NONTARGETED MUTAGENESIS IN HUMAN AMINO FL CELLSINDUCED BY RAPE SEED OIL CONDENSATE

本研究以穿梭质粒ｐＺ１８９作为探针，用菜油油烟凝聚物ＲａｐｅＳｅｅｄＯｉｌＣｏｎｄｅｎｓａｔｅ，ＲＣ）诱发人羊膜ＦＬ细胞中的非定标性突变。结果显示：ｌ２．５和５０μｇ／ｍｌＲＣ处理组的突变频率较自发突变频率增加了３．５和４．１倍；两个处理组的点突变频率分别为１１．９×１Ｏ－４（１９／１５９９６）和１１．６×ｌ０－４（１７／１４７０１），比自发点突变频率２．９×１０－４（２／６８２２）分别增加了４．１和３．９倍，其卡方检验的Ｐ值均小于０．０５。     

细胞因子和低氧对胰腺癌细胞表达血管内皮生长因子A、C的调节

目的:探讨细胞因子白细胞介素(IL)-1α、IL-6、肿瘤坏死因子(TNF)α、SNAP(S-nitroso-nacetyl-penicillamine)(在培养细胞中可释放NO,使细胞处于低氧状态)对胰腺癌细胞产生和分泌血管内皮生长因子(VEGF)-A、C的调节。方法:用northernblot和westernblot法分别分析人胰腺癌细胞株中VEGF-A、VEGF-C基因和蛋白的表达;以IL-1α(10μg/L)、IL-6(100μg/L)、TNFα(50μg/L)或SNAP(25mg/L)刺激细胞株后用逆转录-聚合酶链式反应技术(RT-PCR)分析其VEGF-A、VEGF-C基因的表达。结果:Northernblot法显示6种胰腺癌细胞株均有4.1kbVEGF-A基因和2.4kbVEGF-C基因的表达;Westernblot法显示这6种胰腺癌细胞株均有相对分子质量为43×103的VEGF-A蛋白和相对分子质量为55×103的VEGF-C蛋白表达。RT-PCR分析法显示:IL-1α使细胞株COLO-357产生VEGF-A、VEGF-CmRNA分别增加1~2倍、1倍;IL-6刺激细胞株CAPAN-1产生VEGF-A、VEGF-CmRNA分别增加2~5倍、1倍;TNF-α使细胞株COLO-357产生VEGF-A、VEGF-CmRNA分别减少1~2.5倍、1~2倍,使细胞株CAPAN-1产生VEGF-A、VEGF-CmRNA分别减少1倍、1.6~2.5倍;而SNAP刺激细胞株COLO-357产生VEGF-AmRNA增加5倍,刺激细胞株CAPAN-1产生VEGF-AmRNA增加4倍。结论:细胞因子IL-1α、IL-6、TNFα和SNAP通过调节血管内皮生长因子A、C的表达而影响胰腺癌细胞的生物学特性。     

Genistein对人尿道鳞癌细胞增殖和凋亡的影响

目的观察Genistein(GEN)对人尿道鳞癌细胞系HUS-98细胞增殖和凋亡的影响.方法MTT法检测细胞增殖,碘化丙啶(PI)和Annexin V-FITC双染色的流式细胞分析方法检测凋亡,台盼蓝拒染法测定淋巴细胞活力,免疫细胞化学检测雌激素受体(ER)蛋白的表达.结果低浓度(1×10-111～1×10-8mol/L)GEN促进HUS-98细胞的生长,处理3 d时,1×10-8mol/L组的细胞数比对照组的增加9%(P＜0.01);高浓度(1×10-7mol/L～5×10-4mol/L)GEN则浓度依赖性地引起HUS-98细胞数目逐日减少,但是除5×10-4mol/L外的其余浓度对正常淋巴细胞的生长没有影响.1×10-6mol/L GEN作用于HUS-98细胞24～48 h,凋亡细胞和坏死细胞的比率均增加,且有时间依赖性.HUS-98细胞表达ER蛋白.结论高浓度GEN具有抑制ER阳性的人尿道鳞癌细胞的生长和诱导凋亡及坏死的作用,为今后用于尿道鳞癌的治疗提供了实验依据.     

小鼠淋巴瘤L5178Y细胞tk基因自发分子突变研究

背景与目的:研究小鼠淋巴瘤L5178Y3.2.7c-tk /-细胞tk基因的自发突变频率和分子突变。材料与方法:进行4次平行试验,计算自发突变频率。选择tk基因自发突变子(tk-/-),提取基因组DNA,经等位基因特异性PCR扩增,杂合性缺失(Lossofheterozygosity,LOH)分析和测序等技术,分析其分子突变谱。结果:L5178Y细胞tk基因的平均自发突变频率为145×10-6,tk基因自发突变LOH平均发生率为79.8%。由LOH分析的试验结果显示,自发突变的LOH在大集落(Largeclone,LC)与小集落(Smallclone,SC)之间差异无统计学意义。序列分析证实,自发tk基因点突变主要为碱基置换。结论:tk基因的自发突变是以功能性等位基因缺失为主的分子突变,其中点突变以碱基置换为主。     

腺病毒介导的肿瘤血管靶向的体外自杀基因治疗研究

本工作在血管内皮细胞中分别建立了HSV-tk/GCV和EC-cd/5-FC自杀基因系统,用于抑制实体肿瘤中血管生成的研究.构建含自杀基因的重组腺病毒AdCMVtk和AdCMVcd,滴度均1×10~(12)pfu/ml.病毒感染小鼠血管内皮细胞lGll(MOI=100),并鉴定自杀基因的表达,测定原药对它们的杀伤.生长抑制试验表明,GCV对lGll/Ad-tk细胞杀伤的IG_(50)为0.2μmol/ L,5-FC对lGll/Ad-cd细胞杀伤的IC_(50)为20μmol/L.电镜下显示被原药杀伤的血管内皮细胞有明显的细胞凋亡现象.同时混合细胞实验证明两系统均存在明显的旁杀伤效应.从而在体外水平证明了HSV-tk/GCV和EC-cd/5-FC自杀基因系统杀伤增生血管内皮细胞的有效性.     

丙烯酰胺诱导小鼠淋巴瘤细胞tk基因突变的研究

背景与目的:研究丙烯酰胺(Acrylamide,AA)对小鼠淋巴瘤L5178Y3.2.7c-tk /-细胞tk基因突变频率的影响。材料与方法:使用丙烯酰胺对L5178Y细胞进行梯度染毒,分别进行细胞毒性,细胞接种效率,相对悬浮生长率和突变频率的测定。结果:随着AA剂量的增加,L5178Y细胞的相对存活率和悬浮生长率均明显降低。在150～750μg/ml范围内诱导L5178Y细胞tk基因的突变频率高于自发突变频率1～9倍,表明具有较强的致突变性。结论:AA对L5178Y细胞具有明显的细胞毒性,并可以诱导tk基因的突变。     

MNNG诱导的哺乳类细胞信号转导通路的改变

目的:本实验室曾用烷化剂N - 甲基- N’- 硝基- N - 亚硝基胍(N2methyl2N’2nitro2N2nitrosoguanidine ,MNNG) 在非洲绿猴肾vero 细胞上诱导出非定标性突变。进一步的研究提示细胞信号转导通路在非定标性突变的发生中扮演了重要角色。所以本实验的目的是研究与非定标性突变发生有关的细胞信号转导通路的改变。方法:本研究中,vero 细胞在0. 2μmol·L - 1MNNG处理2. 5h 后在不同的时间点制备全细胞抽提液,然后利用一种偶联抗Anti2Phosphotyrosine2Peroxidase) 进行Western 印迹分析来观察细胞蛋白质酪氨酸磷酸化的变化。为了评估MNNG处理vero 细胞引起的胞内JNK/ SAPK通路激活情况,我们用Western 印迹法和固相激酶活性测定法分别检测JNK1 的磷酸化程度和JNKs 的激酶活性。在这部分实验中,vero细胞在MNNG或1mg·L - 1放线菌素酮(CHM) 处理后在不同的时间点制备全细胞抽提液,Western 印迹法用抗JNK1 兔多克隆IgG和羊抗兔IgG- HRP 分别作为一抗和二抗。在固相激酶活性测定实验中,细胞抽提液在[γ232 PATP 存在下与GST2cJ un (79)2agarose 混合孵育,标记的磷酸化GST2c2J un 经SDS2PAGE 分离后进行放射自显影。结果:在磷酸化酪氨酸Western印迹分析中发现MNNG处理vero 细胞后再经0h 和12h ,细胞内45kDa 蛋白质酪氨酸磷酸化程度增强。在MNNG处理vero细胞后再经6h ,有62kDa 蛋白质酪氨酸磷酸化程度增强。1mg·L - 1CHM 处理vero 细胞12h 也可引起胞内45kDa 蛋白质酪氨酸磷酸化程度增强。在JNK1 磷酸化程度和JNKs 激酶活性测定中发现0. 2μmol·L - 1MNNG处理vero 细胞2. 5h 和1mg·L - 1CHM 处理vero 细胞1h 都可引起细胞抽提液中磷酸化JNK1 的比例增高,同时,通过测定JNKs 的底物c2J un 的磷酸化水平,发现这两种处理也都可使JNKs 的激酶活性大大增强(分别为对照的6. 7 倍和3. 0 倍) 。结论:本研究发现0. 2μmol·L - 1MNNG处理vero 细胞可引起胞内45kDa 的62kDa 蛋白质酪氨酸磷酸化改变,提示MNNG可诱导哺乳类细胞内应激信号转导通路激活。另外,0. 2μmol·L - 1MNNG处理vero 细胞2. 5h 和1mg·L - 1CHM 处理vero 细胞1h 都可引起全细胞抽提液中磷酸化JNK1 的比例增高和JNKs 的激酶活性成倍增强。证明用于诱导vero 细胞产生非定标性突变的实验条件可以引起vero 细胞内信号转导通路发生改变,并且至少可以激活vero 细胞内JNK/ SAPK通路。     

地塞米松诱导CEM细胞凋亡过程中Survivin和Caspase-3基因表达的研究

目的探讨地塞米松(dexamethasone,DEX)诱导CEM细胞凋亡过程中生存素(Sur-vivin)和半胱天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)基因表达。方法台盼蓝拒染法测定细胞活力,绘制增殖曲线;流式细胞仪解析DEX诱导CEM细胞凋亡;Westernblot检测Survivin和Caspase-3蛋白表达;RT-PCR检测Survivin基因表达。结果1)DEX以时间、剂量依赖方式抑制CEM细胞增殖。0.1~10μmol/LDEX于48h开始明显抑制CEM细胞的生长。24、48、72h抑制细胞增殖50%的药物浓度分别为9.8、0.9和0.4μmol/L。2)随DEX剂量增大亚二倍体细胞百分数逐渐增加。5μmol/LDEX处理12~48h,亚二倍体细胞从14.9%升至46.2%;3)5μmol/LDEX处理12~72h,Survivin蛋白从54.6%下调至9.7%;SurvivinmRNA从76.4%(6h)降至18.3%(72h);4)DEX作用12h之内只能检测到非激活状态的procaspase-3,处理24h后出现17×103活性亚基,直至72h。结论DEX诱导CEM细胞凋亡时下调Survivin基因表达,活化Caspase-3。     

应用穿梭质粒建立哺乳动物细胞诱变检测系统的实验研究

本文通过用已知诱变剂EMS对基于EB_2病毒的穿梭载体pMCi5在小鼠3T3细胞中的诱变作用的研究,初步建立了一种能在DNA水平研究哺乳动物细胞诱变作用的快速实验系统。pMCi5质粒带有细菌lacI基因,可作为体细胞诱变研究的靶基因,最后通过转化大肠杆菌,在含X-gal的培养基中快速检测lacI突变。该系统的自发突变率小于1.21×10~(-4),300μ/mlEMS的诱发突变率为3.8×10~(-3)。经酶谱分析得到的7个突变子,在DNA水平上没有大的改变,EcoRl酶切位点上无点突变发生。     

异丙酚和异氟醚对大鼠心室肌细胞L-型钙离子通道的影响

目的 :研究联合使用异丙酚和异氟醚对大鼠心室肌细胞膜L 型钙离子通道的影响 ,阐明异丙酚和异氟醚在离子通道水平上对心肌细胞抑制的药理作用机制。方法 :采用急性酶解法获得SD大鼠的单个心室肌细胞 ,在保持膜片钳钳夹电位 - 4 0mV ,波宽为 2 50ms的条件下 ,利用全细胞膜片钳技术 ,观察不同浓度的异丙酚、异氟醚及其二药复合应用时对心肌细胞钙离子通道电流的影响。结果 :用含有1μmol/L四已铵的台氏液灌流时 ,可记录到具有电压和时间依赖性内向的钙电流 ;加入 1μmol/L维拉帕米时 ,该电流被迅速消除。 12 μmol/L、2 5μmol/L异丙酚和 7× 10 2 μmol/L、1 1× 10 3μmol/L异氟醚对钙电流无显著性影响 (P >0 0 5) ;50 μmol/L、2 50 μmol/L异丙酚和 2 2× 10 3μmol/L、4 4× 10 3μmol/L异氟醚对钙电流有显著性影响 (P <0 0 5) ;2 5μmol/L异丙酚和 1 1× 10 3μmol/L异氟醚复合剂、12 5μmol/L异丙酚和 2 2× 10 3μmol/L异氟醚复合剂对钙电流有显著性影响 (P <0 0 5)。 结论 :异丙酚、异氟醚及其两药复合应用时对心肌产生负性肌力作用有浓度依赖性 ,其机制与其抑制钙离子通道电流有关。     

Pharmacogénétique des fluoropyrimidines. La méthylènetétrahydrofolate réductase

Résumé: Lefficacité optimale des fluoropyrimidines nécessite des concentrations élevées en 5-10 méthylènetétrahydrofolate (CH₂FH₄), contrôlées par la méthylènetétrahydrofolate réductase (MTHFR) qui convertit irréversiblement le CH₂FH₄ en 5-méthyltétrahydrofolate (CH₃FH₄). Les polymorphismes 677CT et 1298AC du gène MTHFR sont associés à une baisse dactivité de lenzyme. Les tumeurs «MTHFR mutées» devraient donc être plus sensibles aux fluoropyrimidines que les tumeurs «MTHFR sauvages». Les études expérimentales et cliniques publiées à ce jour tendent à montrer une plus grande sensibilité au 5-FU (associé ou non à lacide folinique) dans les tumeurs MTHFR mutées par rapport aux tumeurs sauvages. Ces résultats montrent la nécessité de poursuivre ces recherches afin de confirmer limpact de ces polymorphismes sur lefficacité des fluoropyrimidines.     

裘法祖教授生平

Prof.Fazu Qiu,member of the Chinese Communist Party,surgery professor of Tongji Hospital,departed in Tongji Hospital,Wuhan,China,at fourteen to nine a.m,June 14,2008,after a disease.He turns 94 this year.He was the senior academician of the Academia Sinica,the illustrious medical scientist of China,and the Honorary Director of Tongji Medical College,as well as Huazhong University of Science & Technology.     

Oncogénétique et psycho-oncologie, une collaboration recommandée...

Résumé: La possibilité depuis 1994, de connaître la probabilité individuelle de développer certains cancers a permis de proposer de nouvelles modalités de prévention, de traitements et contribué au développement actuel de loncogénétique. Une meilleure connaissance des répercussions psychologiques tant pour les patients que pour les apparentés est désormais possible et limplication des psycho-oncologues dans ce cadre de la réalisation des tests prédictifs, recommandée. La mission de «messager» qui incombe au «cas-index» doit faire lobjet dune attention particulière. La complexité de linformation et la dimension paradoxale que peut avoir parfois la communication à propos des choix, rend difficile lévaluation de la qualité du consentement. La situation particulièrement délicate dune aide à la décision à légard de la chirurgie prophylactique, exige une collaboration étroite des généticiens et des psycho-oncologues.Les soins de support en oncologie     

The role of papillomaviruses in human cancers

This review comprehensively evaluates the influence of gene-gene, gene-environment and multiple interactions on the risk of colorectal cancer (CRC). Methods of studying these interactions and their limitations have been discussed herein. There is a need to develop biomarkers of exposure and of risk that are sensitive, specific, present in the pathway of the disease, and that have been clinically tested for routine use. The influence of inherited variation (polymorphism) in several genes has been discussed in this review; however, due to study limitations and confounders, it is difficult to conclude which ones are associated with the highest risk (either individually or in combination with environmental factors) to CRC. The majority of the sporadic cancer is believed to be due to modification of mutation risk by other genetic and/or environmental factors. Micronutrient deficiency may explain the association between low consumption of fruit/vegetables and CRC in human studies. Mitochondrial modulation by dietary factors influences the balance between cell renewal and death critical in colon mucosal homeostasis. Both genetic and epigenetic interactions are intricately dependent on each other, and collectively influence the process of colorectal tumorigenesis. The genetic and environmental interactions present a good prospect and a challenge for prevention strategies for CRC because they support the view that this highly prevalent cancer is preventable.     

Antifungal combination therapy in localized candidosis

A mouse model of localized candidosis in air-filled subcutaneous cysts imitating thrush has been developed. We have now tested various antifungal combinations in this animal model. Flucytosine (5-FC) + amphotericin B (Amph B) showed the highest efficacy, a clear additive or even synergistic effect was seen. The combination of 5-FC + imidazole or triazole derivative was less efficacious, an additive effect was rare. The combination of 5-FC + Amph B was also tested against Candida albicans strains showing various degrees of 5-FC-resistance. A significant reduction in 5-FC-resistant mutants was seen after the treatment with the combination.     

Les génériques en cancérologie: à molécule identique, médicaments identiques? Les biosimilaires, des super-génériques?

Résumé: Les biosimilaires vont bientôt voir leur apparition en Europe. Comment un laboratoire peut-il aborder le développement de son dossier dAMM? Quelles sont les bases légales et les recommandations officielles? Comment la similarité et/ou le caractère générique peuvent-ils être démontrés? Les règles sont-elles identiques à celles des produits chimiques conventionnels pour lesquels, notamment en cancérologie, il existe des médicaments génériques? Comment faire pour que la sécurité et lefficacité des médicaments biosimilaires soient assurées pour les patients?     

Dermatomycosis in Dogs

During the routine examination of dogs for cutaneous lesions, 205 dogs were screened for fungi other than dermatophytes. Twenty-two dogs (10.8%) revealed the presence of non-dermatophytic fungi suspicious for representing the etiologic agents of the skin lesions. The fungi isolated were Alternaria sp. (2.9%), Penicillium sp. (2.4%), Aspergillus fumigatus (2.0%), Mucor sp. (1.5%), Cladosporium sp. (1.5%) and Fusarium sp. (0.5%). No dermatophyte was isolated in association with these fungi. The incidence of these infections was found to be greater in warm and humid climate.     

PSA-Test zur Früherkennung des Prostatakarzinoms

Zusammenfassung Prostatakrebs ist hierzulande seit einigen Jahren die häufigste Krebserkrankung bei Männern. Da über die Ätiologie wenig gesichertes Wissen vorliegt und daher kaum Möglichkeiten zur primären Prävention bestehen, konzentrieren sich die Anstrengungen auf die Suche nach wirksamen Verfahren zur sekundären Prävention. Hierbei gilt die Verwendung des PSA-Tests zur Früherkennung des Prostatakarzinoms als derzeit aussichtsreichstes Verfahren. Bevor ein neues Früherkennungsverfahren zur breiten Anwendung empfohlen oder in das gesetzliche Früherkennungsprogramm aufgenommen wird, muss jedoch seine Wirksamkeit in hierfür geeigneten wissenschaftlichen Untersuchungen nachgewiesen werden. Bis jetzt gibt es bereits eine ganze Reihe epidemiologischer Studien zur Effektivität des PSA-Screenings, doch konnte ein Wirksamkeitsnachweis bisher nicht erbracht werden. Zwei große randomisierte Studien in Europa und den USA lassen für die Jahre 2005–08 erste Ergebnisse erwarten. Da epidemiologische Arbeiten belegen, dass durch PSA-Screening eine nicht unerhebliche Überdiagnostik und Übertherapie eintritt, d. h. Schaden angerichtet werden kann, ist das Ergebnis der genannten randomisierten Studien vor weitergehenden Entscheidungen unbedingt abzuwarten. Bis dahin sollte von der Anwendung des PSA-Tests zur Prostatakrebsfrüherkennung unmissverständlich abgeraten werden. Da für den Test bereits ausgiebig Werbung betrieben wurde, kommt einer gründlichen ärztlichen Aufklärung von an dem Test interessierten Personen eine Schlüsselrolle zu.     

Cancer immunotherapy

Unprecedented progress has seen made in the last decade in the field of cancer immunotherapy. The recent approval of nivolumab （Opdivo）, the first anti-programmed cell death-1 （PD-1） antibody, for metastatic melanoma in Japan, marked a milestone in the rapidly advancing field of cancer immunotherapy. Nivolumab together with ipilimumab （Yervoy）, the anti-cytotoxic T-lymphocyte-associated antigen-4 （CTLA-4） antibody, are the first 2 drugs in the class of ＂immune checkpoint inhibitors＂ that have delivered impressive responses in patients with metastatic melanoma and renal cell cancer （RCC） as well as a variety of solid tumors.