplantation area was collected at 1, 4 and 8 weeks. The ultrastructure of the collected tissue was studied by electron microscope. The results were compared with control group, which received only vitamin C subconjunctival injection and antibiotic eye drops as treatment for alkali burn. Exterior eye pictures were also taken at the end of the observation, the width from upper corneal limbus to the edge of upper fornix was measured. Data were analyzed statistically. · RESULTS:(1) In the transplant group, conjunctival epithelium growth was observed in the area of AMT under both light and electron microscope 1 week after surgery. At the 4th week, conjunctival epithelium with goblet cells that resembled normal conjunctival tissues was observed in the whole amniotic membrane area. At the 12th week, the conjunctival epithelium on the amniotic membrane was well formed, and the connective tissue under the epithelium was loose at the fornix. No fibrosis was identified. In contrast, conjunctival epithelium necrosis was observed in the control group at 2 weeks after alkali burns. Reepithelization did not occur through the 12-week observation. Severe fibrosis with inflammatory cells infiltration was observed between 4 to 8 weeks. At the 12th week, fibrosis of the connective tissue at the fornix developed and there were no conjunctival epithelium covering the burned area.(2) In the transplant group, the conjunctiva in transplanted area had no scarring and appeared smooth at the 12th week. Upper fornix was reconstructed. The depth of fornix was 7.9±0.3mm (7.6- 8.2mm), which was approximate to the normal depth 8.2±0.2mm (8.0-8.4mm, P >0.05). While in the control group, the burned area appeared rough with granuloma formation and severe scarring. Upper fornix became shallow. The depth of fornix was 3.1±1.7mm (1.0 - 4.5mm.), and significant difference was found between control and transplant group (P <0.01). CONCLUSION: Human amniotic membrane preserved in glycerin can promote cell adhering, migrating and differenti- ating of normal conjunctival epithelium. Reconstruction of conjunctival surface in early stage of alkali burn can be achieved by AMT. AMT can effectively prevent symblepharon formation.     

羊膜为基底的小片状同种异体结膜移植治疗碱烧伤

目的 将羊膜移植与片状同种异体结膜移植相结合重建眼表。方法 新西兰白兔42只，右眼(实验组)、左眼(对照组)上方球结膜碱烧伤后24h分别行以羊膜为基底的小片状同种异体结膜移植和单纯小片状同种异体结膜移植，术后各周行印迹细胞的PAS染色、扫描电镜检查。结果 实验组植片成活率明显高于对照组(P＜0．05)。实验组术后第4周，对照组术后第5周结膜外观、杯状细胞形态数目功能均恢复正常。结论 大面积结膜碱烧伤早期应用羊膜改善异体植片的基底，有利于降低排斥反应，提高植片成活率，达到结膜结构与功能重建之目的。     

小鼠角膜碱烧伤行羊膜移植对MMP-9、TIMP-1在新生血管形成中的影响

目的探讨小鼠角膜碱烧伤行羊膜移植对基质金属蛋白酶9(matrixmetalloproteinase9,MMP9)、金属蛋白酶组织抑制剂1(tissueinhibitorofmetalloproteinase1,TIMP1)在新生血管形成中的影响以及MMP9及TIMP1在角膜新生血管形成中的作用。方法昆明小鼠40只,随机分为实验组和对照组,每只鼠均取右眼为实验眼。采用1mol·L-1NaOH溶液烧伤小鼠角膜,建立炎症性角膜碱烧伤动物模型。对实验组小鼠右眼角膜行羊膜移植,对照组不行羊膜移植。分别在羊膜移植后的0d、2d、7d、14d处死2组小鼠,摘除右眼球,行免疫组织化学染色并用计算机图像分析系统检测2组小鼠MMP9及TIMP1在角膜中的分布及其平均吸光度值的变化。结果免疫组化结果:对照组碱烧伤角膜后第2d,可见MMP9出现表达,第7dMMP9的染色较第2d增强,基质层可见大量新生血管,且血管内皮细胞可见表达,14d达高峰;TIMP1开始表达不明显,第7d出现表达,14d达高峰。羊膜移植组各时间点MMP9表达低于对照组,而TIMP1表达高于对照组。结论碱烧伤后小鼠角膜中MMP9表达增加,在新生血管形成的过程中起一定作用。羊膜可能具有抑制MMP9在碱烧伤小鼠角膜中表达的作用,而且羊膜同时促使TIMP1在后期表达水平升高,从而抑制MMP9的活性,抑制和减缓碱烧伤后角膜新生血管的发生和发展。     

羊膜对氧氟沙星滴眼液兔角膜通透性的影响

目的探讨羊膜对氧氟沙星滴眼液兔角膜通透性的影响。方法先给108只新西兰大白兔进行样本编号,再按号码单纯随机抽样并分为6组,每组18只,分别为正常角膜组、正常角膜羊膜移植组、机械刮除角膜上皮组、机械刮除上皮联合羊膜移植组、角膜碱烧伤组、角膜碱烧伤联合羊膜移植组。0．3％氧氟沙星眼液滴眼,每15min滴眼1次,共4次,最后1次滴眼后5、30min,1、2、4、6h,于每个时间点每组18只大白兔中任意处死3只兔抽取房水。高效液相法检测房水中氧氟沙星的浓度。结果刮除角膜上皮组与正常角膜上皮组比较,药物的前房浓度均明显增高（均P〈0．05）。正常角膜羊膜移植组5、30min、1h房水中氧氟沙星浓度与正常角膜组无明显差异（均P〉0．05）,而2、4、6h则明显高于正常角膜组（均P〈0．05）;机械刮除上皮联合羊膜移植组2、4、6h房水中氧氟沙星浓度亦明显高于机械刮除角膜上皮组（均P〈0．05）,而两组间5、30min、1h房水中氧氟沙星浓度比较无明显差异（均P〉0．05）;角膜碱烧伤联合羊膜移植组6h以内房水中氧氟沙星浓度均高于碱烧伤组（均P〈0．05）。结论羊膜具有一定药物蓄积和缓释作用,增加了氧氟沙星在角膜表面的停留时间,使药物的通透性增高。     

联合片状同种异体结膜移植与羊膜移植治疗早期碱烧伤

目的：探讨联合羊膜的小片状同种异体结膜移植重建眼表的可行性。 方法：新西兰白兔双眼上方球结膜碱烧伤后24h,实验组行以羊膜为基底的小片状同种异体结膜移植,对照组行单纯小片状同种异体结膜移植,术后各周行印迹细胞的PAS染色、扫描电镜检查。 结果：实验组未见明显排斥反应,全部植片成活,对照组7眼植片排斥脱落,植片成活率81．6％,明显低干实验组（P〈0．05）。实验组术后4wk,对照组术后第5wk结膜外观、杯状细胞形态、数目、功能均恢复正常。 结论：羊膜与小片状同种异体结膜移植相结合可能成为修补早期大面积结膜碱烧伤的有效途径。     

化学伤后睑球粘连动物模型的建立

目的 建立标准的化学伤后睑球粘连动物模型，观察睑球粘连发生的规律和病理特点。方法 12只新西兰大白兔随机分为A组：1mol／L氢氧化钠溶液结膜囊滴入烧伤组；B组：2mol／L氢氧化钠溶液结膜囊滴入烧伤组；C组：2mol／L氢氧化钠浸泡滤纸角结膜贴附烧伤组；D组：2mol／L氢氧化钠浸泡滤纸结膜贴附烧伤组共4组，观察睑球粘连发生效率。另外14只新西兰大白兔采用滤纸结膜烧伤方法建立睑球粘连动物模型，观察烧伤后眼表组织的变化规律和病理改变。结果 A、B、c3组模型中9眼均出现角膜穿孔、眼球萎缩。滤纸结膜烧伤17眼中仅1眼出现角膜穿孔。烧伤后4周时8睑球粘连模型中5眼为中度，3眼为重度。烧伤后1周成纤维细胞量、炎性细胞、增生细胞核抗原阳性表达细胞与第2、3、4周差异有统计学意义（P〈0．05）。烧伤后3、4周大量新生胶原纤维量生成，且胶原纤维较粗致密。结论 滤纸结膜烧伤方法是一种有效的睑球粘连动物模型的制作方法。睑球粘连的预防性治疗应在烧伤后第1周内开始。     

角膜碱烧伤早期羊膜移植治疗对t-PA和PAI-1活性的影响

目的 探讨羊膜移植在治疗早期兔角膜碱烧伤中的疗效及其对组织型纤溶酶原激活剂（tissue-type plasminogenactivator,t-PA）和1型纤溶酶原激活剂抑制剂（plasminogen activator inhibitor 1,PAI-1）活性的影响.设计随机对照实验研究.研究对象72只新西兰白兔,随机分为碱烧伤组、新鲜羊膜移植组、保存羊膜移植组及正常对照组,每组18只.右眼为实验眼.方法 制作角膜碱烧伤模型,烧伤后30分钟实施手术.术后第14、30、60天,通过计算机图像分析系统分析角膜情况;并用发色底物法检测角膜组织浸液中t-PA和PAI-1的活性.主要指标角膜上皮荧光染色、角膜烧伤斑面积和平均光密度,t-PA及总PAI-1活性,t-PA/PAI-1比值.结果 术后第14、30、60天,新鲜羊膜移植组及保存羊膜移植组t-PA活性和t-PA/PAI-1与碱烧伤组相比均显著下降（P＜0.01）.术后第14天,新鲜羊膜移植组t-PA活性明显低于保存羊膜移植组（P=0.022）,而总PAI-1活性明显高于保存羊膜移植组（P=0.001）;术后第14、30天,t-PA/PAI-1明显低于保存羊膜移植组（P=0.000,P=0.030）.结论 羊膜移植术后t-PA活性和t-PA/PAI-1显著下降,证实羊膜具有抑制炎症、抑制瘢痕、促进上皮愈合的功能;新鲜羊膜优于保存羊膜.