北京地区2000-2004年分离的呼吸道合胞病毒B亚型株G蛋白基因的序列分析

目的 了解近年来北京地区流行的B亚型呼吸道合胞病毒（BSV）G蛋白的基因特征。方法 2000年冬季至2004年冬季自首都儿科研究所附属儿童医院收集的急性呼吸道感染患儿呼吸道标本，从中分离到B亚型RSV毒株，每年随机选取1至2株毒株，用RT-PCR扩增其G蛋白全基因后克隆至pBS-T载体中，筛选出阳性克隆后测序，并与B亚型标准株（CH18537）和文献报道的毒株序列进行比较分析。结果 所测毒株G蛋白全基因核苷酸长度分别为915、921和981bp，推导的氨基酸长度分别为292、293、312和315从。分离株与B亚型标准株CH18537间存在着明显的差异，CH18537株同分离株间的核苷酸的同源性为91．9％～93．7％，氨基酸的同源性只有85．0％～89．0％。分离株间核苷酸的同源性为93．4％～98．8％，氨基酸的同源性为88．2％～98．6％。氨基酸的变异主要集中在胞外区一个高度保守区的两端，而胞内区和跨膜区相对保守。此外，在进行G蛋白基因分析的8株B亚型分离毒株中，我们发现有3株BSVG蛋白在490～495位核苷酸缺失，3株RSVG蛋白在c末端791位后出现了60个核苷酸的插入，导致C末端259位后出现20个氨基酸的插入。这60个核苷酸与相邻的前60个核苷酸高度重复，只出现3至4个核苷酸的差异。该3株分离株与文献报道的有60个核苷酸插入的两株（S00-4和BA4128／99B）核苷酸和氨基酸同源性分别为97．5％～98．6％和95．5～98．1％，在插入的20个氨基酸中，有高达50％（9～10个氨基酸）左右的丝氨酸和苏氨酸氧连接的糖基化位点。结论 RSVB亚型G蛋白基因变异存在着多样性，分离株既有核苷酸替代，又有基因缺失和插入，还有糖基化位点的改变和氨基酸长度的改变。这种变异使G蛋白高度糖基化，提示最终可能导致病毒抗原性的改变。北京分离的有60个核苷酸插入的变异株与日本及西班牙报道的变异株有非常近的亲缘关系，提示这种G蛋白基因中有60个核苷酸插入的B亚型变异株已经在子代病毒中形成稳定遗传并在世界范围内传播。     

呼吸道合胞病毒分离株N蛋白编码基因特征分析

目的 阐明人呼吸道合胞病毒(human respiratory syncytial virus,HRSV)A和B亚型病毒分离株的核蛋白(nucleoprotein,N)编码基因特征.方法 采用逆转录-聚合酶链反应(revelrse transciptionpolymerase chain reaction,RT-PCR)对北京2004年分离的HRSV代表株(2株A亚型和2株B亚型)进行N基因全长序列扩增、测序,并和GenBank下载的所有HRSV病毒的N基因全长序列进行对比和分析.结果 2株HRSV A亚型分离株与A亚型Long株(标准株)的N蛋白的核苷酸和氨基酸差异分别为36～40个(3.1%～3.4%)和4个(1.0%);2株HRSV B亚型分离株与B亚型CH18537株(标准株)的N蛋白之间的核苷酸和氨基酸差异分别为17(1.4%)和1(0.3%)个.4株HRSV代表株和从GenBank下载的HRSV的N蛋白之间的核苷酸和氨基酸差异分别为3～172个(0.25%～14.63%)和0-18个(0～4.6%).结论 N基因在HRSV基因组中是较为保守的基因,A或B亚型的型内差异相对较小;但A和B亚型之间N基因序列有较大变异,变异平均分配于整个N基因中;本研究为HRSV基因快速诊断试剂的研制提供了基因信息学数据.     

5株呼吸道合胞病毒地方株F蛋白基因序列分析

目的呼吸道合胞病毒（ＲＳＶ）Ｆ蛋白是ＲＳＶ感染免疫中最重要的病毒蛋白，为了解我国ＲＳＶ地方株Ｆ蛋白的基因状况和变异特征，随机选取北京、广州、长春和河北四个地区具有不同流行特征的ＲＳＶ地方株（Ａ亚型）５株，进行ＲＳＶＦ蛋白全基因的核苷酸序列分析。方法以提取的病毒ｍＲＮＡ为模板进行ＲＴ－ＰＣＲ扩增、目的基因的克隆及序列测定，对地方株及原型株的序列进行比较分析。结果地方株Ｆ蛋白基因与原型株Ａ２株有很高的同源性，核苷酸全序列的同源性为９５．１％～９６．１％，氨基酸同源性为９６．７％～９７．４％。核苷酸有义突变率为２２．６％～２５．９％。３非编码区的核苷酸序列比蛋白编码区变异显著。河北地方株（Ｅ７３株）在３非编码区有６个核苷酸的插入。Ｆ２亚单位的氨基酸变异高于Ｆ１亚单位。在北京地方株（ＺＨＳ１３株）Ｆ１亚单位内，由具有中和能力单克隆抗体所识别的抗原表位区中存在一个氨基酸的变异。结论我国ＲＳＶ地方株与原型株之间的Ｆ蛋白基因尽管存在一定的变异，但仍有很高的同源性。地方株间Ｆ蛋白的核苷酸、氨基酸变异的位置及形式很相似，提示我国ＲＳＶ的不同流行特征可能并非由于Ｆ蛋白的基因变异所致。     

呼吸道合胞病毒逃逸株对单克隆抗体预防的抵抗

目的探讨体外筛选的呼吸道合胞病毒抗体逃逸株生长特性、F蛋白免疫反应性及在棉鼠体内对抗体免疫预防的抵抗，旨在证实用单克隆抗体免疫预防的负面效应，为今后临床可能出现的抗体逃逸株提供线索。方法呼吸道合胞病毒(RSV)A2株在逐渐升高的Pahvizumab(PZ)浓度环境中连续传代5次并经单噬斑纯化后获得PZ逃逸株MP4。用RT-PCR法扩增A2及MP4全长F基因并自动测序；用微量中和试验鉴定MP4在体外对PZ中和反应的抗性；用Western blot鉴定其F蛋白免疫反应性的变化；最后在棉鼠模型内观察PZ预防A2和MP4感染的效果。结果与A2母株比较，MP4于F基因828位核苷酸发生突变(A→T)，导致272位推导氨基酸由赖氨酸变为甲硫氨酸。MP4在体外及在棉鼠肺内的生长能力无明显改变。MP4F蛋白虽仍可表达于受感染细胞膜上，但不再被PZ识别。动物实验证实，即使大剂量PZ亦不能预防MP4感染。结论体外筛选的PZ逃逸株在棉鼠模型体内对同一抗体的免疫预防具有极强的抗性，类似情况是否会在人体内发生及是否会导致严重后果尚有待进一步研究。     

呼吸道合胞病毒单克隆抗体逃逸株体外适合度变化

目的 Palivizumab(PZ)是针对呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)F蛋白的人源化单克隆抗体(ScAb).本研究观察PZ逃逸株体外适合度变化规律.方法 采用竞争复制法测定两株Pz抵抗株(F212和MP4)的体外适合度.将等量F212和母株A2混合后在HEp-2细胞中连续转代,在不同时间点采用差异噬斑法、核酸序列图谱分析法和限制性片段多态性法分析混合病毒群体中F212和A2的比例.由于MP4在细胞培养和棉鼠肺内复制水平与A2相似,故将A2和MP4按照1:1、10:1、100:1和1000:1的比例混合并在HEp-2细胞中竞争复制,不同时点采用差异噬斑法和核酸序列图谱分析法分析混合病毒群体中MP4和A2比例.结果 等比例混合的F212/A2混合群体在传代至10代时,F212已基本消失,传至35代时仍无F212信号,提示其适合度低于A2.A2/MP4混合病毒群体中,除按1000:1比例预混外,其余所有比例预混的病毒中MP4均成为优势株,因而提示MP4的适合度高于A2.结论 首次发现RSV PZ逃逸株适合度可超过原型株A2,了解适合度增加或降低的机制对减毒活疫苗的研究有理论指导意义.     

呼吸道合胞病毒单克隆抗体逃逸株体内适合度研究

目的 此前研究已在体外筛选获得呼吸道合胞病毒(RSV)Palivizumab(PZ)逃逸株MP4,体外评估发现MP4适合度高于A2母株,本研究在免疫缺陷棉鼠模型中进一步评价MP4体内适合度.方法 采用大剂量环磷酰胺腹腔注射法制备免疫抑制鼠模型,将PZ逃逸株MP4和母株A2等量混合,经鼻腔接种免疫缺陷动物模型,于接种后4天和4周分批处死动物,取动物肺脏组织研磨后采用差异噬斑形成法或核苷酸序列图谱分析法检测混合病毒群体中母株A2和逃逸株MP4的相对含量,以代表MP4相对于A2的适合度.将肺内病毒F基因片段RT-PCR扩增产物克隆并转化大肠杆菌,随机挑取部分菌落再行PCR扩增F基因片段及序列测定,观察F基因第828位碱基并计算A2株和MP4相对含量.结果 差异噬斑法结果显示接种后4天和4周棉鼠肺内病毒混合群体中均以MP4占优,序列图谱分析发现接种后4周8只棉鼠中7只肺内MP4占优.接种后4周克隆的8只棉鼠F基因片段78%(120/154)为MP4基因信号.结论 与体外适合度结果类似,MP4在棉鼠肺内的适合度高于A2母株,提示与MP4基因型相同的逃逸株一旦产生,可能在免疫缺陷个体间传播.     

呼吸道合胞病毒疫苗研究进展

呼吸道合胞病毒(RSV)是全球婴儿严重下呼吸道疾病最重要的病原体，发展其疫苗已被WHO列为全球最优先发展疫苗之一。目前RSV疫苗研究主要集中于亚单位疫苗、减毒活疫苗、DNA疫苗等。     

呼吸道合胞病毒逃逸株对单克隆抗体预防的抗性比较

目的 Palivizumab（PZ）是目前临床使用的惟一一个预防人类感染性疾病的单克隆抗体，本研究评估不同逃逸株在棉鼠体内对PZ预防的抗件。方法在细胞培养系统中筛选获得PZ逃逸株，测定其全长F基因序列，用微量中和法评估逃逸株对PZ的抗性，在棉鼠模型体内观察逃逸株对PZ预防的抗性差异。结果筛选获得的PZ逃逸株于F蛋白内第268位氨基酸（F212）和272位氨基酸（MP4、MS312、MS412和MS512）发生替换。用Western blot检测发现所有逃逸株PZ识别位点抗原性改变。F212复制能力受损，而其他逃逸株复制能力与A2母株接近。与A2原型株比较，MP4和MS412在体内外对PZ的中和活性具完全抗性。F212体外对PZ中和活性显示不完全抗性，但大剂量PZ在棉鼠体内仍能有效预防F212感染。结论不同PZ逃逸株体内对PZ的预防效应可能具有不同程度的抗性，某些逃逸株即使在PZ筛选压力下产生，亦不一定导致临床后果。     

呼吸道合胞病毒疫苗研究进展

呼吸道合胞病毒(RSV)是全球婴儿严重下呼吸道疾病最重要的病原体,发展其疫苗已被WHO列为全球最优先发展疫苗之一。目前RSV疫苗研究主要集中于亚单位疫苗、减毒活疫苗、DNA疫苗等。     

呼吸道合胞病毒抑制剂的研究进展

正人呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)是一种导致婴幼儿、老年人和免疫力低下的成年人下呼吸道疾病的重要RNA病毒~([1-4])。据估计全球每年有超过3300万5岁以下的儿童感染呼吸道合胞病毒,其中约10%会引起     

呼吸道合胞病毒的快速诊断

<正> 业已证明,合胞病毒(RSV)引起的婴幼儿肺炎及毛细支气管炎占病毒性感染的40％左右,此病毒于冬、春两季流行,医院及托儿所机构常由于诊断不明造成交叉感染,而引起严重后果。近年来国外已开展快速诊断,如从脱落细胞中寻找BSV,在我国尚属研究阶段。本文用自制的特异性强、效价高的抗血清,对50例小儿肺炎和毛细支气管炎患儿进行了脱落细胞荧光快速诊断,现将方法及结果报告如下。     

呼吸道合胞病毒的分型研究

目的 了解北京地区１９９０￣１９９１年和１９９７￣１９９８年两个非连续的流行年中呼吸道合胞病毒（ＲＳＶ）Ａ、Ｂ亚型和基因型的流行情况。方法 用间接免疫荧光法（ＩＩＦ）检测ＲＳＶ阳性鼻咽分泌物（ＮＰＳ）标本或ＲＳＶ分离株,划分Ａ、Ｂ亚型。根据Ｎ基因片段的限制性酶切图型将ＲＳＶ分离株分成至少６个基因型ＮＰＩ－６ＮＰＩ,３和６属于Ｂ亚型,ＮＰ２４和５属于Ａ亚型。根据ＳＨ基因片段的核苷酸序列将Ａ亚型分离株     

我国部分地区呼吸道合胞病毒地方株磷蛋白基因序列分析

目的 了解我国呼吸道合胞病毒（ＲＳＶ）地方株的Ｐ（Ｐｈｏｓｐｈｏｒｐｒｏｔｅｉｎ,Ｐ）蛋白基因状况和变异特征。方法 选取不同地区具有不同流行特征的６株ＲＳＶ地方株,以提取的病毒ｍＲＮＡ为模板进行逆转录－聚合酶链扩增（ＲＴ－ＰＣＲ）扩增、目的基因的克隆及序列测定分析。结果 地方株和同亚型原型株之间Ｐ蛋白核苷酸序列及推导出的氨基酸序列同源性均超过９５％;不同亚型间存在较大差异,核苷酸全序列同源性低于８５％,尤其在３′端非编码区及中间变异区。由氨基酸序列推导出的疏水性分析图显示,Ａ、Ｂ亚型中间变异区存在疏水性的不同,这为解释Ａ、Ｂ亚型间Ｐ蛋白电泳迁移率的不同提供了一种可能。结论 我国ＲＳＶ地方株与原型株之间的Ｐ蛋白无论在核苷酸水平还是在氨基酸水平均存在一定的变异。这些结果对于了解我国ＲＳＶ地方株的基因状况提供了有益的     

北京地区正常人群血清中呼吸道合胞病毒F和G蛋白…

以表达呼吸道合胞病毒（ＲＳＶ）Ｆ和Ｇ蛋白的重组痘苗病毒作为抗原，用间接免疫荧光法检测北京地区不同年龄组正常儿童及成人血清中ＲＳＶ Ｆ和Ｇ蛋白特异性ＩｇＧ抗体。其结果表明：成人及产妇静脉血中有中等滴度的ＲＳＶ抗体及较低水平的Ｆ和Ｇ蛋白特异性ＩｇＧ抗体。初生婴儿脐带血中的ＲＳＶ Ｆ和Ｇ蛋白ＩｇＧ抗体水平同母亲静脉血中的一致，表明属母传抗体。婴幼儿ＲＳＶ抗体水平在生后６个月内迅速降低，６个月以后抗体的滴     

呼吸道合胞病毒研究有新发现

呼吸道合胞病毒研究有新发现蚌埠医学院附属医院儿科承担的安微省卫生厅招标科研项目“双哌达膜治疗呼吸道合胞病毒肺炎基础与临床应用研究”，最近通过了由省卫生厅组织的专家鉴定。呼吸道合胞病毒是婴幼儿最重要的下呼吸道感染病原体，可引起婴幼儿支气管炎及肺炎，日后...     

呼吸道合胞病毒F蛋白研究进展

人呼吸道合胞病毒（RSV）融合蛋白（F蛋白）为病毒表面结构蛋白,可以刺激机体产生保护性抗体和细胞免疫反应。因此对F蛋白的深入研究将有助于了解病毒感染的机理,从而为研究RSV的免疫机理、研制特定部位的亚单位或多肽疫苗提供帮助。     

呼吸道合胞病毒跨膜蛋白研究进展

呼吸道合胞病毒(Respiratory syncytial virus,RSV)属副粘病毒科肺病毒属,是引起小儿病毒性肺炎最常见的病原,其跨膜蛋白包括融合性F蛋白、吸附性G蛋白和小疏水SH蛋白,它们在病毒的吸附、穿入中具有重要作用,F和G蛋白还是刺激机体免疫应答的主要抗原,因此在疫苗研制中具有重要意义.     

呼吸道合胞病毒疫苗研究动态

呼吸道合胞病毒(respiratory syneytial virus，RSV)是引起婴幼儿严重下呼吸道感染的重要病毒性病原体，广泛分布于世界各地。其发病率高，多数儿童在两岁前都感染过RSV。老年人和免疫力低下的人群中也会暴发流行。RSV感染的临床表现在不同年龄组往往不同，一般可致鼻炎、中耳炎、哮喘、支气管炎、细支气管炎和肺炎，尤其以后两种疾病最为严重，甚至可导致死亡。RSV属副黏病毒科，肺炎病毒属，病毒粒子直径约150～300nm。     

从尸解肺组织分离呼吸道合胞病毒2例分析

从尸解肺组织分离呼吸道合胞病毒２例分析谢健屏，常汝虚，张美德（广州市儿童医院病毒室，广东５１０１２０）从２例尸解取出肺组织作病毒培养分离出呼吸道合胞病毒（ＲＳＶ）。病例１：男性，年龄６个月。１９８５年４月因发热、咳嗽、气促而住院。出生后一个月就发现患...     

中国呼吸道合胞病毒地方株G蛋白在重组痘苗病毒中的表达

目的　构建表达中国呼吸道合胞病毒 (RSV)地方株G蛋白基因的重组痘苗病毒 ,以用于RSV感染防治的研究。方法　用基因克隆技术将中国RSV地方株G蛋白基因插入到痘苗病毒载体中 ,与痘苗病毒共感染获得重组病毒。用免疫印迹、ELISA、蚀斑减少试验等方法检测表达产物的免疫原性及生物活性。结果　RSV地方株G蛋白在痘苗病毒中获得较好的表达 ,表达产物的糖基化程度较高 ,且该重组病毒免疫家兔可诱发特异性抗体产生。蚀斑减少试验证明 ,用该表达产物制备的抗血清具有中和病毒的活性。结论　重组病毒表达的中国RSV地方株G蛋白具有较好的抗原性、免疫原性等生物活性