5-氟尿嘧啶诱导结肠癌细胞凋亡与NF-κB活化及uPA表达的关系

目的 研究5-氟尿嘧啶(5-Fu)诱导人结肠癌细胞(HCT116)凋亡与核转录因子-κ B(NF-κ B)活化以及尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)表达的关系,并观察吡咯烷二硫氨基甲酸盐(PDTC)抑制NF-κ B活化对5-Fu诱导结肠癌细胞凋亡及uPA表达的影响.方法 采用流式细胞仪Annexin V-FITC法检测结肠癌细胞HCT116凋亡;采用免疫组织化学方法半定量分析HCT116细胞NF-κB及uPA表达的动态变化.结果 5-Fu在诱导HCT116细胞凋亡的同时有NF-кB活化,1μmol/L PDTC能显著增加5-Fu诱导HCT116细胞凋亡及抑制5-Fu诱导的HCT116细胞NF-κB活化作用(P＜0.05),uPA变化与NF-κB一致.结论 5-Fu在诱导HCT116细胞凋亡的同时活化了NF-κ B,uPA表达亦随之增强;PDTC在抑制5-Fu诱导的HCT16细胞NF-κB活化的同时增强了5-Fu诱导细胞凋亡的作用,uPA表达也相应下降.     

NGX6基因联用5-Fu对人结肠癌细胞凋亡的影响

目的:探讨候选抑瘤基因NGX6联用5-Fu对结肠癌细胞凋亡的影响.方法:以稳定转染并表达NGX6基因的HT-29细胞与5-Fu联用作为实验组.以PDTC与5-Fu联用的HT-29细胞作为对照组.通过EMSA检测各组结肠癌HT-29细胞核转录因子-κB(NF-κB)的激活情况,利用MTT比色法检测各组细胞增殖的情况.吖啶橙(AO)/溴化乙啶(EB)双染法显微镜观测以及PI/Annexin-V双染流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况.结果:稳定转染并表达NGX6基因的HT-29细胞以及应用了PDTC的HT-29细胞NF-κB的激活均明显受到抑制;与5-Fu作用的HT-29细胞组比较,5-Fu联合PDTC作用于HT-29细胞后,HT-29细胞增殖受到明显抑制,5-Fu诱导HT-29细胞凋亡作用增强;与5-Fu联合PDTC作用于HT-29细胞的对照组比较,在诱导细胞凋亡以及抑制细胞增殖方面,稳定转染并表达NGX6基因的HT-29细胞与5-Fu联用组和对照组所取得一致的效果,NGX6基因增强5-Fu对HT-29细胞增殖抑制的能力及诱导HT-29细胞凋亡的能力.结论:NGX6基因抑制了肿瘤细胞NF-κB的激活,具有增强5-Fu诱导结肠癌细胞凋亡的能力,其机制可能是抑制肿瘤细胞NF-κB的激活,NGX6基因对肿瘤的治疗及预后起积极作用.     

抑制NF-κB的表达对射线诱导HeLa细胞株凋亡的影响

背景与目的：TNF、某些化疗药物以及电离辐射可以活化NF-κB,从而抑制细胞凋亡。NF-κB的活化可以通过特异性抑制剂吡咯二硫氨基甲酸脂（pyrrolidine dithiocarbamate,PDTC）得到抑制。本实验的目的在于探讨抑制NF-κB的表达在宫颈癌HeLa细胞对射线诱导的细胞凋亡中的影响。方法：将HeLa细胞分为实验组加入PDTC（100μmol/L）及对照组不加PDTC。两组均给予直线加速器照射,剂量分别为0、2、4、6Gy,均作用2 h。用Western blot法来观察细胞核内NF-κB含量的变化,用TUNEL法来检测细胞的凋亡,用MTT法测细胞增殖。结果：辐射可以使HeLa细胞内NF-κB的表达增多,PDTC可以抑制由射线介导的NF-κB的增加。抑制了由射线介导的NF-κB的增加,不仅使得HeLa细胞的增殖受到明显的抑制（P〈0.05）也使凋亡指数大大增加（P〈0.001）。结论：在宫颈癌HeLa细胞中抑制NF-κB的表达可以增加由射线介导的细胞凋亡,增加了细胞对射线的反应。     

NF-κB抑制剂增敏卡铂对卵巢癌细胞毒性作用的机制研究

[目的]探讨NF-κB抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐（PDTC）增敏卡铂对卵巢癌细胞的毒性作用及其机制。[方法]采用凝胶迁移率变动试验（EMSA）法,观察卡铂作用下和卡铂与PDTC共同作用下NF-κB的活化反应;MTT和流式细胞仪分别比较2种情况下SKOV3细胞的生长情况和凋亡率;RT-PCR方法检测2种情况下survivinmRNA的表达。[结果]EMSA实验结果表明,卡铂可以诱导NF-κB活化,PDTC可以抑制此作用。PDTC预处理后可增强卡铂对卵巢癌SKOV3细胞的生长抑制作用。卡铂作用24h、48h后卵巢癌SKOV3细胞的凋亡率分别为3.4%、20.1%;卡铂＋PDTC作用24h、48h后卵巢癌SKOV3细胞的凋亡率明显增加,分别为14.0%、32.7%,与卡铂组相比有显著性差异（P〈0.01）。卡铂作用3d、5d后卵巢癌SKOV3细胞中survivinmRNA的相对表达量分别为0.48±0.04、0.57±0.03,卡铂＋PDTC组分别为0.33±0.04、0.38±0.04,对应时间点两组差异显著（P〈0.01）。[结论]卡铂能诱导NF-κB的活化,NF-κB抑制剂可以增强卡铂诱导的SKOV3细胞的凋亡。NF-κB可能通过上调SKOV3细胞内survivinmRNA的表达来抵抗卡铂诱导的SKOV3细胞的凋亡。     

斑蝥酸钠对结肠癌HCT116细胞凋亡及PUMA表达的影响

目的 探讨斑蝥酸钠对结肠癌细胞凋亡及p53上调凋亡控制因子（PUMA）表达的影响。方法 采用不同浓度斑蝥酸钠（0.1、0.25、0.5、1、2 μg／ml）处理结肠癌细胞HCT116 24 h,并设不加药对照组。测量其单层细胞跨膜电阻值（TER）以评价斑蝥酸钠对HCT116细胞凋亡的影响,同时采用实时荧光定量PCR和Western blotting分别检测HCT116细胞的PUMA mRNA和蛋白水平变化;HCT116细胞经0.05、0.1、0.2、0.4、0.8 μg／ml 抑制性κB激酶β（IKKβ）质粒转染或10、20、40、80 nmol／L 核因子（NF）-κB抑制剂（BAY 11-7082）处理后,采用Western blotting检测其PUMA蛋白水平。结果 与对照组比较,各浓度斑蝥酸钠处理后HCT116细胞的TER降低,PUMA mRNA和蛋白水平升高,且以上效应呈浓度依赖性,差异有统计学意义（P＜0.05）;与未处理的HCT116细胞相比,IKKβ质粒转染后,PUMA蛋白表达增加,而BAY 11-7082可降低斑蝥酸钠对PUMA的上调作用,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 斑蝥酸钠可通过NF-κB通路上调PUMA的表达,进一步诱导结肠癌细胞HCT116的凋亡。     

白血病细胞核因子-κB活化与化疗药物诱导凋亡的关系

目的 研究化疗药物诱导P388白病细胞核因子-κB(NF-κB)活化与凋亡的关系,以及长春新碱(VCR)对它们的影响。方法 采用电泳迁移率变动分析(EMSA)检测细胞NF-κB活化水平;采用TdF介导的dUTF缺口末端标记技术(TUNEL)和DNA电泳方法检测细胞凋亡。结果 化疗药物诱导P388白血病细胞NF-κB活化与化疗药物诱导细胞凋亡有明显关系,0．1μmol／L VCR不仅能显著抑制100μmol／L阿糖胞苷(Ara-C)或100μmol／L鬼臼乙叉甙(Vp-16)诱导的P388细胞NF-κB活化(抑制率分别为52％和63％),而且增强它们诱导P388细胞凋亡的作用(凋亡增加率分别为89%和123%)。P388细胞在接触化疗药物前,NF-κB亦有一定程度的活化。结论 化疗药物诱导P388白血病细胞凋亡的同时,可活化NF-κB;VCR可通过抑制NF-κB活化,增强化疗药物诱导白血病细胞凋亡的作用。     

HMGB1对结肠癌细胞VEGF-C表达的影响

目的:探讨高迁移率族蛋白(high mobility group protein box1,HMGB1)对结肠癌细胞血管内皮生长因子C(vascular endothelia growth factor C, VEGF-C)的表达影响及核转录因子(nuclear factor κB, NF-κB )在其中的作用.方法:以HMGB1作为干预因素,通过RT-PCR方法检测在HMGB1作用不同时间后,结肠癌细胞HCT116中VEGF-C表达的变化.构建NF-κB干扰质粒,检测比较干扰前后HMGB1对结肠癌细胞VEGF-C表达影响的变化.结果:HMGB1可诱导HCT116细胞中VEGF-C的表达,随着对结肠癌细胞作用时间的延长,VEGF-C的表达逐渐增强,在2、4、8、12和24 h几个时间点中,以12 h时HMGB1对VEGF-C的表达影响最明显.抑制NF-κB可削弱HMGB1对VEGF-C的诱导作用.结论:结肠癌细胞中HMGB1可通过刺激NF-κB活化的途径,诱导VEGF-C.     

EGF介导的NF-κB促进体外胰腺癌细胞的uPA表达与侵袭力

目的探讨表皮生长因子(EGF)促进胰腺癌细胞侵袭和转移的分子机制。方法用WST-1细胞增殖实验、细胞黏附实验和Transwell体外侵袭实验检测EGF对胰腺癌细胞系NOR-P1的增殖、黏附及侵袭能力的影响。采用Western blot和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测uPA的表达。用凝胶电泳迁移实验检测核因子-κB(NF-κB)活性。结果EGF能够明显促进胰腺癌细胞的侵袭能力,但对胰腺癌细胞的黏附力及增殖并无明显影响。EGF明显上调胰腺癌细胞的NF-κB活性和尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)表达。NF-κB抑制物四氢化吡咯二硫代氨基甲酸酯(PDTC)能够明显抑制EGF所诱导的NF-κB活性,同时也抑制EGF所诱导的uPA表达及胰腺癌细胞的侵袭力。结论EGF通过活化NF-κB促进胰腺癌细胞的uPA表达和侵袭力,采用NF-κB抑制剂阻断NF-κB通路有利于胰腺癌的综合治疗。     

NF-κB在TNF-α诱导的Hela细胞凋亡中的作用

目的：探讨核因子-κB(nuclear factorkappa B，NF-κB)对肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)诱导的宫颈癌Hela细胞凋亡的影响。方法：培养宫颈癌Hela细胞。不同处理因素按指定时间作用后，RT一PCR检测NF-κB p65 mRNA的表达。免疫印迹和免疫组化检测NF-κB p65活性的变化，TUNEL法检测细胞凋亡。结果：静息状态下。在Hela细胞中NF-κB p65具有微弱活性水平。TNF-α诱导Hela细胞NF—κB活化与其诱导细胞凋亡明显相关，NF-κB p65单抗能显著抑制TNF-α(10ng／mL)诱导的Hela细胞NF-κB活化，抑制率为49．69％，并增强其诱导Hela细胞凋亡的作用，凋亡增加率为57．52％。结论：TNF-α在诱导宫颈癌Hela细胞凋亡的同时活化NF-κB。NF-κB p65单抗可通过抑制NF-κB活化以增强TNF-α诱导Hela细胞凋亡的作用。     

家族性圆柱瘤过表达对槲寄生凝集素诱导HCT116细胞凋亡的影响

目的:探讨家族性圆柱瘤(CYLD)过表达对槲寄生凝集素诱导人大肠癌HCT116细胞凋亡的影响.方法:MTT法测定细胞的增殖活力,琼脂糖凝胶电泳观察细胞凋亡,流式细胞仪进行细胞周期分析,蛋白质印迹实验和地高辛标记的凝胶电泳阻滞试验(DIG-EMSA)研究细胞凋亡途径.结果:CYLD过表达不影响肠癌HCT116细胞株的生长,但可抑制NF-κB的活性.可增强槲寄生凝集素对HCT116细胞的生长抑制作用,尤其作用12 h后CYLD转染细胞细胞的抑制较HCT116细胞和空质粒转染对照细胞更为明显(P<0.01),但不影响槲寄生凝集素对NF-κB的抑制作用,也不影响槲寄生凝集素对IκBα、Bcl-2和Bax的表达.结论:CYLD过表达可抑制NF-κB的活性,并增强槲寄生凝集素对HCT11 6细胞的生长抑制作用,提示其调控细胞的功能可能取决于NF-κB在细胞中的作用.     

NF-κB在TNF-α诱导的Hela细胞凋亡中的作用

目的探讨核因子-κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)对肿瘤坏死因子-α(tumor necrosisfactor-α,TNF-α)诱导的宫颈癌Hela细胞凋亡的影响。方法培养宫颈癌Hela细胞,不同处理因素按指定时间作用后,RT-PCR检测NF-κBp65mRNA的表达,免疫印迹和免疫组化检测NF-κB p65活性的变化,TUNEL法检测细胞凋亡。结果静息状态下,在Hela细胞中NF-κB p65具有微弱活性水平,TNF-α诱导Hela细胞NF-κB活化与其诱导细胞凋亡明显相关,NF-κB p65单抗能显著抑制TNF-α(10ng/mL)诱导的Hela细胞NF-κB活化,抑制率为49.69%,并增强其诱导Hela细胞凋亡的作用,凋亡增加率为57.52%。结论TNF-α在诱导宫颈癌Hela细胞凋亡的同时活化NF-κB。NF-κB p65单抗可通过抑制NF-κB活化以增强TNF-α诱导Hela细胞凋亡的作用。     

NF-κB在脂肪酸合酶抑制剂诱导人结肠癌LoVo细胞凋亡中的作用

目的　探讨NF-κB在脂肪酸合酶抑制剂(FASI)诱导人结肠癌LoVo细胞凋亡中的作用。方法　FASI—浅蓝菌素处理大肠癌LoVo细胞株,四唑盐比色试验(MTT法)、片断DNA琼脂糖凝胶电泳、流式细胞仪及荧光染色(AO/EB)等方法检测细胞调亡,用凝胶电泳迁移率法(EMSA)检测NF-κB活性。结果　LoVo细胞在FASI作用下,细胞增殖被阻遏,并呈现剂量效应关系。同时诱导细胞发生凋亡。FASI对人成纤维细胞增殖无明显影响。NF-κB在不同浓度浅蓝菌素(10-9～10-5)处理LoVo细胞12h后,可抑制NF-κB活性,其抑制程度呈剂量依赖性递减。结论FASI可能通过抑制LoVo细胞内源性脂肪酸合成,诱发细胞凋亡来阻遏LoVo的增殖。NF-κB可能参与FASI诱导人结肠癌LoVo细胞凋亡中的信号转导。     

NF-κB抑制剂对卡铂诱导卵巢癌细胞凋亡的影响

目的探讨NF—κB抑制剂（PDTC）对卡铂诱导卵巢癌细胞SKOV3凋亡的影响。方法采用免疫组织化学方法,观察了卡铂诱导下卵巢癌SKOV3细胞中NF-κB在细胞质和细胞核中的表达变化;采用凝胶迁移率变动试验（EMSA）法,检测卡铂作用下和卡铂与PDTC共同作用下NF—κB的活性;MTT和流式细胞仪分别检测2种情况下SKOV3细胞的生长情况和凋亡率。结果NF—κB在卵巢癌SKOV3细胞质中表达,卡铂诱导12h后卵巢癌SKOV3细胞质中的NF—κB转移至细胞核。EMSA实验结果表明,卡铂诱导后的卵巢癌SKOV3细胞NF—κB的活性增强,PDTC可以抑制此作用。PDTC预处理后可增强卡铂对卵巢癌SKOV3细胞的生长抑制作用。卡铂作用24h、48h后卵巢癌SKOV3细胞的凋亡率分别为6．7％、20．1％;卡铂＋PDTC作用24h、48h后卵巢癌SKOV3细胞的凋亡率为14．0％、32．7％,两者比较差异显著（P〈0．05）。结论卡铂能诱导NF—κB的活化,NF—κB的抑制剂可以增强卡铂诱导SKOV3细胞的凋亡,提高化疗疗效。     

水通道蛋白-5对结直肠癌细胞迁移、凋亡的影响及机制研究

目的:探讨短发夹RNA（short hairpin RNA,shRNA）沉默水通道蛋白-5（aquaporin-5,AQP5）对人结直肠癌HT-29细胞和HCT116细胞迁移、凋亡的影响及相关机制。方法:构建pRNA-H1.1-AQP5的干扰质粒和pRNA-H1.1-NC的对照质粒转染HT-29和HCT116细胞,利用Real-time PCR（RT-PCR）、Western blot方法验证AQP5基因敲降效率,划痕试验检测AQP5-shRNA对结直肠癌细胞迁移率的影响,流式细胞术检测各组细胞的细胞凋亡率,Western blot检测凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2基因在蛋白水平的表达。选用NF-κB抑制剂BAY 11-7082（BAY）处理转染AQP5-shRNA的HT-29和HCT116细胞,划痕试验检测各组细胞的迁移率,Western blot检测凋亡基因Bax和Bcl-2的表达情况。结果:AQP-shRNA转染HT-29和HCT116细胞中,AQP5表达量明显低于NC-shRNA转染的HT-29和HCT116细胞（P＜0.05）。划痕试验结果表明,对比NC组,AQP5-shRNA明显抑制HT-29和HCT116细胞的迁移（P＜0.05）。流式细胞术结果表明AQP5-shRNA显著提高HT-29和HCT116细胞的凋亡率（P＜0.05）。对比NC-shRNA组,AQP5-shRNA组细胞中Bax蛋白表达明显提高,而Bcl-2蛋白表达显著下降。BAY处理后,AQP5-shRNA所抑制的结直肠癌细胞迁移率显著下降,AQP5-shRNA所促进的细胞凋亡率显著升高,且对比AQP5-shRNA组,AQP5-shRNA与BAY共同处理的细胞中Bax蛋白表达明显升高,Bcl-2蛋白表达明显降低。结论:AQP5-shRNA抑制结直肠癌细胞迁移,促进结直肠癌细胞凋亡受NF-κB信号调控。     

NF-кB与柔红霉素对HL-60细胞凋亡作用关系的探讨

目的：探讨核因子NF-кB是否与柔红霉素(DNR)在体外诱导HL-60细胞凋亡的过程有关。方法：应用光镜、流式细胞技术(FCM)检测DNR对HL-60细胞的凋亡作用；并采用细胞免疫化学(IC)、FCM、电泳运动转移分析(EMSA)法分别检测对照细胞组、DNR诱导HL-60细胞凋亡组、PTDC或FBI抑制组细胞核内NF-кB的表达情况。结果：1.0μmol／L DNR对HL-60细胞作用5h时，有显著的凋亡现象发生，且细胞内NF-кB的表达较对照细胞显著增强，PDTC可显著抑制DNR作用HL-60后的凋亡率及NF-кB的表达，而FBI对此无明显作用。结论：DNR诱导HL-60凋亡的过程与细胞核因子NF-кB有关，ROS参与了此凋亡过程。     

NF-κB抑制对宫颈癌HeLa细胞放疗敏感性影响的观察

目的:探讨抑制核转录因子κB(NF-κB)表达对宫颈癌HeLa细胞放疗敏感性的影响。方法:通过对HeLa细胞加入NF-κB的抑制剂100μmol/LPDTC或2μmol/L PS-341,均作用2 h来抑制NF-κB的表达。将HeLa细胞分为PDTC组、PS-341组及对照组加入等量生理盐水。各组均给予直线加速器照射,剂量分别为0、2、4和6 Gy。用蛋白质印迹法来观察细胞核内NF-κB含量的变化,用TUNEL法来检测细胞的凋亡,用MTT法检测细胞增殖。结果:辐射可以使HeLa细胞内NF-κB的表达增多,PDTC及PS-341均可以抑制由射线介导NF-κB的增加。在0 Gy条件下对照组与PDTC组及PS-341组HeLa细胞的凋亡指数分别为3%、12%和15%,两实验组的凋亡指数均高于对照组,P<0.01;6 Gy条件下实验组细胞的凋亡指数都高于同条件下对照组,P<0.01。结论:在宫颈癌HeLa细胞中,PDTC及PS-341均可抑制NF-κB的表达从而增加了由射线介导的细胞凋亡,增加HeLa细胞的放疗敏感性。     

乳腺癌中核转录因子-κB p50表达及其与细胞凋亡的关系

 目的 研究核转录因子-κB p50 （NF-κB p50）在乳腺癌组织中的表达和意义及其与细胞凋亡的关系。方法 应用Elivision免疫组化染色法和脱氧脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记（TUNEL）技术，对65例乳腺癌组织中NF-κB p50、凋亡细胞表达进行原位观察和比较,并结合临床资料进行分析。结果 65例乳腺癌标本NF-κB p50表达阳性率为70.8 %（46／65），细胞凋亡指数（AI）为（4.59±1.94）%； NF-κB p50表达强度与患者的肿瘤的大小、组织分级、孕激素受体（PR）无关（P＞0.05）；与腋淋巴结转移数、雌激素受体（ER）状况明显相关（P＜0.05）。NF-κB p50表达阴性的乳腺癌中AI明显高于NF-κB p50 表达阳性组（P＜0.05）。NF-κB p50活性强度与AI呈明显的负相关（P＜0.001）。结论 NF-κB p50的异常激活在早期乳腺癌的发生和转化中起重要作用，其抑制凋亡活性与肿瘤侵袭转移及恶性潜能密切相关，对NF-κB p50活性及细胞凋亡的检测有助于乳腺癌的临床分析，并有望成为预后的观察指标。     

N F- КB 在脂肪酸合酶抑制剂诱导人结肠癌LoVo 细胞凋亡中的作用

 目的　探讨 NF-κB在脂肪酸合酶抑制剂 ( FASI)诱导人结肠癌 Lo Vo细胞凋亡中的作用。方法　 FASI—浅蓝菌素处理大肠癌 Lo Vo细胞株 ,四唑盐比色试验 ( MTT法 )、片断 DNA琼脂糖凝胶电泳、流式细胞仪及荧光染色 ( AO/EB)等方法检测细胞调亡 ,用凝胶电泳迁移率法 ( EM-SA)检测 NF- κB活性。结果　 Lo Vo细胞在 FASI作用下 ,细胞增殖被阻遏 ,并呈现剂量效应关系。同时诱导细胞发生凋亡。FASI对人成纤维细胞增殖无明显影响。NF- κB在不同浓度浅蓝菌素 ( 1 0 -9～ 1 0 -5)处理 Lo Vo细胞 1 2 h后 ,可抑制 NF- κB活性 ,其抑制程度呈剂量依赖性递减。结论FASI可能通过抑制 Lo Vo细胞内源性脂肪酸合成 ,诱发细胞凋亡来阻遏 Lo Vo的增殖。NF- κB可能参与 FASI诱导人结肠癌 Lo Vo细胞凋亡中的信号转导.     

忍冬藤提取物抗结肠癌作用研究

【摘要】目的研究忍冬藤提取物的体外抗结肠癌作用。方法体外培养结肠癌HCT116和SW480细胞并用忍冬藤提取物干预,采用CCK8法检测忍冬藤提取物对HCT116和SW480细胞增殖的影响;采用Hochest法和Annexin V/PI法检测忍冬藤提取物及p53抑制剂PFT α对HCT116和SW480细胞凋亡的影响;JC 1法检测忍冬藤提取物对HCT116细胞线粒体膜电位的影响;Western Blot检测忍冬藤提取物对HCT116细胞相关蛋白表达水平的影响。结果相较于空白组,忍冬藤提取物可明显抑制结肠癌HCT116和SW480细胞增殖,并促进细胞凋亡（P<001）,促进HCT116细胞线粒体膜电位坍塌,明显上调HCT116细胞Bax/Bcl 2的比值（P<001）以及Cleaved PARP、Cyt C、Cleaved Caspase 3和p53蛋白表达（P<005,P<001）;相较于忍冬藤提取物组,忍冬藤提取物+PFT α明显抑制HCT116细胞凋亡（P<001）。结论忍冬藤提取物可通过诱导p53依赖的线粒体凋亡发挥抗结肠癌作用。     

核因子κB在凝血因子Ⅶa促进结肠癌SW620细胞增殖迁移中的作用

目的 探讨核因子κB(NF-κB)在促进结肠癌SW620细胞增殖迁移过程中的作用及其可能的机制。方法 以凝血因子Ⅶa、NF-κB抑制剂二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)等处理结肠癌细胞株SW620,采用Western blot法检测细胞核NF-κB(p65)、细胞浆NF-κB抑制蛋白（IκB-o）和凋亡蛋白半胱氨酸蛋白酶7（caspase-7）的蛋白表达变化;采用流式细胞术检测SW620细胞的细胞周期变化;采用Transwell法测定SW620细胞的迁移能力;采用实时定量聚合酶链反应(PCR)检测白细胞介素8( IL-8)和组织因子(TF) mRNA的表达水平。结果凝血因子Ⅶa能够显著下调细胞浆中IκB-o的表达水平,并使细胞核内NF-κB的表达水平升高,单克隆抗TF和抗蛋白酶激活受体2(PAR2)抗体能够抑制凝血因子Ⅶa的这一作用。PDTC能够明显干预凝血因子Ⅶa对SW620细胞增殖、迁移的促进作用。PDTC能够明显干预凝血因子Ⅶa对SW620细胞中TF、IL-8 mRNA表达的促进作用和对caspase-7蛋白表达的下调作用。结论 凝血因子Ⅶa与细胞表面TF结合形成TF/Ⅶa复合物,活化受体PAR2,经NF-κB通路上调IL-8、下调caspase-7的表达,促进SW620细胞的增殖与迁移。TF/Ⅶa/PAR2/NF-κB通路还可进一步上调TF的表达,从而形成TF/Ⅶa/PAR2/NF-κB/TF正反馈通路。