补肾中药对增龄大鼠成骨细胞Cbfα1表达的影响

目的观察核心结合因子α1(Cbfα1)在增龄成骨细胞中的表达,探讨补肾中药促进骨形成的新机制。方法来源于不同年龄的大鼠成骨细胞被分离,采用组织块翻转方法培养。通过倒置显微镜观察细胞形态,矿化结节染色对成骨细胞加以鉴定。采用RT-PCR和免疫组化方法检测成骨细胞Cbfα1的表达。结果RT-PCR和免疫组化结果表明,在增龄成骨细胞中,固本壮骨胶囊、金匮肾气丸和西药萌格旺可上调不同龄大鼠成骨细胞Cbfα1的表达,知柏地黄丸则下调Cbfα1的表达,补肾益精方对于不同龄大鼠成骨细胞Cbfα1表达的影响存在着区别。结论补肾中药中的补阳中药具有促进骨形成的作用。     

补肾中药对成骨细胞维生素D受体与核心结合因子α1蛋白表达的影响

为探讨补肾中药影响骨形成的机制,将SD大鼠随机分为正常组、生理盐水组、单味补阳组（固本壮骨胶囊）、复方补阳组（金匮肾气丸）、复方平补组（补肾益精方）、复方补阴组（知柏地黄丸）和西药对照组（萌格旺）7组,各组的含药血清分别干预16月龄大鼠成骨细胞,采用免疫组织化学方法检测药物干预后大鼠成骨细胞维生素D受体（vitamin Dreceptor,VDR）、核心结合因子仅α1（core binding factor α1,Cbfα1）蛋白的表达。结果：在大鼠成骨细胞中,单味补肾阳组、复方补肾阳组、复方平补组、西药对照组明显上调VDR、Cbfα1蛋白表达,复方补肾阴组明显下调VDR、Cbfα1蛋白表达。结论：补肾中药中,补阳中药和平补中药可能是通过上调成骨细胞VDR、Cbfα1蛋白表达,促进骨形成。     

补肾复方含药血清对大鼠成骨细胞OPG、ODF表达的影响

为研究补肾复方对大鼠成骨细胞OPG、ODF表达影响。以补肾活血方、补肾健脾方、龟鹿二仙膏、金匮肾气丸、六味地黄丸、左归丸6种补肾中药复方及生理盐水给体重为250g左右的大鼠灌胃,提取含药血清;采用酶消化法从初生2天SD大鼠头盖骨中分离出成骨细胞,用含药血清及生理盐水进行成骨细胞传代培养;取第2代细胞,培养至细胞铺满培养瓶约80%时,更换含药血清培养液24小时;用含药血清培养液24小时后终止培养,提取总RNA,应用RT-PCR方法观察六种补肾复方对大鼠成骨细胞OPG、ODF表达影响。结果显示补肾活血方、补肾健脾方、金匮肾气丸、六味地黄丸和左归丸含药血清培养的大鼠成骨细胞OPG的表达量高于生理盐水对照组,龟鹿二仙膏含药血清培养的大鼠成骨细胞OPG的表达量低于生理盐水对照组,其中补肾活血方组、补肾健脾方组大鼠成骨细胞OPG表达量明显高于生理盐水对照组,统计学有显著性差异(P<0.05)。6种补肾复方含药血清培养的大鼠成骨细胞ODF表达量均低于生理盐水对照组,其中补肾活血方组、补肾健脾方组和金匮肾气丸组大鼠成骨细胞ODF表达量明显低于生理盐水对照组,统计学有显著性差异(P<0.05)。表明补肾活血方、补肾健脾方含药血清能增加大鼠成骨细胞OPG表达量,降低大鼠成骨细胞ODF表达量。     

补肾方剂对绝经后骨质疏松症的影响及其作用机制研究

目的：考察补肾方剂六味地黄丸和金匮肾气丸对绝经后骨质疏松症（POMP）的影响及其相关作用机制。 方法：通过双侧卵巢切除术建立POMP模型大鼠,连续3个月补肾方剂六味地黄丸和金匮肾气丸给药后,通过双能X线骨密度仪测定大鼠股骨骨密度,通过雌激素酶联免疫分析试剂盒测定血清雌激素水平。体外原代培养成骨细胞,不同浓度（10-100 ng·μL-1）六味地黄丸和金匮肾气丸处理后,通过CCK-8试剂盒检测成骨细胞活力,通过碱性磷酸酶试剂盒检测成骨细胞ALP活性,通过RT-PCR实验及免疫印迹法检测成骨细胞雌激素受体ERs（ERα,ERβ,ERRα）Collagen I和p-AMPK表达,通过检测表达。 结果：金匮肾气丸可显著改善POMP大鼠股骨骨密度和血清雌激素水平（P<0.05）,但六味地黄丸作用不明显。此外,成骨细胞经不同浓度补肾方剂处理后,浓度为50 ng·μL-1和100 ng·μL-1的金匮肾气丸可有效提高成骨细胞活力,ALP活性和Collagen I蛋白表达,且随着金匮肾气丸浓度越高,作用效果越明显,而六味地黄丸对成骨细胞作用不显著。此外,金匮肾气丸可显著提高ERα的mRNA表达（P<0.01）及ERα蛋白表达,明显抑制p-AMPK蛋白表达,但对ERβ,ERRα表达影响不明显。 结论：金匮肾气丸可通过促进ERα表达,抑制p-AMPK有效治疗POMP,明显促进成骨细胞增殖分化,改善成骨细胞功能,但六味地黄丸作用效果不显著。     

补肾方剂对绝经后骨质疏松症大鼠的影响及其作用机制研究

目的考察补肾方剂六味地黄丸和金匮肾气丸对绝经后骨质疏松症(POMP)大鼠的治疗效果及其潜在的作用机制。方法采用双侧卵巢切除术构建POMP模型大鼠后,连续3个月灌胃给药治疗,通过双能X线骨密度仪和雌激素酶联免疫分析试剂盒分别检测大鼠股骨骨密度和血清雌激素水平。同时,体外分离培养大鼠原代成骨细胞,10,50,100 ng·μL~(-1)不同浓度补肾方剂处理后,通过CCK-8试剂盒和碱性磷酸酶(ALP)试剂盒分别检测成骨细胞活性和ALP活性;通过RT-PCR和WB检测成骨细胞内雌激素受体ERs(ERα,ERβ,ERRα)Collagen I和p-AMPK表达变化。结果金匮肾气丸可显著改善POMP大鼠股骨骨密度和血清雌激素水平(P0.05),但六味地黄丸作用不明显。成骨细胞经不同浓度补肾方剂处理后,浓度为50,100 ng·μL~(-1)的金匮肾气丸可有效提高成骨细胞活力、ALP活性和Collagen I蛋白表达,且金匮肾气丸浓度越高,作用效果越明显,而六味地黄丸对成骨细胞作用不显著。此外,金匮肾气丸可显著增加ERα的表达(P0.05,P0.01),抑制p-AMPK蛋白表达,但对ERβ、ERRα表达影响不明显。结论金匮肾气丸可通过促进ERα表达,抑制p-AMPK有效治疗POMP,明显促进成骨细胞增殖分化,改善成骨细胞功能,但六味地黄丸作用效果不显著。     

具有补肾、健脾功效的中药复方对切卵大鼠肾脏、股骨中VDRmRNA表达的影响

目的:观察补肾方、健脾方对大鼠肾脏、股骨中维生素D受体(vitamin D receptor,VDR)表达的影响,探讨补肾、健脾不同功效的中药复方,是否对机体不同组织器官VDRmRNA的表达存在一定选择性.方法:复制切卵大鼠骨质疏松模型,随机分为假切组、模型组、补肾方组和健脾方组,术后12周开始灌胃,灌胃12周后取材.测定骨密度、血清雌二醇浓度,同时对大鼠肾脏、股骨中VDRmRNA进行半定量.结果:补肾方能提高切卵大鼠骨密度(P＜0.05),健脾方能维持大鼠骨密度(P＞0.05);补肾方、健脾方均维持了切卵大鼠血清雌二醇浓度水平,上调了肾脏和股骨中VDRmRNA的表达(P＜0.01).结论:补肾和健脾中药都能通过上调切卵大鼠肾脏和股骨中VDRmRNA的表达,而起到治疗骨质疏松症的作用.     

补肾通络方对老龄大鼠肾功能的影响

目的:通过动物实验探讨补肾通络方对老龄大鼠肾功能减退的影响.方法:选用老龄Wistar大鼠作为用药对象,从反映衰老和肾小球滤过、肾小管浓缩和重吸收功能的指标进行观察.结果:补肾通络方组血清尿素氮、尿渗透压、血浆黏度、纤维蛋白原、超氧化物歧化酶、过氧化脂质等指标有明显改善,金匮肾气丸对照组尿渗透压、超氧化物歧化酶、过氧化脂质有改善,提示补肾通络方有防治老龄大鼠肾功能减退的作用,其疗效优于金匮肾气丸对照组.     

中药治疗骨质疏松症机理研究进展

骨质疏松症(osteoporosis,OP)[1]是一种以骨量和骨组织微结构破坏为特征,导致骨脆性增加和容易发生骨折的全身性骨骼疾病,是老年人常见病,尤其女性发病率高。随着我国进入老龄化社会,骨质疏松症及骨质疏松后骨折已成为老年人健康的严重威胁。本文就近年来中药治疗骨质疏松症的机理研究进展作一综述。1促进成骨细胞增殖石印玉等[2]比较不同功效的补肾中药复方对成骨细胞和破骨细胞的药效异同,采用连续酶消化法和机械分离法获得成骨细胞和破骨细胞,在同等条件下制备补肾益精方(由制何首乌、淫羊藿、骨碎补等组成)、金匮肾气丸、知柏地黄丸、…     

金匮肾气丸化裁方对良性前列腺增生大鼠前列腺组织)VEGF、IGF-1 表达的影响

目的 研究金匮肾气丸化裁方对大鼠前列腺增生模型前列腺组织VEGF和IGF-1表达的影响.方法 去势加丙酸睾酮注射法建立大鼠前列腺增生模型,免疫组化学法检测前列腺组织中血管内皮生长因子（VEGF）的表达,RT-PCR法检测类胰岛素生长因子-1（IGF-1）mRNA的水平.结果 金匮肾气丸化裁方中剂量组明显降低前列腺增生组织中VEGF和IGF-1 mRNA的水平.结论金匮肾气丸化裁抑制大鼠前列腺增生可能与调控生长因子表达水平有关.     

金匮肾气丸对自然衰老大鼠逼尿肌细胞M_3R、β_3-AR mRNA及其蛋白表达的影响

目的:观察金匮肾气丸对自然衰老大鼠逼尿肌细胞M_3R、β_3-AR mRNA和蛋白表达的影响。方法:以多尿自然衰老大鼠为"肾虚多尿"模型,给予金匮肾气丸4周,采用酶消化和组织块相结合的方法原代培养逼尿肌细胞,用实时荧光定量PCR法和Westernblotting法观察金匮肾气丸对自然衰老大鼠逼尿肌细胞M_3R、β_3-AR mRNA及其蛋白表达的影响。结果:与正常对照组比较,自然衰老大鼠逼尿肌细胞M_3R mRNA和蛋白的表达明显增加;与模型对照组比较,金匮肾气丸可以抑制自然衰老大鼠逼尿肌细胞M_3R mRNA和蛋白的表达;与正常对照组比较,自然衰老大鼠逼尿肌细胞β_3-AR mRNA和蛋白表达明显降低;与模型对照组比较,金匮肾气丸可以增加自然衰老大鼠逼尿肌细胞β3-ARmRNA和蛋白的表达。结论:金匮肾气丸可以减少自然衰老大鼠膀胱逼尿肌细胞M_3RmRNA及其蛋白的表达和增加自然衰老大鼠膀胱逼尿肌细胞β_3-ARmRNA及其蛋白的表达,使M_3R和β_3-AR之间的平衡状态维持正常的水平。     

安宫牛黄丸对自发性高血压大鼠脑出血后内皮型一氧化氮合酶信使核糖核酸表达的影响

目的 观察安宫牛黄丸对自发性高血压大鼠脑出血后内皮型一氧化氮合酶信使核糖核酸(eNOSm RNA)表达的影响,探讨其保护作用机制.方法 采用自体血制作大鼠脑出血模型,将120只自发性高血压大鼠按随机数字表法分为模型组、西药治疗组、安宫牛黄丸组、中西药结合组.应用RT-PCR法测定用药后eNOSmRNA表达的变化.结果 ...     

补肾活血方联合补佳乐对宫腔粘连大鼠YAP1/TGF-β1信号通路的影响

目的:探讨补肾活血方联合补佳乐对宫腔粘连大鼠的疗效及机制。方法:将40只SD雌性大鼠随机分为假手术组、模型组、中药组(补肾活血方)、西药组(补佳乐)、中药+西药组(补肾活血方+补佳乐),每组8只。应用双重感染建立宫腔粘连模型后,灌胃给药4周,HE染色观察子宫内膜病理变化; Masson染色观察子宫内膜纤维化; 免疫组化检测子宫内膜Yes 相关蛋白1(YAP1)及转化生长因子-β₁(TGF-β₁)蛋白表达。最后将每组剩余大鼠与雄鼠合笼,7 d后记录胚胎孕囊数。结果:与模型组相比,中药+西药组的内膜厚度和腺体数明显改善(P<0.05)。与模型组相比,中药组、西药组、中药+西药组纤维化明显减轻(P<0.05),而与西药组或中药组相比,中药+西药组纤维化程度显著降低(P<0.05)。与模型组相比,中药组、中药+西药组YAP1蛋白表达明显降低(P<0.05); 同西药组或中药组相比,中药+西药组子宫内膜YAP1蛋白表达明显降低(P<0.05)。与模型组相比,中药+西药组TGF-β₁蛋白表达明显减少(P<0.05); 同西药组相比,中药+西药组TGF-β₁蛋白表达量减少(P<0.05)。与模型组、中药组、西药组相比,中药+西药组子宫孕囊数明显增多(P<0.05)。结论:补肾活血方联合补佳乐能够有效抑制大鼠宫腔粘连,减轻子宫内膜纤维化,改善妊娠结局,其作用机制可能与调控YAP1/TGF-β₁信号通路有关。     

慢性束缚应激模型大鼠海马脑啡肽mRNA和前强啡肽mRNA的表达及中药复方的影响

目的:探讨中药复方逍遥散、四君子汤、金匮肾气丸抗慢性束缚性应激的机理。方法:采用单纯束缚的方法建立慢性束缚性应激的大鼠模型,提取海马总RNA,采用RT-PCR反应扩增脑啡肽和前强啡肽基因,比较二者在海马中的表达情况。结果:显示慢性束缚应激时大鼠海马内脑啡呔mRNA和前强啡肽mRNA的表达明显增强,并且时间越长增强越明显。逍遥散和四君子汤都能降低海马内脑啡肽mRNA的表达,三个复方都能降低前强啡肽mRNA的表达,逍遥散的作用明显优于金匮肾气丸。结论:脑啡肽和前强啡肽都参与了海马对应激的调控,对内源性阿片系统的调节是三个中药复方调节应激的重要途径之一。     

固本壮骨胶囊治疗原发性骨质疏松症的临床研究

目的：评价固本壮骨胶囊的疗效和女全性。方法：我们于2002年10月至2003年7月按照国家药品食品监督管理局中药新药审批办法，通过与骨松宝颗粒剂（无糖型）多中心、随机、双盲双模拟对照的临床观察。对223例原发性骨质疏松症（肝肾不足证）患者进行了系统的临床试验研究。结果：治疗后两组都有明确疗效，两组间没有统计学差异，但试验组在改善腰膝酸软和步履艰难这二个症状方面明显优于对照组。比较骨密度的变化，各部位3个月和6个月的骨密度改变，两组无明显差异，而试验组在提高腰椎骨密度方面优于对照组。另外，治疗组在治疗过程中无明显不良反应，治疗后的各项血液生化指标和心电图均无改变。结论：固本壮骨胶囊是一种安全有效的中药新药。     

基于Blimp1/Bcl6通路探讨骨痛灵联合唑来膦酸治疗肺癌骨转移的实验研究

目的观察骨痛灵方对肺癌骨转移疼痛模型小鼠Blimp1/Bcl6通路的影响。方法 85只C57 BL/6小鼠随机选取17只小鼠,注射PBS溶液作为假手术组;其余68只小鼠左后肢胫骨骨髓腔内注射Lewis肺癌细胞建立骨转移疼痛模型,随机分为模型组、中药组、西药组、中西药组,每组17只。中药组小鼠以骨痛灵方煎剂灌胃,西药组予以唑来膦酸腹腔注射,中西药组则两药联合运用,治疗3周。采用TRAP特殊染色法检测小鼠胫骨的破骨细胞,以RT-PCR和Western blot法检测B细胞诱导成熟蛋白1(Blimp1)、B细胞淋巴瘤蛋白6(Bcl6)和组织蛋白酶K(Ctsk) mRNA和蛋白的表达。结果与模型组比较,中药组、西药组和中西药组TRAP阳性细胞数量均明显减少,Blimp1、Ctsk mRNA和蛋白表达均降低,Bcl6 mRNA和蛋白表达均升高,且差异均有统计学意义(P0.05);在3个治疗组中,中西药组阳性细胞数量最少,Blimp1、Ctsk mRNA和蛋白表达最低,Bcl6 mRNA和蛋白表达最高,差异有统计学意义(P0.05)。结论骨痛灵方通过抑制Blimp1/Bcl6通路,抑制破骨细胞的活化,从而缓解肺癌骨转移疼痛。     

六味地黄丸合二陈汤加减治疗慢性阻塞性肺疾病急性加重期气阴两虚型临床疗效观察

目的：探讨六味地黄丸合二陈汤加减对慢性阻塞性肺疾病急性加重期（AECOPD）的临床效果。方法：将60例COPD急性加重期患者随机分成两组,治疗组32例予常规西医治疗联合六味地黄丸合二陈汤加减治疗,对照组28例予单纯西医治疗。结果：治疗组与对照组相比,不仅能改善临床症状,改善肺功能,出院天数也明显减少。结论：六味地黄丸合二陈汤加减治疗AECOPD疗效显著。     

搜风祛痰法对ApoE基因敲除小鼠过氧化物酶体增殖物激活受体γ表达的影响

目的 通过观察过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPAR-γ）的表达水平,来阐明搜风祛痰法中药对ApoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化不稳定斑块的干预作用机制.方法 制备ApoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化模型,随机分为5组：模型组、稳斑汤低剂量组、中剂量组、高剂量组及西药（他汀）组,另设空白对照组.采用HE染色、Masson染色法用于实验观察,应用RT-PCR法检测PPAR-γmRNA的表达.结果 与空白组、模型组相比,稳斑汤各剂量组及西药组PPAR-γ mRNA表达水平明显升高（P＜0.01）.结论 稳斑汤可以提高PPAR-γmRNA表达水平,对小鼠动脉粥样硬化有一定稳定斑块的效应,因剂量不同而各异.     

桂枝茯苓胶囊/丸治疗慢性盆腔炎性疾病临床随机对照试验的系统评价

该研究系统评价桂枝茯苓胶囊/丸,治疗慢性盆腔炎性疾病的有效性和安全性。计算机检索中文全文期刊数据库、万方数据库、中国生物医学文献数据库及Pub Med,Embase,The Cochrane Library数据库,检索桂枝茯苓胶囊/丸治疗慢性盆腔炎的随机对照试验(RCT),检索时限均为建库至2017年2月。由2位评价员独立筛选文献、提取资料并评价纳入文献的偏倚风险,风险评估参照Cochran Handbook5.3推荐的偏倚风险评估工具。本研究共纳入30个RCT,涉及3 586例患者,30个研究均报告了临床有效率,提示桂枝茯苓(胶囊、丸)联合西药的临床疗效优于单纯西药[RR=1.20,95%CI(1.16,1.23)];3个研究报告了复发率,提示桂枝茯苓(胶囊、丸)联合西药的复发率低于单纯西药[RR=0.33,95%CI(0.18,0.62)];3个研究采用了hs-CRP、血浆粘度比,2个研究采用了肿瘤坏死因子、纤维蛋白为次要指标,提示桂枝茯苓(胶囊、丸)联合西药在抗炎、改善血循环方面优于单纯西药组。17个研究报告了不良反应,主要为胃肠道的刺激症状,桂枝茯苓(胶囊、丸)联合西药组的不良反应发生率低于单纯西药组,加用桂枝茯苓(胶囊、丸)未增加不良反应。现有证据表明,桂枝茯苓(胶囊、丸)联合西药临床疗效优于单纯西药组,在改善临床症状、降低复发率、抗炎、降低血浆粘度方面的疗效均优于单纯西药组,受纳入研究数量及质量的限制,该结论仍需开展高质量RCT研究进行验证。     

龟板提取物上调维生素D受体表达促骨髓间充质干细胞向成骨分化

目的 探讨龟板提取物诱导大鼠骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)向成骨分化和对维生素D受体(VDR)表达的影响.方法 从大鼠骨髓中分离MSCs.体外培养,利用流式细胞术检测MSCs表面抗原CD44细胞标志,体外培养MSCs分成不同的组观察其向成骨分化,在培养基中不加任何处理的作为对照组,培养基中加成骨诱导液诱导MSCs向成骨分化作为阳性对照组,龟板提取物组在培养基中加龟板提取物,诱导7 d后,通过免疫化学染色、Western blotting、原位杂交、RT-PCR等方法观察龟板提取物对原代培养的MSCs向成骨分化的成骨分化标记分子碱性磷酸酶(ALP)、骨桥蛋白(OPN)及VDR阳性表达及VDR mRNA的表达情况.结果 免疫组化染色显示,龟板提取物组成骨分化标记分子ALP、OPN和VDR的阳性百分比明显高于对照组,Western blotting结果也显示龟板提取物组的ALP、OPN和VDR的蛋白表达水平高于对照组;同时原位杂交、RT-PCR结果表明.龟板提取物诱导MSCs向成骨分化过程可明显促进VDR mRNA的表达.结论 龟板提取物可促MSCs向成骨分化,其机制可能与VDR的上调有关.     

益肾活血饮逆转骨髓瘤凋亡抵抗的研究

目的:探讨中药益肾活血饮对骨髓瘤凋亡的影响及其机理。方法:以阿霉素共培养的骨髓瘤细胞上清作为条件培养液诱发凋亡抵抗(化疗后组),再加入益肾活血饮含药血清(中药+化疗后组),观察其对骨髓瘤细胞HIF-1α表达(免疫印迹法)及继发凋亡抵抗(流式细胞术)的影响。结果:化疗后组骨髓瘤细胞HIF-1α表达上升,凋亡率下降。中药+化疗后组HIF-1α表达低于化疗后组,但较中药组及空白组高;其凋亡率则高于化疗后组,但较中药组及空白组低。结论:益肾活血饮可能通过下调HIF-1,部分逆转骨髓瘤细胞的继发凋亡抵抗。