针刺通过Wnt信号通路对绝经后骨质疏松骨折大鼠骨密度和骨代谢的作用研究

目的 探讨针刺对绝经后骨质疏松骨折大鼠骨损伤的治疗作用及其可能作用机制。方法 选取36只雌性SD大鼠采用双侧卵巢摘除法建立绝经后骨质疏松症模型,造模成功3周后采用闭合骨折法建立股骨骨折大鼠模型,随机分为模型组、针刺组和针刺+Wnt拮抗剂组,另设假手术组。针刺组给予针刺治疗,针刺+Wnt拮抗剂组给予针刺治疗同时皮下注射20 mg/kg Wnt拮抗剂DKK1;假手术组及模型组仅给予常规饲养。检测各组大鼠股骨骨密度（BMD）、组织矿物质密度（TMD）、骨体积分数（BV/TV）、骨小梁数量（Tb.N）、骨小梁厚度（Tb.Th）和骨小梁分离度（Tb.Sp）、血清炎性因子和成骨影响因子水平;HE染色观察股骨组织病理学变化,评定骨损伤情况;RT-PCR和Western blot检测大鼠骨痂组织分泌型蛋白Wnt3a和β连环蛋白（β-catenin）mRNA与蛋白表达情况。结果 与假手术组比较,模型组大鼠ALP、PINP、股骨组织病理学评分、BMD、TMD、BV/TV、Tb.N、Tb.Th、Wnt3a和β-catenin mRNA与蛋白表达水平降低,Tb.Sp、TNF-α、IL-1β和IL-6水平升高（P<0.05）。与模型组比较,针刺组大鼠ALP、PINP、股骨组织病理学评分、BMD、TMD、BV/TV、Tb.N、Tb.Th、Wnt3a和β-catenin mRNA与蛋白表达水平升高,Tb.Sp、TNF-α、IL-1β和IL-6水平降低（P<0.05）。与针刺组比较,针刺+Wnt拮抗剂组大鼠ALP、PINP、股骨组织病理学评分、BMD、TMD、BV/TV、Tb.N、Tb.Th、Wnt3a和β-catenin mRNA与蛋白表达水平降低,Tb.Sp、TNF-α、IL-1β和IL-6水平升高（P<0.05）。结论 针刺能够改善PMOP股骨骨折大鼠骨密度,减轻体内炎症反应,提高成骨影响因子水平,可能是通过调节Wnt信号通路发挥作用。     

过表达miR-664a-5p激活Wnt/β-catenin信号通路促进骨质疏松大鼠骨重建

目的 探究过表达miR-664a-5p的脂肪间充质干细胞（miR-664a-5p-ADSCs）通过激活Wnt/β-catenin信号通路对骨质疏松（OP）大鼠骨重建的促进作用。方法 将大鼠分为Sham组、OVX组、ADSCs组和miR-664a-5p-ADSCs组。切除卵巢建立OP大鼠模型,Sham组仅切除脂肪组织。3个月后,ADSCs组和miR-664a-5p-ADSCs组分别尾静脉注射miR-664a-5p-ADSCs及其阴性对照ADSCs;Sham组和OVX组注射等量生理盐水。1个月后进行指标检测。micro-CT、HE染色、TRAP染色检测OP大鼠骨重建情况;免疫组化染色、RT-qPCR、Western blot检测Runx2、ALP、OCN、Wnt、β-catenin mRNA和蛋白的表达。结果 Sham组骨小梁完整,破骨细胞较少;与Sham组相比,OVX组骨小梁稀疏且变薄,破骨细胞较多;Runx2、ALP、OCN、Wnt、β-catenin mRNA和蛋白水平明显降低（P<0.05）;与OVX组相比,ADSCs组、miR-664a-5p-ADSCs组骨小梁增加且增厚,破骨细胞较少;Runx2、ALP、OCN、Wnt、β-catenin mRNA和蛋白水平明显升高,且miR-664a-5p-ADSCs组上述效果强于ADSCs组（P<0.05）。结论 过表达miR-664a-5p的ADSCs通过激活Wnt/β-catenin信号通路促进OP大鼠骨重建。     

雌二醇对去卵巢骨质疏松大鼠骨组织Wnt/β-catenin信号通路的影响

目的观察雌二醇对去卵巢骨质疏松大鼠骨组织Wnt/β-catenin信号通路的影响,探讨其防治绝经后骨质疏松症的作用机制。方法将80只雌性SD大鼠随机分为对照组、假手术组、去势组、药物组,构建绝经后骨质疏松大鼠模型,检测骨组织骨密度(bone mineral density,BMD)和生物力学指标,运用qRT-PCR和免疫组化分别检测骨组织Wnt、β-catenin、BMP-2的mRNA和蛋白表达,通过HE染色观察骨组织形态学。结果去势组股骨BMD、生物力学指标较对照组和假手术组均显著降低(P0.05),药物组股骨BMD、生物力学指标较去势组均显著升高(P0.05)。去势组骨组织Wnt、β-catenin、BMP-2的mRNA和蛋白表达较对照组和假手术组均显著降低(P0.05),药物组骨组织Wnt、β-catenin、BMP-2的mRNA和蛋白表达较去势组均显著升高(P0.05)。去势组骨小梁明显减少,排列稀疏不规则,连接不完整,骨髓腔变大,有大量纤维组织。药物组骨小梁数量减少不明显,粗细均匀稍致密,排列尚规则,连续性完整性较好。结论雌二醇通过Wnt/β-catenin信号通路作用于BMP-2,增加了去卵巢骨质疏松大鼠骨密度,提高了骨生物力学性能,能够改善骨组织结构,发挥了抗骨质疏松作用。     

Wnt/β-catenin信号通路探讨羌活鱼超微粉抗去卵巢大鼠骨质疏松的作用机制

目的 探讨羌活鱼超微粉对去卵巢大鼠骨代谢、骨微观结构及Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法 选取75只4月龄SPF级雌性SD大鼠,随机分为假手术组、模型组、羌活鱼超微粉组、羌活鱼普通粉组、仙灵骨葆组,除假手术组外均采用去势法建立骨质疏松症动物模型。药物干预12周后通过ELISA检测各组血清骨代谢指标、通过Micro-CT扫描测定各组大鼠的股骨骨微结构变化、运用Western Blot法测定骨组织中Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白的表达。结果 药物干预12周后,与模型组相比,羌活鱼组、仙灵骨葆组的ALP、OPG、PINP及BMD、BV/TV、Tb.Th、Tb.N显著升高,SMI、Tb.Sp、TRACP显著降低,Wnt2、β-catenin、Runx2的蛋白表达增加,但仍较假手术组低,差异有统计学意义（P<0.05）;羌活鱼超微粉组在改善大鼠骨代谢、骨微观结构及蛋白表达方面均优于羌活鱼普通粉组,差异具有统计学意义（P<0.05）。结论 羌活鱼能够延缓去卵巢大鼠骨质疏松的发生、发展,且超微粉剂优于普通粉剂,其作用机制可能与激活Wnt/β-catenin信号通路有关。     

青娥丸调控Wnt1/β-catenin信号通路治疗糖尿病骨质疏松

目的 探究青娥丸对糖尿病骨质疏松（diabetic osteoporosis，DOP）小鼠模型Wnt/β-catenin通路的影响。方法 采用高糖高脂饲料喂养联合腹腔注射链脲菌素建立DOP小鼠模型，对小鼠进行药物干预，分为空白组、模型组、青娥丸低、中、高剂量组及阿仑膦酸钠组，进行一般状态观察，股骨组织进行HE染色，验证造模成功情况。生化检测各组小鼠碱性磷酸酶（ALP）、尿素氮（BUN）、天冬氨酸转氨酶（AST）的水平，免疫组化检测股骨Wnt/β-catenin信号传导通路中相关蛋白Wnt1、β-catenin、Runx2表达水平，HE染色观察各组股骨组织细胞形态，qPCR检测股骨组织中GSK-3β、低密度脂蛋白受体相关基因5(LRP5)、COL1A1 mRNA水平。结果 与对照组相比，模型组小鼠骨小梁间隔增大，骨小梁之间连接减少，小鼠多饮多尿少动，尾静脉血糖值增加（P＜0.01），血清中ALP、BUN、AST含量和GSK-3β mRNA水平均增加（P＜0.01），体重和LRP5、COL1A1 mRNA水平下调（P＜0.01），Wnt1、β-catenin、Runx2蛋白呈少量阳性表达（P＜0.01）。与模型组相比，青娥丸组和阿仑膦酸钠组骨小梁间隔变小，骨小梁间的连接增多，尾静脉血糖值下降（P＜0.01），血清中ALP、BUN、AST含量和GSK-3β mRNA水平均减少（P＜0.01），体重和LRP5、COL1A1 mRNA水平上调（P＜0.01），Wnt1、β-catenin、Runx2蛋白阳性表达增多（P＜0.01）。结论 青娥丸可增强DOP小鼠骨组织的修复作用，其机制可能与Wnt1/β-catenin信号通路的激活有关。 关键词：中医中药；青娥丸；糖尿病性骨质疏松；骨组织；Wnt1/β-catenin信号通路     

小檗碱联合绿原酸抗骨质疏松的作用机制

目的 研究小檗碱联合绿原酸对MC3T3-E1细胞分化作用及对绝经后骨质疏松小鼠的干预作用,并探讨其可能的机制。方法 观察小檗碱、绿原酸及两药联用对MC3T3-E1细胞增殖和分化能力的影响,并检测细胞中Wnt3a、β-catenin及成骨分化相关基因mRNA的表达水平。在体构建绝经后骨质疏松症小鼠模型,随机分为模型组、小檗碱组、绿原酸组及两药联用组,同时设置假手术组为对照,尾静脉给药8周后处死小鼠,检测其血清BALP、BGP含量,Micro-CT扫描观察小鼠股骨微结构变化,免疫组织化学法检测小鼠股骨Wnt3a和β-catenin蛋白表达,HE染色观察小鼠重要器官的组织病理结构变化。结果 与正常组相比,小檗碱组、绿原酸组及两药联用组对MC3T3-E1细胞增殖率无明显影响,但均可促进MC3T3-E1细胞成骨分化能力和矿化水平,以两药联用组最明显;并且两药联用组能显著升高Wnt3a、β-catenin、ALP、Runx2、OPN和OCN mRNA的表达(P<0.01)。体内实验表明,与模型组相比,两药联用组小鼠血清BALP、BGP含量明显降低,股骨微观结构得到明显改善,股骨Wnt3a和β...     

lncRNA ANCR调节骨质疏松大鼠脂肪源性干细胞分化成骨细胞及对Wnt信号通路的作用机制

目的探讨lncRNA ANCR调节骨质疏松(osteoporosis,OP)大鼠脂肪源性干细胞分化成骨细胞及对Wnt信号通路的作用机制。方法将lncRNA ANCR siRNA慢病毒载体及慢病毒空载体分别转染至脂肪源性干细胞,分为siRNA组、空载体组、干细胞组。分别通过碱性磷酸酶染色观察ALP染色效果、Western blot法检测Wnt/β-catenin蛋白水平、茜素红染色实验检测成骨染色效果、免疫组化法检测Wnt/β-catenin信号阳性表达的差异性。结果与空载体组、干细胞组相比较,siRNA组细胞中ALP染色显著加深(P均0.05),成骨染色更为显著(P均0.05);与空载体组,干细胞组相比较,siRNA组细胞Wnt/β-catenin蛋白表达显著上升(P均0.05),Wnt/β-catenin阳性数显著升高(P均0.05);空载体组与干细胞组比较,细胞中Wnt/β-catenin蛋白、ALP表达水平、Wnt/β-catenin阳性数相近,无显著差异(P0.05)。结论 lncRNA ANCR的表达水平与骨质疏松大鼠体内脂肪源性干细胞的分化存在显著相关性,下调lncRNA ANCR能够促进脂肪源性干细胞向成骨细胞分化,其作用机制可能与调控Wnt/β-catenin的表达有关。     

电针对去卵巢大鼠Wnt3a和β-catenin的基因及蛋白表达的影响

目的研究电针对去卵巢骨质疏松模型大鼠Wnt3a和β-catenin的蛋白及基因表达的影响。方法选取60只雌性SD大鼠,随机分为空白组、假手术组、模型组、药物组、针刺组,每组12只。空白组不做任何处理,常规饲养;假手术组只暴露双侧卵巢但不切除;其余3组行双侧切卵巢法建立骨质疏松模型大鼠。造模13周后开始治疗,针刺组取"肾俞"、"脾俞"、"三阴交"、"足三里",每次电针刺激15 min(断续波,2 Hz,1.0 mA)并灌服与药物组相同体积的蒸馏水,每日1次,连续治疗5 d,间隔2 d,20 d为1个疗程,共治疗3个疗程;药物组以戊酸雌二醇水溶液(0.02 mg/mL,1 mL/100 g体质量)灌胃,疗程同针刺组;假手术组、模型组灌服与药物组相同体积的蒸馏水,疗程同针刺组;各组大鼠每周称重1次,以此调整给药剂量。治疗结束后麻醉处死大鼠,分离股骨和胫骨,分别用RT-PCR分析法和免疫组化法检测各组大鼠股骨和胫骨Wnt3a,β-catenin蛋白及基因的表达。结果模型组Wnt3a和β-catenin蛋白表达量最低,与空白组和假手术组比较差异有统计学意义(P0.05);经针刺或药物干预后,Wnt3a和β-catenin蛋白表达显著升高,与模型组比较差异具有统计学意义(P0.05);模型组Wnt3a和β-catenin mRNA表达量最低,与空白组和假手术组比较差异有统计学意义(P0.05);经针刺或药物干预后,Wnt3a和β-catenin mRNA表达显著升高,与模型组比较具有统计学意义(P0.05)。结论针刺防治绝经后骨质疏松症的分子机制可能是通过调控Wnt3a和β-catenin的基因和蛋白表达水平,从而激活Wnt/β-catenin信号通路,以此调节骨重建系统的平衡。     

泛素-蛋白酶体抑制剂MG132上调Wnt/β-catenin信号通路改善骨质疏松的实验研究

目的:探讨泛素-蛋白酶体抑制剂MG132改善骨质疏松的机制。方法:32只雌性SD大鼠,体质量220~250 g,8周龄,分为4组(n=8)。A组和B组大鼠采用去卵巢法制备骨质疏松症模型,造模成功后分别给予蛋白酶体抑制剂MG132和二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide,DMSO)干预;C组为假手术对照组,D组为正常组,C组及D组均给予MG132干预。分别于给药后6、12周分批处死动物,于股骨颈组织取材,行病理形态学观察,Micro-CT分析,检测组织中20S蛋白酶体活性,Wnt和β-catenin的表达。结果:形态学观察显示:A组,骨小梁轻度变细,呈网状,偶有中断;B组,骨小梁明显变细、变薄,不连续;C组与D组相似,骨小梁形态结构完整,排列呈网状。骨密度(bone mineral density,BMD),骨表面积(bone surface,BS),骨体积分数(bone volume/total volume,BV/TV)及骨小梁厚度(trabecular thickness,Tb.Th)的分析结果显示:不同时间点,B组的参数比较均差于其他各组(P<0.05),A组的BS差于C组和D组(P<0.05),C组和D组所有参数差异无统计学意义。20S蛋白酶体的RFU值检测结果显示:B组显著高于其他各组(P<0.05);Western blot检测结果显示,A组Wnt蛋白和β-catenin蛋白的灰度值显著高于其他各组(P<0.05)。结论:泛素-蛋白酶体抑制剂MG-132可抑制β-catenin蛋白的降解,从而调控Wnt/β-catenin信号通路,延缓骨质疏松的发生和发展。     

熊果酸通过BMP-2/Smad4/Wnt/β-catenin信号通路介导对去卵巢大鼠骨量流失的保护作用

目的 探讨熊果酸(XGS)对去卵巢大鼠骨量流失的影响,并探索可能的机制。方法 通过双侧去卵巢建立骨质疏松大鼠模型;随后随机分为假手术组(Sham)、去卵巢组(OVX)以及熊果酸组(XGS),每组10只;其中XGS组大鼠接受熊果酸(100 mg/kg)治疗12周;待治疗检测股骨骨量、骨密度(BMD)、骨矿物质含量(BMC)、骨代谢指标以及BMP-2、Smad4、Wnt 1和 β-catenin表达。结果 治疗12周后,与OVX组相比,Micro-CT和双能X线结果显示XGS组的大鼠骨小梁微观参数、骨密度和骨矿物质含量得到明显改善。XGS组大鼠BMD、BMC、TV/BV、Tb.N、Tb.Th和Tb.Sp较OVX组明显改善(P＜0.05)。血清检测结果和生物力学检测结果显示XGS组的最大载荷和弹性模量均高于OVX组(P＜0.05);XGS组大鼠血清ALP、OPD和OCN水平较OVX组明显降低,组间差异有统计学意义(P＜0.05)。WB检测显示,和OVX组比较,XGS组BMP-2、Smad4、Wnt1和β-catenin表达水平明显上调,比较差异有统计学意义(P＜0.05)。结论 熊果酸可以通过BMP-2/Smad4/Wnt/β-catenin信号通路介导对去卵巢大鼠骨量流失保护作用。     

基于Wnt/β-catenin信号通路探讨太白楤木抗去卵巢大鼠骨质疏松症的作用和机制

目的 探索太白楤木对去卵巢大鼠骨质疏松症以及Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法 40 只雌性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、仙灵骨葆胶囊组（0.3 g/kg）、太白楤木低剂量组（0.4 g/kg）和太白楤木高剂量组（0.8 g/kg）,每组8 只,除假手术组外其余组进行去卵巢手术。术后灌胃给药12周,三点弯曲试验测定骨生物力学性能,Micro-CT检测骨密度和微结构,ELISA法检测血清骨代谢指标,HE染色观察胫骨病理改变,Western blot法测定骨组织中Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白的表达情况。结果 经过12周治疗,与模型组相比,太白楤木高剂量组显著增大最大载荷、刚度和最大应力(P＜0.01),提高去卵巢大鼠骨密度(P＜0.01),保护骨小梁微结构不被破坏,骨吸收标志物NTX-Ⅰ和TRAP水平降低(P＜0.01),骨形成标志物BALP水平升高(P＜0.01),Wnt3a、β-catenin和RUNX2蛋白表达量升高(P＜0.01),p-β-catenin蛋白水平降低(P＜0.01)。结论 太白楤木对去卵巢大鼠生物力学性能、骨密度和骨微结构具有保护作用,太白楤木调节骨代谢可能和激活Wnt/β-catenin信号通路有关。     

芍药苷促进小鼠成骨分化抗骨质疏松作用的实验研究

目的 探讨芍药苷对MC3T3-E1成骨细胞分化以及小鼠骨质疏松模型的影响。 方法 体外细胞实验分为对照组、不同剂量芍药苷干预组。通过CCK-8法检测芍药苷对MC3T3-E1成骨细胞活力的影响;采用碱性磷酸酶（ALP）染色以及活性检测芍药苷促进MC3T3-E1成骨分化能力;通过茜素红染色检测芍药苷促矿化能力;运用荧光定量PCR、Western blot检测Runx2、OPG、RANKL、Col1α1的mRNA以及蛋白表达情况。选取8周龄C57BL/6小鼠24只,分为假手术组、骨质疏松模型组、药物干预组。选取各小鼠左侧股骨远端以及胫骨近端的区域进行苏木素-伊红（HE）染色、Runx2免疫组织化学以及micro-CT扫描。 结果 中、高剂量芍药苷干预组可以促进MC3T3-E1细胞ALP的活性（P<0.05）;高剂量芍药苷能够促进MC3T3-E1细胞的矿化能力（P<0.01）;同时中、高剂量能够促进OPG、Runx2蛋白的表达（P<0.05）,抑制RANKL的表达（P<0.05）。与假手术组比较,OVX组骨微结构破坏明显,Runx2蛋白表达显著减少（P<0.01）;芍药苷干预后骨质疏松模型小鼠骨小梁数量以及厚度显著增加（P<0.01）,骨小梁间隔减少明显（P<0.01）,Runx2蛋白提升明显（P<0.01）。 结论 芍药苷能够促进成骨细胞的分化,上调成骨分化基因,改善骨质疏松模型小鼠的骨微结构,具有抗骨质疏松治疗的潜在价值。     

小白菊内酯对地塞米松诱导的成骨细胞增殖和分化的影响

目的 探讨小白菊内酯（parthenolide,PTL）对地塞米松（dexamethasone,Dex）诱导的成骨细胞（MC3T3-E1）成骨分化及Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法 用浓度为2.5~80 μmol/L的小白菊内酯与地塞米松共同处理MC3T3-E1细胞,CCK-8法检测细胞增殖活性;将MC3T3-E1细胞分为对照组（Control组）、地塞米松组（Dex组）、小白菊内酯低、中、高浓度组（PTL-L组、PTL-M组、PTL-H组）、小白菊内酯高浓度+Wnt抑制剂组（PTL-H+DKK1组）,碱性磷酸酶（ALP）染色检测细胞ALP活性,茜素红S染色观察细胞矿化结节形成;Western blot检测细胞Runt相关转录因子2（RUNX2）、骨钙素（OCN）、骨形成蛋白2（BMP2）、细胞周期蛋白Cyclin D1及Wnt/β-catenin通路相关蛋白表达水平。结果 浓度为2.5~80 μmol/L的小白菊内酯可促进地塞米松诱导的MC3T3-E1细胞增殖,选择小白菊内酯浓度为5.0、10.0、20.0 μmol/L进行后续实验;与Control组相比,Dex组ALP活性显著降低,矿化结节减少,RUNX2、OCN、BMP2、Cyclin D1、Wnt3a、β-catenin蛋白表达水平显著降低（P<0.05）;与Dex组比较,PTL-L组、PTL-M组、PTL-H组ALP活性、矿化结节数依次升高,RUNX2、OCN、BMP2、Cyclin D1、Wnt3a、β-catenin蛋白表达水平依次升高（P<0.05）;与PTL-H组比较,PTL-H+DKK1组ALP活性与矿化结节显著降低,UNX2、OCN、BMP2、Cyclin D1、Wnt3a、β-catenin蛋白表达水平显著降低（P<0.05）。结论 小白菊内酯通过激活Wnt/β-catenin信号通路,减轻地塞米松对成骨细胞增殖与分化的抑制作用。     

β-TCP修复骨质疏松性骨缺损的实验研究

目的 探索β-TCP修复骨质疏松性大鼠骨缺损的效果。方法 取SD大鼠20只,先去卵巢建立骨质疏松模型,等饲养3个月保证骨质疏松模型成功后再建立双侧大鼠股骨干骺端缺损模型,将手术成功的骨质疏松性骨缺损模型随机均分为两组,β-TCP植入组于骨缺损处植入β-TCP,空白对照组不作任何处理。术后4,8周进行大体观察、X射线摄片、组织病理学观察,Micro-CT观察。结果 术后4周、8周,β-TCP 植入组：缺损区X射线影像有明显的骨组织生成,HE染色可见大量骨小梁和较多核深染的长梭形骨细胞,Micro-CT显示骨微观结构修复效果较好,且能明显增加股骨骨密度;空白对照组X射线骨组织生成较少,骨小梁或骨板结构较少,排列较紊乱,Micro-CT显示骨微观结构修复效果不够理想,股骨骨密度增加不明显。结论 β-TCP可较好地修复骨质疏松性大鼠股骨干骺端缺损。     

蒙药蓝刺头抗绝经后骨质疏松症骨微观形态学计量研究

目的通过研究证实蒙药蓝刺头防治绝经后骨质疏松症(postmenopausal osteoporosis,PMOP)的作用。基于蒙医药"补暖补精-清镇赫依-固骨质壮骨"经典理论,通过防治PMOP提供实验依据,揭示此理论、治法效应,为蒙医药现代化提供思路。方法分组:6月龄SD系SPF级健康雌性未孕大鼠84只,体重(250±20) g,随机分为假手术组(Sham)、去卵巢骨质疏松模型组(OVX)、蒙药蓝刺头高剂量组(Echinops-H)、中剂量组(Echinops-M)、低剂量组(Echinops-L)、中药对照组淫羊藿组(HEP)、西药对照组辅酶Q10组(Co-Q10) 7组。造模:采用双侧卵巢切除法(去势)制备绝经后骨质疏松模型,阴道上皮角化实验、骨密度检测、子宫病理学检查验证造模成功。给药:术后90 d,模型组、假手术组给予生理盐水灌胃,其余各组予相应药物灌胃。标本采集:末次灌胃后行标本采集。处死大鼠剔除右侧完整股骨并标记,4%多聚甲醛溶液固定保存。指标检测:右侧股骨采用骨密度仪测定离体骨骨密度(bone mineral density,BMD)(股骨近端BMD、股骨总BMD)检测,行Micro-CT骨微结构形态计量学测定。结果去卵巢术后各组大鼠BMD下降明显,表现为松质骨、皮质骨骨量相继减少,皮质骨变薄,BMD下降;去卵巢术后各组大鼠骨组织体积、骨小梁体积分数、骨小梁厚度、骨小梁宽度、骨小梁数目、骨小梁模块因素下降明显,骨小梁分离度升高明显;适当剂量蒙药蓝刺头可以明显提高大鼠骨组织体积、骨小梁体积分数、骨小梁厚度、骨小梁宽度、骨小梁数目、骨小梁模块因素,明显降低骨小梁分离度;其具明显抗PMOP作用。结论蒙药蓝刺头对PMOP模型大鼠具显著抗骨质疏松作用;蒙药蓝刺头能显著促进模型大鼠骨组织成骨分化、骨形成;降低PMOP模型大鼠骨代谢高转换指标,抑制骨吸收。     

高脂饮食通过抑制Wnt/β-catenin信号介导对骨质疏松大鼠骨密度和骨修复的负面影响

目的 评估高脂饮食（HFD）对骨质疏松大鼠骨密度（bone mineral density, BMD)及骨修复的影响并探讨可能的机制。方法 将雌性SD大鼠随机分为三组：假手术卵巢切除组（Sham）、手术卵巢切除模型组（OVX）、手术卵巢切除模型+HFD（OVX+HFD）;随后所有大鼠在双侧去卵巢手术或假手术后12周基础上制作双侧股骨干建立骨缺损模型,OVX+HFD组大鼠在股骨上接受HFD干预4周。随后使用影像学、血清学、骨生物力学以及基因水平检测来评估骨修复效果。结果 与Sham组相比,OVX和OVX+HFD组的血清E2、ALP水平均显著降低( P<0.05),而TRAP水平均显著升高(P<0.05);OVX和OVX+HFD组之间有显著差异(P<0.05)。Micro-CT检测显示OVX+HFD组骨修复效果较OVX和Sham组明显降低;定量检测结果显示OVX+HFD组的BMD、Tb.N和Tb.Th显著小于OVX组(P<0.01),而Tb.Sp(P<0.05)在OVX+HFD组中明显大于在OVX组。生物力学显示HFD干预后明显降低了去卵巢大鼠骨缺损部位的机械强度,包括大鼠股骨的极限载荷、刚度、能量吸收和弹性模量(P均<0.05);基因检测表明与OVX组相比,OVX + HFD组Smad2、Smad3和GSK-3βmRNA表达显著增加(P<0.01),而Wnt1和β-cateninmRNA表达均显著降低(P<0.01)。结论 HFD对骨质疏松状态下骨缺损愈合有负面影响,而这种影响可能是通过对Wnt/β-catenin信号传导抑制来实现的。     

曲古抑菌素A促进去卵巢大鼠钛植入物骨整合

目的 探讨TSA对去卵巢大鼠TI骨整合的影响。方法 将30只健康3月龄雌性SD大鼠随机分为Sham组（n=5）和OVX组（n=25）。正常饲养3个月后,两组各选取5只大鼠处死,取股骨远端样本行Micro-CT和HE染色以鉴定是否成功建立骨质疏松模型。随后在OVX组剩余大鼠双侧股骨干骺端植入直径1.5 mm TI,并将其分为2组：Control组（n=10）和TSA组（n=10）。连续给药4周。给药结束后处死全部大鼠并取股骨样本行Micro-CT扫描、HE染色以及Masson染色,ELISA法检测,拔钉实验。结果 与Sham组对比,Micro-CT显示OVX组BMD、BV/TV、Tb.Th、Tb.N降低（P<0.05）,而Tb.Sp、SMI升高（P<0.05）,HE染色显示OVX组骨小梁数量明显降低。与Control组对比,Micro-CT显示TSA组BMD、BV/TV、Tb.Th、Tb.N 、Conn.D均升高（P<0.05）,而Tb.Sp、SMI降低（P<0.05）,HE染色、Masson染色显示TSA组骨小梁数量、新生骨数量均升高,ELISA法检测结果显示TSA组OCN、BMP2均升高,拔钉实验显示TSA组TI轴向拔出力增大。结论 TSA通过上调OCN、BMP2等成骨相关蛋白,促进骨小梁形成和新骨形成,进而改善去卵巢大鼠TI骨整合。     

加味六味地黄汤对UUO大鼠肾组织Wnt4/β-catenin信号通路介导调控FGF-23的影响

目的:观察加味六味地黄汤对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾组Wnt4、β-catenin及FGF-23蛋白表达的影响。方法:健康成年SD大鼠120只,随机分为4组:假手术组、模型组、中药组、缬沙坦组,各组组内分为1周、2周、4周3个时间点。假手术组和模型组予以生理盐水(2 ml/只/d)灌胃;中药组予以加味六味地黄汤组灌胃(2 ml/d);缬沙坦组在造模后给予缬沙坦(30 mg·kg~(-1)·d~(-1))灌胃。HE染色和Masson染色观察肾脏病理改变,免疫组化和Western blot观察大鼠肾组织Wnt4、β-catenin及FGF-23蛋白的表达。结果:假手术组大鼠肾组织结构正常,模型组大鼠出现肾间质纤维化,中药组和缬沙坦组大鼠小管间质病变减轻。与假手术组相同时间点相比较,大鼠模型组肾功能(BUN、Scr)、小管间质半定量评分、Wnt4、β-catenin及FGF-23蛋白表达均显著增高,差异均有统计学意义(P 0. 01);与模型组大鼠相同时间点相比较,加味六味地黄汤和缬沙坦均能改善肾脏病理,显著降低BUN和Scr水平、小管间质半定量评分,下调肾组织Wnt4、β-catenin及FGF-23蛋白的表达(P 0. 05或P 0. 01)。结论:UUO大鼠肾组织Wnt4/β-catenin信号通路活化,并可能介导了FGF-23的转录,而加味六味地黄汤可能通过阻断Wnt4/β-catenin信号通路的活化,下调FGF-23的表达,发挥抗肾间质纤维化作用。     

辛伐他汀减轻UUO大鼠肾纤维化及可能机制的研究

目的本研究旨在探讨辛伐他汀改善输尿管梗阻(UUO)大鼠肾组织纤维化以及可能的机制。方法 30只SD大鼠,随机分为假手术对照组(Sham组)、模型组(UUO组)和辛伐他汀治疗组(Sim组),治疗组术前3 d予20 mg·kg~(-1)·d~(-1)辛伐他汀生理盐水混悬液3 mL灌胃治疗,对照组及模型组予等体积生理盐水灌胃。成模后7 d处死各组大鼠。行HE、Masson、PAS染色方法光镜下观察大鼠肾脏病理改变;免疫组化观察Wnt4和β-catenin蛋白在肾组织的表达; Western blotting检测各组大鼠肾皮质β-catenin、Wnt4、GSK-3β、p-GSK-3β、CollagenⅠ、α-SMA和E-cadherin蛋白在各组大鼠肾组织的相对表达量。结果与Sham组相比,UUO组大鼠肾组织纤维化病变明显,肾组织β-catenin、Wnt4、α-SMA、p-GSK-3β、CollagenⅠ蛋白的表达明显增多(P 0.05),E-cadherin蛋白表达减少(P 0.01),与UUO组相比,Sim组肾组织α-SMA、CollagenⅠ、Wnt4、β-catenin和p-GSK-3β蛋白表达减少(P 0.05),E-cadherin蛋白表达多(P 0.05)。结论辛伐他汀能改善肾脏纤维化病变,可能与其抑制Wnt4/β-catenin信号通路的激活和传导有关。     

甜菜碱通过IGF-1R/β-catenin信号通路介导对2型糖尿病大鼠骨流失的保护作用

目的探讨甜菜碱(betaine,TCJ)对2型糖尿病大鼠骨量流失的影响,并探讨可能的机制。方法30只大鼠被随机分为对照组(CON)、模型组(MOD)及甜菜碱组(TCJ),每组10只,其中对MOD组和TCJ组建立2型糖尿病模型。随后TCJ组大鼠每天接受50 mg/kg甜菜碱治疗12周,待治疗结束后通过Micro-CT检测、HE染色切片以及蛋白质印迹检测。结果治疗12周后,与MOD组相比,三点弯曲试验、Micro-CT和HE染色切片结果显示TCJ组的大鼠骨小梁数量、骨强度和骨密度得到明显改善(P<0.05)。TCJ组大鼠最大载荷和弹性模量、骨密度(bone mineral density,BMD)、TV/BV、Tb.N、Tb.Th和Tb.Sp较MOD组明显改善(P<0.05)。和MOD组比较,TCJ组β-catenin表达水平明显上调,而p-IGF-1R、p-GSK-3β、p-β-catenin、IGF-1R和GSK-3β表达水平显著下调,比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论甜菜碱通过IGF-1R/β-catenin信号通路介导对2型糖尿病大鼠骨流失起到保护作用。