沉默p53凋亡刺激蛋白抑制因子抑制结直肠癌细胞的增殖

目的探索p53凋亡刺激蛋白抑制因子(iASPP)在结直肠癌组织/细胞中的表达及iASPP沉默后对结直肠癌细胞增殖的影响。方法该研究首先检测临床样本结直肠癌组织和癌旁正常组织中iASPP mRNA的表达差异、结直肠癌细胞系和正常结肠上皮细胞系(HCoEpiC)mRNA和蛋白质iASPP表达差异;然后在人结肠癌细胞SW480中转染iASPPsiRNA,用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测iASPP mRNA表达效率,用免疫印迹试验(Western blot)检测iASPP的蛋白表达水平;最后用MTT法和Brd U法检测沉默iASPP对SW480细胞增殖的影响。结果结直肠癌组织中,iASPP mRNA表达相比癌旁正常组织上调;结直肠癌细胞LoVo、SW620和SW480中iASPP mRNA和蛋白质表达相比正常结肠上皮细胞系(HCoEpiC)均上调;在SW480细胞中转染iASPP-siRNA可下调iASPP的表达;沉默iASPP可抑制结直肠癌细胞的增殖。结论沉默iASPP基因抑制结直肠癌细胞的增殖。     

直肠癌组织Id-2和MMP-9的表达及意义

目的:研究人直肠癌组织抑制因子-2(Id-2)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的变化及二者的相关性.方法:采用免疫组化法检测62例直肠癌组织和癌旁正常组织Id-2和MMP-9的表达情况,并分析直肠癌组织二者的相关性.结果:直肠癌组织Id-2和MMP-9的阳性表达率均明显高于癌旁正常组织(P＜0.05);Spearman相关分析显示,直肠癌组织Id-2和MMP-9的表达呈正相关关系(rs=0.403,P＜0.05).结论:Id-2、MMP-9与直肠癌的发生发展密切相关.     

巨噬细胞抑制因子1与消化道肿瘤的研究进展

巨噬细胞抑制因子1属于转化生长因子β超家族因子,在胃癌、结直肠癌、胰腺癌中均有表达,且与肿瘤的发病机制密切相关。本文就巨噬细胞抑制因子1在肿瘤和抗肿瘤中的作用及其基因多态性和肿瘤关系的研究进展作一综述。     

Livin基因在结直肠癌中的表达及其与PTEN和Caspase-3的相关性研究

目的：探讨Livin基因在结直肠癌中的表达及其与PTEN和Caspase-3的相关性。方法收集结直肠癌、腺瘤及大肠正常黏膜组织各50例,应用免疫组织化学SP染色方法检测Livin、PTEN及Caspase-3的表达情况并进行评分。结果结直肠癌、腺瘤及大肠正常黏膜组织中Livin蛋白的阳性表达率分别为64．00％、56．00％、18．00％,结直肠癌组织中Livin蛋白的阳性表达率高于腺瘤及大肠正常黏膜组织;Livin蛋白阳性表达率与淋巴结转移及Duke分期有关,而与结直肠癌患者的年龄、性别、分化程度无关。在结直肠癌、腺瘤及大肠正常黏膜组织中PTEN蛋白的阳性表达率分别为40．00％、76．00％、98．00％, Caspase -3蛋白的阳性表达率分别为46．00％、84．00％、92．00％,结直肠癌组织中PTEN、Caspase-3蛋白的阳性表达率明显低于腺瘤及正常黏膜组织,差异有显著性意义（P＜0．01）;PTEN、Caspase-3阳性表达率与结直肠癌Duke分期及淋巴结转移密切相关,与结直肠癌患者的年龄、性别及肿瘤分化程度无关。在结直肠癌组织中Livin蛋白阳性表达与PTEN及Caspase-3蛋白表达均呈负相关。结论凋亡抑制因子Livin、凋亡因子Caspase-3及抑癌基因PTEN参与了结直肠癌的发生、发展。在结直肠癌中PTEN蛋白活性被抑制加速了Livin促进结直肠癌的发生。 Livin 促进结直肠癌的发生可能通过抑制Caspase-3的活性实现。     

锌指蛋白545对结直肠癌上皮间质转化和迁移侵袭的影响

目的探讨锌指蛋白545（ZNF545）对结直肠癌上皮间质转化（EMT）和迁移侵袭的影响。方法免疫印迹试验检测ZNF545在结直肠癌细胞系中的表达,并构建过表达和敲低ZNF545的细胞株;采用Transwell小室实验检测细胞的迁移和侵袭能力,免疫印迹试验检测EMT相关分子标志物[E钙黏蛋白（E-cadherin）、磷酸化锌指转录因子（slug）]的表达;细胞免疫荧光检测ZNF545表达变化对结直肠癌细胞E-cadherin表达的影响。结果内源性ZNF545蛋白在SW480细胞中表达最高,在Lovo、Caco2细胞中的表达次之,在HCT116细胞中表达最低。过表达ZNF545可抑制HCT116细胞的迁移和侵袭能力（均P＜0.01）,抑制slug的表达（P＜0.01）,增加E-cadherin的表达（P＜0.01）;而敲低ZNF545的表达后,SW480细胞的迁移和侵袭能力明显增强（均P＜0.01）,可增加slug的表达（P＜0.01）,抑制E-cadherin的表达（P＜0.01）。在荧光显微镜下,过表达ZNF545可增加E-caherin表达;敲低ZNF545表达后抑制E-caherin表达。结论ZNF545通过参与结直肠癌EMT过程调控结直肠癌细胞迁移和侵袭能力。     

探讨Snail调控上皮间质转化在结直肠癌侵袭、转移方面的作用及意义

目的:转录因子Snail能够抑制E-cadherin (E-cad)的表达促进上皮间质转化(Epithelial to mesenchymal transition,EMT),从而促进肿瘤侵袭与转移.本研究通过检测Snail及E-cad在结直肠癌组织、癌旁组织及结肠癌SW480细胞中的表达,探讨Snail调控EMT 在...     

ZNF750在结直肠癌细胞增殖中的作用和分子机制研究

目的 探讨锌指蛋白750(ZNF750)在结直肠癌细胞增殖中的作用和分子机制。方法 用干扰siRNA转染结直肠癌细胞株SW620和LoVo,沉默ZNF750的表达;运用MTT实验和平板克隆实验检测ZNF750沉默成功的实验组细胞和对照组细胞增殖能力的差别;运用荧光定量PCR检测实验组细胞株中Kruppel样因子4(KLF4)的表达水平与对照组的差异。结果 MTT实验和平板克隆实验显示ZNF750沉默后,结直肠癌细胞的增殖能力较对照组明显增强,差异具有统计学意义(P<0.05)。荧光定量PCR显示结直肠癌细胞株ZNF750沉默后,KLF4的表达水平下降,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 ZNF750抑制结直肠癌细胞的增殖,可能通过调控KLF4的表达参与结直肠癌的发生发展。     

抑制USP22基因对人结直肠癌细胞增殖的影响

目的 利用RNA干扰技术探讨泛素特异性肽酶22（USP22）对人结直肠癌细胞增殖的影响。方法 免疫荧光检测结直肠癌组织中USP22的表达;Western blotting检测体外培养的HCT-116、SW480、HC-29结直肠癌细胞株中USP22的表达,筛选出表达量最高的细胞作为研究细胞。设计、合成针对USP22特异性siRNA,同时设置阴性对照siRNA,利用脂质体转染结直肠癌细胞后,Western blotting检测siRNA抑制效率;通过MTT法检测细胞的增殖能力;流式细胞术检测细胞的周期及凋亡;Western blotting检测周期相关蛋白CyclinB1、p21、p53、CDK2的表达。结果 结直肠癌组织中USP22表达量与癌旁组织比较,差异有统计学意义（P?<0.05）,结直肠癌组织中USP22表达量升高。SW480细胞中USP22的表达量最高,因此作为靶细胞进行后续研究。与对照组比较,USP22 siRNA能够降低USP22的表达（P?<0.05）。USP22抑制后,与对照组比较,能够抑制SW480细胞的增殖,促使SW480细胞停滞于G0/G1期,抑制细胞周期进程,增加细胞凋亡率（P?<0.05）,进而抑制细胞增殖（P?<0.05）;同时,与对照组比较,CyclinB1、CDK2的表达量降低（P?<0.05）,p53和p21的表达量升高（P?<0.05）。结论 USP22抑制后,能够抑制结直肠癌细胞的增殖,其机制可能与抑制细胞周期进程、促进细胞凋亡有关。     

小分子靶向药物治疗结直肠癌的研究进展

抗血管生成小分子受体酪氨酸激酶抑制剂（TKI）可靶向抑制促血管生成受体,如抑制血管生成的关键调节因子血管内皮生长因子（VEGF）的信号传导,特异性阻断肿瘤诱导的血管生成,从而发挥抑制肿瘤进展的作用。通过各类临床研究评估小分子靶向药物在转移性结直肠癌的三线治疗中的安全性及有效性,发现相对于安慰剂对照组,应用小分子靶向药物治疗难治性结直肠癌患者具有更长的生存期,患者的生存质量得到明显改善。小分子靶向药物将推进结直肠癌治疗的进展,为结直肠癌的三线治疗提供可选治疗方案。     

结直肠癌组织iNOS与eNOS的组织芯片技术检测及其与血管生成关系

①目的探讨诱导型一氧化氮合酶（iNOS）、内皮型一氧化氮合酶（eNOS）两种血管生成因子在结直肠癌中表达及其与临床病理特征和微血管密度（MVD）的关系。②方法制作78例结直肠癌组织及非肿瘤结直肠黏膜组织芯片,用免疫组化技术检测其iNOS、eNOS的表达。③结果iNOS在结直肠癌表达阳性率高于非肿瘤结直肠黏膜（x^2=43．166,P〈0．001）,eNOS在结直肠癌表达阳性率低于非肿瘤结直肠黏膜（x^2=11．354,P〈0．001）。结直肠癌组织iNOS表达阳性率随分化程度降低而降低,随浸润深度的增加而增加,差异均有显著性（x^2=18．141、4．748,P〈0．01）;eNOS阳性率在不同临床病理特征病人之间的差异无统计学意义;iNOS阳性组的MVD值高于阴性组,差异有统计学意义（t=2．327,P〈0．05）;eNOS阳性组的MVD值与阴性组之间的差异无统计学意义。④结论检测iNOS在结直肠癌中的表达对判断结直肠癌的恶性程度有价值;抑制iNOS在结直肠癌中表达可能成为抑制结直肠癌血管生成的途径。应用组织芯片大规模高效检测临床组织样本是可行的,具有快速、方便、经济、准确的特点。     

转录共刺激因子对结直肠癌基质金属蛋白酶及相关蛋白的影响

目的:探讨转录共刺激因子(TAZ)对结直肠癌基质金属蛋白酶及相关增殖蛋白的影响,分析其影响结直肠癌肿瘤生物学行为的可能作用机制。方法:采用合成TAZ小干扰RNA(TAZ-siRNA)转染结直肠癌细胞株HCTT116抑制TAZ表达,检测细胞活性、侵袭迁移能力、细胞凋亡,采用实量定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测TAZ与基质金属蛋白酶mRNA表达,采用Western blot法相关蛋白表达。结果:转染组TAZ mRNA与蛋白表达均明显低于对照组与空白组(t=27.116、17.600、24.051、16.168,P0.01);HCT116细胞活性、侵袭迁移能力均明显低于对照组与空白组,细胞凋亡率均明显高于对照组与空白组(t=12.944、17.613、20.489、12.639、18.324、20.051,P0.01);基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)等mRNA表达均明显低于对照组与空白组,金属蛋白酶抑制因子-1(TIMP-1)mRNA表达均明显高于对照组与空白组(t=13.588、10.041、6.678、13.164、10.479、6.705,P0.05或0.01);B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)蛋白表达均明显低于对照组与空白组,bcl-2相关X蛋白(bax)、细胞色素C(Cyt C)表达均明显高于对照组与空白组(t=9.358、7.670、15.205、19.163、5.937、17.063,P0.05或0.01)。结论:抑制转录共刺激因子(TAZ)能够抑制结直肠癌肿瘤细胞增殖与转移,可能与调节基质金属蛋白酶、相关蛋白表达水平有关。     

Survivin在大肠癌组织中的表达及临床意义

目的 探讨结直肠癌组织中凋亡抑制因子Survivin表达的临床意义。方法 采用蛋白印迹和免疫组织化学法检测44例结直肠癌组织和癌旁组织中Survivin表达的情况。结果 结直肠癌组织中Survivin表达率为56．8％（25／44），而所有癌旁组织均未见Survivin表达。Survivin在结直肠癌中表达率显著高于癌旁正常组织（P〈0．05）。结论 Survivin的阳性表达与患者的年龄、性别、肿瘤的大小、部位、浸润深度、组织分级、Dukes分期、复发及淋巴结转移都无明显关系，伴远处器官转移的肿瘤中Survivin阳性高于无远处器官转移者。     

miR-142-3p在结直肠癌组织与细胞中的表达及对细胞增殖影响研究

目的:观察微小RNA-142-3p在结直肠癌组织与细胞中的表达,及其对人结直肠癌细胞增殖的影响。方法:通过组织原位杂交的方法,检测miR142-3p在结直肠癌患者组织中的表达。通过Realtime-PCR检测结直肠癌细胞系中的miR142-3p表达。构建pSliencer 4.1-CMV-miR142-3p过表达载体,并转染结直肠癌细胞Caco2,通过Realtime PCR检测重组质粒pSilencer4.1-CMVmiR142-3p载体在结直肠癌细胞系的表达情况。通过Western Blot检测细胞周期相关蛋白CyclinD1的表达变化。结果:miR142-3p主要定位于细胞的胞浆,在癌组织和癌旁组织中miR142-3p的表达存在差异。miR142-3p结直肠癌细胞系中呈低表达。在结直肠癌细胞系中过表达miR142-3p可下调细胞周期相关蛋白CyclinD1,抑制细胞增殖。结论:miR142-3p抑制结直肠癌Caco2细胞的增殖,下调细胞周期相关蛋白CyclinD1,有望成为结直肠癌诊断和治疗的潜在靶点。     

Survivin蛋白及其mRNA在直肠癌中的表达及意义

目的：研究凋亡抑制因子Survivin蛋白及其mRNA在直肠癌组织中的表达及其与临床病理关系。方法：采用免疫组织化学方法检测40例直肠癌组织和20例正常组织中Survivin蛋白的表达量,采用实时荧光定量PCR方法检测25例直肠癌组织和19例正常组织中Survivin mRNA的表达量。结果：Survivin蛋白在直肠癌组织中的阳性表达率为75%（30/40）,在正常直肠组织中的阳性表达率为0%（0/20）,survivin mRNA在直肠癌组织中的阳性表达率为68%（17/25）,在正常组织中的阳性表达率为5%（1/20）。在癌组织中,Survivin蛋白及其mR-NA的表达量与患者的性别分期和年龄无关,与组织的分化程度、Dukes＇和有无淋巴结转移密切相关。结论：Survivin可能在直肠癌的发生中发挥重要作用,可以作为一种肿瘤标记物用于直肠癌的预后。     

组蛋白去甲基化酶LSD1对直肠癌CACO-2细胞侵袭能力的研究

目的 分析组蛋白去甲基化酶LSD1对直肠癌CACO-2细胞系侵袭能力的影响。方法 构建LSD1敲降的直肠癌CACO-2稳定细胞系;采用克隆成球实验与流式细胞术检测各组间干细胞差异;采用Transwell法检测LSD1对CACO-2细胞系侵袭能力的影响;采用配对样本t检验对各组间LSD1蛋白表达、mRNA表达、干细胞比例及侵袭能力进行统计学分析。结果 成功构建LSD1敲降的直肠癌CACO-2稳定细胞系;克隆成球与流式细胞术(Aldefluor)显示抑制LSD1蛋白可显著减少CACO-2干细胞比例,差异有统计学意义(P＜0.05); Transwell显示抑制LSD1蛋白可显著抑制CACO-2体外侵袭能力,差异有统计学意义(P＜0.05)。结论 抑制LSD1蛋白表达可显著降低直肠癌CACO-2细胞系侵袭能力,抑制LSD1可能是直肠癌靶向治疗的潜在分子靶点之一。     

MMP-11及TIMP-1在结直肠癌组织中的表达及意义

目的探讨基质金属蛋白酶-11（MMP-11）和基质金属蛋白酶抑制因子-1（TIMP-1）在结直肠癌组织中的表达及意义。方法采用免疫组织化学方法检测MMP-11及TIMP-1在结直肠癌和正常结直肠黏膜组织中的表达。结果结直肠癌组织中MMP-11和TIMP-1的表达与正常结直肠黏膜组织比较,差异均有统计学意义（P〈0.05）。MMP-11的表达与浸润深度、淋巴结转移及Dukes分期有关（P〈0.05）;TIMP-1的表达与淋巴结转移、Dukes分期有关（P〈0.05）。MMP-11表达与TIMP-1表达呈正相关关系（P〈0.05）。结论 MMP-11和TIMP-1参与了结直肠癌的发生、发展,可以作为预测结直肠癌浸润和转移的指标。     

MMP-11及TIMP-1在结直肠癌组织中的表达及意义

目的探讨基质金属蛋白酶-11(MMP-11)和基质金属蛋白酶抑制因子-1(TIMP-1)在结直肠癌组织中的表达及意义。方法采用免疫组织化学方法检测MMP-11及TIMP-1在结直肠癌和正常结直肠黏膜组织中的表达。结果结直肠癌组织中MMP-11和TIMP-1的表达与正常结直肠黏膜组织比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。MMP-11的表达与浸润深度、淋巴结转移及Dukes分期有关(P<0.05);TIMP-1的表达与淋巴结转移、Dukes分期有关(P<0.05)。MMP-11表达与TIMP-1表达呈正相关关系(P<0.05)。结论 MMP-11和TIMP-1参与了结直肠癌的发生、发展,可以作为预测结直肠癌浸润和转移的指标。     

lnc RNA-AK093407通过EMT促进结直肠癌细胞增殖和转移

目的 研究AK093407对结直肠癌HCT-15细胞的影响及相关机制。方法 Lv5慢病毒感染过表达AK093047,转染siRNA沉默AK093407;qRT-PCR鉴定AK093407的表达;MTT和平板克隆形成实验检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞周期和凋亡;划痕修复实验和Transwell检测细胞侵袭和迁移;qRT-PCR和蛋白印记检测EMT相关因子。结果 Lv5慢病毒感染后,AK093407表达升高。过表达AK093407结直肠癌细胞增殖活性升高,促进细胞周期演进,凋亡降低,迁移和侵袭能力增强。q RT-PCR和蛋白印记结果显示,occludin和E-cadherin的转录和翻译水平降低（P<0.05）;β-catenin、vimentin和fibronectin的转录和翻译水平升高（P<0.05）。AK093407沉默后,与上述结果相反。结论 AK093407通过EMT促进结直肠癌细胞增殖、细胞周期、侵袭和迁移并抑制细胞凋亡。     

MsrA在结直肠癌干细胞中的表达及意义

目的探讨MsrA 在结直肠癌干细胞中的表达及与结直肠癌发生、发展的关系。方法免疫磁珠分选结直肠癌细胞株
SW480细胞中CD133+/CD44+/ESA+亚群细胞,RT-PCR检测癌细胞、癌干细胞和正常大肠粘膜细胞中MsrA的表达以及MsrA过
表达对VEGF、MMP-13和CXCR4表达的影响,MTT检测过表达MsrA对结直肠癌干细胞增殖的影响。结果癌干细胞中MsrA
的表达水平明显高于癌细胞,癌细胞中MsrA的表达水平明显高于正常大肠粘膜细胞。MsrA过表达会抑制结直肠癌干细胞的
增殖以及下调VEGF、MMP-13和CXCR4的表达。结论MsrA可能通过下调VEGF、MMP-13和CXCR4的表达和抑制细胞增
殖来抑制结直肠癌的发生、发展。
     

Survivin与VEGF及其受体FLT-1在结直肠癌中的表达及其临床意义

目的探讨结直肠癌组织中凋亡抑制因子Survivin与血管内皮生长因子(VEGF)及其受体FLT-1表达、相互关系及临床意义。方法采用免疫组织化学SP法检测82例结直肠癌组织和28例癌旁黏膜组织中Survivin与VEGF及其受体FLT-1表达的状况。结果结直肠癌组织中Survivin表达率为67.1%(55/82),VEGF及其受体FLT-1表达率分别为69.5%(57/82)和82.9%(68/82),均明显高于癌旁黏膜组织组(P<0.05)。Survivin表达与结直肠癌的Dukes分期有关(P<0.05)。VEGF表达与结直肠癌淋巴结转移和Dukes分期有关(P<0.05),而受体FLT-1表达与各临床病理因素无关(P>0.05)。在结直肠癌中Survivin表达与VEGF表达呈正相关(r=0.358,P<0.05)。VEGF和FLT-1表达呈正相关(r=0.565,P<0.05)。结论Survivin和VEGF表达在结直肠癌发生过程中起重要作用,检测Sur-vivin和VEGF表达水平有助于反映结直肠癌进展和预后判断。