苯甲酰芍药苷上调miR-520c-3p缓解脂多糖诱导的小鼠急性肺损伤研究

目的 探究芍药单体成分苯甲酰芍药苷对脂多糖（LPS）诱导的小鼠急性肺损伤（ALI）的作用及分子机制。方法 将75只SPF级小鼠按照随机数表法分成5组：空白对照组（生理盐水）、ALI组（2.00 mg/kg LPS 100μl）、阳性对照组（2.00 mg/kg LPS 100μl+血必净注射液100μl）、苯甲酰芍药苷低剂量组（2.5 mg/kg苯甲酰芍药苷100μl）、苯甲酰芍药苷高剂量组（5 mg/kg苯甲酰芍药苷100μl）,通过腹腔注射LPS构建ALI模型并给予药物干预。称重检测各组肺组织湿/干重比;苏木素-伊红(HE)染色观察肺组织病理形态变化;ELISA法检测ALI小鼠肺组织中肿瘤坏死因子（TNF-α）、白介素-6（IL-6）水平;蛋白免疫印迹（WB ）检测肺组织IκB激酶（IKKβ）/核因子κB（NF-κB）表达及其磷酸化激活水平;荧光定量PRC（RT-PCR）检测ALI小鼠肺组织中miR-520c-3p表达;Targetscan 7.0预测miR-520c-3p靶基因;A549转染miR-520c-3p inhibitor验证苯甲酰芍药苷对炎症的调控作用。结果 苯甲酰芍药苷低、高剂量均明显降低ALI小鼠肺组织湿/干重比（P＜0.05）,ALI损伤的肺组织结构得到缓解;ELISA结果显示苯甲酰芍药苷低、高剂量能明显降低ALI小鼠肺组织中TNF-α、IL-6的水平（P＜0.05）;WB结果显示,与空白对照组相比,苯甲酰芍药苷低、高剂量组IKKβ、NF-κB p65磷酸化水平以及总NF-κB p65水平下降;RT-PCR结果发现苯甲酰芍药苷有效促进miR-520c-3p在ALI中的表达（P＜0.05）;Targetscan预测结果显示miR-506-3p直接靶向NF-kB p65亚基RELA基因3’UTR序列;补救实验显示miR-520c-3p inhibitor有效逆转了苯甲酰芍药苷对ALI过程中TNF-α、IL-6的抑制作用（P＜0.05）。结论 苯甲酰芍药能有效缓解LPS引起的ALI病理进程中炎症的发生,其作用机制可能是通过上调miR-520c-3p的表达,从而抑制其靶基因NF-κB p65生成,抑制IKKβ/NF-κB 信号通路的活化,导致炎症因子TNF-α、IL-6的合成受到抑制。     

甘草酸二胺通过上调水通道蛋白5减轻小鼠急性肺损伤肺水肿的实验研究

目的 探讨甘草酸二胺对于急性肺损伤状态下水通道蛋白5 (AQP-5)的调节作用及相关机制。 方法 30只SPF级雄性BALB/c小鼠被随机分为3组,即Control组 (对照组)、LPS组 (模型组)和LPS+DG组 (治疗组),每组10只。通过HE染色观察肺组织病理学改变,并进行肺损伤评分;使用湿/干比 (W/D)分析肺水肿程度;RT-PCR和Western blot对AQP-5的表达进行测量;Western blot测定总核因子-κB p65 (total NF-κB p65) 和磷酸化-NF-κB p65 (p-NF-κB p65)蛋白表达。 结果 小鼠气道内注射LPS 72 h后,肺损伤评分和肺组织W/D比值增加,AQP-5表达水平下降,p-NF-κB p65水平增加,差异有统计学意义 (P均P均<0.05)。 结论 甘草酸二胺可以有效的减轻LPS诱导的小鼠急性肺损伤 (ALI)导致的肺水肿,其机制可能与甘草酸二胺抑制NF-κB p65的活化,上调AQP-5的表达有关。     

肿瘤坏死因子α中和抑制脂多糖诱导小鼠急性呼吸窘迫综合征肺组织细胞凋亡的机制探讨

目的 探讨肿瘤坏死因子α（ TNF-α） 中和抑制脂多糖（ LPS） 诱导小鼠急性呼吸窘迫综合征（ ARDS） 肺组织细胞凋亡的机制。方法 小鼠随机分为对照组、LPS 组和TNF-α中和组。采用LPS（ 5 mg/kg） 气道雾化造小鼠ARDS 模型, TNF-α中和组在滴入LPS 前24 h 腹腔注射依那西普（ 0. 4 mg/kg） , 滴入LPS 2 h 后收集标本。PCR 检测各组肺组织核转录因子κB（ NF-κB） p65、Bax、Bcl-2的表达水平,Western blot 检测NF-κB p65 和Erk1 /2 及二者磷酸化、Bax、Bcl-2 的蛋白水平; 测量各组肺组织干湿重比; HE 染色观察各组肺组织病理改变, 采用肺损伤半定量评分评估肺组织损伤程度。结果 LPS 组肺组织NF-κB 及Erk1 /2 活化水平升高、Bcl-2 与Bax 比降低（ P 〈0. 05） 。TNF-α中和能明显降低ARDS小鼠肺组织NF-κB 活化水平, Bcl-2 与Bax 比值升高。TNF-α中和组小鼠肺组织湿干重比及肺损伤半定量评分较LPS 组显著降低（ P 〈0. 05） 。结论 TNF-α中和抑制脂多糖诱导小鼠ARDS肺组织损伤, 其机制与抑制Erk1/2、NF-κB 活化, 上调Bcl-2/Bax 比值, 最终减少细胞凋亡密切相关。     

欧前胡素对小鼠急性肺损伤的影响及其机制研究

目的 探讨欧前胡素对小鼠急性肺损伤的影响及其作用机制。方法 将32只雌性BALB/c小鼠随机分为正常对照组、模型组、欧前胡素30?mg/kg组、欧前胡素60?mg/kg组。用欧前胡素预处理,脂多糖诱导进行模型复制,7?h后收集小鼠肺组织。测量肺湿/干重比,采用苏木精-伊红（HE）染色观察小鼠肺组织病理学改变,检测小鼠肺组织中髓过氧化物酶（MPO）活力及活性氧类（ROS）的水平,酶联免疫吸附试验（ELISA）检测小鼠肺组织肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和白细胞介素-1β（IL-1β）,Western blotting检测小鼠肺组织中磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）、蛋白激酶B（Akt）、核转录因子κB（NF-κB）p65及基质金属蛋白酶-9 （MMP-9）蛋白表达水平。结果 与正常对照组比较,模型组小鼠肺组织损伤评分、肺组织ROS水平及PI3K、Akt、NF-κB p65蛋白磷酸化水平升高（P?<0.05）,TNF-α、IL-1β的释放及MMP-9蛋白表达水平升高（P?<0.05）;与模型组比较,欧前胡素组能够减轻肺组织损伤,降低肺损伤评分（P?<0.05）,降低小鼠肺组织中ROS水平及PI3K、Akt、NF-κB p65蛋白磷酸化水平（P?<0.05）,降低TNF-α、IL-1β的释放及MMP-9蛋白表达水平（P?<0.05）;与欧前胡素30?mg/kg组比较,欧前胡素60?mg/kg组小鼠肺损伤评分、肺组织ROS水平、Akt及NF-κB p65蛋白磷酸化水平、TNF-α的释放及MMP-9蛋白表达水平降低（P?<0.05）,PI3K蛋白磷酸化水平及IL-1β的释放差异无统计学意义（P?>0.05）。结论 欧前胡素对脂多糖诱导的急性肺损伤有保护作用,其作用机制可能与脂多糖诱导的急性肺损伤中ROS被抑制,以及ROS介导的PI3K/Akt/NF-κB通路被抑制有关。     

丙酮酸乙酯对脓毒症急性肺损伤大鼠的 作用及其机制研究

目的 探讨丙酮酸乙酯（EP）对脓毒症急性肺损伤（ALI）大鼠的作用及其可能的作用机制。 方法 选取健康成年雄性SD 大鼠40 只,采用随机数字表法分为对照组、假手术组、ALI 组和EP 组,每组10 只。 ALI 组和EP 组采用盲肠结扎穿孔法复制大鼠脓毒症模型,假手术组仅翻动盲肠,不做结扎穿孔。EP 组术后 腹腔注射EP 溶液（40 mg/kg,间隔6 h）,对照组、假手术组和ALI 组腹腔注射等量乳酸林格液（间隔6 h）。 模型复制24 h 后心脏采血处死大鼠。酶联免疫吸附试验检测肺组织匀浆中高迁移率族蛋白B1（HMGB1）、 Toll 样受体4（TLR4）及核因子κB（NF-κB）的表达;计算肺组织湿干重比;HE 染色后光镜下观察肺组 织病理结构变化。结果 ALI 组、EP 组HMGB1、TLR4 及NF-κB 水平高于假手术组（P <0.05）,且EP 组 低于脓毒症ALI 组（P <0.05）;对照组与假手术组HMGB1、TLR4 及NF-κB 水平比较,差异无统计学意义 （P >0.05）。ALI 组、EP 组肺组织湿干重比高于假手术组（P <0.05）,且EP 组低于ALI 组（P <0.05）;对照 组与假手术组肺组织湿干重比比较,差异无统计学意义（P >0.05）。对照组和假手术组肺组织结构完整,肺泡 间隔无水肿、炎症;ALI 组肺泡结构破坏严重,肺泡间隔增宽,肺间质明显渗出、出血和大量炎症细胞浸润; EP 组肺泡结构较完整,与ALI 组相比,肺间质渗出、出血及炎症细胞浸润症状明显减轻。结论 EP 可能通过 抑制HMGB1/TLR4/NF-κB 信号通路,减轻肺组织炎症反应,改善肺损伤程度从而对脓毒症ALI 发挥保护作用。     

δ阿片受体激动剂DADLE对脓毒症大鼠急性肺损伤的保护作用

目的 探讨δ阿片受体激动剂DADLE对脓毒症性急性肺损伤(ALI)的保护作用.方法 采用盲肠结扎穿孔法(CLP)制作脓毒症急性肺损伤模型,将模型随机分为ALI组、假手术组(SHAM组)、糖皮质激素(GC)治疗组和DADLE治疗组.分别于建模3、6和12h后开腹抽血行动脉血气分析,ELISA法检测血浆中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)和核因子-κB(NF-κB)的含量,观察与比较各组肺组织病理改变.结果 DADLE组中PaCO2、PaO2、HCO2-和BE与GC组相比较差异无统计学意义(P＞0.05),但均高于ALI组(P＜0.05);GC组和DADLE组血浆中TNF-α、IL-6和NF-κB水平均明显低于ALI组(P＜0.01);DADLE组和GC组肺组织病理学变化均较ALI组轻.结论 DADLE对脓毒症大鼠的肺组织有明确的保护作用,具有抑制炎性细胞因子释放作用,其抗炎作用与GC相似.     

电针刺激通过JAK1/STAT3通路减轻脓毒症大鼠的急性肺损伤

目的 探讨电针对脓毒症大鼠急性肺损伤的影响及作用机制。方法 采用SPF级SD大鼠60 只,用随机数字表法分组。假手术组（SHAM）15 只：只开腹而不结扎盲肠;脓毒组共45 只,采用盲肠结扎穿孔制术（CLP）脓毒症肺损伤模型制备,制备成功后随机分为脓毒症急性肺损伤组（ALI）15 只：不做进一步处理;脓毒症急性肺损伤+电针非穴位组（ALI+SEA）15 只、脓毒症急性肺损伤+电针穴位组（ALI+EA）15 只：针刺双侧内关穴及足三里,电刺激的频率、强度与时间与ALI+SEA组保持一致。于CLP后12 h后处死大鼠,称量大鼠肺组织,测定大鼠肺组织湿/干重比值（W/D）,HE 染色检测肺组织病理变化,Tunel染色计算肺组织凋亡细胞比例,酶联免疫吸附试验（ELISA）检测大鼠肺组织中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和白细胞介素-6（IL-6）的浓度,蛋白质免疫印迹试验（Western blot）检测凋亡相关蛋白Bax、Caspase-3表达以及核转录因子JAK1/STAT3信号通路中重要蛋白JAK1、STAT3的表达。结果 ALI与SHAM相比呈现出明显的肺损伤病理表型,表现为肺湿/干重比值增加（P<0.01）,血清中TNF-α和IL-6水平显著上升（P<0.01）,组织内JAK1、STAT3、Caspase-3、Bax表达水平显著上调（P<0.01）;ALI+SEA与ALI相比以上指标无显著性变化（P>0.05）;ALI+EA与ALI+SEA组比,能显著的减轻脓毒症诱发的肺部病理变化,表现为肺湿/干重比值升高受到抑制（P<0.01）,血清中TNF-α和IL-6上升得到缓解（P<0.01）,组织中JAK1、STAT3、Caspase-3、Bax的表达升高显著下调（P<0.01）。结论 电针可关联JAK1/STAT3通路的机制,抑制脓毒症大鼠炎性介质的释放及细胞凋亡,减轻脓毒症大鼠的肺损伤。     

二氧化硫对脓毒症致急性肺损伤大鼠炎症反应的抑制作用

目的 探讨二氧化硫(sulfur dioxide,SO2)对盲肠结扎穿孔术(cecal ligation and puncture,CLP)诱导的脓毒症大鼠急性肺损伤炎症反应的作用及其机制.方法 雄性SD大鼠32只随机分成4组,每组8只:假手术+生理盐水(Sham+NaCl)组,假手术+外源性SO2供体Na2SO3/NaHSO3(Sham+SO2)组,盲肠结扎穿孔术+生理盐水(CLP+NaCl)组及盲肠结扎穿孔术+外源性SO2供体Na2SO2/NaHSO3(CLP+SO2)组.对各组大鼠肺组织显微镜下形态学观察,进行肺损伤半定量评分(index of quantitative assessment,IQA),测量肺湿干重比(wet/dry weight,W/D);采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测肺组织中TNF-α、IL-6含量;采用蛋白质印迹法(Western blot)检测肺组织中NF-κB信号通路中磷酸化IκBα(p-IκBα)、IκBα、p-p65蛋白含量.结果 光镜下,Sham+SO2组与Sham+NaCl组相比,形态结构无明显变化;CLP+NaCl组肺组织明显变化,肺组织结构不完整,肺泡间隔明显增厚,肺间质以及肺泡水肿;与CLP+NaCl组相比,CLP+SO2组肺泡结构较完整,肺泡间隔变窄,间质水肿减轻.与Sham+NaCl组相比,CLP+NaCl组大鼠IQA、W/D增加;与CLP+NaCl组相比,CLP+SO2组大鼠IQA、W/D降低.与Sham+NaCl组相比,CLP+NaCl组大鼠肺组织中TNF-α、IL-6含量均升高;与CLP+NaCl组相比,CLP+SO2组大鼠肺组织中TNF-α、IL-6含量均下降.与Sham+NaCl组相比,CLP+NaCl组大鼠肺组织中p-IκBα、p-p65的表达增强,IκBα的表达减弱;与CLP+NaCl组相比,CLP+SO2组大鼠肺组织中p-IκBα、p-p65的表达减弱,IκBα的表达增强.结论 SO2在脓毒症大鼠肺损伤中通过抑制炎性反应起保护作用,机制与抑制NF-κB信号通路有关.     

大麻素受体2在脓毒症大鼠急性肺损伤中的作用及其机制

目的 探讨大麻素受体2 (CB2R)对脓毒症大鼠急性肺损伤的作用及其机制。方法 将SD大鼠随机分为对照组、模型组、CB2R激动剂（JWH133）组和CB2R拮抗剂（AM630）组。模型组腹腔注射脂多糖（LPS）构建脓毒症模型;JWH133组和AM630组在注射LPS前30 min注射JWH133和AM630。6 h后光镜和电镜下观察肺组织结构改变;检测肺组织含水率以及支气管肺泡灌洗液（BALF）中TNF-α、IL-1β的含量;实时定量PCR检测肺组织ERK1/2及NF-κB p65 mRNA的表达;Western blotting检测肺组织TNF-α、IL-1β、ERK、p-ERK、NF-κB p65、p-NF-κBp65的蛋白表达。结果 与对照组比较,模型组肺泡结构破坏,大量炎症细胞浸润,超微结构破坏;肺组织含水率升高;BALF中TNF-α、IL-1β水平升高（P <0.05）;肺组织ERK1/2、NF-κB p65 mRNA表达及TNF-α、IL-1β、p-ERK1/2、p-NF-κB p65蛋白表达水平升高（P <0.05）。与模型组相比,JWH133组病理改变及超微...     

表没食子儿茶素没食子酸酯通过减弱HMGB1/TLR4/NF-κB/NLRP3途径改善脓毒症后急性肝损伤

目的　探究表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）在脓毒症后急性肝损伤中的保护作用及潜在机制。方法　采用盲肠结扎穿刺术（CLP）建立脓毒症模型小鼠,以及使用脂多糖建立脓毒症后急性肝损伤细胞模型。8～10周龄雄性C57BL/6J小鼠88只随机分为CLP组、CLP+EGCG低剂量（4 mg/kg）组、CLP+EGCG高剂量（8 mg/kg）组和假手术组。正常肝细胞（L02细胞）根据干预方式不同分为脂多糖（LPS）（400 ng/mL）组、LPS（400 ng/mL）+高迁移率族蛋白B1（HMGB1）（100 ng/mL）组、LPS（400 ng/mL）+EGCG（100 μg/mL）组和对照组（PBS）组。术后24 h,采用全自动生化分析仪检测小鼠肝功能,镜下分析肝组织病理变化;ELISA法检测血清炎症因子;Western blot检测HMGB1、TOLL样受体4（TLR4）、NF-κB p65、NOD样受体蛋白3（NLRP3）、焦亡相关蛋白[消皮素D（GSDMD）、caspase 1、caspase 11、IL-1β、IL-18]的水平变化;采用免疫组织化学染色观察小鼠肝组织中HMGB1、GSDMD的表达及定位情况。L02细胞干预24 h后,采用ELISA法检测细胞上清液中炎症因子以及采用Western blot检测细胞中HMGB1、TLR4、NF-κB p65、NLRP3及焦亡相关蛋白的水平变化。结果　动物实验（样本量n=6）表明：CLP组小鼠白细胞计数、淋巴细胞计数、中性粒细胞计数、单核细胞计数均低于假手术组（P均<0.01）。与CLP组相比,CLP+EGCG低剂量、高剂量组小鼠血清丙氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）、HMGB1、TNF-α、IL-6表达水平明显降低（P均<0.05）,且CLP+EGCG高剂量组较低剂量组降低更为明显（P均<0.05）;HE染色结果提示CLP+EGCG低剂量、高剂量组小鼠肝组织损伤明显减轻,且以高剂量组为甚;Western blot提示CLP+EGCG低剂量、高剂量组肝组织中HMGB1、TLR4、NF-κB p65、 NLRP3、焦亡相关蛋白的表达水平明显下降（P均<0.05）,且以高剂量组降低更为明显（P均<0.05）;免疫组化提示CLP+EGCG低剂量、高剂量组中HMGB1和GSDMD的表达明显减少（P均<0.05）,且CLP+EGCG高剂量组降低更为明显（P均<0.05）。细胞实验（样本量n=8）表明：与LPS+HMGB1组相比,LPS组、LPS+EGCG组以及对照组的细胞上清液中HMGB1、TNF-α和IL-6的表达水平明显减少（P均<0.05）,且LPS+EGCG组较LPS组明显降低（P均<0.05）。Western blot结果提示LPS+HMGB1组中HMGB1、TLR4、NF-κB p65、 NLRP3以及焦亡相关蛋白表达水平较其余三组明显升高（P均<0.05）,且LPS+EGCG组较LPS组明显降低（P均<0.05）。结论　EGCG对脓毒症后急性肝损伤有保护作用,其机制可能与通过减弱HMGB1/TLR 4/NF-κB P65/NLRP3途径降低肝细胞焦亡有关。     

lncRNA NEAT1/miR-181a-5p/bcl-2轴在脓毒症致急性肺损伤中的作用机制研究

目的 探讨lnc RNA NEAT1/miR-181a-5p/bcl-2轴在脓毒症急性肺损伤（ALI）中的作用及机制。方法 结扎盲肠头尾端穿孔（CLP）构建脓毒症ALI小鼠模型,将C57BL/6雄性小鼠分为假手术组和ALI组,每组各8只。术后24 h取肺组织,测定肺湿/干比（W/D）,苏木素-伊红（HE）染色后光镜观察肺组织形态学改变,qRT-PCR检测肺组织长链非编码RNA(lncRNA)NEAT1,NEAT1的海绵miR-181a-5p以及结合蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)的表达水平。双荧光素酶报告基因实验检测NEAT1和mi R-181a-5p的结合情况。通过Western blot检测肺组织中miR-181a-5p结合蛋白bcl-2和Bax蛋白的表达水平。结果 与假手术组相比,ALI组小鼠W/D明显升高（P <0.01）;HE染色发现ALI组部分肺组织呈实质肺泡萎缩或消失。与假手术组相比,ALI组小鼠肺组织中lncRNA NEAT1的表达水平显著升高（P <0.01）,miR-181a-5p的表达水平显著降低（P <0.01）,bcl-2的表达水平...     

高脂饮食下核因子κB调控自噬在小鼠溃疡性结肠炎中的作用及其机制

目的 观察核因子κB (NF-κB)调控自噬在高脂饮食下葡聚糖硫酸钠（DSS）诱导的小鼠溃疡性结肠炎中的作用及其机制。方法 将小鼠分为正常对照组（Control组）、高脂饮食组（HFD组）、DSS组、DSS+高脂饮食组（DSS+HFD组）,每组12只。采用体质量差值、疾病活动指数（DAI）和结肠组织病理学结果评估小鼠一般情况和结肠组织炎症程度,采用ELISA检测小鼠血清炎性细胞因子水平,采用实时PCR检测小鼠结肠组织中NF-κB和LC3 mRNA的表达情况。结果 DSS+HFD组体质量差值小于Control组和DSS组（均P <0.05）。DSS+HFD组DAI、结肠组织病理学评分大于Control组和DSS组（均P <0.05）。DSS+HFD组血清白细胞介素（IL）-6、肿瘤坏死因子-α (TNF-α)以及结肠组织NF-κB mRNA水平高于Control组和DSS组（均P <0.05）。DSS+HFD组结肠组织LC3 mRNA水平低于Control组和DSS组（均P <0.05）。DSS+HFD组血清IL-10水平低于Control组（P <0.05...     

重组人Elafin对慢性高氧诱导新生小鼠支气管肺发育不良中炎性因子及NF-κB信号通路的影响

目的：探讨重组人Elafin对慢性高氧致新生小鼠支气管肺发育不良（bronchopulmonary dysplasia,BPD）中炎性因子和核因子-κB p65（nuclear factor-κB,NF-κB）蛋白的影响。方法：将30只C57BL/6J新生24 h内小鼠随机分成空气组、高氧+L/R组及高氧+Elafin组（n=10）。高氧+L/R 组、高氧+Elafin组暴露于85%氧气中。21 d时进行基础肺功能测定,采用HE染色观察小鼠肺组织形态学改变,RT-PCR检测肺组织炎症因子的表达,Western blot检测NF-κB p65蛋白表达情况。结果：与空气组[（7.85±0.24） g]比较,高氧+L/R组小鼠体质量[（5.33±0.63） g]显著下降（P=0.000）,肺发育受阻;TNF-α mRNA、IL-1β mRNA （P=0.000） 和NF-κB p65蛋白（P=0.001）表达增加,抗炎因子IL-4、IL-13 mRNA（P=0.000）表达降低。与高氧+L/R组比较,高氧+Elafin组小鼠体质量升高（P=0.014）,肺泡形态趋于正常;TNF-α（P=0.011）、IL-1β（P=0.000） mRNA和NF-κB p65蛋白（P=0.001）表达降低,IL-4（P=0.047）、IL-13（P=0.000） mRNA表达增加。结论：Elafin能有效减轻高氧诱导的小鼠肺损伤,其作用机制可能与抑制NF-κB活化及炎症因子释放密切相关。     

亚精胺通过抑制NF-κB/NLRP3炎症小体通路减轻LPS诱导的小鼠急性肺损伤

目的 ：本研究旨在观察亚精胺对脂多糖（LPS）诱导的急性肺损伤（ALI）小鼠NLRP3表达与活化的影响。方法 ：采用小动物呼吸机检测亚精胺对ALI小鼠呼吸功能的影响;检测小鼠的生存率;采用肺组织病理评分评估亚精胺对ALI小鼠肺组织形态变化的影响;ELISA检测ALI小鼠支气管肺泡灌洗液（BALF）中IL-1β和IL-18的蛋白水平;qPCR检测小鼠肺组织IL-1β、IL-18、NLRP3、ASC及pro-caspase-1、NF-κB的表达;Western Blots检测小鼠肺组织IκB的表达。结果 ：亚精胺可改善ALI小鼠的呼吸功能,提高生存率;减轻LPS诱导的肺病理损伤;降低ALI小鼠炎症因子IL-1β和IL-18的表达;减少ALI小鼠肺组织NLRP3、ASC、pro-caspase-1、NF-κB及IκB的表达。结论 ：亚精胺可通过抑制ALI小鼠肺组织NF-κB的激活,使NLRP3炎症小体的表达及活化减少,从而抑制炎症因子的表达,最终达到减轻ALI的作用。本研究可为从调节内源性能量代谢角度,探索ALI的发生机制提供实验基础     

aR1治疗脂多糖诱导的急性肺损伤小鼠的效果和机制

目的 探讨Maresin-1（MaR1）治疗脂多糖（LPS）诱导的急性肺损伤（ALI）小鼠的效果和机制。方法将雄性SPF级BALB/c小鼠45只随机分为3组。对照组经口气管插管滴入3 mg/kg生理盐水。LPS组经口气管插管滴入3 mg/kg LPS。MaR1组经口气管插管滴入3 mg/kg LPS,1 h后尾静脉注射1 ng/只MaR1。对比分析3组小鼠肺组织损伤评分、免疫印迹分析小鼠肺组织MAPKs、核因子-κB(NF-κB)蛋白表达,以及氧化应激标记分析3组小鼠肺组织核因子-E2相关因子2（Nrf-2）表达和抗氧化酶的情况。结果与LPS组比较,MaR1组能改善LPS诱导的ALI小鼠肺组织损伤评分（P=0.000）;MaR1组能显著抑制LPS诱导的ALI小鼠MAPKs和p65NF-κB的磷酸化,两组间差异均有统计学意义（P＜0.05）;MaR1组通过上调抗氧化酶增加Nrf-2的核转运,两组间差异均有统计学意义（P＜0.05）;MaR1组抑制了LPS诱导的ALI模型肺组织中活性氧介导的氧化应激反应,两组间差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论MaR1治疗小鼠ALI机制可能是通过抑制MAPK和NF-κB的磷酸化,同时活化多种抗氧化酶保护肺组织有关。     

荆防药对正丁醇提取部位抗炎作用的NF-κB信号通路机制研究

目的观察荆防药对正丁醇提取部位对气管滴注脂多糖(LPS)所致小鼠急性肺损伤(ALI)模型及LPS刺激诱导的小鼠单核巨噬白血病细胞(RAW264. 7细胞)炎症模型的保护作用,探讨其抗炎效应的核转录因子-κB(NF-κB)信号通路机制。方法 (1)小鼠ALI模型:将雄性昆明种小鼠分为空白对照组,假手术组,模型组,地塞米松(5 mg/kg)+LPS组,荆防药对正丁醇部位低、中、高剂量(3. 33、6. 67、10. 01 g/kg)+LPS组,除地塞米松组于实验第2、4、5天腹腔注射给药1次外,其余各组动物连续灌胃给药5 d,1次/d,空白对照组、假手术组和模型组给予等体积0. 5%吐温溶液。末次给药30 min后,除空白对照组和假手术组外其余各组小鼠气管滴注LPS 100μL(5 mg/kg)制备小鼠ALI模型,假手术组小鼠行麻醉、气管滴注操作,但给予无菌生理盐水。造模后5 h各组再次给药1次,给予LPS后6 h处死小鼠,取小鼠肺组织进行病理形态学观察,Real-Time PCR法检测小鼠肺组织NF-κB p65、NF-κB p50、IκBαmRNA表达水平,Western-Blot法检测小鼠肺组织NF-κB p50蛋白表达水平。(2)RAW264. 7细胞炎症模型:取对数期RAW264. 7细胞悬液接种、培养24 h贴壁后,设空白对照组,LPS组(1 mg/L),LPS+DMSO对照组,LPS+地塞米松(5 mg/L)组,LPS+荆防药对正丁醇部位高、低剂量组(50、25 mg/L),LPS+5-O-甲基维斯阿米醇苷高、低剂量组(50、25 mg/L),LPS+橙皮苷组(50μg/L),LPS+迷迭香酸组(5 mg/L)。受试药物预处理3 h,除空白对照组外其余各组均加入1 mg/L LPS刺激12 h造模,吸取细胞上清,Griess法测定一氧化氮(NO)含量,ELISA法测定白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;裂解细胞,Real-Time PCR法检测细胞NF-κB p65、NF-κB p50和IκBαmRNA表达水平。结果 (1)与LPS所致小鼠ALI模型组比较,荆防药对正丁醇部位各剂量组可减少ALI小鼠肺组织嗜中性粒细胞计数,其中低剂量组降低作用显著(P 0. 01);荆防药对正丁醇部位中、低剂量组显著下调ALI小鼠肺组织NF-κB p65mRNA及NF-κB p50蛋白表达水平(P 0. 01),中剂量组亦明显下调NF-κB p50 mRNA表达水平(P 0. 05)。(2)与细胞炎症模型组比较,所有受试药物均能明显降低细胞上清IL-6水平(P 0. 01或P 0. 05),荆防药对正丁醇部位(50、25 mg/L)、5-O-甲基维斯阿米醇苷低剂量组可显著降低细胞上清NO含量(P 0. 01或P 0. 05),荆防药对正丁醇部位高剂量组有减少细胞上清TNF-α含量的趋势;荆防药对正丁醇部位低剂量组显著下调细胞NF-κB p65、NF-κB p50、IκBαmRNA表达水平(P 0. 05或P 0. 01),高剂量组明显抑制细胞NF-κB p50、IκBαmRNA表达(P 0. 05或P0. 01),5-O-甲基维斯阿米醇苷和橙皮苷亦可显著下调细胞NF-κB p50 mRNA表达水平(P 0. 05),迷迭香酸明显抑制模型细胞NF-κB p50和IκBαmRNA表达的上调(P 0. 05)。结论荆防药对正丁醇提取部位具有抗急性炎症作用,抗炎作用发挥与抑制NF-κB信号通路中关键因子NF-κBp65、NF-κB p50、IκBα基因及NF-κB p50蛋白表达有关,5-O-甲基维斯阿米醇苷、橙皮苷与迷迭香酸可能为其主要有效物质基础。     

抗CD200抗体对脓毒症小鼠肝脏保护作用及其机制的研究

目的观察CD200在脓毒症小鼠肝脏的表达情况,并进一步探讨抗CD200抗体对脓毒症小鼠肝脏的保护作用及其可能的作用机制。方法构建脓毒症小鼠模型(CLP),将C57BL/6雄性小鼠分为假手术组、脓毒症组(CLP组),每组8只,观察各组小鼠肝脏组织CD200的表达水平;将C57BL/6雄性小鼠分为假手术组,脓毒症组(CLP组)、CLP+同型对照抗体治疗组(Isotype组)、CLP+抗CD200抗体治疗组(anti-CD200组),每组8只。检测各组小鼠外周血氨基转移酶水平、肝脏病理、腹腔灌洗液细菌负荷、外周血TNF-α、IL-6的水平、肝脏组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素(IL)-6的mRNA水平、肝脏组织核转录因子-κB(NF-κB)磷酸化水平。结果脓毒症组小鼠的肝脏CD200表达水平明显高于假手术组(P<0.05);anti-CD200组小鼠肝脏组织的坏死程度明显轻于脓毒症组(P<0.05),TNF-α、IL-6水平低于脓毒症组(P<0.05),腹腔灌洗液细菌菌落的水平低于脓毒症组(P<0.05),NF-κB的磷酸化低于脓毒症组(P<0.05)。结论抗CD200抗体可以对脓毒症小鼠肝脏产生保护作用,其可能的机制为抑制NF-κB的磷酸化、减少炎症因子的释放。     

苯甲酰芍药苷对脂多糖诱导小鼠急性肺损伤保护作用及分子机制研究

目的探讨苯甲酰芍药苷对脂多糖(LPS)诱导小鼠急性肺损伤(ALI)的保护作用及可能分子机制。方法将75只SPF级C57BL/6J小鼠按照随机数字表法分成五组,每组15只:空白对照组(生理盐水200μL)、ALI组(2mg/kg LPS 100μL+生理盐水100μL)、阳性对照组(2mg/kg LPS100μL+血必净注射液100μL)、苯甲酰芍药苷低剂量组(2mg/kg LPS 100μL+2.5mg/kg苯甲酰芍药苷100μL)、苯甲酰芍药苷高剂量组(2mg/kg LPS 100μL+5.0mg/kg苯甲酰芍药苷100μL),通过腹腔注射LPS构建ALI模型并给予药物干预。称重检测各组肺组织湿/干重比;苏木素-伊红(HE)染色观察肺组织病理形态变化;酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测ALI小鼠肺组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)水平;蛋白免疫印迹(WB)法检测肺组织IκB激酶(IKKβ)/核因子κB(NF-κB)表达及其磷酸化激活水平;荧光定量PRC(RT-PCR)检测ALI小鼠肺组织mi R-520c-3p表达;Targetscan 7.0预测mi R-520c-3p靶基因;A549转染mi R-520c-3p inhibitor验证苯甲酰芍药苷对炎症的调控作用。结果与ALI组比较,低、高剂量苯甲酰芍药苷均明显降低ALI小鼠肺组织湿/干重比[(5.64±0.14)、(4.75±0.11)比(6.21±0.64),P均0.05];ALI损伤的肺组织结构得到缓解;ELISA结果显示,与ALI组比较,低、高剂量苯甲酰芍药苷能明显降低ALI小鼠肺组织TNF-α、IL-6水平[TNF-α:(20.68±1.06)pg/m L、(7.34±0.37)pg/m L比(32.27±1.89)pg/m L,P均0.05;IL-6:(29.16±2.36)pg/m L、(14.26±1.06)pg/m L比(48.26±3.19)pg/m L,P均0.05];WB结果显示,与ALI组比较,苯甲酰芍药苷低、高剂量组IKKβ、NF-κB p65磷酸化水平以及总NF-κB p65水平下降;RTPCR结果显示,与ALI组比较,低、高剂量苯甲酰芍药苷有效促进mi R-520c-3p在ALI中的表达[(0.51±0.13)、(0.74±0.09)比(0.34±0.11),P均0.05];Targetscan预测结果显示,mi R-506-3p直接靶向NF-k B p65亚基RELA基因3'UTR序列;补救实验显示,与苯甲酰芍药苷组比较,苯甲酰芍药苷+mi R-520c-3p inhibitor组TNF-α、IL-6 m RNA水平明显升高[TNF-α:(3.94±0.49)比(1.55±0.36),P0.05;IL-6:(6.95±1.21)比(2.11±0.42),P0.05]。结论苯甲酰芍药苷能有效缓解LPS引起的小鼠ALI病理进程中炎症的发生,其作用机制可能是通过上调mi R-520c-3p表达,从而抑制其靶基因NF-κB p65生成,抑制IKKβ/NF-κB信号通路的活化,导致炎症因子TNF-α、IL-6的合成受到抑制。     

人心房利钠肽对机械通气肺损伤大鼠肺组织NF-κB p65的表达及影响

目的 探讨人心房利钠肽（hANP）对大鼠机械通气性肺损伤（VILI）时炎症因子和NF-κB p65表达的影响.方法 采用高气道压机械通气模式制备机械通气性肺损伤模型.雄性SD大鼠30只随机分为空白对照组、机械通气肺损伤组（HV组）和人心房利钠肽组（HV＋ hANP组）.HV＋hANP组于机械通气30 min静脉注射hANP（0.1g/kg· min）,机械通气4小时时处死大鼠,免疫蛋白印迹法测定肺组织NF-κB p65的表达,酶联免疫吸附法测定肺组织TNF-a和IL-1β含量,计算肺组织湿/干重比（W/D）.结果 与TV组相比,HV组、HV＋ hANP组肺组织NF-κB p65表达明显增加,肺组织TNF-a和IL-1β含量明显上升（P＜0.05）,肺组织W/D明显升高（P＜0.05）;与HV组相比,HV＋ hANP组肺组织NF-κB p65表达明显抑制,肺组织TNF-a和IL-1β含量明显降低（P＜0.05）,肺组织W/D降低（P＜0.05）.结论 人心房利钠肽通过抑制肺组织NF-κB p65表达,减轻肺部炎症反应,从而减轻大鼠机械通气所致肺损伤.     

盐酸戊乙奎醚通过抑制肺组织NF-κB活化减轻胎鼠急性肺损伤

目的 研究盐酸戊乙奎醚(penehyclidine hydrochloride,PHCD)对宫内窘迫致胎鼠急性肺损伤(acute lung injury,ALI)时NF-κB的影响.方法 足月胎鼠80只,体质量4.74 ～4.82 g,采用随机数字表法分为4组(n=20):空白对照组、PHCD组、ALI组、ALI +PHCD组.采用钳夹孕鼠两侧子宫角血管的方法建立宫内窘迫模型,ALI+PHCD组在建立宫内窘迫模型前30 min予孕鼠肌注PHCD(2 mg/kg),PHCD组给孕鼠肌注等剂量盐酸戊乙奎醚.剖宫取出胎鼠后立即断头,收集胎鼠外周血行血气检测、肺湿/干质量比值(W/D)测定,HE染色观察胎鼠肺组织病理改变,ELISA测定肺组织肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)及白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)含量,荧光定量PCR检测肺组织NF-κB表达,Western blot检测肺组织NF-κB p65蛋白表达.结果 ALI组血酸碱度(pH)、氧分压均低于空白对照组,差异有统计学意义(P＜0.05),ALI+ PHCD组上述指标高于ALI组,差异有统计学意义(P ＜0.05);ALI组二氧化碳分压、乳酸(lactic acid,Lac)、W/D、TNF-α、IL-6含量、NF-κB mRNA表达及NF-κB p65蛋白表达水平均明显高于空白对照组(P＜0.05),ALI+ PHCD组上述各指标均明显低于ALI组(P＜0.05).ALI+ PHCD组肺组织病理学损伤较AH组减轻.结论 PHCD可能是通过抑制肺组织NF-κB活化,减少TNF-α、IL-6的释放,降低炎性反应,从而减轻宫内窘迫导致胎鼠急性肺损伤.