claudins多基因家族在医学中的应用

粘附连接和紧密连接是细胞间的两种主要的连接方式，在肿瘤的发生发展过程中，粘附连接蛋白的作用已经被广泛而深入的研究，而人们对紧密连接蛋白还知之甚少，claudins是近年来被鉴定的多基因家族，它编码了一系列的紧密连接蛋白，在紧密连接的形成和功能上起了重要的作用．破坏了细胞与细胞之间的这种连接。会伴随着一些紧密连接蛋白分子表达的改变，被认为是肿瘤侵袭和转移的指标．现综述claudins多基因家族近年来的研究现状，及其在药理学、肿瘤学中的应用前景。     

二甲双胍通过抑制内质网应激诱导的细胞凋亡改善结肠炎黏膜上皮屏障损伤

目的：探讨二甲双胍对溃疡性结肠炎黏膜上皮屏障损伤的作用及具体机制。方法：用人结肠癌细胞系Caco-2与人单核细胞系THP-1构建结肠炎体外细胞共培养模型,用1?mmol/L二甲双胍作用24?h后,运用流式细胞术检测肠上皮细胞凋亡情况,采用蛋白质印迹法检测紧密连接蛋白和内质网应激相关蛋白的表达水平。结果：与模型对照组比较,二甲双胍组细胞凋亡率从（14.22±2.34）%下降至（9.88±0.61）%（t=3.119,P<0.05）,紧密连接蛋白1和密封蛋白1相对表达量增加（t=5.172和3.546,均P<0.05）,内质网分子伴侣葡萄糖调节蛋白（GRP）78和内质网应激诱导的凋亡相关分子C/EBP同源蛋白（CHOP）、胱天蛋白酶（caspase）-12的蛋白表达水平下降（均P<0.05）,蛋白激酶R样内质网激酶（PERK）和真核生物起始因子2α（eIF2α）的磷酸化水平下降（均P<0.05）。结论：二甲双胍可以通过减轻结肠炎肠上皮细胞的细胞凋亡和增加紧密连接蛋白的表达改善结肠炎肠黏膜上皮屏障损伤,其分子机制可能与抑制内质网应激诱导的细胞凋亡途径有关。     

紧密连接蛋白在女性生殖系统中的相关研究

紧密连接是正常上皮或内皮组织连接复合体最顶端的结构,由多种蛋白组成,呈连续带状分布,连接相邻的细胞,是一种通透屏障,在维持机体内环境的稳定和发挥机体正常机能等方面具有重要作用。近年来研究发现女性生殖系统中与激素相关的宫颈阴道部分泌物的变化、黄体的周期性变化以及某些妇科肿瘤都与紧密连接蛋白表达水平的改变密切相关,提示研究紧密连接蛋白在女性生殖系统的表达以及作用机制具有重要的生理学意义。     

严重烧伤后肠黏膜肌球蛋白轻链磷酸化表达改变及其意义

目的探讨肌球蛋白轻链（myosin light chain,MLC）磷酸化在严重烧伤早期对肠黏膜屏障功能及细胞紧密连接相关蛋白变化的作用。方法健康成年SD大鼠48只,采用随机数字表法分为正常对照组及烧伤后1、2、6、12、24h组,用异硫氰酸荧光素．葡聚糖（FITC-Dextran）检测大鼠肠黏膜通透性,免疫荧光法检测肠黏膜细胞紧密连接相关蛋白ZO-1、F-肌动蛋白（F．actin）及磷酸化型MLC（phosphorylated MLC,p-MLC）的变化。结果烧伤后大鼠肠黏膜通透性明显增加,伤后6h达高峰,为对照组的3倍（P〈0．01）;烧伤后肠上皮通透性的增加伴随有紧密连接相关蛋白ZO-1的明显重分布、细胞紧密连接损害以及肠上皮细胞p-MLC表达的增加。结论MLC磷酸化可能在严重烧伤后肠黏膜屏障功能紊乱及通透性增加的发生机制中起着重要的调控作用。     

紧密连接蛋白claudin的研究进展

细胞粘附既是维持组织结构稳定的基本条件,也是细胞运动和发挥功能的调节因素,并且对细胞的增殖、分化有重要影响。现已知的粘附结构包括4种细胞间连接形式：紧密连接（tight junctions,TJ）、粘附带、缝隙连接和桥粒。在上皮组织中,细胞-细胞间的相互作用由连接复合体调节。位于连接复合体最顶端的就是紧密连接。     

单纯疱疹病毒II型感染对生殖道上皮细胞间紧密连接和单核细胞趋化性影响的初步研究

目的探讨人类单纯疱疹病毒II型（HSV-2）感染对生殖道上皮细胞间紧密连接的影响及对单核细胞的趋化作用。方法通过以人子宫内膜腺癌细胞（HEC-1-A）小室培养模型为基础建立生殖道体外单层细胞致密层模型,低剂量HSV-2感染后（MOI=0.1）,检测体外细胞活力;通过检测跨膜电阻判断细胞间紧密连接程度的变化;采用Westernblot、荧光定量PCR法观察细胞紧密连接蛋白ZO-1、E-cadherin和Occuldin的表达情况;通过单核细胞趋化反应实验来检测感染HSV-2的HEC-1-A细胞培养上清液的趋化效应。结果与阴性对照组（Mock组）相比,HSV-2（MOI=0.1）感染使HEC-1-A单层细胞致密层跨膜电阻逐渐降低,且在感染中后期下降明显（P＜0.01）,而细胞活力无显著变化（均＞80%）;随着HSV-2病毒感染,ZO-1蛋白表达水平逐渐降低,在感染60h,该蛋白表达水平最低,而其mRNA表达水平无显著变化（P＞0.05）,E-cadherin和Occuldin均无显著变化（均P＞0.05）;HSV-2感染HEC-1-A后的细胞上清液可诱导单核细胞产生明显的趋化反应（P＜0.01）。结论低剂量HSV-2持续感染可降低HEC-1-A单层细胞致密层跨膜电阻,破坏细胞间紧密连接,很可能与下调ZO-1表达水平相关;感染后的细胞上清液可产生某种特殊的趋化分子介导免疫细胞向感染区域迁移浸润。     

大肠杆菌K1株对人脑微血管内皮细胞的侵袭及侵袭基因功能分析

[目的]研究大肠杆菌侵袭相关基因在侵袭过程中的作用和相互关系[方法]将大肠杆菌侵袭基因缺失突变株俩两混合侵袭人脑微血管内皮细胞（HBMEC）并计算各混合组的相对侵袭率。应用基因转染技术将脑内皮细胞侵袭基因B（ibeB）基因导入HBMEC获得稳定转染的细胞克隆,再利用化学荧光免疫荧光技术检测ibeB基因转染的HBMEC细胞骨架与细胞间紧密连接的变化。[结果]各混合组的相对侵袭率显著不同分另q为100％、76％、44％,前两组数据之间（P=0．36）无显著差异,前两组与后一组数据之间（P〈0．01）且两组细菌的组合对HBMEC的侵袭具有明显的协同作用;ibeB基因转染的HBMEC细胞骨架与细胞间紧密连接都发生了变化。[结论]ibeB基因转染HBMEC的确可以使HBMEC形态改变,说明ibeB基因的产物是细胞骨架和紧密连接的调节蛋白。     

Claudin-7及其调节因子的研究进展

紧密连接是位于上皮细胞或内皮细胞间的细胞连接复合物,对于上皮细胞或内皮细胞的屏障功能具有重要作用,其中Claudin家族是构成紧密连接的重要骨架蛋白,对于调节细胞间物质交换、维持细胞极性具有重要作用。Claudin-7是紧密连接蛋白家族中的一个重要成员,其异常表达可破坏紧密连接的完整性,出现细胞极性的丧失、增殖异常和侵袭转移能力增强。Claudin-7蛋白的表达受到多种因子的调节,了解这些调节因子可为抑制肿瘤的增殖和侵袭提供重要靶点。     

转化生长因子-β1对慢性鼻-鼻窦炎伴鼻息肉上皮紧密连接屏障功能的影响

目的 本研究旨在探讨中国汉族人群中慢性鼻窦炎伴鼻息肉（chronic rhinosinusitis with nasal polyps,CRSwNP）患者鼻腔上皮紧密连接（tight junction,TJ）屏障功能的改变以及转化生长因子-β1（transforming growth factor-β1,TGF-β1）对其调控作用。方法 气液界面方法体外培养鼻息肉患者及健康对照鼻腔上皮细胞,待细胞分化完成后加入不同浓度的TGF-β1刺激上皮细胞72 h,检测上皮细胞跨膜阻力（transepithelial resistance,TER）及细胞间荧光素通透性的变化,评价上皮细胞屏障功能的改变;此外,分别应用实时荧光定量聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）和免疫荧光技术检测紧密连接相关基因mRNA及蛋白表达的改变。结果 与健康对照上皮相比,鼻息肉来源的上皮细胞TER明显降低,上皮细胞对荧光素FITC-葡聚糖（FITC-Dextran）的通透性增加,10 ng/mL TGF-β1刺激可明显降低两种上皮细胞的TER,同时增加荧光素通透性。细胞紧密连接蛋白occludin及zonula occludens（ZO）-1免疫荧光结果显示,健康对照上皮细胞间紧密连接蛋白呈现连续的线性结构,而鼻息肉上皮紧密连接蛋白表达模式呈现明显破坏,包括紧密连接线性结构分离、断裂等,而经10 ng/mL TGF-β1刺激后,无论健康对照还是鼻息肉来源的上皮细胞间紧密连接蛋白表达模式均有明显破坏。结论 中国汉族鼻息肉患者的鼻腔上皮紧密连接屏障功能有明显的缺陷,而TGF-β1在诱发鼻息肉上皮屏障功能缺陷中发挥了重要的调控作用,或可作为鼻息肉治疗潜在的靶位点。     

紧密连接蛋白及其在肺癌中的异常表达

紧密连接蛋白(Claudins)是细胞间紧密连接的主要结构之一,它与闭锁蛋白、细胞黏附蛋白、连接黏附分子、跨膜蛋白和细胞黏附分子共同组成细胞间紧密连接,可维持细胞极性和紧密连接的选择透过性。目前,至少26种Claudin分子已被发现,它们分布于多种组织中,其表达由多种途径参与,并具有组织特异性,其异常表达更与肿瘤的发生发展有密切联系。其中Claudin-1、Claudin-3、Claudin-4和Claudin-5在肺癌中有明显异常表达,可作为肺癌检测、诊断、治疗及预后判断等方面的分子标志,为肺癌及其他恶性肿瘤的诊断和治疗提供了新思路。     

血脑屏障分子组成研究进展

血脑屏障（BBB）是维持脑内环境稳定和避免有害物质入侵脑组织所必须的膜性结构。脑微血管内皮细胞之间的紧密连接是BBB的结构基础,是保持BBB完整性的重要因素。紧密连接结构是由胞浆黏附蛋白、claudin、occludin、连接黏附分子和tricellulin共同组成的。外伤、缺血、缺氧、感染、免疫及理化因素等均可能引起紧密连接结构及功能发生改变,造成BBB损害,导致BBB的通透性升高,进而引起脑水肿。本文拟对血脑屏障的分子组成研究进展进行综述。     

子宫内膜间隙连接通讯研究进展

目前 ,已有不少证据说明细胞间隙连接通讯参与调节细胞的生长、分化、稳态和变异 ,构成间隙连接通讯的最基本单位 -间隙连接蛋白的异常表达或缺失 ,与细胞的异常增生及癌肿的发生有较明显的关系 ,有关间隙连接功能的研究已成为生命科学领域的新热点。本文将对近几年来子宫内膜间隙连接通讯研究方面的进展作一综述 ,供同行在以后的研究中参考。1　间隙连接通讯的结构与功能　　相邻细胞之间的连接类型有 :间隙连接、桥粒、紧密连接 ,而间隙连接是相邻细胞的细胞膜之间形成的一种跨膜蛋白质连接通道 ,每一个间隙连接都由数个跨膜连接子 (ｃｏ…     

血管紧张素II通过下调血管内皮钙粘连蛋白抑制血管内皮细胞中紧密连接蛋白1的表达

目的：探索血管紧张素II(Ang II)引发微血管内皮通透性增加的具体机制。方法：大鼠主动脉内皮细胞原代培养鉴定,取4-7代细胞用于实验,将细胞分为对照组、Ang II组、Ang II+缬沙坦组。采用实时荧光定量聚合酶链反应（RT-q PCR）、蛋白质印迹（Western blot）法检测细胞中紧密连接（ZO-1）、血管内皮钙粘连蛋白（VE-cadherin）的表达,免疫荧光染色检测细胞中ZO-1蛋白的分布。通过向内皮细胞转染过表达VE-cadherin质粒,检测过表达VE-cadherin对Ang II诱导的ZO-1蛋白表达和蛋白分布改变的影响。结果：相比于对照组,Ang II组内皮细胞ZO-1和VE-cadherin在mRNA和蛋白水平的表达均显著减少（P<0.01）,且ZO-1蛋白在细胞周边分布的趋势显著降低。在Ang II干预的内皮细胞中过表达VE-cadherin后,内皮细胞ZO-1蛋白表达增加（P<0.01）,细胞周边分布趋势显著增强。结论：Ang II通过下调VE-cadherin抑制血管内皮细胞中ZO-1蛋白的表达,从而破坏内皮细胞间的紧密连接,这可能是An...     

ALDH2通过线粒体融合与裂变减轻脂多糖诱导的脑微血管内皮细胞屏障的损伤

目的 观察乙醛脱氢酶2(ALDH2)对脂多糖（LPS）诱导的小鼠脑微血管内皮细胞屏障的影响,并探讨线粒体融合与裂变在内皮屏障中的作用。方法 小鼠脑微血管内皮细胞分为3组：对照组：不给予任何处理;LPS损伤组（LPS）:1μg/mL的LPS刺激24 h;LPS+ALDH2激动剂Alda-1组（LPS+Alda-1）：在LPS刺激前给予20μmol/mL的Alda-1预处理1 h。CCK-8实验检测细胞活性;跨内皮细胞电阻和FITC-Dextran葡聚糖实验检测细胞通透性变化;试剂盒丙二醛（MDA）和超氧化物歧化酶（SOD）测定氧化应激水平;超氧化物阴离子荧光探针检测细胞活性氧（ROS）的表达;Western blot检测细胞ALDH2、紧密连接蛋白ZO-1、Occludin以及线粒体融合蛋白Mfn2、OPA1和分裂蛋白Drp1、Fis1表达。结果 与对照组相比,LPS组跨内皮细胞电阻值降低、FITC-Dextran渗漏性增高,MDA含量升高、SOD活性下降,ROS荧光表达增强,ALDH2、紧密连接蛋白ZO-1、Occludin、线粒体融合蛋白Mfn2和OPA1表达降低,而线粒体分裂蛋白D...     

MSP影响非小细胞肺癌PC14细胞周期和上皮间质转化的研究

目的研究巨噬细胞刺激蛋白（MSP）在无巨噬细胞刺激蛋白受体（RON）的情况下对非小细胞肺癌PC14细胞周期的影响,并分析其对PC14上皮间质转化（EMT）的影响。方法取MSP阴性、RON阴性的PC14细胞系,稳定表达MSP的细胞系PC14-Mst1-pEGFP-N1和稳定表达荧光蛋白的空载质粒细胞系PC14-pEGFP-N1,流式细胞术检测各细胞系细胞周期的影响;透射电镜观察在细胞增殖期间细胞之间的连接间隙;逆转录（RT）-PCR和Western blot分别检测E-钙粘蛋白(E-cadherin)和波形蛋白(Vimentin) mRNA、蛋白表达水平。结果流式细胞术结果显示与PC14、PC14-pEGFP-N1相比,PC14-Mst1-pEGFP-N1 细胞G1/G0期数量增多,S期与G2/M期减少;透射电镜发现PC14-Mst1-pEGFP-N1细胞之间的细胞连接较紧密,细胞之间空隙距离缩小;RT-PCR和Western blot检测结果显示,与PC14细胞相比,PC14-Mst1-pEGFP-N1细胞E-cadherin的mRNA和蛋白表达水平升高,而Vimentin的mRNA、蛋白表达水平降低。结论MSP在RON阳性的情况下,可使G1期肺癌细胞增多、分裂相减少,抑制EMT。     

鼠李糖乳杆菌效应蛋白HM0539增强小鼠对大肠杆菌O157:H7肠道感染的抵抗力

目的 探究鼠李糖乳杆菌LGG的效应蛋白HM0539对大肠杆菌O157∶H7肠道感染的预防效果。方法 采用黏附、侵袭实验评价HM0539处理后,大肠杆菌O157∶H7对HT-29细胞的黏附侵袭能力。通过免疫荧光、免疫印迹等方法进一步检测在使用HM0539治疗过程中对HT-29细胞中黏蛋白（MUC2）、紧密连接蛋白（ZO-1）表达的影响;通过动物实验,观察小鼠的生存率及体质量变化,检测攻毒小鼠的肠道病理及肠道屏障功能的改变。结果 HM0539呈浓度依赖性地抑制大肠杆菌O157∶H7黏附和侵袭HT-29,且HM0539的预处理效果优于共同处理（P<0.05）;免疫荧光和免疫印迹等结果显示,HM0539不仅可以明显降低大肠杆菌O157∶H7感染后MUC2的表达水平（P<0.05）,还可显著抑制其对细胞间紧密连接蛋白的破坏（P<0.05）。动物实验结果证 明HM0539可抑制攻毒小鼠的体质量下降（P<0.05）和空肠的损伤;HM0539可抑制大肠杆菌O157∶H7诱导的空肠杯状细胞的破坏（P<0.05）;此外,HM0539可上调攻毒小鼠空肠中的MUC2、ZO-1蛋白的表达（P<0.05）。结论 HM0539可抑制大肠杆菌O157∶H7黏附和侵袭HT-29细胞,而且增强了小鼠对大肠杆菌O157∶H7感染的抵抗力,其机制可能是通过抑制大肠杆菌O157∶ H7破坏黏蛋白和细胞间紧密连接蛋白。     

大鼠角膜损伤修复过程中上皮细胞通透性的改变与紧密连接的重塑有关

目的 探讨大鼠角膜上皮细胞在损伤修复过程中通透性的变化及其与紧密连接蛋白ZO-1和Occludin的重塑的关系.方法用眼科手术刀片在大鼠右眼角膜中央作 2 mm、深及角膜上皮细胞基底层的无菌性机械性损伤复制角膜损伤模型.通过大分子Sulfo-NHS-LC-Biotin渗透作用经荧光分析检测损伤0、8、24、48、72 h后的角膜通透性的变化;间接免疫荧光分析损伤修复过程中角膜上皮细胞紧密连接蛋白Occludin与ZO-1的重塑.结果 角膜损伤后,缺损处上皮细胞缺失,通透性增加,紧密连接蛋白ZO-1、Occludin结构消失.随时间推移,上皮细胞增殖并向缺损处迁徙,其通透性逐渐降低,紧密连接蛋白结构逐渐形成.24 h时,上皮细胞覆盖角膜上皮缺损处,但其通透性仍较正常组高,其细胞间紧密连接较少、排列紊乱;48 h后,角膜通透性恢复正常,其角膜上皮细胞连接紧密,细胞间形成紧密连接结构.结论大鼠角膜损伤修复过程中通透性的改变与紧密连接的重塑有关.     

健脾通里中药芪黄煎剂对胃切除大鼠肠上皮紧密连接的影响

目的 观察健脾通里中药芪黄煎剂对大鼠胃切除创伤模型肠黏膜紧密连接蛋白的影响,并探讨其作用机制。方法 将45只大鼠随机分为假手术组、标准肠内营养组、中药组,每组15只。假手术组大鼠仅腹壁切开,未切除胃;其余两组采用胃切除手术方案建立大鼠模型。假手术组术后正常饮食饮水,标准肠内营养组术后注射肠内营养液,中药组注射肠内营养液+中药煎剂。干预7 d后取材,透射电镜下观察大鼠肠黏膜上皮紧密连接形态及其结构的连续性和完整性,并测量肠黏膜上皮细胞间紧密连接宽度;实时荧光定量聚合酶链式反应法检测紧密连接蛋白（zonula occludin-1,ZO-1）、封闭蛋白、咬合蛋白mRNA表达水平。结果 与假手术组比较,标准肠内营养组大鼠肠黏膜上皮细胞紧密连接宽度显著减小（P＜0.05）,小肠组织中ZO-1、封闭蛋白、咬合蛋白mRNA表达水平均显著下调（P＜0.05）;与标准肠内营养组比较,中药组大鼠肠黏膜上皮细胞紧密连接宽度显著增加（P＜0.05）,小肠组织中ZO-1、封闭蛋白、咬合蛋白mRNA表达水平均显著上调（P＜0.05）。结论 芪黄煎剂可以减轻胃切除术后大鼠肠黏膜上皮细胞间紧密连接的损伤,其作用机制与调节ZO-1、封闭蛋白、咬合蛋白mRNA的表达有关。     

酒川芎增强阿美替尼对EGFR突变型非小细胞肺癌脑移植瘤的抑制作用

目的 探讨酒川芎（WCR）增强阿美替尼抑制EGFR突变型非小细胞肺癌脑移植瘤的作用。方法 建立人脑内皮细胞（h CMEC/D3）和PC9非小细胞肺癌细胞共培养体系,采用流式细胞术考察酒川芎水提液（2 mg/mL）联合阿美替尼（10、20μmol/L）对PC9细胞凋亡的影响;通过ABCB1-MDCK单层细胞模型评估酒川芎水提液（0.5、1、2 mg/mL）对阿美替尼（8μmol/L）跨膜转运的影响。以Western blot法检测血脑屏障完整性相关的紧密连接蛋白表达;建立裸鼠非小细胞肺癌脑移植瘤模型,考察酒川芎（1 mg/g）联合阿美替尼（10 mg/kg）抑制EGFR突变型非小细胞肺癌脑移植瘤的作用。结果 与单用阿美替尼组（20μmol/L）对比,酒川芎（2 mg/mL）联合阿美替尼（20μmol/L）组给药可致细胞凋亡百分率增加21%(P<0.01)。酒川芎（0.5、1、2 mg/mL）联合阿美替尼的双侧转运Papp(A→B)较单用阿美替尼均显著增加（P<0.05）。与酒川芎联合后,紧密连接蛋白zonula occludens(ZO)-1,claudin-5和外排蛋白P-...     

HER3影响辐照诱导的Luminal A型乳腺癌细胞的迁移和侵袭

目的：探讨敲低人表皮生长因子受体?3（human epidermal growth factor receptor?3,HER3）表达及联合辐照对Luminal A型乳腺癌细胞迁移和侵袭能力的影响及分子机制。方法：利用短发夹RNA（shRNA）稳定转染乳腺癌细胞MCF?7和ZR75?1,敲低HER3表达。蛋白免疫印迹实验（Western blot）检测细胞转染效率。将转染空病毒的对照组（shRNA?Control）与HER3敲低组（shRNA?HER3）细胞进行6?Gy X线辐照,细胞划痕实验及侵袭实验（Transwell assay）分析各组乳腺癌细胞迁移和侵袭能力。Western blot检测紧密连接蛋白Claudin?1的表达变化。结果：敲低HER3后,乳腺癌细胞MCF?7和ZR75?1内HER3蛋白表达水平明显降低。单纯辐照的乳腺癌细胞,迁移和侵袭能力增强,Claudin?1蛋白表达增加;而敲低HER3及联合辐照后,乳腺癌细胞迁移和侵袭能力降低,Claudin?1蛋白表达明显降低。结论：敲低HER3表达可以降低辐照诱导的luminal A型乳腺癌细胞的迁移和侵袭能力,其机制可能通过下调紧密连接蛋白Claudin?1的表达而实现。