长链非编码 RNA LINC01419调控结直肠癌细胞增殖、凋亡、迁移侵袭的机制

目的研究长链非编码 RNA(lncRNA)LINC01419调控结直肠癌细胞增殖、凋亡、迁移侵袭的机制。方法收集漯河市中心医院 2015年 10月至 2018年 5月因结直肠癌手术切除的组织标本 20例,以距离结直肠癌边缘 ≥3 cm的癌旁正常组织标本 20例为对照。实时荧光定量逆转录聚合酶链反应( qRT-PCR)检测结直肠癌组织中 lncRNA LINC01419和微小 RNA-132-3p(miR-132-3p)表达。构建干扰 lncRNA LINC01419或 miR-132-3p过表达的结直肠癌 SW620细胞, MTT法和流式细胞术分别检测细胞增殖与凋亡, Transwell检测细胞迁移、侵袭,蛋白质印迹法( Western blotting)检测细胞周期蛋白 D1(cyclin D1)、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂 1A(P21)、 B细胞淋巴瘤 -2(Bcl-2)蛋白、 Bcl-2相关 X(Bax)蛋白、基质金属蛋白酶 -2(MMP-2)、基质金属蛋白酶 -9(MMP-9)蛋白表达。生物信息学预测结合双荧光素酶报告实验分析 lncRNA LINC01419和 miR-132-3p的靶向关系。 si-LINC01419和 anti-miR-123-3p共转染,观察抑制 miR-132-3p表达对干扰 lncRNA LINC01419诱导的 SW620细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的影响。结果与癌旁组织［(1.00±0.09)、(1.01±0.08)］比较,结直肠癌组织中 lncRNA LINC01419表达量( 2.74± 0.26)明显增加( P<0.05)miR-132-3p表达量( 0.51±0.05)显著减少( P<0.05)。干扰 lncRNA LINC01419或 miR-132-3p过表达显著抑制 SW620细胞增殖、,迁移、侵袭、 cyclin D1、Bcl-2、MMP-2、MMP-9蛋白表达,并促进细胞凋亡、 P21、Bax蛋白表达。 lncRNA LINC01419靶向调控 miR-132-3p的表达。抑制 miR-132-3p表达逆转了干扰 lncRNA LINC01419对结直肠癌细胞 SW620增殖、迁移、侵袭的抑制作用,以及对细胞凋亡的促进作用。结论 lncRNA LINC01419通过靶向 miR-132-3p调控结直肠癌细胞增殖、凋亡、迁移侵袭。     

长链基因间非编码 RNA 00963通过靶向微小 RNA-148b-3p对结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的 探讨长链基因间非编码RNA00963(LINC00963)对结直肠癌细胞恶性生物学行为的影响及作用机制.方法 本研究于2018年8月至2019年5月进行;正常结直黏膜上皮细胞NCM460以及结直肠癌细胞系HT29、SW480、SW1116购自中国科学院上海细胞库,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测微小RNA-148b-3p(miR-148b-3p)和LINC00963的表达水平;双荧光素酶报告实验检测miR-148b-3p和LINC00963的靶向关系.将HT29细胞分为miR-NC组、miR-148b-3p组、si-NC组、si-LINC00963组、si-LINC00963+anti-miR-NC组、si-LINC00963+anti-miR-148b-3p组;蛋白质印迹法(Western Blotting)检测蛋白表达;四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞活性;Transwell检测各组细胞迁移和侵袭.结果 与NCM460细胞相比,HT29、SW480、SW1116细胞中miR-148b-3p的表达水平显著降低[(0.32±0.04)、(0.48±0.04)、(0.39±0.04)比(1.03±0.09)],LINC00963的表达水平显著升高[(3.13±0.31)、(2.76±0.27)、(2.91±0.28)比(1.00±0.09)],差异有统计学意义(P<0.05).LINC00963靶向调控miR-148b-3p的表达.干扰LINC00963后,细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)蛋白表达水平降低,细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1A(p21)表达水平升高,HT29细胞活性[48 h为(0.43±0.04)比(0.65±0.06),72 h为(0.56±0.05)比(1.05±0.09)]降低,及迁移数量减少[(39.65±3.42)个比(81.24±8.06)个],侵袭数量减少[(32.14±3.28)个比(69.54±6.27)个],差异有统计学意义(P<0.05).过表达miR-148b-3p后,Cyclin D1、MMP-2、MMP-9表达水平降低,p21表达水平升高,HT29细胞活性[48 h为(0.49±0.04)比(0.67±0.06),72 h为(0.62±0.06)比(1.06±0.09)]降低,及迁移数量减少[(45.32±4.28)个比(86.27±8.25)个],侵袭数量减少[(39.54±4.03)个比(73.65±7.24)个],差异有统计学意义(P<0.05).抑制miR-148b-3p表达可逆转干扰LINC00963对HT29细胞的作用.结论 干扰LINC00963可通过上调miR-148b-3p抑制结直肠癌HT29细胞的增殖、迁移和侵袭.     

LINC00691负调控miR-512-5p对非小细胞肺癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响

目的 探讨LINC00691对非小细胞肺癌（NSCLC）细胞恶性生物学行为的影响。方法 RT-qPCR检测30例NSCLC患者癌组织和对应癌旁组织中LINC00691和miR-512-5p的表达。双荧光素酶报告基因实验验证LINC00691和miR-512-5p的靶向关系。将A549细胞分为si-NC组、si-LINC00691组、miR-NC组、miR-512-5p组、si-LINC00691+anti-miR-NC组和si-LINC00691+anti-miR- 512-5p组,MTT和克隆形成实验检测细胞增殖情况,流式细胞术、Transwell检测细胞凋亡、迁移和侵袭,Western blotting检测细胞中Ki67、Cleaved-caspase3、E-cadherin和N-cadherin蛋白表达。结果 LINC00691在NSCLC癌组织中表达水平上升（P<0.05）,而miR-512-5p表达水平下降（P<0.05）。LINC00691在A549细胞中负调控miR-512-5p。沉默LINC00691表达或过表达miR-512-5p可降低A549细胞的存活率、克隆形成数、迁移和侵袭数以及Ki67、N-cadherin蛋白表达水平,提高其凋亡率,上调Cleaved-caspase3、E-cadherin蛋白表达水平（P<0.05）。沉默miR-512-5p表达逆转了沉默LINC00691表达对A549细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用及凋亡促进作用。结论 沉默LINC00691可能通过靶向上调miR-512-5p表达来抑制NSCLC细胞的增殖、迁移和侵袭,并促进其凋亡。     

白芍总苷调控舌癌HSC3细胞增殖、迁移和侵袭的机制研究

探讨白芍总苷(TGP)对舌癌HSC3细胞增殖、迁移和侵袭的影响及作用机制。TGP作用HSC3细胞或抑制LINC00319表达后,MTT检测HSC3细胞增殖,Transwell检测HSC3细胞的迁移和侵袭,蛋白印迹(Western Blot)检测细胞中CyclinD1、p21、MMP-2和MMP-9蛋白水平,qRT-PCR检测细胞中LINC00319和miR-608水平,双荧光素酶报告基因实验验证LINC00319和miR-608调控关系。TGP或抑制LINC00319表达后,HSC3细胞抑制率、p21蛋白及miR-608水平升高(P<0.05),细胞迁移和侵袭数、CyclinD1、MMP-2和MMP-9蛋白水平及LINC00319水平降低(P<0.05)。LINC00319靶向负调控miR-608表达,LINC00319过表达逆转TGP对HSC3细胞增殖、迁移和侵袭的影响(P<0.05)。TGP可能通过调控LINC00319/miR-608轴抑制舌癌HSC3细胞增殖、迁移和侵袭。     

LINC00839靶向调控miR-124-3p对膀胱癌细胞生物学行为的影响

目的 探讨LINC00839靶向调控miR-124-3p对膀胱癌细胞生物学行为的影响。方法 实时荧光定量PCR(qPCR)检测膀胱癌和癌旁正常组织、膀胱癌细胞株(T24、5637、EJ)中LINC00839表达及抑制LINC00839后对miR-124-3p表达的影响。构建3条小干扰RNA-LINC00839(si-LINC00839-1组、si-LINC00839-2组和siLINC00839-3组)序列转染膀胱癌细胞。沉默LINC00839表达后，CCK-8检测LINC00839对细胞增殖的影响；Transwell检测LINC00839对细胞侵袭的影响；流式细胞术检测LINC00839对细胞凋亡的影响；双荧光素酶实验检测LINC00839与miR-124-3p的相互作用；免疫蛋白印迹法检测抑制LINC00839后对内皮素受体B(EDNRB)蛋白表达的影响。结果 q PCR检测结果显示，与癌旁正常组织比较，膀胱癌组织中LINC00839表达增高(P<0.05);LINC00839在膀胱癌细胞5637表达最高。3条siRNA序列中，si-LINC00839-2抑制效率最高。与si...     

丙泊酚下调miR-93-5p表达对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、侵袭的影响

摘要：目的:探讨丙泊酚对miR-93-5p以及人乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖及侵袭的影响。方法:培养对数期MDA-MB-231细胞,进行细胞毒性试验,筛选最佳丙泊酚处理浓度与时间,实验分为空白对照组（0.1%DMSO培养基）、阳性对照组(30μmol·L-1环磷酰胺)、丙泊酚1,2,5 mg·L-1浓度组。CCK8法检测细胞增殖,细胞划痕及Transwell实验检测细胞迁移侵袭情况,免疫印迹法（Western Blot）检测增殖相关蛋白增殖细胞核抗原（PCNA）、侵袭迁移相关蛋白金属机制蛋白酶2（MMP-2）、金属机制蛋白酶2（MMP-9）蛋白表达情况,定量即时聚合酶链锁反应（qRT-PCR）检测细胞miR-93-5p表达情况。结果:与空白对照组相比,阳性对照组与丙泊酚各浓度组MDA-MB-231细胞增殖抑制率、迁移抑制率显著升高,裸鼠肿瘤体积、侵袭细胞数量及PCNA、MMP-2、MMP-9蛋白表达、miR-93-5p表达显著降低（P<0.05）。与阳性对照组相比,1 mg·L-1和2 mg·L-1丙泊酚组MDA-MB-231细胞裸鼠肿瘤体积、侵袭细胞数量及PCNA、MMP-2、MMP-9蛋白表达、miR-93-5p表达依次升高,增殖抑制率、迁移抑制率依次降低（P<0.05）。结论:丙泊酚可能通过下调miR-93-5p表达,抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖、侵袭能力发挥抗肿瘤作用。     

LINC00707靶向miR-30c-5p对ox-LDL诱导的人血管平滑肌细胞增殖、迁移及炎症因子的影响北大核心CSCD

目的探讨LINC00707对氧化型低密度脂蛋白(oixidized low-density lipoprotein,ox-LDL)诱导的人血管平滑肌细胞功能障碍的影响及其作用机制。方法采用ox-LDL诱导人血管平滑肌细胞HVSMCs建立动脉粥样硬化细胞模型,si-NC、si-LINC00707、miR-NC、miR-30c-5p mimic分别转染至HVSMCs后,加入100 mg·L-1 ox-LDL处理细胞,si-LINC00707和anti-miR-NC、si-LINC00707和miR-30c-5p Inhibitor分别共转染至HVSMCs后,加入100 mg·L-1 ox-LDL处理细胞;qRT-PCR法检测LINC00707、miR-30c-5p的表达量;CCK-8法、Transwell实验分别检测细胞增殖及迁移;ELISA法检测IL-6、TNF-α、IL-10的水平;双荧光素酶报告实验检测LINC00707与miR-30c-5p的靶向关系;Western blot检测E-cadherin、N-cadherin蛋白表达量。结果ox-LDL诱导的HVSMCs中LINC00707的表达量升高(P<0.05),miR-30c-5p的表达量降低(P<0.05);转染si-LINC00707或miR-30c-5p mimic后,细胞存活率、N-cadherin蛋白水平和IL-6、TNF-α的水平降低(P<0.05),迁移细胞数减少(P<0.05),E-cadherin蛋白水平和IL-10的水平升高(P<0.05);LINC00707可靶向结合miR-30c-5p;共转染si-LINC00707和miR-30c-5p Inhibitor后,细胞存活率、N-cadherin蛋白水平和IL-6、TNF-α的水平升高(P<0.05),迁移细胞数增多(P<0.05),E-cadherin蛋白水平和IL-10的水平降低(P<0.05)。结论下调LINC00707导致miR-30c-5p表达升高从而抑制ox-LDL诱导的HVSMCs增殖、迁移及炎症反应。     

下调miR-374a通过靶向TCF21抑制宫颈癌细胞SiHa增殖、迁移、侵袭的分子机制

摘要：目的:阐明下调miR-374a靶向转录因子21（TCF21）调控宫颈癌细胞增殖、迁移、侵袭的分子机制。方法:采用Realtime PCR法检测微小RNA（miR）-374a在正常宫颈上皮细胞和宫颈癌细胞中的表达变化。在宫颈癌细胞Si Ha中转染miR-374a inhibitor,MTT检测细胞增殖,Transwell小室检测细胞侵袭以及迁移能力变化,Western blot检测细胞中基质金属蛋白酶2（MMP-2）、基质金属蛋白酶9（MMP-9）蛋白表达变化。在线靶基因预测软件预测miR-374a的靶基因可能为TCF21,荧光素酶报告系统鉴定靶向关系。在宫颈癌细胞Si Ha中共转染miR-374a inhibitor和TCF21 siRNA,检测细胞增殖、侵袭、迁移变化。结果:miR-374a在正常宫颈上皮细胞中的表达水平明显低于宫颈癌细胞。转染miR-374a inhibitor后的宫颈癌细胞Si Ha增殖、迁移和侵袭能力下降,细胞中MMP-2和MMP-9蛋白表达减少。miR-374a靶向负调控TCF21表达。TCF21 siRNA逆转miR-374a inhibitor对宫颈癌细胞Si Ha增殖、侵袭和迁移的抑制作用。结论:下调miR-374a通过靶向TCF21抑制宫颈癌细胞Si Ha增殖、迁移、侵袭。     

miR-98-5p靶向CCR7对乳腺癌细胞MCF-7运动能力的影响及其机制研究

【目的】探究miR-98-5p靶向作用于趋化因子受体(CCR7)对乳腺癌细胞MCF-7运动能力的影响及相关机制。【方法】MCF-7细胞分为Ctrl组、miR-98-5p mimic组、miR-98-5p NC组、pc-CCR7组、miR-98-5p+pc-CCR7组,分别转染相应的miRNA和CCR7过表达载体,RT-PCR检测miR-98-5p和CCR7基因表达水平,荧光素酶报告实验检测miR-98-5p和CCR7靶向关系,Transwell法检测细胞侵袭,划痕法检测细胞迁移,Western blot检测CCR7、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、MMP-9、血管内皮生长因子(VEGF)、E-钙粘着蛋白(E-cadherin)、N-cadherin、波形蛋白(Vimentin)蛋白表达水平。【结果】荧光素酶报告实验中,与CCR7 WT+miR-98-5p NC比较,CCR7 WT+miR-98-5p mimic荧光素酶活性显著降低。与Ctrl组比较,miR-98-5p mimic组中miR-98-5p表达水平、E-cadherin蛋白表达水平显著升高,CCR7基因和蛋白表达水平、细胞侵袭和迁移能力、MMP-2、MMP-9、VEGF、N-cadherin、Vimentin蛋白表达水平显著降低,pc-CCR7组细胞侵袭和迁移能力、CCR7、MMP-2、MMP-9、VEGF、N-cadherin、Vimentin蛋白表达水平显著升高,E-cadherin蛋白表达水平显著降低;与pc-CCR7组比较,miR-98-5p+pc-CCR7组细胞侵袭和迁移能力、CCR7、MMP-2、MMP-9、VEGF、N-cadherin、Vimentin蛋白表达水平显著降低,E-cadherin蛋白表达水平显著升高。【结论】miR-98-5p可靶向作用于CCR7,抑制乳腺癌细胞MCF-7运动能力,其作用机制与上皮细胞间充质转化(EMT)有关。     

虫草素通过调控miR-524-5p表达抑制口腔鳞癌HSC3细胞的增殖、迁移及侵袭

摘要：目的:探讨虫草素通过调控微小RNA-524-5p（miR-524-5p）表达对口腔鳞癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响。方法:体外培养口腔鳞癌细胞HSC3,分别使用不同浓度(10,20,40μmol·L-1)的虫草素处理;采用甲基噻唑基四唑（MTT）检测细胞增殖; Transwell小室实验检测细胞迁移及侵袭;实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测miR-524-5p的表达水平;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测细胞周期蛋白1（Cyclin D1）、p21、基质金属蛋白酶-2（MMP-2）、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）、上皮型钙黏蛋白（E-cadherin）的表达量;分别将miR-524-5p mimics或anti-miR-524-5p转染至HSC3细胞后,采用上述方法检测细胞增殖、迁移及侵袭。结果:与对照组比较,虫草素各浓度组细胞增殖抑制率显著升高（P<0.05）,迁移细胞数及侵袭细胞数显著减少（P<0.05）,Cyclin D1、MMP-2、MMP-9蛋白水平显著降低（P<0.05）,p21、E-cadherin蛋白水平及miR-524-5p的表达水平显著升高（P<0.05）,且虫草素浓度组间的上述指标比较差异均有统计学意义（P<0.05）; miR-524-5p过表达可抑制HSC3细胞增殖、迁移及侵袭,而抑制miR-524-5p表达可减弱虫草素对HSC3细胞增殖、迁移及侵袭的作用。结论:虫草素可能通过上调miR-524-5p的表达从而抑制口腔鳞癌细胞增殖、迁移及侵袭。     

长链非编码 RNA LINC00346调控微小 RNA-138-5p对宫颈癌细胞增殖、凋亡的影响

目的研究长链非编码 RNA(lncRNA)LINC00346影响宫颈癌细胞增殖和凋亡的分子机制。方法选取 2018年 1—12月于南阳市中心医院手术治疗的 28例宫颈癌病人的宫颈癌组织(实验组)及癌旁正常组织(对照组)为研究对象。根据细胞转染情况分为 si-NC组、 si-LINC00346组、 miR-NC组、 miR-138-5p组、 si-LINC00346+anti-miR-NC及 si-LINC00346+anti-miR-138-5p组;利用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应( qRT-PCR)检测宫颈癌组织和宫颈癌海拉细胞中 LINC00346和微小 RNA(miR)138-5p的表达水平,蛋白质印迹法检测海拉细胞中周期素依赖激酶抑制剂 p21(P21)和胱天蛋白酶 -3(caspase-3)的蛋白含量, MTT法和流式细胞术测定细胞存活率和凋亡率,双荧光素酶报告系统验证 LINC00346和 miR-138-5p的靶向关系。结果与正常癌旁组织相比,宫颈癌组织中 LINC00346含量显著升高［( 2.51±0.08)比( 0.99±0.05)］(P<0.001);转染 si-LINC00346(LINC00346干扰物)后,与 si-NC(阴性对照组)相比, si-LINC00346组宫颈癌海拉细胞中的 LINC00346含量显著下降［( 0.33± 0.03)比( 1.00±0.05)］P21和 caspase-3蛋白含量升高［(0.63±0.04)比( 0.22±0.02);(0.79±0.05)比( 0.30±0.03)］,海拉细胞存活率降低［(52.84±4.39)比(,100.00±6.13)］,凋亡率升高［( 23.39±1.64)比( 8.19±1.00)］,均差异有统计学意义( P<0.001),敲除 LINC00346可降低细胞存活率,提高细胞凋亡率及 P21和 caspase-3蛋白含量;转染野生型 WT-LINC00346的海拉细胞,与 miR-NC对照组相比, miR-138-5p组野生型 WT-LINC00346的萤火虫荧光素酶相对活性显著下降［( 0.24±0.03)比( 0.97±0.05)］。敲除 LINC00346可显著上调 miR-138-5p含量［(2.43±0.07)比( 1.01±0.05)］(P<0.001)。结论 LINC00346通过靶向 miR-138-5p调控宫颈癌海拉细胞增殖和凋亡。     

长链非编码 RNA LINC00662靶向微小 RNA-103a-3p对黑色素瘤细胞增殖和周期的影响

目的探究长链非编码 RNA LINC00662对黑色素瘤细胞增殖和周期的影响,以及分子机制。方法本研究于 2018年 10月至 2020年 2月进行。以体外培养的人皮肤黑色素瘤细胞 A375为研究对象,然后将其分为四组,分别为 si-NC、si-LINC00662、si-LINC00662+anti-miR-NC和 si-LINC00662+anti-miR-103a-3p转染 A375细胞。采用 RT-PCR检测皮肤黑色素瘤组织中 LINC00662和 miR-103a-3p的表达水平, CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期,蛋白质印迹法( western blot. ting)检测细胞周期蛋白 1(CyclinD1)、增殖细胞核抗原( PCNA)的蛋白表达。结果与正常组织和正常皮肤细胞相比,在皮肤黑色素瘤组织和细胞株中 LINC00662表达［ 1.24±0.50比 4.17±1.27］上调, miR-103a-3p表达［ 1.17±0.32比 0.64±0.21］显著下调。 LINC00662与 miR-103a-3p靶向结合。与 si-NC组相比, si-LINC00662组 LINC00662表达［ 1.00±0.06比 0.48±0.06］、 OD值和 S期细胞比例［( 34.7±3.5)%比( 20.5±3.0)%］降低, G0/G1期细胞比例［( 57.4±5.2)%比( 74.7±4.8)%］增高, Cyclin D1［1.00±0.01比     

LINC00094靶向miR-19b对非小细胞肺癌增殖、侵袭的抑制作用及其分子机制

目的 探讨LINC00094对非小细胞肺癌A549细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的影响及其作用机制。方法 将pcDNA3.1、pcDNA3.1-LINC00094、si-NC、si-LINC00094转染至非小细胞肺癌A549细胞中;将pcDNA3.1-LINC00094分别与miR-NC、miR-19b转染至A549细胞中,分别记为pcDNA3.1-LINC00094+miR-NC组、pcDNA3.1-LINC00094+miR-19b组。采用实时荧光定量PCR检测LINC00094和miR-19b表达水平;采用蛋白质印迹法检测细胞周期蛋白和凋亡蛋白表达水平;采用四甲基偶氮唑盐比色法、流式细胞术和Transwell分别检测细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭能力;双荧光素酶报告实验检测LINC00094与miR-19b的靶向关系。结果 LINC00094在肺癌组织中低表达。过表达LINC00094可降低A549细胞的生存率,并抑制细胞迁移、侵袭（P<0.05）,且伴有相关蛋白表达水平的改变（P<0.05）。LINC00094靶向调控miR-19b,过表达miR-19b可逆转LINC00094对A549细胞增殖、迁移、侵袭的抑制作用和对细胞凋亡的促进作用。结论 LINC00094可靶向抑制miR-19b的表达,从而抑制A549细胞的增殖、迁移和侵袭。     

微小RNA-152-3p 对结肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其作用机制研究

目的探讨微小RNA(miR)-152-3p对结肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭的影响及机制。方法2019年2月至2020年4月,将结肠癌SW480细胞分为miR-152-3p模拟物阴性对照(miR-NC)组、miR-152-3p模拟物(miR-152-3p)组、抑制物(anti-miRNC)组、miR-152-3p抑制物(anti-miR-152-3p)组、阴性对照(si-NC)组、沉默转移相关蛋白2(si-MTA2)组、miR-152-3p模拟物+空载体(miR-152-3p+pcDNA3.1)组、miR-152-3p模拟物+过表达MTA2(miR-152-3p+pcDNA3.1-MTA2)组,均用脂质体法转染至结直肠癌SW480细胞中,另取未转染结直肠癌SW480细胞记为Control组。采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-152-3p和MTA2 mRNA的表达水平;蛋白质印迹法测定蛋白的表达;MTT法检测细胞活性;Transwell检测细胞迁移和侵袭;双荧光素酶报告基因检测实验检测荧光活性。结果结肠癌HCT116、SW480及LoVo细胞中miR-152-3p表达分别为0.72±0.04、0.29±0.02、0.49±0.01,人正常结肠上皮细胞NCM460中miR-152-3p表达为1.06±0.12,与正常结肠上皮细胞NCM460相比,结肠癌细胞HCT116、LoVo、SW480中MTA2 mRNA和蛋白较高,miR-152-3p较低(P<0.05);Control组、miR-NC组、miR-152-3p组、si-NC组及si-MTA2组结肠癌SW480细胞吸光度分别为0.92±0.22、0.96±0.17、0.31±0.07、0.99±0.17及0.32±0.09,细胞迁移数分别为(172.00±23.52)个、(169.00±20.66)个、(53.67±12.22)个、(155.67±16.8)个及(54.33±8.74)个,细胞侵袭数分别为(124.67±10.02)个、(122.33±9.45)个、(26.00±5.00)个、(108.33±10.02)个及(42.00±4.00)个,与miR-NC 组相比,miR-152-3p 组SW480细胞中细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、基质金属蛋白酶(MMP)-2及SW480细胞活性、迁移和侵袭数量均较低,周期素依赖激酶抑制剂p21(P21)及上皮钙黏素(E-cadherin)较高(P<0.05);与si-NC组相比,si-MTA2组SW480细胞中cyclin D1、MMP-2及SW480细胞活性、迁移和侵袭数量均较低,P21及E-cadherin较高(P<0.05)。转染miR-152-3p和MTA2野生型表达载体的结肠癌SW480细胞荧光素酶活性显著降低(P<0.05)。相比miR-152-3p+pcDNA3.1组,miR-152-3p+pcDNA3.1-MTA2组SW480细胞中P21、E-cadherin的表达较低,MTA2、cyclin D1、MMP-2蛋白的表达较高,SW480细胞活性、迁移、侵袭数量较高(P<0.05)。结论miR-152-3p可能通过下调MTA2抑制结肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭。     

苦参碱对HCCLM3人高转移性肝癌细胞体外转移的 作用及机制研究

目的:探讨苦参碱对HCCLM3人高转移肝癌细胞体外转移的作用及其机制.方法:CCK-8检测不同浓度的苦参碱对HCCLM3癌细胞的增殖作用,选取不具有直接抑制细胞增殖效应的药物浓度进行细胞划痕实验,研究苦参碱对HCCLM3癌细胞迁移的影响;Transwell实验研究苦参碱对HCCLM3癌细胞侵袭的抑制影响;实时定量PCR(RT-PCR)和WesternBlot实验研究苦参碱对HCCLM3癌细胞E-钙粘蛋白(E-cadherin)、N-钙粘蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、基质金属蛋白酶(Matrix Metalloprotinase,MMP)-2和MMP-9因子mRNA和蛋白的表达.结果:苦参碱4、8、16 mg·mL-1剂量对HCCLM3癌细胞不产生直接抑制作用(P>0.05);苦参碱4、8、16 mg·mL-1剂量能够抑制HCCLM3癌细胞的迁移和侵袭,且与苦参碱0 mg·mL-1组相比,差异具有统计学意义(P<0.05);苦参碱4、8、16 mg·mL-1剂量能够减少HCCLM3癌细胞的N-cadherin、Vimentin、MMP-2和MMP-9因子mRNA和蛋白的表达,并增加E-cadherin mRNA和蛋白的表达.结论:苦参碱能够抑制HCCLM3癌细胞的转移和侵袭,其机制可能与抑制细胞上皮间质转化(Epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关蛋白以及MMP-2和MMP-9有关.     

下调微小 RNA-425-5p靶向第 10号染色体同源缺失性磷酸酶-张力蛋白调控宫颈癌细胞侵袭和迁移的分子机制

目的研究下调微小 RNA(miR)-425-5p靶向第 10号染色体同源缺失性磷酸酶 -张力蛋白( PTEN)调控宫颈癌 Caski细胞侵袭和迁移的分子机制。方法本研究起止时间为 2018年 12月至 2019年 11月。以宫颈癌 Caski细胞为探讨对象,转染 miR-425-5p抑制剂( inhibitor),PTEN siRNA和 miR-425-5p inhibitor共转染到宫颈癌 Caski细胞; MTT法测定细胞增殖, Transwell小室测定细胞侵袭和迁移;在线靶基因预测软件发现 PTEN与 miR-425-5p可能互为靶向关系,荧光素酶报告系统鉴定靶向关系;蛋白质印迹法( Western blotting)测定上皮钙黏素( E-cadherin)、神经钙黏素( N-cadherin)蛋白表达。结果转染 miR-425-5p inhibitor后的宫颈癌 Caski细胞 miR-425-5p表达量降低［( 0.96±0.15)比( 0.32±0.04)］,增殖［( 0.47±0.05)比( 0.23±0.04)］、侵袭［( 95.32±7.86)比( 63.17±5.22)］及迁移［( 140.88±13.94)比( 89.64±9.57)］能力降低, E-cadherin表达上调［( 0.29±0.05)比( 0.65±     

微小 RNA-744-5p靶向整合素连接激酶对膀胱癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响

目的 探讨微小RNA-744-5p(miR-744-5p)对膀胱癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及可能机制.方法 选取2016年2月至2018年11月枣庄矿业集团枣庄医院接收的经病理确诊的56例膀胱癌病人病理组织切片,采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测56例膀胱癌组织和对应癌旁组织中miR-744-5p表达水平.分别转染miR-744-5p模拟物(mimics)、miR-744-5p抑制剂或共转染miR-744-5p mimics与整合素连接激酶(ILK)过表达载体至膀胱癌BIU-87、T739细胞,MTT检测细胞增殖,Transwell检测细胞迁移和侵袭,蛋白质印迹法(Western Blotting)检测过细胞中细胞周期蛋白(Cyclin D1)、P21、基质金属蛋白酶(MMP-2)和钙黏附蛋白E(E-cadherin)蛋白表达.双荧光素酶报告基因实验验证miR-744-5p与ILK调控关系.结果 与癌旁组织相比,膀胱癌组织中miR-744-5p表达水平显著降低[(0.98±0.10)比(0.25±0.02),P<0.05].过表达miR-744-5p后,BIU-87和T739细胞OD值、迁移数和侵袭数及Cyclin D1和MMP-2蛋白表达降低(P<0.05),而P21和E-cadherin蛋白表达升高(P<0.05).抑制miR-744-5p后,BIU-87和T739细胞OD值、迁移数和侵袭数升高(P<0.05).miR-744-5p靶向结合并负调控ILK,过表达ILK逆转过表达miR-744-5p对BIU-87和T739细胞增殖、迁移和侵袭的影响.结论 膀胱癌组织中miR-744-5p呈低表达,过表达miR-744-5p可阻碍膀胱癌细胞增殖、迁移和侵袭,而抑制miR-744-5p则起相反的作用,其可能通过靶向负调控ILK表达发挥作用.     

微小 RNA-15a-5p靶向蛋白质二硫键异构酶 A6前体蛋白抑制前列腺癌细胞增殖、迁移及侵袭

目的 探讨微小RNA-15a-5p(miR-15a-5p)是否可通过靶向蛋白质二硫键异构酶A6前体蛋白(PDIA6)而抑制前列腺癌细胞增殖、迁移及侵袭.方法 选取2018年2月至2019年3月江南大学附属医院接受治疗的前列腺癌病人50例,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)与蛋白印迹法(Western blotting)分别检测前列腺癌组织、癌旁组织中miR-15a-5p、PDIA6的表达量;体外培养人前列腺癌DU145细胞,将细胞分为miR-NC组、miR-15a-5p组、si-NC组、si-PDIA6组、miR-15a-5p+pcDNA组、miR-15a-5p+pcDNA-PDIA6组;噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖;Transwell小室实验检测细胞迁移及侵袭;双荧光素酶报告实验验证miR-15a-5p、PDIA6的靶向关系.结果 与癌旁组织相比,前列腺癌组织中miR-15a-5p的表达水平降低[(1.00±0.17)比(0.68±0.11)],PDIA6 mRNA[(0.99±0.09)比(1.64±0.18)]和蛋白[(0.44±0.07)比(0.76±0.17)]表达水平升高;转染miR-15a-5p mimics或转染si-PDIA6可降低细胞存活率(P<0.05),减少迁移及侵袭细胞数(P<0.05);双荧光素酶报告实验证实miR-15a-5p可靶向结合PDIA6;PDIA6过表达可降低miR-15a-5p过表达对DU145细胞增殖、迁移及侵袭的抑制作用.结论 过表达miR-15a-5p通过降低PDIA6的表达对列腺癌细胞增殖、迁移及侵袭能力有抑制作用.