Bmi-1蛋白在胃癌组织中的表达及其与胃癌患者术后生存的相关性

胃癌发病与原癌基因的高表达有密切的相关性.多梳基因(PcG)家族由多种与细胞周期和增殖相关的转录抑制子组成,是一类重要的与发育相关的基因.Bmi-1基因是PcG基因家族的成员之一[1],可协同c-myc基因共同促进细胞转化和肿瘤形成,使肿瘤细胞逃逸凋亡[2].目前证实Bmi-1基因在多种肿瘤中均呈高表达[3],且与患者预后有关.本文拟研究Bmi-1基因在胃癌组织中的表达及其与胃癌患者术后生存的相关性.     

沉默Bmi-1表达对人小细胞肺癌细胞凋亡的影响及其机制研究

目的探讨沉默原癌基因Bmi-1(B-cell-specific moloney murine leukemia virus integration site 1)对人小细胞肺癌NCI-H345细胞凋亡的影响及其可能的作用机制。方法将NCI-H345细胞分为对照组(不做处理)、Bim-1 NC组(转染转染Bmi-1基因阴性对照序列)和Bmi-1转染组(转染转染Bmi-1基因序列)3组,以脂质体转染法转染上述各组细胞,采用荧光定量(RT-PCR)检测Bmi-1 mRNA的相对表达水平,蛋白质印迹法(Western blot)检测Bmi-1和Cleaved Caspase-3蛋白的相对表达水平,流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期。结果转染Bmi-1 48 h后,与对照组相比,Bmi-1转染组NCI-H345细胞中Bmi-1 mRNA和蛋白的相对表达水平均明显降低(P0.05);Bim-1 NC组和对照组相比,Bim-1 mRNA和蛋白表达水平差异无统计学意义(P0.05)。流式细胞仪检测结果显示,与对照组相比,Bmi-1 NC组细胞中G0/G1期、S期和G2/M期细胞所占比例差异无统计学意义(P0.05),Bmi-1转染组中G0/G1期细胞所占比例明显升高,S期和G2/M细胞所占比例明显下降,差异有统计学意义(P0.05)。与对照组相比,Bmi-1 NC组的细胞凋亡率差异不显著(P0.05),Bmi-1转染组的细胞凋亡率显著升高(P0.05)。Western blot检测结果显示,Bmi-1转染组细胞中Cleaved Caspase-3蛋白的表达水平较对照组明显升高(P0.05),Bmi-1 NC组细胞中Cleaved Caspase-3蛋白的表达水平与对照组间差异不显著(P0.05)。结论 Bmi-1基因沉默能诱导NCI-H345细胞凋亡,其作用机制可能与阻滞G0/G1期和上调Cleaved Caspase-3蛋白的表达有关。     

多梳基因Bmi-1与胃癌关系研究进展

多梳基因（PcG）在胚胎发育、细胞周期调节、造血干细胞更新、肿瘤发生中起重要作用。转录抑制因子Bmi-1是PcG家族成员之一,与多种人类恶性肿瘤的发生、发展有关。最新研究发现Bmi-1高表达与胃癌的发生、发展、浸润、转移、预后等密切相关。本文就Bmi-1的分子结构、作用机制及其与胃癌关系的研究进展作一综述。     

siRNA沉默Bmi-1表达对肺腺癌A549细胞侵袭能力的影响

目的观察Bmi-1基因沉默对A549细胞增殖和侵袭影响并初步探讨其机制。方法根据四条针对Bmi-1的小干扰RNA(siRNA)序列,将其瞬时转染到A549细胞中,选择最有效的一条链并构建到逆转录病毒真核表达载体p SUPERretro-Neo中,形成重组载体,然后将其稳定转染至A549细胞中,构建了稳定转染Bmi-1-shRNA的A549细胞。应用MTT实验检测Bmi-1-siRNA对A549细胞体外增殖的影响;Transwell小室观察其对A549侵袭能力的影响;RT-PCR和明胶酶谱法分别观察siRNA对A549细胞MMP-2/MMP-9表达及活性的影响。结果 Bmi-1 siRNA能够抑制A549细胞的增殖能力和侵袭能力,Bmi-1 siRNA能够抑制A549细胞MMP-2/MMP-9的表达和活性。结论 Bmi-1 siRNA对A549细胞侵袭能力的抑制和MMP-2/MMP-9的活性降低有关。     

Bmi-1-siRNA对乳腺癌MCF-7细胞体外增殖的抑制作用

目的探讨Bmi-1-siRNA对乳腺癌MCF-7细胞体外增殖的作用及机制。方法将不同浓度的Bmi-1-siRNA转染MCF-7细胞,MTT法检测细胞增殖情况,免疫细胞化学技术检测转染72h后MCF-7细胞内Bmi-1、端粒酶逆转录酶（hTERT）、细胞增殖相关核抗原Ki-67蛋白的表达。结果Bmi-1-siRNA对MCF-7细胞的生长抑制率明显升高,且随浓度增高而升高（P〈0．05）;MCF-7细胞中Bmi-1、hTERT、Ki-67蛋白表达明显降低（P〈0．05）。结论Bmi-1-siRNA可有效抑制MCF-7细胞的增殖,其机制为降低Bmi-1 mRNA及Bmi-1、hTERT蛋白的表达。     

Bmi-1与结肠癌干细胞上皮-间质转化的研究

癌基因Bmi-1是多梳基因(Pc G)家族中的一员,广泛表达于血液肿瘤和多种实体瘤。Bmi-1对肿瘤干细胞具有促进和维持作用,并通过PTEN-PI3K/AKT等信号通路影响肿瘤的上皮-间质转化(EMT),使细胞出现形态学和基因型上的改变。肿瘤干细胞和EMT也存在相互作用,共同参与肿瘤的形成、浸润和转移过程,并介导放化疗抵抗性。本文就Bmi-1与结肠癌干细胞和EMT的研究现状作一概述。     

Bmi-1基因对胃癌细胞增殖的影响及机制

目的:探索干扰Bmi-1基因后对其可能的下游基因Akt/PKB活性和P16INK4a基因表达的影响及对肿瘤细胞增殖和细胞衰老的作用.方法:用s iRNA技术干扰Bmi-1表达后,运用Western blot检测Bmi-1蛋白及相关蛋白pAkt、Akt和P16INK4a的表达,同时进行SA-β-Gal染色检测细胞衰老,软琼脂克隆形成实验检测细胞的增殖能力.结果:转染Bmi-1 i质粒组平均细胞衰老率28%±3.5%,而对照Ctrl i组为16%±2.7%,有明显统计学差异( P<0.01).转染Bmi-1 i质粒组细胞平均克隆形成数为3.4±1.4个,而对照Ctrl i组为11±2.3个,两组比较有明显的统计学差异( P<0.01).Bmi-1 i 组较Ctrl i 组Bmi-1和pAkt蛋白表达明显下降,而P16INK4a蛋白表达升高.结论:干扰Bmi-1可以通过降低Akt/PKB活性和上调P16INK4a蛋白表达,促进肿瘤细胞衰老并减弱肿瘤细胞的增殖能力.     

体外培养的平滑肌细胞多梳基因Bmi-1的表达变化及其与细胞增殖和细胞周期的关系

目的 探讨多梳基因Bmi-1在体外培养的血管平滑肌细胞中的表达变化及其与细胞增殖和细胞周期谮的关系,以了解在平滑肌细胞表型转换及增殖过程中的早期基因事件.方法 逆转录聚合酶链反应检测1～4代大鼠平滑肌细胞及不同浓度的丙戊酸钠作用于第4代血管平滑肌细胞24、48、72和96 h后Bmi-1 mRNA的表达.倒置显微镜下观察正常细胞及各组药物作用后细胞数量和形态的变化.四甲基偶氮唑盐法分析各组药物作用后细胞增殖活力的改变.流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡.结果 体外培养的第1代大鼠血管平滑肌细胞有少量的Bmi-1 mRNA的表达,在传代过程中Bmi-1 mRNA的表述量逐渐增加,到第4代达到较高水平;经0.5～4.0mmoL/L丙戊酸钠作用于第4代平滑肌细胞24、48、72和96 h后,Bmi-1 mRNr A的表达量随浓度的增加和时间的延长而呈下降趋势.各浓度丙戊酸钠干预组随作用时间及浓度的增大均出现了生长抑制.经丙戊酸钠处理后各组出现细胞周期G2/M期阻滞及细胞凋亡,且随药物浓度的升高而增大.结论 平滑肌细胞体外增殖及由收缩表型向合成表型的转化过程中出现平行的Bmi-1基因表达上调.丙戊酸钠可通过降低Bmi-1的表达明显抑制血管平滑肌细胞生长,并具有细胞周期G2/M期阻滞及捉凋亡作用.     

RNAi抑制人大肠癌LOVO细胞Bmi-1基因的表达

目的探讨RNA干扰（RNAi）技术沉默Bmi-1基因表达对人大肠癌细胞株LOVO增殖和侵袭力的影响及机制。方法将化学法合成的针对Bmi-1mRNA不同位点设计的3对siRNA序列（siR-NA1～3）和1对带有荧光标记的FAM-siRNA（siRNA4）转染至人大肠癌LOVO细胞,荧光显微镜下观察siRNA的转染效率,QRT-PCR检测Bmi-1mRNA表达抑制作用,Western Blot检测Bmi-1蛋白表达变化,MTT法检测LOVO细胞体外增殖变化,小室侵袭实验检测LOVO细胞侵袭能力。结果利用荧光标记的Oligo观察到siRNA转染效率达70%。siRNA1对mRNA表达抑制率最高,从而筛选出沉默效应最强的siRNA序列为siRNA1。siRNA1转染组LOVO细胞Bmi-1蛋白表达,增殖及侵袭力明显低于阴性对照组和空白对照组（P〈0.05）。结论化学合成的靶向Bmi-1siRNA转染人大肠癌LOVO细胞能有效抑制Bmi-1的mRNA和蛋白质表达水平,Bmi-1基因的RNA干扰可有效抑制人大肠癌LOVO细胞的增殖和侵袭能力。     

结肠癌组织中Bmi-1表达变化及意义

目的观察结肠癌组织中Bmi-1的表达变化,探讨其临床意义。方法采用免疫组化法检测64例接受根治性手术治疗的结肠癌患者结肠癌组织标本、瘤旁结肠上皮组织及淋巴结转移灶中的Bmi-1,并以5例结肠息肉标本为对照。分析患者临床病理资料与Bmi-1表达的相关性。结果 64例结肠癌标本中Bmi-1蛋白阳性表达率为62.5%(40/64),64例瘤旁结肠上皮组织中Bmi-1蛋白阳性表达率为12.5%(8/64)。与瘤旁结肠上皮组织相比,结肠癌标本中Bmi-1蛋白阳性表达率显著升高(P<0.05)。在结肠息肉组织中未见Bmi-1蛋白阳性表达。不同Dukes分期及病理分级的患者Bmi-1蛋白阳性表达率相比,P均<0.05。结论 Bmi-1蛋白在结肠癌组织中呈高表达,可能与肿瘤的进展有关。     

siRNA沉默Bmi-1表达对胰腺癌PANC-1细胞增殖的抑制作用

目的:探讨运用RNAi技术沉默Bmi-1基因对人胰腺癌细胞恶性行为的影响,为胰腺癌基因治疗提供新的靶点和思路.方法:构建反义Bmi-1真核表达载体转染人胰腺癌PANC-1细胞,运用荧光显微镜下观察、MTT、Western blot、流式细胞术检测转染效果及细胞周期、凋亡变化.结果:成功构建反义Bmi-1真核表达载体并且...     

磷酸化p38介导低切应力诱导的血管内皮细胞Bmi-1表达

目的探讨低切应力(LSS)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)中Bmi-1表达的影响及其可能的机制。方法原代培养HUVEC,免疫荧光检测Bmi-1在细胞中的定位;运用平行平板流动腔系统,给HUVEC加载0.5 Pa低切应力0.5 h、1 h、2 h和4 h,以无切应力加载为对照组,用实时定量RT-PCR检测Bmi-1 mRNA表达,用Western blot检测Bmi-1蛋白表达,利用p38特异性抑制剂SB2219探讨信号转导途径。结果免疫荧光观察发现Bmi-1主要分布在HUVEC胞核中;HUVEC在LSS作用0.5 h后Bmi-1表达即明显增强,随着作用时间延长(1 h、2 h、4 h),Bmi-1mRNA及蛋白表达逐渐降低;切应力能显著激活磷酸化p38表达;SB2219可以明显抑制Bmi-1表达。结论 LSS可诱导HUVEC中Bmi-1表达,其表达量与刺激时间长短密切相关,这种作用可能通过p38信号调节。     

沉默Bmi-1基因表达对胃癌细胞BGC823衰老和转移的作用

目的:研究靶向Bmi-1 siRNA对胃癌BGC823细胞衰老和转移的作用.方法:设计Bmi-1的siRNA靶序列,分别合成两条互补的寡核苷酸链,退火后重组入pRNAT-U6.2载体,转化扩增后进行序列测定.用脂质体包裹转染人胃癌BGC823细胞,采用RT-PCR和Western blot分别检测Bmi-1基因mRNA和蛋白表达的变化.SA-β-Gal染色检测和细胞体外侵袭实验检测分析对细胞衰老和侵袭、转移的影响.结果:靶向Bmi-1基因的siRNA的双链寡核苷酸片段克隆入pRNAT-U6.2载体,经测序分析,插入片段正确:RT-PCR和Western blot检测显示,Bmi-1基因的表达水平明显降低,其中以1 104-1 122 nt(GGAGGAGGTGAATGATAAA)为靶序列的siRNA沉默作用最佳,Bmi-1mRNA和蛋白表达几乎完全抑制.转染siRNA组的衰老细胞百分率显著升高、穿透Matrigel的细胞数显著下降,与未转染和转染空载体组比较差异有显著性(P<0.01).结论:抑制胃癌BGC823细胞Bmi-1基因表达,可以增加细胞的衰老和降低细胞侵袭、转移的能力.     

过表达Bmi-1促进CD133~+CD44~+HCT116结肠癌干细胞发生上皮间质转化

目的探讨Bmi-1促进结肠癌干细胞发生迁移、侵袭的作用及机制。方法常规培养结肠癌HCT116细胞,成球培养基法(SFM)和磁珠分选法(MACS)富集和筛选CD133~+CD44~+HCT116结肠癌干细胞;流式细胞学鉴定结肠癌干细胞CD133和CD44表型,体外平板克隆实验和CCK8法鉴定细胞增殖克隆能力,裸鼠体内成瘤实验鉴定细胞致瘤能力。构建过表达Bmi-1质粒并转染CD133~+CD44~+HCT116结肠癌干细胞,Western blotting验证细胞中Bmi-1、E-cadherin及Vimentin的表达情况。平板划痕实验和Transwell实验评价转染后不同细胞的迁移和侵袭能力。结果 CD133~+CD44~+HCT116结肠癌细胞具有更强的体外克隆增殖能力和体内致瘤能力,可作为结肠癌干细胞研究模型;过表达Bmi-1后促进CD133~+CD44~+HCT116结肠癌干细胞的E-cadherin表达下降,而Vimentin表达上升;过表达Bmi-1后细胞24 h迁移速度为(18.44±0.59)μm/h,明显高于对照组(1.88±0.21)μm/h和普通组(1.92±0.36)μm/h(P0.05),同时其侵袭细胞数(37.67±2.51)也明显高于对照组(9.33±0.58)和普通组(7.67±0.58)(P0.05)。结论 Bmi-1介导CD133~+CD44~+HCT116结肠癌干细胞发生上皮间质转化(EMT)而促进肿瘤侵袭、转移。     

siRNA沉默Bmi-1基因对人肝癌细胞株MHCC97-H侵袭迁移能力的影响

目的:探讨RNA干扰技术沉默Bmi-1基因表达后,对人肝癌细胞株MHCC97-H侵袭迁移能力的影响.方法:设计并合成针对Bmi-1基因序列特异性的双链小干扰RNA(Bmi-1-siRNA),转染高转移性人肝癌细胞株MHCC97-H,用流式细胞仪观察转染效率,荧光实时定量PCR和Westernblot检测Bmi-1基因的mRNA和蛋白表达水平;通过体外Transwell小室基质侵袭和迁移实验,观察Bmi-1表达沉默后对人肝癌细胞株MHCC97-H侵袭和迁移能力的影响.结果:将针对Bmi-1基因序列特异性的小干扰RNA(Bmi-1-siRNA)转染高转移性人肝癌细胞株MHCC97-H后,流式细胞仪显示,转染效率可达到91%.与空白组、对照siRNA组相比,实验组Bmi-1-siRNA能有效抑制MHCC97-H细胞中Bmi-1基因的mRNA(F=56.199,P<0.05)和蛋白表达水平.通过Transwell小室基质侵袭和迁移实验,我们分析了不同组细胞的侵袭迁移能力.结果发现,与空白组、对照siRNA组相比,Bmi-1-siRNA转染的MHCC97-H细胞穿透能力明显降低(F=186.66,12.746,P<0....     

Bmi-1在结直肠癌卵巢转移患者中的表达及意义

目的探讨Bmi-1与结直肠癌临床病理因素的关系、临床意义及在卵巢转移过程中的作用。 方法对2010年4月至2011年7月间哈尔滨医科大学附属第三医院结直肠外科的44例患者病理样本进行免疫组织化学染色,检测Bmi-1蛋白在结直肠癌原发灶、正常肠黏膜及原发灶中肠源性卵巢转移癌中的表达,实验结果采用t检验或者χ2检验。 结果Bmi-1在直肠癌原发灶中表达的阳性率显著高于正常黏膜(分别为65.9%、15.9%,χ²＝22.752,P<0.01)。Bmi-1在原发灶中的高表达与结直肠癌的分化程度、分期及淋巴结转移相关(χ²＝5.116,P＝0.024;χ²＝4.856,P＝0.028;χ²＝5.495,P＝0.019),而卵巢转移灶中的Bmi-1未见异常表达。Bmi－1高表达的患者生存期明显低于Bmi-1低表达者(13.16个月,16.87个月,t＝－2.524,P＝0.012)。 结论Bmi-1在结直肠癌原发灶中的高表达表明Bmi-1与结直肠癌的发生、发展相关。Bmi-1与伴有卵巢转移的结直肠癌患者的预后相关,可能是结直肠癌预后重要相关因子。     

Bmi-1和S100A4蛋白在食管鳞状细胞癌中的表达及其临床病理意义

目的:探讨Bmi-1和S100A4蛋白在食管鳞状细胞癌(ESCC)组织中的表达及其临床病理意义.方法:采用免疫组织化学法分别检测68例食管鳞状细胞癌、45例癌旁异型增生及36例正常食管黏膜组织中Bmi-1及S100A4蛋白的表达,并分析两者的表达水平与临床病理因素的关系.采用X2检验进行统计学分析.结果:Bmi-1蛋白在食管鳞状细胞癌、癌旁异型增生及正常黏膜组织中的阳性表达率分别为57.4%、48.9%、25.0%;S100A4蛋白的阳性表达率分别为48.6%、26.7%、13.9%,两者在组间的表达差异有统计学意义(P<0.01).食管鳞癌组织中Bmi-1和S100A4的蛋白表达与淋巴结转移及TNM分期均密切有关(P<0.05),而S100A4的蛋白表达还与肿瘤浸润深度有关(P<0.05).两者在食管鳞状细胞癌组织中的表达呈正相关(r=0.302,P<0.05).结论:Bmi-1及S100A4的蛋白表达与食管鳞状细胞癌发生发展密切相关,联合检测Bmi-1及S100A4两蛋白指标对食管鳞癌的预后判断具有重要的意义.     

胶质瘤术后组织中Bmi-1、CD147和PTEN的表达及意义

目的检测胶质瘤患者术后组织中B细胞特异的莫洛尼白血病病毒插入位点(Bmi)-1、白细胞分化抗原(CD)147和抑癌基因PTEN(PTEN)的表达,研究三者在肿瘤中表达的差异。方法确诊的97例胶质瘤术后组织作为观察组,58例因脑血管畸形切除的正常脑组织作为对照组,应用免疫组化SP法检测两组中Bmi-1、CD147和PTEN的表达特点。结果两组中Bmi-1、CD147和PTEN表达的阳性率差别均有统计学意义。观察组中Bmi-1、CD147和PTEN的表达与肿瘤的最大径、分级、是否伴有坏死、Ki67的表达均具有相关性。线性相关分析显示Bmi-1、CD147和PTEN的表达均具有负相关性。结论胶质瘤术后组织Bmi-1和CD147高表达,PTEN低表达可以促进肿瘤的发生,同进可以促进肿瘤的进展,Bmi-1和CD147在发挥作用过程中可能对PTEN的表达有重要调节作用。     

大肠癌干细胞基因Bmi-1的表达及临床病理意义

目的探讨大肠癌干细胞基因Bmi-1在蛋白和RNA的表达水平及其与临床病理的关系。方法采用SYBR Green实时定量RT-PCR技术检测35例大肠癌组织及相应癌旁和远端正常组织中Bmi-1 mRNA的表达;常规HE染色和免疫组化SP法检测肿瘤组织、癌旁组织、正常黏膜组织中Bmi-1蛋白的表达情况;评价基因的表达与临床病理及分期的关系。结果大肠癌组织Bmi-1蛋白的阳性表达率显著高于瘤旁及正常组织（P〈0.05）;Bmi-1 mRNA的阳性表达在肿瘤与正常（P=0.086）、肿瘤与瘤旁间（P=0.385）无明显差异。在大肠癌中合并淋巴结转移者Bmi-1 mRNA及Bmi-1蛋白表达水平显著高于未转移者（P〈0.05）;Duke分期C和D期患者Bmi-1 mRNA表达水平明显升高（P〈0.05）,癌组织浸润深度越深Bmi-1 mRNA及Bmi-1蛋白表达水平越高。肿瘤分化程度越低Bmi-1蛋白表达强度越强。结论 Bmi-1与大肠癌的发生发展密切相关,检测其表达水平对评估大肠癌患者预后及指导今后治疗有一定意义。     

老年宫颈癌患者Bmi-1蛋白检测的临床意义

宫颈癌是老年女性常见的一种恶性肿瘤,发生率仅次于乳腺癌[1,2].肿瘤的发病机制极其复杂,目前仍不清楚,探明其发生、发展的机制可以为防治提供准确的治疗靶点[3].多梳基因-1(Bmi-1)为多梳基因家族成员,研究显示Bmi-1蛋白在多种实体肿瘤中高表达,参与了肿瘤的发生、发展过程,是一个新近发现的癌基因[4,5],本研究观察老年宫颈癌患者标本中Bmi-1蛋白的表达及其相关的临床意义.