超声造影剂对血管平滑肌细胞增殖的影响

目的观察超声造影剂对大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响.方法血小板衍生生长因子-BB(PDGF-BB)刺激大鼠VSMC建立细胞增殖模型.在培养基中加或不加脂质体微泡(1μl/ml),采用台盼蓝排斥染色、MTT法和3H-TdR掺入法检测不同强度、时间的连续波超声辐照对VSMC的毒性作用以及增殖和DNA合成的抑制作用.结果频率1MHz、声强0.3W/cm2的超声联合造影荆辐照VSMC,未见细胞溶解,24h后细胞核蓝染率较辐照即刻显著降低(P＜0.01);辐照30s即可显著抑制PDGF-BB所致的VSMC增殖和DNA合成(P＜0.05),随着辐照时间延长,抑制作用增强,60s时抑制程度最强(P＜0.01).结论低强度超声辐照下超声造影荆的空化效应可抑制VSMC增殖,并对细胞膜有暂时性的损伤作用.     

茶多酚对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响

目的　探讨茶多酚对离体大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞增殖的影响。方法　体外培养大鼠主动脉血管平滑肌细胞 ,应用不同剂量的茶多酚作用 2 4 h后 ,采用 MTS/ PES法确定血管平滑肌细胞的增殖状态。应用流式细胞术测定细胞周期。结果　与对照组相比 ,茶多酚对血管平滑肌细胞增殖具有明显的抑制作用 (P<0 .0 0 1)。流式细胞术检测结果表明 ,茶多酚可以使血管平滑肌细胞大部分处于 G0 / G1 期 ,与对照组相比有明显差异 (P<0 .0 5 ) ,并且可以诱导其凋亡。结论　茶多酚可明显抑制离体大鼠血管平滑肌细胞的增殖。     

活血潜阳胶囊对血管平滑肌细胞增殖的影响

为研究活血潜阳胶囊对血管紧张素Ⅱ（ATⅡ）诱导的血管平滑肌细胞（VSMC0增殖的影响。以贴块法行SD大鼠胸主动脉VSMC分离培养，以血清药理学方法进行实验，10^-6MATⅡ为刺激因子，Captopril为对照，活血潜阳胶囊药物血清分为10%，7.5%,5%,2.5%4个浓度，绘制细胞生长曲线，并测定DNA的合成，结果：经活血潜阳胶囊处理后，细胞增殖速度明显下降，生长曲线下移，^3H-TdR掺入量减少，DNA合成明显受到抑制，且在一定范围内有剂量依赖性，提示；活血潜阳胶囊能抑制ATⅡ引起的VSMC增生，揭示了活血潜阳胶囊治疗高血压的机理之一。     

多巴胺D_4受体对血管紧张素Ⅱ介导的血管平滑肌细胞增殖的影响

目的观察多巴胺D4受体对血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)介导的血管平滑肌细胞(vascular smoothmuscle cells,VSMCs)增殖的影响。方法以大鼠胸主动脉平滑肌细胞株(A10细胞)、原代的Wistar-Kyoto(WKY VSMCs)和自发性高血压大鼠(SHR)胸主动脉血管平滑细胞(VSMCs)为研究对象,观察刺激D4受体对AngⅡ促增殖作用的影响以及D4受体特异性阻断剂L745870对该作用的阻断效应。细胞增殖采用MTT和细胞计数方法测定。结果 AngⅡ(10-7mol/L)可促进A10细胞增殖,最大增殖幅度为64%。D4受体激动剂PD168077本身对A10细胞无增殖影响,但D4受体特异激动剂PD168077可抑制AngⅡ(10-7mol/L)介导的血管平滑肌细胞的增殖作用,最大抑制幅度为40%;应用D4受体阻断剂L745870后该抑制作用丧失;D4受体对AngⅡ介导血管增殖的作用在SHR和WKY大鼠的VSMCs之间并无区别。结论 D4受体对AngⅡ介导的血管平滑肌细胞增殖具有抑制作用,该作用可能在一定程度上抑制了高血压病所伴发的血管平滑肌细胞增殖。     

环孢素A对血管紧张素Ⅱ诱导的血管平滑肌细胞增殖的影响

目的：观察环孢素A（CsA)对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响，以探讨钙调神经磷酸酶（CaN)依赖的信号通路在血管平滑肌细胞增殖中的作用。方法；以体外培养的大鼠主动脉平滑肌细胞为模型，实验分为三组：（1）AngⅡ组，（2）CsA AngⅡ组，（3）对照组。检测细胞增殖活度（MTT法），增殖细胞核抗原（PCNA）表达（免疫组化定量技术），细胞数目（直接计数法）的变化。结果：AngⅡ组血管平滑肌细胞增殖活度（吸光度表示），PCNA表达水平（光密度值表示）和细胞数目明显高于对照组（P＜0．01或P＜0．05），CsA＋AngⅡ组血管平滑肌细胞增殖活度，PCNA表达水平和细胞数目较AngⅡ组明显降低，差异显著（P＜0．01或P＜0．05）。结论：环孢素A可显著阻滞血管紧张素Ⅱ刺激的血管平滑肌细胞增殖，这种作用可能通过抑制CaN活性，阻断CaN介导的信号传导通路所致。     

鱼精蛋白对牛主动脉平滑肌细胞增殖的影响

应用细胞培养新生牛主动脉平滑肌细胞传代培养，取第４－６代平滑肌细胞进行实验，采用细胞计数法观察不同浓度的鱼精蛋白以对牛主动脉平滑肌细胞增殖的影响。结果显示：不同浓度鱼精蛋白均能刺激牛主动脉平滑肌细胞增殖，鱼精蛋白的浓度与平滑肌细胞增殖量呈正相关。上述     

超声辐照对血管平滑肌细胞增殖和凋亡的影响

目的:观察超声波辐照对培养的血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖和凋亡的影响,筛选防止介入治疗后血管再狭窄的辐照参数,并探讨其机理.方法:单声源压电陶瓷超声辐照系统声强连续可调,台盼蓝排斥实验分析辐照后即刻细胞存活率;MTT比色法描述辐照后5天VSMCs的生长动力学变化;BrdU掺入法检测辐照对VSMCs S期DNA复制的影响;ELISA法检测辐照后VSMCs凋亡情况.结果:1.超声辐照对培养的VSMCs有直接杀伤作用,该作用随辐照强度和辐照时间的增加而增加,相同辐照强度和时间下,低频超声该作用更显著.2.超声辐照组较对照组VSMCs生长曲线平缓,0.705MHz组以0.5W/cm2,5min辐照最为明显.3.BrdU掺入法测定S期细胞增殖发现,0.705MHz,0.5W/cm2,5min辐照组BrdU%低于对照组(40.5%±6.8%vs55.8%±3.3%,P＜0 05).4.0.705MHz,0.5W/cm2,5min辐照的凋亡富积因子与阳性对照相比为1.851±0.087vs1.924±0.074,P=0.836.结论:0.705MHz,0.5W/cm2,5min超声辐照在无明显杀伤细胞的情况下诱导培养的VSMCs凋亡,阻止VSMCs S期DNA复制,提示USE是一种潜在的治疗介入治疗后血管再狭窄的手段.     

鱼精蛋白对牛主动脉平滑肌细胞增殖的影响

应用细胞培养技术进行新生牛主动脉平滑肌细胞传代培养，取第４～６代平滑肌细胞进行实验，采用细胞计数法观察不同浓度的鱼精蛋白对牛主动脉平滑肌细胞增殖的影响。结果显示：不同浓度鱼精蛋白均能刺激牛主动脉平滑肌细胞增殖，鱼精蛋白的浓度与平滑肌细胞增殖量呈正相关。上述结果提示：鱼精蛋白通过促进动脉平滑肌细胞增殖，参与动脉粥样硬化的发生和发展     

血管内照射对抑制兔血管损伤术后平滑肌细胞增殖疗效观察

目的 观察^188铼血管内照射对抑制新西兰白兔血管损伤术后平滑肌细胞增殖疗效。方法 40只新西兰白兔行腹主动脉球囊内皮拉伤后分别予^188Re血管内照射（照射组），不予血管内照射（对照组），分析术后3、6周病理组织学标本平滑肌细胞增殖和凋亡情况。结果 照射组3周平滑肌细胞比对照组增殖细胞明显下降，凋亡细胞明显增多（P〈0．05），6周两组平滑肌细胞增殖、凋亡无显著性意义（P〉 0．05）。结论 血管内照射能有效抑制新西兰白兔血管损伤术后平滑肌细胞增殖，促进平滑肌细胞细胞凋亡。     

肾上腺髓质素对血管紧张素Ⅱ诱导的血管外膜成纤维细胞增殖及转化的影响

目的观察肾上腺髓质素（ADM）对血管紧张素Ⅱ的促成纤维细胞增殖及转化作用的影响。方法原代培养大鼠主动脉外膜成纤维细胞，随机分为对照组、ADM组、AngⅡ组及AngⅡ加不同浓度ADM（10^-9～10^-4mol／L）组。用四氮唑蓝（MTT）比色法测定细胞增殖活性，流式细胞分析仪检测细胞周期，蛋白免疫印迹法测定细胞内α—SM actin表达情况。结果与对照组相比，AngⅡ组S期和G2/M期细胞增多，MTTA值检测细胞增殖抑制率为-23．8％；ADM对基础水平的细胞周期中各期细胞构成比及细胞增殖抑制率并无明显影响：与AngⅡ组相比，AngⅡ加ADM组S期细胞构成比明显减少，细胞增殖抑制率提高了。经AngⅡ刺激后主动脉外膜成纤维细胞表达α～SM acfin转变为肌成纤维细胞。ADM可抑制AngⅡ上述作用，下调α—SMacdn表达。结论ADM对成纤维细胞的增殖及转化无明显影响，但ADM抑制AngⅡ诱导的血管成纤维细胞增殖及转化。     

脂联素对血管紧张素Ⅱ诱导血管平滑肌细胞分化和增殖的影响

目的：观察脂联素（APN）对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导人颈动脉平滑肌细胞α‐SMA表达及增殖的影响。方法：体外培养人颈动脉平滑肌细胞,免疫蛋白印迹法和实时荧光定量PCR检测A PN 对AngⅡ刺激人颈动脉平滑肌细胞后α‐SMA蛋白和mRNA表达;EdU 标记法检测APN 对AngⅡ诱导人颈动脉平滑肌细胞增殖活性的影响。结果：（1）1、10μM 的A n gⅡ可诱导人颈动脉平滑肌细胞增殖;（2）1、10μM 的AngⅡ可诱导人颈动脉平滑肌细胞α‐SMA蛋白和mRNA的表达;（3）5μg／mL的APN可抑制AngⅡ诱导人颈动脉平滑肌细胞α‐SMA表达和增殖。结论：APN可抑制AngⅡ诱导人颈动脉平滑肌细胞的分化和增殖。     

低强度超声引发大鼠子宫平滑肌收缩的量效关系研究

目的 通过研究低强度超声对大鼠子宫平滑肌收缩的影响,寻找超声引起子宫收缩的适宜参数.方法 利用正交设计的方法,用不同声强、不同辐照时间的超声(频率0.8 MHz,声强1～3 W/cm2)辐照离体大鼠子宫肌条,采用BL-410生物机能实验系统记录子宫平滑肌的收缩情况.结果 在相同的频率下,超声辐照时大鼠子宫收缩频率、幅度、张力及子宫活动力均明显高于辐照前(P＜0.01),辐射停止后10 min,子宫收缩基本恢复至辐射前状态;子宫收缩的频率、幅度、张力及活动力在2 W、10 min时达到最大(P＜0.05).结论 低强度超声可引发子宫平滑肌收缩,在频率不变的情况下,2 W/cm2辐照10 min是适宜的辐照参数.     

人参总皂苷抑制钙调神经磷酸酶信号通路参与其抗血管平滑肌细胞增殖作用

目的 我们先前报道人参总皂苷(total ginsenosides,TG)具有抗血管平滑肌细胞(VSMC)增殖作用,本工作重点探讨该作用是否与其抑制钙调神经磷酸酶( calcineurin,CaN)信号通路有关.方法 采用来自大鼠胸主动脉的培养VSMCs,以real time RT- PCR检测CaN的mRNA表达,并用Western blotting检测CaN的催化亚基CnA的蛋白表达.结果 TG在抑制VSMC增殖的浓度(0.05 mg/mL和0.1 mg/mL)能显著抑制AngⅡ所引起的CaN mRNA和CnA蛋白表达的升高.结论 TG抑制CaN信号通路可能是其抗VSMC增殖的分子机制之一.     

超声/微气泡SonoVue介导体内和体外基因转导的研究

目的初步探讨超声联合微气泡超声造影剂SonoVue介导体外培养细胞和体内肌肉组织基因转导的可行性,并研究不同超声波参数和基因用量与转基因效率之间的关系。方法利用不同强度和不同剂量超声波和声学造影剂SonoVue,介导人肝癌细胞株HepG2和BALB／c小鼠右侧胫前肌内增强型绿色荧光蛋白报告质粒的转导,分别直接或组织冰冻切片后在荧光显微镜下观察,并计算转导效率。结果超声联合微气泡造影剂SonoVue可介导体外培养的HepG2细胞和小鼠胫前肌内pEGFP-C1基因转导,HepG2细胞以1MHz 1．5W／cm^2超声波基因转导效果最好;小鼠胫前肌以1MHz3W／cm^2的超声波转基因效果最好。结论超声联合微气泡造影剂SonoVue可介导体外培养细胞和体内肌肉组织基因转导,1MHz超声波是转基因的理想频率。     

聚焦超声对肝癌细胞SMMC7721增殖能力的影响

目的:研究聚焦超声对肝癌细胞SMMC7721增殖能力的影响,初步探讨产生该影响的机制.方法:以剂量为0.8MHz20W 5s的聚焦超声(该剂量照射过的SMMC7721细胞可保持70%的存活率)照射处于对数生长期的SMMC7721细胞,用免疫组化法及原位杂交法观察SMMC7721生化及基因表达的变化.结果:聚焦超声抑制SMMC7721细胞VEGF和PCNA蛋白的表达(P＜0.05)以及VEGF和PCNA mRAN的表达(P＜0.05).结论:用聚焦超声照射后存活的SMMC7721细胞增殖能力减弱,其机制可能是通过抑制VEGF和PCNA mRNA的表达,使VEGF和PCNA蛋白表达减少来实现.     

Gene Transfection Mediated by Ultrasound and Pluronic P85 in HepG2 Cells

In order to assess whether gene transfection could be mediated by ultrasound in associa- tion with P85 and find the appropriate parameters of ultrasound irradiation, the effects of ultrasound with or without P85 on gene transfection of HepG2 cells were examined. The HepG2 cells were irra- diated by ultrasound at 1 MHz, 0.4-2.0 W/cm2 and 50% duty cycle with plasmid encoding enhanced green fluorescent protein (EGFP) as a report gene. Forty-eight h later, the expression of EGFP was detected under the fluorescence microscopy. Transfection efficacy was quantitatively assessed by flow cytometry, and cell viability was evaluated by trypan blue exclusion. The results showed that the transfection efficacy was increased with the increases in ultrasound output power and the ideal trans- fection efficacy was achieved in HepG2 cells irradiated by ultrasound at 0.8 W/cm2 for 30 s. The transfection efficacy in ulstrasound P85 group was three times higher than in single ultrasound group [(17.63±1.07)% vs (5.57±0.56)%, P<0.05]. The cell viability was about 81% and 62% in ultrasound group and ultrasound P85 group respectively. It was concluded that ultrasound in combination with P85 could mediate the gene transfection of HepG2 cells, ideal transfection efficacy was achieved by ultrasound irradiation at 0.8 W/cm2 for 30 s, and P85 could somewhat increase the damage to cells caused by ultrasound.     

冠通方及其拆方含药血清对Ang Ⅱ诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响

目的：探讨冠通方及其拆方对含药血清对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响,阐析防治冠心病支架术后再狭窄的作用机理以寻找药物作用的靶点。方法：建立AngⅡ诱导的血管平滑肌细胞（VSMC）增殖模型;采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法观察冠通方及其拆方对VSMC增殖的影响;并用免疫组化法观察冠通方及其拆方对大鼠VSMC表达的影响。结果：冠通方组及其拆方含药血清均可抑制大鼠VSMC的增殖（P〈0.05）;其中冠通方组作用结果最好（P〈0.01）;冠通方组、拆方3组与阴性组比较均有显著性差异（P〈0.01）;其中冠通方组的抑制VSMC的增殖最强（P〈0.01）;拆方3组其次（P〈0.05）;拆方1、2组间比较差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：冠通方能抑制血管平滑肌细胞（VSMC）的增殖,其机制可能与降低VSMC中含量表达有关。     

血管紧张素Ⅱ-NADPH氧化酶-活性氧信号传导通路对人肠系膜动脉平滑肌细胞增殖的影响

目的观察血管紧张素Ⅱ—NADPH氧化酶-活性氧物质信号传导通路对人肠系膜动脉平滑肌细胞增殖的影响。方法用培养的二至四代人肠系膜动脉平滑肌细胞作为标本;以四甲基偶氮唑盐（MTT）法、流式细胞仪、逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）分别测定细胞增殖率、细胞内活性氧及p22phox蛋白mRNA的表达。结果①加入血管紧张素Ⅱ药物组的细胞增殖率、活性氧物质量、p22phox蛋白mRNA的表达均明显高于空白对照组,差异统计学意义（P〈0．05）。②细胞增殖与活性氧物质的生成量、p22phox蛋白mRNA的表达成明显正相关关系,相关系数分别为0．92、0．967。结论血管紧张素Ⅱ在浓度为10μmol／L时,促进人肠系膜动脉平滑肌增殖、细胞内活性氧物质的生成、细胞内的p22phox蛋白的表达,推测血管紧张素Ⅱ促人肠系膜动脉平滑肌增殖作用部分机制是通过血管紧张素Ⅱ-NADPH氧化酶-活性氧通路来实现。     

钙调神经磷酸酶信号通路在AngⅡ刺激的大鼠VSMCs增殖中的作用

目的:探讨钙调神经磷酸酶（calcineurin,CaN）依赖的信号通路在血管紧张素Ⅱ（Ang Ⅱ）刺激的大鼠血管平滑肌细胞（VSMCs）增殖中的作用。方法:采用组织贴块法,体外原代培养大鼠胸主动脉平滑肌细胞;Ang Ⅱ刺激培养的大鼠 VSMCs增殖;CaN特异性抑制剂环孢素 A（CsA）阻断Ang Ⅱ刺激的大鼠VSMCs中CaN依赖的信号转导通路;观察各因素对CaN活性、细胞增殖活度、增殖细胞核抗原（PCNA）表达水平的影响。结果:在一定范围内,Ang Ⅱ（10-8～10-6mol/L）以浓度依赖性方式增加VSMCs的CaN活性,同时细胞增殖活度（AMTT值）增高,与对照组相比,差异有统计学意义（P<0.01或P<0.001）。CsA（1 μmol/L）抑制CaN活性后,明显降低Ang Ⅱ（10-7mol/L）刺激的VSMCs增殖活度及核内PCNA的表达水平（OD值）,与Ang Ⅱ组比较,差异显著（P<0.001）。结论:CaN依赖的信号通路在Ang Ⅱ刺激的血管平滑肌细胞增殖中发挥重要作用。