兔胚胎软骨细胞移植修复关节软骨缺损的初步研究

目的　采用兔胚胎软骨细胞培养移植修复关节软骨缺损 ,并对其组织形态学进行观察。方法　在成兔股骨内侧髁作关节软骨缺损模型 ,实验组采用生物蛋白胶与胚胎软骨细胞相混后 ,植入兔膝关节实验性软骨缺损区 ,对照组不做任何处理或单纯用生物蛋白胶移植修补 ,分别于术后 4、8、1 2周观察关节软骨缺损修复的情况 ,并对其进行组织学评分。结果　实验组在胚胎软骨细胞移植 8、1 2周后 ,于缺损区内可形成透明软骨 ,组织评分及效果评定优于对照组。结论　胚胎软骨细胞移植组所产生的修复组织接近正常软骨组织 ,明显优于对照组     

软骨细胞纤维蛋白胶混合物修复兔关节软骨缺损的实验研究

目的：研究关节软骨细胞与纤维蛋白胶的混合物修复关节软骨全层缺损的效果。方法：（１）用自制消化瓶消化分离原代兔关节软骨细胞并培养;（２）通过硫酸铵沉淀法从兔血液中提取纤维蛋白原并制备纤维蛋白胶;（３）分别用自体或异体关节软骨细胞和纤维蛋白胶的混合物修复兔股骨滑车关节软骨全层缺损。术后１、２、３个月从大体观察,组织学等方面了解关节软骨缺损的修复情况。结果：自体软骨细胞组在术后３个月时修复组织已非常类似     

钻孔修复兔关节软骨缺损的实验研究

为了观察软骨缺损的修复过程，比较不同数目钻孔术对软骨缺损的修复效果，用中国白兔２４只，在股骨关节面造成６ｍｍ×８ｍｍ全层软骨缺损，分别施行１０孔和５孔钻孔术，术后４、８周取材，做组织学及电镜观察，并进行评估。结果表明：１０孔、５孔和对照组的优势修复组织分别为类透明软骨、幼稚软骨加纤维软骨和纤维组织。修复组织厚度１０孔和５无显差异。修复组织覆盖缺损的面积，１０孔〉５孔〉对照组。初步结论：软骨下骨钻     

关节软骨损伤组织工程修复的实验研究

目的：（1）研究不同体外培养时间软骨的生物学特性，探讨运用于软骨组织工程中软骨种子细胞的最适宜培养时间和条件。（2）应用组织工程技术探讨运用自体关节软骨细胞修复关节软骨缺损的可行性。（3）应用组织工程技术探讨应用同种异体软骨细胞修复关节软骨缺损的可行性。（4）研究修复关节软骨缺损的软骨细胞来源。方法：（1）取新西兰兔关节软骨细胞体外培养，观察软骨细胞的形态学变化，生长曲线，酸性粘多糖及胶原分泌情况。（2）建立关节软骨缺损模型，应用自体关节软骨细胞复合生物支架Pluronic修复关节软骨缺损，观察修复效果。（3）应用同种异体软骨细胞复合生物支架Pluronic修复关节软骨缺损，观察修复效果。（4）应用3H－TdR放射自显影方法，确定修复关节软骨缺损的细胞来源。结果：（1）体外培养第四代软骨细胞的增殖能力达到高峰，而第二代软骨细胞分泌基质能力最强。（2）自体或同种异体软骨细胞复合Pluronic修复关节软骨缺损，12周后缺损表面较平滑，与正常软骨界面愈合较好，MASSON三色染色显示胶原分布已较均匀， 骨细胞呈柱状排列，II型胶原在细胞周围阳性表达，而空白对照和材料对照组未见明显修复。（3）3H－TdR放射自显影方法证实修复软骨组织的细胞来源于体外移植细胞，软骨细胞植入体内早期仍进行有丝分裂，而在中后期软骨细胞以分泌基质为主，植入的细胞与周围软骨细胞间存在物质交换。结论：（1）软骨细胞在体外培养2－3周左右是作为软骨组织工程种子细胞的最佳时机。（2）自体或同种异体组织工程化软骨是修复关节软骨缺损的较好方法。（3）组织工程化软骨修复关节软骨缺损的细胞来源于体外移植的软骨细胞。     

自体骨髓基质细胞立体培养修复关节软骨缺损的实验研究

目的:探讨细胞载体Ⅰ型胶原海绵与骨髓基质细胞的组织相容性及利用自体骨髓基质细胞立体培养构建的组织工程软骨修复关节软骨的效果.方法:在24只4～6月龄新西兰大白兔股骨粗隆、胫骨下端进行骨穿,获取骨髓基质细胞进行体外培养、扩增,三代后获取足够细胞数量,制成108/ml细胞悬液,植入细胞载体Ⅰ型胶原海绵立体培养,2周后移植到直径 3.5 mm 的软骨缺损面上,于1、2、3个月处死动物检查.结果:骨髓基质细胞与细胞载体Ⅰ型胶原海绵有良好的组织相溶性,形成自体组织工程软骨能完成关节软骨缺损修复.第1个月修复组织具备纤维软骨特征,第2个月具备透明软骨特征,第3个月修复组织具备透明软骨的生物学特性.结论:细胞载体Ⅰ型胶原海绵与骨髓基质细胞体外培养形成的组织工程软骨,能完成关节软骨的修复,修复组织为透明软骨.     

藻酸包埋异体关节软骨细胞修复兔膝关节软骨缺损

目的 探讨异体关节软骨细胞作为软骨种子细胞修复关节软骨缺损的可行性。方法 无菌取成年新西兰大白兔四肢关节软骨，酶消化法分离细胞，条件培养基体外培养扩增，藻酸钙凝胶包埋培养1周，植入兔膝关节股骨髁间软骨缺损，对照组缺损旷置。术后3、6个月分别取材，观察缺损修复情况；切片特染和免疫组化观察修复组织病理，并Wakitnni评分评估修复质量。结果 7／8缺损为成熟透明软骨组织修复，1／8为纤维软骨修复；Wakitani平均评1．75分；空白对照组评7．65分。实验组3个月组标本未见淋巴细胞或白细胞浸润，6个月组标本未见明显退变；所有标本均未见藻酸残留。结论 用藻酸包埋异体关节软骨细胞修复兔膝关节软骨缺损的方法是可行的，异体关节软骨细胞在适当的处理后可成为关节软骨组织工程种子细胞。     

兔关节软骨细胞的分离培养及生物学特征

目的 探讨兔关节软骨细胞分离培养的方法和生物学特性。方法 从4周龄新西兰白兔关节分离培养软骨细胞,倒置显微镜下观察原代及传代培养的细胞形态学变化,并计数绘制生长曲线。测定细胞冻存复苏后的存活率。用甲苯胺蓝染色和免疫细胞化学法了解葡萄糖胺多糖（GAGs）,Ⅱ型胶原的合成情况并鉴定细胞。结果 成功建立体外培养兔关节软骨细胞的实验方法。原代培养的软骨细胞呈多角形,传代3次后出现反分化。形态学、免疫化学染色显示细胞培养3代以内可以保持表型的稳定,冷冻复苏存活率为92％。结论 本文建立的体外培养关节软骨细胞的方法简单可行。体外培养的兔软骨细胞表型能保持3代稳定,具有良好的生物学活性,可用于实验研究,可经深低温冷冻保存。     

聚羟基丁酸酯-羟基戊酸酯支架复合同种异体软骨细胞修复关节软骨缺损的实验研究

目的:探讨聚羟基丁酸酯-羟基戊酸酯(PHBV)三维多孔材料作为软骨组织工程支架的可行性及有效性.方法:采用"压片-热处理-粒子析出技术"制备PHBV多孔支架.体外分离培养软骨细胞后接种到PHBV支架体外培养4周,期间扫描电镜观察细胞在支架上的生长情况,然后与单纯PHBV支架同时植入兔膝关节软骨缺损区继续培养4、8、12周后取材,分别行大体、组织学、Ⅱ型胶原免疫组化观察.进行Wakitani评分,观察其体内修复关节缺损效果.结果:电镜观察示软骨细胞在支架上黏附、增殖良好并能分泌细胞外基质,组织学观察示PHBV支架浅层有新生软骨组织形成,于4周后开始形成透明软骨样结构且表面基本平整与宿主整合良好,组织学切片上可见类软骨形成并分泌甲苯胺蓝异染的软骨基质和软骨特异性Ⅱ型胶原. 结论:PHBV可以作为软骨组织工程支架材料,能够用于再生修复软骨的缺损.     

自体骨膜移植修复关节软骨缺损的研究

对２４只兔股果髁部的关节软骨缺损进行自体游离骨膜移植，术后４、８周取材，做组织学及电镜观察。结果显示，关节软骨缺损区被骨膜再生的幼稚软骨完全充填，其组织结构趋于透明样软骨，而以地照组仅被纤维组织和纤维软骨部分充填。     

髂骨来源的“双相”BMG结合软骨细胞修复兔关节软骨缺损的实验研究

目的:探讨应用髂骨来源的"双相"骨基质明胶(bone matrix gelatin,BMG)结合软骨细胞移植修复兔关节软骨缺损的有效性和可行性。方法:使用酶消化法体外分离培养并扩增兔肋软骨细胞;使用自体来源髂骨构建"双相"BMG支架材料;将软骨细胞种植与BMG支架材料上构建成为细胞-BMG复合物;将制作好的27只软骨缺损动物模型随机分为3组。将细胞-BMG复合物移植于软骨缺损模型进行修复治疗作为实验组。将BMG支架移植入软骨缺损模型作为材料组;空白对照组不做处理。分别在术后4周、8周和12周通过大体形态学(依据国际软骨修复协会评分量表)、病理组织学染色及免疫组织化学染色方法对各组修复效果进行评价。结果:番红O染色,甲苯胺蓝染色和Collagen II免疫组化染色分别提示术后12周时实验组的修复组织非常类似于正常关节软骨,组织表面与正常软骨组织平面几乎持平,材料组软骨缺损处得到了部分修复,而缺损组的修复效果较差。按照ICRS量表,大体形态学和病理组织学评分结果提示:术后12周实验组的修复效果与其他两组相比有明显统计学差异(P<0.05)。结论:自体髂骨来源的"双相"BMG结合软骨细胞在体内可形成具有一定结构功能的软骨组织,能够应用于再生修复软骨的缺损。     

关节镜下微骨折术治疗膝关节软骨缺损临床疗效观察

目的比较关节镜下关节清理术结合软骨缺损区微骨折术与关节清理灌洗术治疗膝关节软骨全层缺损的临床疗效.方法对2002年1月～2004年10月的膝关节全层软骨缺损患者,分别行膝关节镜下关节清理术结合软骨缺损区微骨折术(29例)和关节清理灌洗术(22例),根据临床症状及Tegner运动评级判定疗效,随访观察6～24个月.结果关节清理术结合软骨缺损区微骨折术总有效率89.7%,关节清理灌洗术总有效率59.1%,组间比较有统计学差异(P＜0.05).结论关节镜下关节清理术结合软骨缺损区微骨折术治疗膝关节软骨缺损的疗效优于关节清理灌洗术.     

骨髓间充质干细胞和软骨细胞共培养复合同种异体脱钙骨基质修复关节软骨全层缺损

目的:探讨自体骨髓间充质干细胞(BMSCs)与软骨细胞共培养复合同种异体脱钙骨基质(DBM)修复关节软骨缺损的可行性,评价修复效果,为优化种子细胞源提供依据.方法:取浓度为5×109/L的第二代BMSCs和软骨细胞,按2:1比例混匀共培养作为种子细胞.DBM与共培养细胞复合植入修复为实验组(A组),单纯材料DBM组(B组)和不处理组(C组)作为实验对照组.移植8和16 wk后经大体观察、组织学评分和免疫组化染色评价缺损修复.结果:共培养的软骨细胞基质合成丰富,细胞增殖快,共培养5～7 d两种细胞比例达1:1以上.A组缺损修复组织呈软骨样,表面光滑平坦,与周围软骨整合的软骨细胞更为成熟.B组和C组的修复组织呈纤维组织.组织学评分表明A组优于B,C两组,差异具有统计学意义(P＜0.01),B组与C组差异无统计学意义(P＞0.05).免疫组化染色显示A组修复组织的细胞为透明软骨样细胞,柱状排列,Ⅱ型胶原染色阳性,与周围软骨及软骨下骨整合良好.结论:自体BMSCs与软骨细胞共培养,BMSCs能增强软骨细胞的增殖,促进软骨细胞基质合成,缩短软骨细胞培养时间和减少传代次数,可节省大量的软骨细胞,与DBM复合后能有效修复关节软骨缺损.     

脉冲电磁场对家兔骨软骨骨折愈合的影响

目的 :研究脉冲电磁场对家兔骨软骨骨折的修复作用。方法 :将 16只家兔人工造成临床常见的胫骨平台骨折的动物模型 ,骨折采用钢丝内固定 ,不用外固定。随机分为实验组和对照组。实验组术后每天用脉冲电磁场刺激 6h,对照组不用电磁场刺激 ,喂养条件相同。术后 12周全部处死后行大体标本、光镜、电镜检查。结果 :实验组 6只家兔软骨骨折全部愈合 ,修复组织为类透明软骨 ,2只软骨骨折未完全愈合 ,修复组织为纤维软骨。对照组 7只未完全愈合 ,修复组织为纤维软骨 ,1只完全愈合 ,修复组织为类透明软骨。结论 :1脉冲电磁场对骨软骨骨折的愈合有促进作用 ;2脉冲电磁场能使软骨骨折达到类透明软骨修复。     

关节软骨微环境的物质输运研究进展

关节软骨是最常见且研究最多的一种透明软骨;其软骨细胞的物质输运主要由扩散和对流2种方式完成.在关节软骨的胞外基质内,生物活性分子的扩散和对流输运在组织生理调节和细胞生物学响应中起到极为重要的作用.近年来,关节软骨与软骨下骨的交互作用备受关注;其交互作用在骨关节炎的发生发展中不容忽视.本文主要对关节软骨内、关节软骨与软骨下骨间物质输运的实验研究进展进行综述,旨在为研究关节软骨微环境的生理病理作用提供一定参考,并为临床治疗骨关节炎提供一定的新思路.     

兔甲状软骨细胞体外培养研究

目的:研究体外培养的甲状软骨细胞的生物学特性。方法:分离培养兔甲状软骨细胞,进行原代与传代培养,用倒置显微镜及组织学方法观察细胞形态、功能及生长增殖。结果:原代、第2代、第3代软骨细胞呈圆形或多角形,第4代有一半变成梭形,第6代绝大多数变成长梭形;原代甲状软骨细胞阿新蓝染色阳性,具有合成和分泌糖胺多糖的功能。结论:体外单层培养的兔甲状软骨细胞表型能保持3代稳定,具有正常的生长增殖能力。     

Transfection of Articular Chondrocytes with rhBMP7 Gene and Its Expression

The repair of osteochondral defects remainsone of the most intensely studied orthopaedic top-ics.Nowadays the focus is on gene modified tissueengineering[1] .It is suggested that articular chon-drocytes could serve as satisfactory target cells,while bone morphogenetic protein- 7(BMP- 7) couldstimulate new bone and cartilage tissue forma-tion[2 ] .In the present study,a recombinant plas-mid pc DNA3 - rh BMP7was transduced to culturedrabbit articular chondrocytes in vitro in order toexplore …     

关节软骨微环境的物质输运研究进展

关节软骨是最常见且研究最多的一种透明软骨;其软骨细胞的物质输运主要由扩散和对流2种方式完成.在关节软骨的胞外基质内,生物活性分子的扩散和对流输运在组织生理调节和细胞生物学响应中起到极为重要的作用.近年来,关节软骨与软骨下骨的交互作用备受关注;其交互作用在骨关节炎的发生发展中不容忽视.本文主要对关节软骨内、关节软骨与软骨下骨间物质输运的实验研究进展进行综述,旨在为研究关节软骨微环境的生理病理作用提供一定参考,并为临床治疗骨关节炎提供一定的新思路.     

关节镜下微骨折技术联合关节内注射玻璃酸钠修复膝关节软骨缺损

目的:评价微骨折技术(microfracture,MF)联合关节内注射玻璃酸钠修复膝关节软骨缺损的修复效果.方法:对12例股骨髁软骨缺损患者采用关节镜下MF修复,缺损面积约2.0～6.0cm2,平均3.2cm2.术后第1、2、3周患膝关节腔注射玻璃酸钠20mg,1 次·周-1.术后随访,对比手术前后的膝关节Lysholm评分、痛觉视觉模拟评分(VAS),记录术后并发症.结果:术后随访6～36个月,平均17.5个月.最终随访Lysholm评分优2例、良6例、中3例、差1例,优良率为66.7%.术前Lysholm评分(46.2±3.6)分,随访终末时为(78.4±4.9)分,差异具有统计学意义(P<0.01).术前VAS为(4.26±0.56)分,终末随访时为(1.82±0.14)分,差异具有统计学意义(P<0.05).9例并发关节腔积血,2例有关节轻度疼痛和偶有交锁.结论:MF联合术后关节内注射玻璃酸钠对膝关节软骨损伤的修复效果较满意,是一种操作简单、实用的软骨修复技术.     

结缔组织生长因子在成年和幼年兔关节软骨全层缺损修复中表达的差异

目的探讨结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)在成年和幼年兔膝关节软骨全层缺损修复过程中的表达及意义。方法成年和幼年新西兰白兔各25只,两年龄组兔分别分为5组(n=5):对照组(未损伤组)、损伤24h、1周、4周、8周组,制备兔膝关节股骨关节面全层软骨缺损自我修复模型。术后于各时间点处死动物,观察软骨缺损的修复情况,并应用RT-PCR和免疫组化技术分别检测CTGF mRNA及蛋白在成年和幼年兔修复过程中的表达。结果幼年兔关节软骨全层缺损后可形成透明软骨样修复,成年兔仅为纤维组织修复。各组检测均见CTGF mRNA表达,幼年组表达水平显著高于成年组,差异有统计学意义(P<0.05)。免疫组化显示各组软骨细胞均有CTGF蛋白表达,阳性表达主要集中在软骨的中间带及深层带。结论幼年兔关节软骨全层缺损修复优于成年兔,同时伴有CTGF表达的显著增高,提示CTGF可能在促进关节软骨修复中发挥重要作用。