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目的对结核分枝杆菌Mtb81抗原基因进行克隆、表达及纯化,并评价其抗原性。方法应用聚合酶链反应技术扩增结核分枝杆菌H37Rv Mtb81 DNA序列;将目的基因构建大肠杆菌高效表达株;亲和层析柱纯化重组蛋白;经SDS-PAGE电泳鉴定;通用ELISA法进行重组蛋白的抗原性检测分析。结果获得了结核分枝杆菌抗原Mtb81基因,在大肠杆菌BL21中高效表达,Western印迹结果证实该重组蛋白能与抗结核分支杆菌多克隆抗体发生特异免疫结合反应。ELISA分析中,该纯化的重组抗原敏感性、特异性和准确性分别为:35.8%、98.3%和56.7%,具有良好的抗原性和较高的特异性。结论结核分枝杆菌Mtb81重组蛋白抗原具备良好的抗原性与特异性,为结核病诊断、重组疫苗应用和免疫效应检测以及抗原、抗体的大规模制备打下基础。 相似文献
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目的克隆结核分枝杆菌Mtb81蛋白的编码基因Rv1837c,并在大肠杆菌中表达、纯化,获得重组蛋白Mtb81。方法以结核分枝杆菌H37Rv基因组为模板,PCR扩增Rv1837c基因序列,克隆入原核表达载体pET-28a,构建重组表达质粒,转化大肠杆菌后用IPTG诱导表达,纯化表达产物,获得重组Mtb81。ELISA检测重组Mtb81蛋白的敏感性和特异性。结果重组质粒pETRv1837c测序表明具有正确的编码序列,质粒构建成功,重组蛋白Mtb81在大肠杆菌中以包涵体和可溶性形式稳定表达。以Mtb81为抗原ELISA检测结核病患者血清抗体总敏感性为20.83%,特异性为95.83%。结论结核分枝杆菌Mtb81重组蛋白能在大肠杆菌工程菌种成功表达,为进一步的应用研究奠定基础。 相似文献
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结核分枝杆菌差异蛋白MPT64与ESAT6的融合表达与纯化 总被引:3,自引:2,他引:1
目的: 融合表达结核分枝杆菌分泌蛋白MPT64-ESAT6,为结核病的预防提供可供选择的有效亚单位疫苗. 方法: 设计含不同酶切位点的mpt64和esat6引物,采用PCR的方法从结核分枝杆菌毒株H37Rv-DNA中分别扩增出相应大小的DNA片段,将片段分别与T-easy载体连接测序. 将测序正确的mpt64和esat6按照不同的酶切位点克隆入pPro-EX HT表达载体,挑选出阳性克隆,将诱导的表达产物进行SDS-PAGE蛋白电泳分析,同时与6×His的mAb进行Western-blot分析,并用Ni-NTA亲合柱纯化表达产物. 结果: PCR获得的mpt64和esat6序列与GenBank报道的完全一致. 两者在大肠杆菌DH5α株中融合表达的产物Mr为38×103,与预计大小相吻合. Western-blot结果显示,在Mr约38×103处有表达产物与6×His mAb特异性结合带. 表达产物为包涵体,通过Ni-NTA纯化系统,可得到纯化的目的蛋白. 结论: 结核分枝杆菌的分泌蛋白MPT64和ESAT6被成功的融合表达,有望为结核的临床判定提供有效的诊断试剂. 相似文献
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结核分枝杆菌CFP10和ESAT6优势肽段融合蛋白的表达及其免疫学研究 总被引:2,自引:0,他引:2
目的:构建结核分枝杆菌分泌蛋白的重组质粒及工程菌,获得纯化的CFP10-ESAT6P蛋白抗原,制备初步用于检测结核病患者的特异性抗体。方法:根据编码结核分枝杆菌基因序列设计引物,克隆表达结核CFP10-ESAT6重组蛋白,表达产物免疫新西兰大白兔,其中80%可产生高价的抗体。利用产物建立IgG间接ELISA方法鉴定其抗原性及实用性。结果:应用ELISA法,通过检测113例结核病患者、82例非结核病患者及健康献血员,CFP10-ESAT6P和对照PPD对结核病患者血清检测的敏感性分别为89.4%和79.6%,特异性分别为96.3%和93.9%。结论:高效表达纯化的CFP10-ESAT6蛋白抗原性强,可用于结核病患者抗体的检测,用于结核病的辅助诊断。 相似文献
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目的制备猪带绦虫囊尾蚴rTS-CC18抗原并对其抗原性进行鉴定,为建立猪囊尾蚴检测技术提供诊断抗原。方法用PCR方法从重组质粒pGEM-TS-CC18中扩增TS-CC18编码基因,构建pET30a-TS-CC18重组表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导筛选高表达量菌株。采用Ni-FF亲和层析方法提纯表达蛋白。Western blotting及间接ELISA检测重组蛋白的反应活性。结果Tricine-SDS-PAGE表明,重组菌经0.5 mmol/LIPTG诱导6 h,可稳定表达可溶性rTS-CC18蛋白,其相对分子质量约16×103。Western blotting检测诱导的蛋白能与猪囊尾蚴阳性血清发生特异性反应;间接ELISA检测血清抗体结果表明:纯化的rTS-CC18蛋白与全囊虫抗原的相对特异性达100.0%,相对敏感性达84.0%,总符合率为94.3%。结论成功制备了猪囊尾蚴rTS-CC18抗原,其特异性、敏感性及稳定性良好,对诊断猪囊尾蚴病及开发诊断制剂具有潜在应用价值。 相似文献
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目的:在外源抗原表位表达载体系统中构建并表达乙型肝炎病毒(HBV)抗原表位,并对其诊断敏感性进行评价。方法:人工合成编码HBV“a”抗原决定簇表位中24个氨基酸(S124-147)的寡核苷酸序列,克隆入外源抗原表位表达载体系统FHV-RNA2-I3位点,构建重组质粒,在原核pET系统(BL21细胞)中表达。通过ELISA和West-ernblot检测表达产物的抗原性,并以表达产物为包被抗原,通过ELISA和Westernblot检测58份乙肝患者血清抗-HBs。结果:嵌和蛋白可与抗-HBs特异性结合,其ELISA检测抗-HBs阳性率为77.5%,Westernblot的为68%,而对照试剂盒的为62%。结论:在外源抗原表位表达系统中表达的HBV重组抗原表位具有良好的抗原性,有诊断应用价值。 相似文献
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目的纯化获得结核分枝杆菌重组38kD蛋白,并评价其在血清学诊断方面的应用价值。方法应用亲和层析方法纯化结核分枝杆菌重组38kD蛋白,应用ELISA方法检测220例血清中的抗结核抗体。结果结核分枝杆菌重组38kD蛋白以包涵体形式表达,以48名正常人血清OD492+2S为正常限值,57例PPD强阳性血清,47例菌阳结核病人血清和68例菌171结核病人血清阳性检出率分别为13.8%、97.87%和83.82%。结论结核分枝杆菌38kD重组蛋白以包涵体形式高效表达,具有较强的抗原特异性和免疫反应性。 相似文献
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目的 建立以结核分枝杆菌特异性蛋白ESAT6、CFP10-ESAT6、ESAT6-PPE68为包被抗原检测结核病人血清中特异性抗体的间接ELISA检测方法。方法 利用本室构建并纯化的结核分枝杆菌特异性抗原蛋白ESAT6、CFP10-ESAT6、ESAT6-PPE68,建立结核分枝杆菌特异性抗体检测的间接ELISA检测方法:ESAT6-ELISA、CFP10-ESAT6-ELISA、ESAT6-PPE68-ELISA。并与PPD-ELISA同时检测220例结核病人血清、30例非结核呼吸疾病病人血清和50例健康人群血清,分别对三种方法的敏感性与特异性进行统计学分析。结果 ESAT6-ELISA的敏感性为25%,特异性为95%;CFP10-ESAT6-ELISA的敏感性为45%,特异性为93%;ESAT6-PPE68-ELISA的敏感性为48%,特异性为85%。结论 三种结核分枝杆菌特异性抗体检测方法的敏感性均低于PPD-ELISA,但三种结核分枝杆菌特异性抗体检测方法的特异性均高于PPD-ELISA,其中CFP10-ESAT6-ELISA检测的效果最佳,PPE68可作为结核特异性诊断的候选抗原。 相似文献
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[目的]分析前列腺特异性膜抗原(PSMA)基因片段在酿酒酵母中的诱导表达情况,以便进一步探讨重组人PSMA的免疫活性并完成抗前列腺癌PSMA蛋白疫苗的制备.[方法]应用基因重组技术将人PSMAcDNA序列克隆入酿酒酵母穿梭诱导表达载体pYES2/NT,构建重组酵母真核表达质粒pYES2/NT-PSMA,转化酿酒酵母菌株INVSc1,尿嘧啶筛选出阳性克隆转化子,经半乳糖诱导表达后进行菌体全蛋白的Western blot检测.[结果]成功构建了PSMA的酵母真核表达重组子pYES2/NT-PSMA,并在酿酒酵母INVSc1中得到有效表达,Western blot显示两个特异性的人重组PSMA全蛋白片段,相对分子质量分别为Mr=100×103及Mr=85×103.[结论]人PSMA基因片段能够在酿酒酵母中表达并进行翻译后糖基化修饰,为下一步进行抗前列腺癌PSMA疫苗的研制奠定了良好基础. 相似文献
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目的基因克隆、表达、纯化结核分枝杆菌14KDa蛋白,研究其抗原性,评价其在血清学诊断中的价值。方法以结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA为模板,应用PCR技术扩增14KDa蛋白基因片断,将其插入到高效表达载体PET-22b(+)上,构建重组质粒PET-22b(+)/14KDa,重组质粒在大肠杆菌中由IPTG诱导表达,表达产物经金属离子鳌合亲和层析方法纯化,免疫印迹和酶联免疫吸附(ELISA)试验分析重组蛋白的抗原性。结果构建了具有正确基因序列的14KDa蛋白重组质粒,在大肠杆菌BL21(DE3)中以可溶性蛋白形式表达,重组蛋白的表达量占菌体蛋白的40.8%,经过一步金属离子鳌合亲和层析后得到纯度为94.3%的目的蛋白。免疫印迹试验结果表明该蛋白能与羊抗结核血清发生特异免疫结合反应。应用ELISA方法对结核血清参考品进行检测,敏感性和特异性分别为75.6%和96.0%。结论获得了能高效表达14KDa蛋白的大肠杆菌工程菌,目的蛋白以可溶性形式表达,该重组蛋白具有良好的免疫原性,可望成为结核血清学的诊断抗原之一。 相似文献
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人工全髋关节置换术的手术配合 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:介绍人工全髋关节置换术的手术配合做法;方法:主要在手术配合的六个方面,解决防感染、防栓塞等问题。结果:30例人工全髋关节置换术均获成功,结论:手术配合是护士责任心和基本功的全面体现,对提高手术效果有至关重要的影响。 相似文献
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以^3氢-胸腺嘧啶核苷放射自显影法及HE染色,观察并分别测定了18例正常子宫内膜增殖中期,15例增殖晚期的腺上皮细胞或间质细胞的标记指数、分裂指数。结果显示:子宫内膜增殖晚期腺上皮细胞或间质细胞之LI均明显高于增殖中期。同时,增殖晚间质细胞之MI也明显高于增殖中期,即此两种细胞在增殖晚期中增生明显,其增生状态初步获得了定位定量测定的正常值。 相似文献
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尿微量白蛋白检测在继发性肾脏疾病中的临床意义 总被引:1,自引:0,他引:1
谷秀娟 《延安大学学报(医学科学版)》2010,8(1):24-25
目的探讨尿微量白蛋白(m-Alb)检测在继发性肾脏疾病中的临床意义。方法采用Beckman Immage全自动特种蛋白分析仪对糖尿病组、高血压组、心脏病组患者进行了m-Alb测定,同时与健康组结果作对比。结果m-Alb检测糖尿病组为3.7±5.26mg/dl,高血压组为7.5±8.18mg/dl,心脏病组为7.8±3.76mg/dl,健康组为0.66±0.48mg/dl,各试验组m-Alb增高百分率为糖尿病组48.9%,高血压组37.5%,心脏病组26.9%。结论尿蛋白阴性的糖尿病、高血压、心脏病患者进行m-Alb检测,可以监测病程的进展。 相似文献
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[目的 ]通过尿液 pH值对红细胞检验影响的观察 ,更加科学、准确地诊断血尿和血红蛋白尿。[方法 ]采用干化学分析仪检测和尿液显微镜红细胞计数 ,观察 180例正常人尿标本加入正常人血标本后 ,不同 pH值 ,不同时间内 ,观察红细胞溶解情况。 [结果 ]pH <5 .5以下时 ,随着时间的延长 ,红细胞溶解现象明显。 1h后观察有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ;2h后有非常显著性差异 (P <0 .0 1)。[结论 ]pH <5 .5时对红细胞计数影响较大 ,易致红细胞发生溶解现象 ,出现假性血红蛋白尿 ,对血尿和血红蛋白尿很难区分 ,给临床诊断造成不便 ,更易引起漏诊和误诊。 相似文献
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本文报告80例局限于小腿或手或足的银屑病。均经皮肤组织病理检查确诊。因部位比较特殊。受多种理化因素影响,使皮疹形态发生轻重程度不同的变化,常看不到典型损害,因而误诊为神经性皮炎,湿疹,慢性皮炎及癣等。作者对误诊原因进行了分析后,提出了鉴别诊断方法。 相似文献
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目的解决腰椎间盘突出症手术中神经压迫。方法对1980~1998年再手术资料进行统计分析,讨论分析再手术原因,再次手术前影像学检查,观察病理变化以确定再手术方法。结果对11例随访6个月~1年,优7例(68.4%),良3例(36.8%),差1例(2.8%)。结论初次手术前详细查体和分析X线片,术中用导尿管和神经剥离探查,尽量避免髓核遗留,手术范围不宜太大,尽量减少对软组织和脊柱结构的破坏,避免形成硬膜囊与神经根粘连而致单纯形疤痕。 相似文献