LncRNA-MALAT1在缺氧诱导胃癌侵袭转移中的作用

目的:探讨LncRNA-MALAT1对缺氧诱导胃癌侵袭转移的影响。方法:RT-PCR检测胃癌组织标本和胃癌细胞株中MALAT1的表达;通过基因重组方法构建MALAT1的siRNA载体,并感染人SGC7901及MKN45胃癌细胞,RT-PCR验证siRNA干扰有效;Transwell实验研究其对胃癌细胞SGC7901及MKN45侵袭转移能力的影响。结果:MALAT1在胃癌组织和胃癌细胞株中的表达高于癌旁组织和胃正常上皮细胞;缺氧能够促进SGC7901及MKN45细胞的侵袭转移能力,而下调MALAT1能够明显抑制缺氧条件下SGC7901及MKN45细胞的侵袭转移能力。结论:MALAT1在促进胃癌细胞的侵袭转移中发挥重要作用,为胃癌靶向治疗提供理论依据。     

沉默MTA1表达对胃癌SGC7901细胞增殖和侵袭能力的影响

目的:观察转移相关基因1（MTA1）基因沉默对人胃癌细胞SGC7901增殖和迁移侵袭能力的影响,探讨 MTA1基因在胃癌发生发展中的作用。方法:利用脂质体法将靶向MTA1的小分子干扰 RNA（siRNA） 转染到胃癌细胞株 SGC7901中。运用Real time PCR 和Western blot 技术检测SGC7901细胞内MTA1的 mRNA和蛋白表达水平。CCK-8法检测细胞增殖能力,Transwell小室实验观察细胞迁移和侵袭能力。结果:MTA1 siRNA 可有效抑制SGC7901细胞MTA1基因在 mRNA 和蛋白水平上的表达（P﹤0.01）。CCK-8实验表明MTA1 siRNA 转染后细胞增殖不受影响;Transwell小室实验表明细胞迁移和侵袭能力明显下降。结论:沉默MTA1表达可抑制胃癌细胞株 SGC7901迁移和侵袭,而不影响细胞增殖。MTA1在胃癌侵袭转移过程中可能发挥重要作用。     

NS398对SGC7901胃癌细胞生长及CD44V6、MMP-9基因表达的影响

目的探讨COX-2特异性抑制剂NS398对SGC7901胃癌细胞体外生长及CD44V6、MMP-9基因表达的影响。方法体外培养SGC7901胃癌细胞,应用免疫细胞化学方法,检测SGC7901胃癌细胞中COX-2、CD44V6、MMP-9蛋白表达水平,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测NS398对胃癌细胞PGE2分泌水平的影响,MTT法检测NS398对SGC7901胃癌细胞体外生长的抑制效应,半定量RT-PCR检测NS398作用后胃癌细胞株中CD44V6、MMP-9基因表达水平的变化。结果 SGC7901胃癌细胞中COX-2、CD44V6、MMP-9呈阳性表达,NS398可显著抑制SGC7901胃癌细胞PGE2的分泌,200μmol/L NS398抑制率达64.3%,NS398对胃癌细胞生长抑制作用呈时间及浓度依赖性;NS398作用24 h后胃癌细胞中CD44V6、MMP-9基因表达水平下降,200μmol/L NS398对CD44V6、MMP-9基因表达抑制率分别为45.7%、43.6%。结论 SGC7901胃癌细胞中COX-2、CD44V6、MMP-9呈阳性表达,NS398可有效抑制SGC7901胃癌细胞PGE2的分泌和胃癌细胞生长,并可抑制与胃癌转移相关的CD44V6、MMP-9基因的表达。     

胃、十二指肠

胃癌组织芯片中survivin与caspase-3的表达及意义；RNA干扰靶向抑制胃癌细胞株SGC7901 hTERT基因的表达；内分泌源性血管内皮生长因子在胃癌中的表达；大葱油对体内外人胃癌细胞生长的抑制作用；MMP-1基因1G／2G多态性在胃癌侵袭转移中的作用；新辅助化疗对胃癌徽卫星不稳定性的影响。[编者按]     

CDKL1对胃癌细胞迁移及侵袭的作用

目的:探讨细胞周期素依赖激酶样蛋白1(CDKL1)对胃癌细胞系SGC7901迁移及侵袭的作用.方法:将胃癌细胞系SGC7901分为实验组及对照组,采用慢病毒转染siRNA至胃癌细胞构成实验组,转染无意义序列作为对照组.通过细胞划痕实验检测胃癌SGC7901细胞的迁移能力;Transwell小室实验检测其侵袭能力;Western blot检测CDKL1低表达后对胃癌细胞中AEG-1和MMP-9蛋白表达的影响.结果:与对照组相比,CDKL1低表达后实验组细胞迁移及侵袭能力明显降低(P＜0.05),实验组胃癌细胞中AEG-1和MMP-9蛋白的表达水平明显下降(P＜0.05).结论:特异性下调CDKL1基因可抑制胃癌细胞的迁移及侵袭能力,表明CDKL1基因可促进胃癌细胞的侵袭以及转移,并且与AEG-1和MMP-9密切相关.     

胃、十二指肠

DNA修复基因ADPRT和XRCCI遗传变异与胃癌发病风险,As2O3对胃癌细胞SGC 7901／ADR阿霉素耐药性的逆转作用,肠特异性转录因子CDX2在不同亚型肠化生及胃癌组织中的表达,周期蛋白A、E在胃低分化腺癌中表达的研究,Tiaml表达与胃癌侵袭转移关系的临床和实验研究,胃癌中PTEN突变在其蛋白异常表达中的作用,     

多西紫杉醇对胃癌细胞作用及其机制的研究

目的:研究多西紫杉醇对人胃癌中分化细胞株SGC7901的作用效果及机制。方法:MTT法检测多西紫杉醇对胃癌细胞株SGC7901的增殖抑制作用。AnnexinV方法检测药物作用后胃癌细胞的凋亡。PI染色法检测凋亡晚期的胃癌细胞。采用流式细胞仪检测多西紫杉醇作用前后细胞凋亡相关分子Fas蛋白、Bcl2蛋白表达水平的变化。结果:0.92、3.7、14.8、59.2μg/mL多西紫杉醇作用于SGC7901细胞72h,抑制率分别为13.3%、21.6%、57.5%、61.0%。多西紫杉醇可诱导胃癌细胞株SGC7901发生细胞凋亡。多西紫杉醇使SGC7901凋亡分子Fas表达增加,作用前后分别为(26.5±7.2)%、(37.9±7.0)%;多西紫杉醇作用SGC7901前后Bcl2表达分别为(38.9±9.1)%、(31.2±5.6)%,差异无显著性。结论:多西紫杉醇对胃癌中分化细胞株SGC7901生长有明显的抑制作用,可诱导胃癌细胞系SGC7901凋亡,凋亡作用的发生可能与多西紫杉醇诱导Fas分子表达有关。     

miR-9-5p靶向FGF9抑制胃癌细胞迁移侵袭的作用机制

目的:探讨miR-9-5p在胃癌组织中的表达及对胃癌细胞株SGC7901、AGS细胞迁移和侵袭影响的作用机制。方法:real-time PCR和Western blot检测癌旁组织、胃癌组织及其细胞系中miR-9-5p和FGF9的表达；Transwell小室检测过表达miR-9-5p或敲除FGF9对SGC7901和AGS细胞迁移和侵袭能力的影响；TargetScan在线分析、双荧光素酶报告基因和Western blot实验验证miR-9-5p和FGF9的靶向关系；将转染后的SGC7901细胞分为对照（NC）组和实验（miR-9-5p）组接种于裸鼠右侧腋窝皮下，观察记录裸鼠成瘤情况并绘制生长曲线。结果:与癌旁组织相比，胃癌组织及其细胞系中miR-9-5p表达下调、FGF9表达上调（P＜0.05）；过表达miR-9-5p或敲除FGF9能抑制SGC7901、AGS细胞迁移和侵袭；TargetScan在线分析、双荧光素酶报告基因和Western blot实验表明miR-9-5p能调控FGF9表达；miR-9-5p组细胞成瘤速度较NC组慢（P＜0.05），肿瘤体积及重量小（P＜0.05）。结论:miR-9-5p在胃癌组织中表达下调，过表达miR-9-5p可抑制FGF9表达，从而抑制胃癌细胞的迁移和侵袭，减缓肿瘤生长。     

胃泌素在胃癌细胞株的表达及抗胃泌素McAb对胃癌细胞株生长的影响

目的探讨胃泌素在人胃癌细胞株(SGC7901)的表达以及17肽胃泌素和抗胃泌素McAb对胃癌细胞株生长的影响。方法以自制的抗胃泌素McAb为一抗,采用免疫组化链亲和素生物素复合物法(streptavidinbiotincomplex,SABC),检测胃泌素在人胃癌细胞株SGC7901的表达,并用17肽胃泌素和抗胃泌素McAb作用于SGC7901细胞株,通过MTT法检测细胞增殖水平。结果胃泌素在SGC7901细胞株呈强阳性表达,17肽胃泌素在1×10-9mol/L～1×10-5mol/L浓度范围内能显著促进该细胞株的生长,抗胃泌素McAb不仅能抑制胃癌细胞的生长,而且还可抑制17肽胃泌素对细胞的促生长作用。结论胃泌素通过自分泌方式促进人胃癌细胞株SGC7901的生长,抗胃泌素McAb能抑制胃癌细胞的生长,以抗胃泌素McAb为基础的肿瘤靶向生物治疗有进一步研究的价值。     

胃癌细胞株中GnT-V表达水平的检测

目的检测正常胃黏膜细胞株GES-1和胃癌细胞株GnT-V的mRNA和蛋白质的表达水平。方法体外培养胃癌细胞株BGC823、SGC7901、MKN45和正常胃黏膜细胞株GES-1,应用RT-PCR、Real-time PCR、Westem blot等技术检测胃癌细胞株及正常胃黏膜细胞GnT-V mRNA和蛋白质表达的水平。结果检测显示3株胃癌细胞（BGC823、SGC7901、MKN45）均表达CmT-V mRNA,其中BGC823、SGC7901呈高表达,MKN45则低表达GnT-V（P〈0．05）。各细胞相对正常对照组GnT-V的相对表达倍数分别为18．25,13．36,9．25。Western blot结果显示3株胃癌细胞均不同程度的GnT-V蛋白表达,而正常对照组不表达GnT-V蛋白。结论胃癌细胞不同程度表达GnT-V,各细胞中以BGC823表达量最高,SGC7901表达量居中,MKN45呈低表达,提示GnT-V可能对于胃癌的发生发展有一定的影响。     

Semaphorin 5A, an Axon Guidance Molecule, Enhances the Invasion and Metastasis of Human Gastric Cancer through Activation of MMP9

Semaphorin 5A, a member of semaphorin family, was originally identified as axonal guidance factor functioning during neuronal development. Previously, we showed that the expression of semaphorin 5A might contribute to the metastasis of gastric cancer. However, its functional roles and mechanism(s) in invasion and metastasis of gastric cancer remain unclear. By using human gastric caner cell lines Parental SGC7901, SGC7901-siScrambled and SGC7901-siSema 5A, we found that semaphorin 5A significantly promoted the invasive and metastatic abilities of gastric cancer cell in vitro. Semaphorin 5A increased the expression of MMP9 by activating phosphorylated ErK1/2 in gastric cancer cell. Furthermore, MEK inhibitor PD98059 and MMP9 antibody (Ab) significantly inhibited in vitro invasive and metastatic abilities induced by semaphorin 5A. Taken together, the present work revealed a novel function of semaphorin 5A that the existence of semaphorin 5A could promote invasion and metastasis of gastric cancer by regulating MMP9 expression, at least partially, via the MEK/ERKs signal transduction pathway. Semaphorin 5A and its regulated molecules could be the potential targets for cancer therapy.     

Gab2通过调节EMT促进胃癌的侵袭转移

目的 探讨Gab2在胃癌组织中的表达情况及其对胃癌细胞侵袭转移能力的影响与机制。方法 采用免疫组织化学SP法检测胃癌组织中Gab2、E-cadherin、N-cadherin及MMP-9的表达并分析其与淋巴结转移的关系。应用小RNA干扰技术,转染SGC7901细胞株,RT-PCR法检测瞬时转染后Gab2基因表达情况,体外侵袭实验检测细胞转染后侵袭能力的变化,Western blot法检测各蛋白的表达。结果 胃癌组织中Gab2的表达水平与淋巴结转移显著相关（P=0.002）,与E-cadherin的表达负相关（r=-0.693, P=0.000）,而与N-cadherin和MMP-9的表达水平正相关（r=0.407, P=0.021; r=0.335, P=0.017）。小RNA干扰技术降低Gab2蛋白的表达后SGC7901细胞侵袭转移能力降低,同时E-cadherin表达增多,N-cadherin和MMP-9蛋白表达降低。结论 Gab2可能通过调节EMT在胃癌侵袭转移中发挥重要作用。     

lncRNA-uc003uxs在缺氧诱导胃癌侵袭转移中的作用

目的:探讨长链非编码RNA（long non-coding RNA,lncRNA）-uc003uxs在缺氧诱导胃癌侵袭和转移中的作用。方法:三个胃癌细胞系SGC7901、MKN45、MKN28分别经常氧和缺氧孵育 24 h ,提取3例配对的胃癌细胞总RNA,利用高通量lncRNA芯片比较它们之间的表达谱差异,初步筛选与缺氧诱导胃癌侵袭转移相关的关键分子。RT-PCR法检测 lncRNA-uc003uxs在缺氧诱导的胃癌细胞（相对于常氧诱导的胃癌细胞）以及20对胃癌组织（相对于癌旁组织）中的表达水平。通过慢病毒转染,稳定下调SGC7901和MKN28细胞中lncRNA-uc003uxs的表达。通过Transwell迁移和侵袭实验以及裸鼠尾静脉注射内脏转移实验检测lncRNA-uc003uxs下调后对胃癌细胞侵袭和转移能力的影响。结果:高通量芯片分析结果显示:与常氧诱导的胃癌细胞相比,缺氧诱导的胃癌细胞 SGC7901、MKN45和MKN28中有84个共同上调的lncRNA分子以及70个共同下调的lncRNA分子,而多重筛选策略则提示:lncRNA-uc003uxs可能是缺氧诱导胃癌侵袭转移的关键lncRNA分子之一。RT-PCR结果表明:lncRNA-uc003uxs在缺氧诱导的胃癌细胞SGC7901、MKN45和MKN28中显著上调,其在胃癌组织中的表达水平也显著高于癌旁组织。Transwell实验结果显示:缺氧能够显著增加SGC7901和MKN28细胞的迁移和侵袭能力,而下调lncRNA-uc003uxs的表达后,两种细胞的迁移和侵袭能力明显下降。此外,裸鼠尾静脉内脏转移实验也证实lncRNA-uc003uxs的下调抑制了胃癌细胞SGC7901的体内肝肺转移能力。结论:利用高通量芯片筛选,在胃癌细胞中发现了一系列缺氧相关的lncRNA分子。临床标本分析及功能缺失试验证实:lncRNA-uc003uxs是一个缺氧诱导胃癌侵袭转移的关键lncRNA分子。     

胃癌转移相关miRNA的差异表达谱及miR-218的生物学分析

目的 探讨胃癌转移相关微小RNA（miRNA）的差异表达情况并进行miR-218的生物学分析。方法 采用实时荧光定量PCR（qPCR）及miRNA芯片法检测低转移潜能的胃癌细胞亚系（SGC7901-NM、MKN28-NM）与高转移潜能的胃癌细胞亚系（SGC7901-M、MKN28-M）间miRNA的差异表达。提取不同转移潜能胃癌细胞系和10例胃癌冰冻组织及相应的转移淋巴结中的总RNA,利用qPCR检测miR-218在不同细胞及组织中的表达情况。结果 对不同转移潜能的胃癌细胞亚系进行芯片检测发现,与SGC7901-NM细胞比较,SGC7901-M 细胞有47个分子表达下调,15个分子表达上调。与MKN28-NM细胞比较,MKN28-M细胞有41个分子表达下调,83个分子表达上调。在SGC7901-M及MKN28-M细胞中,34个分子表达均出现下降,11个分子表达均出现上升。对不同转移潜能的胃癌细胞亚系以及人永生化正常胃黏膜细胞系GES进行检测可以发现,4种不同转移潜能的胃癌细胞亚系中miR-218的表达均低于正常胃黏膜细胞系GES,差异有统计学意义（P＜0.05）,且在高转移潜能胃癌细胞亚系中miR-218的表达均低于低转移潜能胃癌细胞系,差异有统计学意义（P＜0.05）。胃癌转移淋巴结中miR-218的表达水平为0.23±0.02,低于胃癌原发灶的1.09±0.05,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 胃癌转移相关miRNA会出现差异表达情况,高转移潜能胃癌细胞中的miR-218表达水平上调可能与胃癌转移存在一定关系。     

丹参酮ⅡA对胃癌细胞迁移和侵袭能力的抑制作用及机制

背景与目的：有研究证实,丹参酮ⅡA (tanshinone ⅡA)对肿瘤细胞具有抑制增殖、诱导分化和促凋亡的作用,并可抑制骨肉瘤细胞迁移和侵袭。但丹参酮ⅡA抑制胃癌侵袭和转移的机制尚不明确。本研究主要探讨丹参酮ⅡA对人胃癌SGC7901细胞体外迁移和侵袭的影响。方法：不同浓度(0.5、1、2、4 μg/mL)丹参酮ⅡA分别作用体外培养的胃癌SGC7901细胞24、48、72 h后,MTT比色法检测细胞增殖活力的改变;细胞划痕实验观察细胞的迁移能力的改变;3D侵袭实验观察细胞侵袭能力的改变;Real-time PCR和蛋白质印迹法(Western blot)分别检测细胞间黏附分子1(ICAM-1)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、金属蛋白酶抑制剂-2(TIMP-2)mRNA和蛋白的表达水平改变。结果：1、2、4 μg/mL丹参酮ⅡA对胃癌细胞株SGC7901有明显的抑制作用,且抑制作用存在时间-剂量依赖性(P<0.05);2 μg/mL丹参酮ⅡA呈时间依赖性抑制SGC7901细胞迁移;1、2、4 μg/mL丹参酮ⅡA呈浓度依赖性抑制SGC7901细胞侵袭;丹参酮ⅡA下调SGC7901细胞ICAM-1、MMP-2、MMP-9表达,同时可上调TIMP-2表达(P<0.05)。结论：丹参酮ⅡA可抑制胃癌SGC7901细胞的迁移和侵袭,上调TIMP-2的表达,下调ICAM-1、MMP-2、MMP-9的表达,可能是其作用机制之一。     

小剂量顺铂联合5-氟尿嘧啶对胃癌细胞增殖抑制及其机制的研究

目的：探讨小剂量顺铂（DDP）、5-氟尿嘧啶（5-FU）在体外联合用药对SGC-7901胃癌细胞及胃癌耐药细胞株SGC-7901／5-FU细胞增殖及其相关基因表达的影响。方法：采用MTT法观察在小剂量DDP、5-Fu联合用药前后SGC-7901与SGC-7901／5-FU存活率的差异,同时应用免疫组化方法检测SGC-7901与SGC-7901／5-FU中p53、Fas／FasL基因的表达情况。结果：DDP与5-FU均有抑制肿瘤细胞增殖作用,且有浓度相关性;尤以DDP联合5-FU后对细胞存活率的影响明显高于两种药物的单独使用（P〈0．01）,小剂量DDP联合应用5-FU时效果最明显,但对SGC-7901／5-FU细胞增殖抑制作用明显小于SHC-7901;小剂量联合DDP＋5-FU,p53、FasL基因表达的阳性率显著高于单纯的5-FU组或DDP组（P〈0．01）,而Fas基因表达则相反。结论：小剂量DDP联合5-FU对胃癌细胞具有明显抑制作用,对耐药株也有-定抑制作用,但效果弱于非耐药株。p53、Fas／FasL基因对胃癌细胞的增殖活性有重要作用,在小剂量DDP联合5-FU比各单药应用组基因的改变更明显（P〈0．01）。     

miR-17-92基因簇反义寡核苷酸对胃癌细胞增殖与侵袭的抑制作用

目的：探讨miR-17-92基因簇反义寡核苷酸对人胃癌细胞株SGC-7901的增殖及侵袭的影响。方法：合成miR-17-92基因簇中miR-17、miR-18a、miR-20a的反义寡核苷酸,通过实时荧光定量PCR验证miR-17、miR-18a、miR-20a反义寡核苷酸对SGC-7901细胞的miR-17、miR-18a、miR-20a的抑制效果,然后利用MTT、Transwell检测抑制表达后对细胞增殖及侵袭的影响。结果：miR-17、miR-18a、miR-20a的反义寡核苷酸能够抑制对应miRNA的表达,同时抑制了胃癌细胞的增殖与侵袭。结论：miR-17-92基因簇可能在胃癌发生发展中起到了癌基因的作用。