人脐血造血干/祖细胞体外扩增的研究新进展

人脐血造血干／祖细胞增殖能力强，在不同的细胞生长因子联合作用下，可以有目的地扩增，使单份脐血造血干／祖细胞数量增加。动物实验证实了体外扩增并未降低造血干／祖细胞在小鼠体内的造血重建能力。因此，脐血造血细胞体外扩增有望解决成人济血移植中存在的造血干／祖细胞数量不足的问题。     

造血干/祖细胞体外扩增的临床应用现状

重组人造血生长因子 (Ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒｓ ,ＨＧＦ)以及造血干 祖细胞 (Ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃｓｔｅｍ ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒｃｅｌｌｓ,ＨＳＰＣ)动员、采集和分离技术的进步不仅推动了临床大剂量化疗的发展 ,同时也促进了体外扩增ＨＳＰＣ临床应用这一细胞治疗新领域的开展。众多研究显示 ,体外扩增ＨＳＰＣ是可行的。这一技术可克服单份脐血应用于成人ＨＳＰＣ数量的不足 ;对于骨髓移植来说 ,可以减少骨髓的采集量和采集时间 ,对减轻供者的痛苦以及费用具有重要的意义 ;同样对那些外周血干细胞…     

内皮细胞在调控造血中的作用

如何在不损害体内重建能力的前提下体外培养和扩增造血干祖细胞是造血干细胞临床移植的一个关键问题。近年研究结果证明,内皮细胞基质层在为造血干祖细胞扩增与分化提供调控微环境方面有重要作用。     

Flt3／FL结构、功能及对脐血造血干／祖细胞体外扩增作用的研究

Flt3是主要表达于造血干／祖细胞上的一种Ⅲ型酪氨酸激酶受体,Flt3配基（FL）是一种早期造血生长因子,与造血调控密切相关。FL在脐血造血干／祖细胞体外扩增中发挥重要作用,并具有其他方面的功能。本文就Flt3/FL的结构、功能及其在脐血造血干／祖细胞体外扩增中的作用作一综述。     

小鼠骨髓内皮细胞条件培养液体外扩增胚胎及成体造血干/祖细胞的差异及其机制探讨

本研究比较小鼠骨髓内皮细胞条件培养液(mBMEC-CM)联合FL和TPO对卵黄囊和骨髓造血干／祖细胞体外生长的影响，并对其机制进行探讨。取卵黄囊和骨髓单细胞悬液，对照组中加入含10％FBS的DMEM，实验组分别加入10％mBMEC-CM，FL(5ng/ml)和TPO(2ng／ml)，10％mBMEC-CM复合FL和TPO培养24小时后进行集落培养，计数CFU-GM和HPP-CFC的集落数。应用Atlas cDNA Expression Array对卵黄囊和骨髓造血细胞表达的细胞因子受体进行检测。结果表明：mBMEC-CM能扩增卵黄囊和骨髓CFU-GM和HPP-CFC，其与FL和TPO联合后扩增能力明显增强；mBMEC-CM扩增骨髓CFU-GM和HPP-CFC的能力明显强于其扩增卵黄囊CFU-GM和HPP-CFC的能力。检测到小鼠卵黄囊及骨髓造血细胞存在差异表达的细胞因子受体；卵黄囊造血细胞表达PDGF-Rβ，PDGF-Ra和促肾上腺皮质激素释放因子受体，而在骨髓造血细胞中未检测到上述受体的表达；在骨髓造血细胞中表达的IFN-γR，GM-CSFR，多巴胺D2受体和卵泡刺激素受体则未在卵黄囊造血细胞中检测到mRNA的表达。结论：mBMEC-CM能支持卵黄囊和骨髓造血祖细胞的体外扩增，其与FL和TPO联合后扩增能力明显增强；mBMEC-CM对骨髓造血祖细胞表现出更强的扩增作用。检测到卵黄囊和骨髓造血细胞之问存在差异表达的细胞因子受体，提示mBMEC-CM对胚胎及成体造血细胞扩增中存在的差异可能与两种造血细胞存在差异表达的细胞因子受体有关。     

间充质干细胞和内皮祖细胞对脐血造血干/祖细胞体外扩增效力的影响

目的比较脐带来源的间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSCs)和内皮祖细胞(Endothelial progeni-tor cells,EPCs)对脐血造血干/祖细胞(Hematopoietic stem/progenitor cells,HSCs/HPCs)的体外扩增效力。方法正常人脐血中分离单个核细胞(Mononuclear cells,MNCs),流式细胞术检测其中HSCs/HPCs所占比例,将MNCs分别接种于处理后的MSCs或EPCs或仅接种于培养液中,比较不同培养条件对HSCs/HPCs扩增能力、表面抗原CD34的表达以及集落形成能力的影响。结果共培养过程中,MSC组和EPC组的MNCs扩增倍数均明显高于对照组,且EPC组更为显著。扩增7天后,对照组、MSC组和EPC组的HSCs/HPCs CD34的表达均较扩增前下降,其中EPC组下降的最为显著,MSC组最不显著。共培养4天后,MSC组的HSCs/HPCs集落形成总数为EPC组的2.47倍(**,P<0.01),共培养7天后,MSC组的HSCs/HPCs集落形成总数为EPC组的3.45倍(**,P<0.01);EPC组与对照组的HSCs/HPCs集落形成总数无显著性差异。结论 MSC和EPC均可为HSCs/HPCs的体外扩增提供适宜的微环境,MSC可抑制HSCs/HPCs的分化,有助于维持其表面抗原CD34的表达,并保持其造血重建潜能和归巢能力;而EPC则可有效促进HSCs/HPCs的分化。     

IL-6和sIL-6R对造血干/祖细胞扩增作用的研究进展

SCF、Flk2/Flt3配体(FL)及TPO均可刺激造血细胞增殖,而IL-6受体(IL-6R)的可溶性形式(sIL-6R)与以上因子有协同增殖作用.本文就sIL-6R的特性及其作用机制,IL-6-sIL-6R复合物协同造血因子对造血干/祖细胞、SRC的扩增作用作一综述.     

P21、P27蛋白在肿瘤中的表达研究进展

肿瘤的发生发展与细胞周期调控紊乱有关,肿瘤的研究已迈入分子生物学、基因学阶段。参与细胞周期调控的相关分子主要有细胞周期蛋白(cyclin)、细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂(CDKI)三大类。P21、P27蛋白作为近年来发现的细胞周期蛋白依赖性抑制剂CIP/KIP家族中重要的成员,其在肿瘤中的表达研究目前受到了很大关注。本文对P21和P27蛋白的结构、生物学功能及其与肿瘤的相关研究进行综述。     

脐血间充质干细胞的生物学特征及其对造血干/祖细胞体外扩增的支持作用

目的探讨脐血间充质干细胞(MSC)的生物学特征及其对造血干/祖细胞体外扩增的支持作用。方法用液体培养法分离脐血贴壁细胞,采用ELISA方法检测贴壁细胞条件培养液中细胞因子的表达;用流式细胞术分析其免疫表型特征;在成软骨细胞诱导培养条件下诱导细胞分化,并用RTPCR方法检测分化后细胞原胶原Ⅱ型基因的表达。采用分阶段共培养方法观察脐血贴壁细胞对CD34+细胞体外扩增的支持作用。结果脐血单个核细胞纤维样细胞集落形成率为(3.5±0.7)/106。脐血MSC体外至少可以扩增15代。没有分化的脐血MSC表型为CD13、CD29、CD90、CD105、CD166、SH2、SH3和SH4阳性,CD45、CD34和CD14阴性;脐血MSC培养上清中干细胞因子、IL6和肿瘤坏死因子α检测阳性。在成软骨细胞诱导培养基培养条件下,脐血MSC原胶原Ⅱ型基因mRNA表达阳性。脐血MSC与CD34+细胞共掊养14d,CD34+细胞扩增率高于未共培养组4倍。结论脐血MSC具有类似于成体骨髓MSC的特征,对造血干细胞增殖有明显的支持作用。     

三丁基过氧化氢体外诱导造血干/祖细胞衰老中的SIRT6/NF-κB信号轴

背景：SIRT6/NF-κB信号轴是细胞衰老的调控通路,但其在造血干/祖细胞（hematopoietic stem and progenitor cel ,HSC/HPC）衰老中的作用尚不清楚。目的：探讨SIRT6/NF-κB信号通路在三丁基过氧化氢体外诱导造血干/祖细胞衰老中的作用。方法：免疫磁性分选法分离、纯化小鼠Sca-1＋ HSC/HPC。用100μmol/L三丁基过氧化氢体外诱导Sca-1＋HSC/HPC构建体外衰老模型,通过衰老相关β-半乳糖苷酶细胞化学染色、流式细胞术分析细胞周期、造血祖细胞混合集落培养确定三丁基过氧化氢诱导 Sca-1＋HSC/HPC 衰老的生物学作用。荧光定量 PCR 及Western blotting检测衰老调控分子SIRT6、NF-κB mRNA及蛋白的表达。结果与结论：与对照组比较,衰老组Sca-1＋ HSC/HPC β-半乳糖苷酶染色阳性细胞数、G0/G1期细胞比例增高,形成造血祖细胞混合集落数量减少;SIRT6 mRNA及蛋白表达下调,NF-κB mRNA及蛋白表达上调。结果表明三丁基过氧化氢可能通过调控SIRT6/NF-κB信号通路发挥诱导Sca-1＋HSC/HPC衰老作用。     

P27kip1在恶性肿瘤中的调控及其作用

P27kip1蛋白属于细胞周期调控蛋白Cip/Kip家族,是细胞周期负性调控因子,在人体多种恶性肿瘤细胞增值、分化及细胞凋亡中起着非常重要的作用,因此与p27kip1蛋白相关的研究成为近年研究热点,目前认为,p27kip1基因是一种抑癌基因,细胞内的许多蛋白及因子可以在各种水平参与p27kip1基因表达的调控.现就p27kip1的生物学功能及在恶性肿瘤中的调控及其作用研究进展进行综述.     

人胎盘造血干/祖细胞的增殖分化能力

近年来有研究表明，人胎盘组织富含造血干细胞，而且其CD34^＋CD38^-、CD34^＋CD38^＋造血干／祖细胞（HSPC）的百分率明显高于脐血。但有关人胎盘组织CD34^＋HSPC亚群的增殖分化能力的研究却未见报道。我们采用免疫磁珠分选人胎盘组织CD34^＋CD38^-和CD34^＋CD38^＋HSPC亚群，并用不同培养体系进行血细胞集落培养，以评价其增殖分化能力。     

干扰素-γ对脐血造血干/祖细胞细胞周期蛋白D各亚型表达的影响

体外观察干扰素-γ(interferon-γ，IFN-γ)对脐血造血干／祖细胞细胞周期蛋白D(cyclinD)不同亚型表达的影响，以探讨IFN-γ造血抑制的机制。用免疫磁珠阳性分选的方法分离脐带血CD34^ 细胞，并进行体外扩增；用甲基纤维素半固体培养方法，观察IFN-γ对脐血造血干／祖细胞CFU-GM形成的影响；用半定量RT-PCR检测IFN-γ对脐血造血干／祖细胞cyclinD不同亚型表达的影响。结果显示IFN-γ可以显著抑制脐血CFU-GM的形成，并可以从mRNA水平抑制cyclinD2和CyclinD3亚型的表达。由此得出结论，IFN-γ可以显著抑制cyclinD的表达，这可能是IFN-γ介导造血抑制的一种机制。     

不同来源人造血干/祖细胞在NOD/SCID小鼠体内归巢能力的差异

目的 比较不同来源的人造血干／祖细胞在NOD／SCID小鼠体内归巢能力的差异性，并探讨其体内归巢能力与膜表面归巢相关分子CXCR4表达水平的相关性。方法 采用流式细胞术（FACS）检测新鲜脐血、冻存脐血、动员后外周血（mPB）及骨髓来源的CD34^＋细胞表面CXCR4表达水平；将荧光染料CFSE标记的人CD34^＋细胞移植人接受照射的NOD／SCID小鼠，移植后20小时检测已归巢于NOD／SCID小鼠骨髓及脾脏中不同来源的人CD34^＋细胞，计算其相应的骨髓及脾脏归巢效率；并将小鼠股骨制成组织切片，荧光显微镜下观察人CD34^＋细胞在小鼠骨髓腔内的分布。结果 新鲜脐血、冻存脐血、mPB和骨髓CD34^＋细胞膜表面CXCR4表达阳性率分别为（49.52±1．12）％。（46．12±2．29）％，（48．50±2．48）％和（65．39±1．27）％，CD34^＋细胞在NOD／SCID小鼠骨髓的归巢效率分别为（3．00±0．44）％，（2．84±0．46）％，（4．06±0．70）％及（5．76±0．52）％；在脾脏的归巢率分别为（1．88±0．12）％，（1．80±0．15）％，（1．90±0．22）％，（2．16±0．34）％。归巢的CD34^＋细胞主要分布于小鼠股骨的骨内膜区域。结论 脐血CD34^＋细胞膜表面CXCR4水平低于mPB和骨髓。经冻存复苏后脐血CD34^＋细胞膜表面CXCR4水平略有下调。脐血CD34^＋细胞在照射NOD／SCID小鼠的骨髓归巢效率低于mPB和骨髓。     

SDF-1-CXCR4生物学轴对造血干/祖细胞的调控作用

基质细胞衍生因子(SDF-1)及其特异性受体(CXCR4)所构成的SDF-1-CXCR4生物学轴在造血干/祖细胞(HSPCs)的归巢、增殖及分化过程中发挥重要作用。本文对其在HSPCs造血调控中的作用及机制进行综述。     

Flt3/FL结构、功能及对脐血造血干/祖细胞体外扩增作用的研究

Flt3是主要表达于造血干/祖细胞上的一种Ⅲ型酪氩酸激酶受体,Flt3配基(FL)是一种早期造血生长因子,与造血调控密切相关。FL在脐血造血干/祖细胞体外扩增中发挥重要作用,并具有其他方面的功能。本文就Flt3/FL的结构、功能及其在脐血造血干/祖细胞体外扩增中的作用作一综述。     

增强造血干/祖细胞归巢潜能的可行性策略

造血干／祖细胞（HS／PC）的归巢为一多步骤过程，众多黏附分子、趋化因子、生长因子及蛋白水解酶等参与HS／PC归巢过程的调控，其中以基质衍生因子（SDF）-1α与其特异性G蛋白偶联受体CXCR4（SDF-lα／CXCR4轴）的调节作用尤为重要，Wright等^[1]研究证实CXCR4或SDF-1α缺陷小鼠因胎肝和骨髓造血功能衰竭而死于围产期。新近发现多种细胞因子或蛋白成分可以增加HS／PC对SDF-lα／CXCR4轴的敏感性和反应性，并由此构建复杂的SDF-1α／CXCR4轴调控模型，我们就此领域的研究现状作一综述。     

F1t3/FL结构、功能及对脐血造血干/祖细胞体外扩增作用的研究

Flt3是主要表达于造血干/祖细胞上的一种Ⅲ型酪氮酸激酶受体,Flt3配基(FL)是一种早期造血生长因子,与造血凋控密切相关.FL在脐血造血干/祖细胞体外扩增中发挥重要作用,并具有其他方面的功能.本文就Flt3/FL的结构、功能及其在脐血造血干/祖细胞体外扩增中的作用作一综述.     

凋亡在脐血造血干/祖细胞冷冻损伤中的作用及其机制研究

为探讨脐血造血干／祖细胞冷冻损伤中凋亡的作用及其机制，应用流式细胞术检测脐血CD34^ 细胞冻存前后细胞凋亡率、线粒体膜势能和Fas抗原，用免疫组织化学法检测Bcl—2蛋白表达，用Western blot和caspase-3蛋白活性分析检测caspase-3的表达．以甲基纤维素半固体培养进行造血祖细胞集落分析。研究结果显示，CD34^ 细胞在-196℃冻存2周或4周后凋亡率增加，电泳出现DNA梯形条带，CFUs分别下降了25．2％和30．1％。冷冻过程中细胞内线粒体膜势能下降，Bcl—2蛋白表达下调，而Fas抗原表达无明显改变。新鲜分离的CD34^ 细胞中caspase-3以分子量为32kD的非活性酶原形式存在，冷冻过程中caspase-3被激活，可检测到分子量为20kD的裂解片段，caspase-3蛋白活性分别增加了1．2倍和1.5倍。结论：凋亡在脐血造血干细胞冷冻损伤中起着重要作用，其机制可能是通过线粒体介导的caspase依赖性途径执行，caspase-3是其中一个重要的效应蛋白酶。     

SDF-1及其受体在造血干/祖细胞归巢中的作用

造血干 /祖细胞 (hematopoieticstem/progenitorcell,HSPC)的归巢 (homing)被认为是一个多步骤的过程 ,HSPC和内皮细胞上的多种粘附分子参与其中 ,与白细胞穿内皮移行到炎症部位的过程具有相似性。首先是HSPC沿骨髓血管壁的滚动和锚定 ,固定于内皮细胞表面上的趋化因子 ,激活HSPC上的 β1 和 β2 整合素 ,促进其与内皮细胞表面的免疫球蛋白样受体结合 ;接着HSPC发生穿内皮的移行 ,最后定居于骨髓微环境并开始重建造血。基质细胞衍生因子 1(stromalcell derivedfactor 1 ,SDF 1 ) ,又称前B细胞生长刺激因子 (pre Bcellgrowth stimu…