基于TLR4/NF-κB/NLRP3通路探讨补阳还五汤调控巨噬细胞极化的作用机制

目的：基于Toll样受体4(TLR4)/核转录因子-κB(NF-κB)/核苷酸结合寡聚化结构域样受体3(NLRP3)通路探讨补阳还五汤调控巨噬细胞极化的作用机制。方法：本实验通过采用不同浓度(0、1.25、2.5、5、10、20、40、80 mg·L^-1)脂多糖(LPS)对RAW264.7巨噬细胞干预24 h,细胞增殖与活性检测(CCK-8)法检测RAW264.7巨噬细胞存活率,筛选最适浓度建立体外LPS诱导RAW246.7巨噬细胞炎症模型。将实验分为空白组(20%空白血清),模型组(20%空白血清+10 mg·L^-1LPS),模型对照组(20%FBS+10mg·L^-1LPS),低、中、高(5%、10%、20%)补阳还五汤含药血清组及NLRP3抑制剂MCC950(50μmol·L^-1)、活性氧(ROS)抑制剂NAC(10μmol·L^-1)、NF-κB抑制剂PDTC(10μmol·L^-1)联合补阳还五汤高剂量(20%)组。酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测...     

基于AMPK-mTOR 信号通路探讨通心络胶囊通过调节自噬改善高糖环境下H9c2 心肌细胞损伤的机制

目的 采用高糖诱导H9c2心肌细胞损伤建立糖尿病心肌病(DCM)细胞模型,观察通心络胶囊对H9c2细胞的保护作用并探讨其可能机制。方法 以葡萄糖不同浓度(45、65、75、100 mmol·L^-1)及75 mmol·L^-1葡萄糖+通心络胶囊不同浓度(20、40、80、160、300μg·mL^-1)分别处理H9c2细胞24 h,采用CCK-8法测定细胞存活率。将H9c2细胞分为对照组、模型组(75 mmol·L^-1葡萄糖)、通心络胶囊组(75 mmol·L^-1葡萄糖+160μg·mL^-1通心络胶囊),给药干预24 h。采用DCFH-DA荧光探针法检测细胞活性氧(ROS)水平;JC-1荧光探针法检测细胞线粒体膜电位;ELⅠSA法检测细胞乳酸脱氢酶(LDH)及丙二醛(MDA)水平;Western Blot法检测细胞自噬蛋白(P62、Beclin-1、LC3Ⅱ/Ⅰ)及AMPK-mTOR信号通路蛋白的表达。结果 75 mmol·L^-1葡萄糖浓度...     

蒺藜皂苷对白细胞介素-1β诱导的软骨细胞凋亡和炎症因子分泌的影响

目的:观察蒺藜皂苷对白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)诱导的软骨细胞凋亡和炎症因子分泌的影响,并探讨其作用机制。方法:(1)软骨细胞培养和转染。采用DMEM培养液培养小鼠软骨细胞(ATDC5细胞),培养后采用转染试剂分别转染pcDNA-circ＿0045714、pcDNA、si-circ＿0045714、si-NC。(2)蒺藜皂苷浓度筛选。将ATDC5细胞接种于96孔板中,一组正常培养(正常组),一组加入10 ng·mL^-1的IL-1β(IL-1β组),其他组在加入10 ng·mL^-1 IL-1β的基础上分别加入浓度为25μg·mL^-1、50μg·mL^-1、100μg·mL^-1、200μg·mL^-1、400μg·mL^-1的蒺藜皂苷。培养后计算软骨细胞存活率,并确定后续实验蒺藜皂苷的浓度。(3)软骨细胞增殖抑制率检测。将ATDC5细胞分为对照组、IL-1β组、IL-1β+蒺藜皂苷低剂量组、IL-1β+蒺藜皂苷中...     

脑心通调控NLRP3/Caspase-1通路抑制脂多糖诱导的BV2细胞焦亡

目的:探索脑心通醇提物对脂多糖(LPS)诱导的小胶质细胞BV2焦亡的影响,并通过NOD样受体热蛋白结构域3(NLRP3)/半胱氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)通路阐释其可能的作用机制。方法:LPS(1 mg·L^-1)体外诱导BV2细胞的同时,加入不同质量浓度脑心通醇提物(2,10,50 mg·L^-1)干预后,分别采用MTS法检测细胞活性,实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测白细胞介素-1β(IL-1β),肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和NLRP3的mRNA水平;免疫荧光法检测NLRP3蛋白表达的情况;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测NLRP3/Caspase-1通路关键蛋白表达。结果:与空白组比较,LPS(1 mg·L^-1)能明显降低BV2细胞活性,显著升高IL-1β,TNF-α及NLRP3 mRNA表达水平(P<0.01),且可提升NLRP3蛋白表达水平以及Caspase-1剪切体和前体蛋白的比值(Caspase-1 p20/Caspase-1)。与LPS组比较,脑心通醇提物(2,10,50 mg·L^-1)干预后,逆转了LPS导致的细胞活性降低(P<0.01),50 mg·L^-1脑心通醇提物可显著降低IL-1β,TNF-α及NLRP3 mRNA表达水平(P<0.05,P<0.01),显著降低LPS诱导的NLRP3的高表达以及Caspase-1 p20/Caspase-1(P<0.01)。结论:脑心通能明显抑制LPS诱导的小胶质细胞焦亡,其作用机制与NLRP3/Caspase-1通路密切相关。     

白藜芦醇抑制TXNIP/NLRP3信号通路改善脂多糖诱导的肾小管上皮细胞炎性损伤

[目的]观察白藜芦醇对脂多糖诱导的肾小管上皮细胞(HK-2)炎性损伤的保护作用,及其对TXNIP/NLRP3炎性通路的影响。[方法]采用脂多糖(LPS,1 mg/L)体外诱导HK-2细胞炎性损伤模型,将细胞分为正常对照组、LPS诱导组、LPS+低剂量(50μmol/L)白藜芦醇组、LPS+中剂量(100μmol/L)白藜芦醇组、LPS+高剂量(200μmol/L)白藜芦醇组;CCK8法检测HK-2细胞相对存活率,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测炎性因子白介素-6(IL-6)、白介素-1β(IL-1β)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,Western Blot方法分析诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、环氧酶-2(COX-2)、人硫氧还蛋白互作蛋白(TXNIP)及人隐热蛋白(NLRP3)表达。[结果]与LPS诱导组比较,不同浓度白藜芦醇干预的HK-2细胞相对存活率明显升高(P0.05),细胞上清炎性因子IL-6、IL-1β及TNF-α水平明显降低(P0.05),细胞中炎性蛋白iNOS及COX-2表达水平显著降低(P0.05);细胞中TXNIP及NLRP3蛋白表达也显著降低(P0.05),并表现出剂量依赖性。[结论]白藜芦醇可以明显抑制LPS诱导的HK-2细胞炎症损伤,抑制炎症相关蛋白的表达,其作用机制可能与抑制TXNIP/NLRP3炎性通路活化相关。     

苦参水提物激活Nrf2/HO-1信号通路抑制炎症和氧化应激机制研究

目的研究苦参水提物(WSF)抑制脂多糖(LPS)诱导大鼠巨噬细胞RAW264.7炎症和氧化应激的分子机制。方法采用CCK-8法检测WSF对RAW264.7细胞的最佳给药质量浓度;以LPS刺激RAW264.7细胞制备体外炎症模型,随机分为对照组、模型组、WSF组和WSF对照组,流式细胞术检测活性氧(ROS)及一氧化氮(NO)水平,通过荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blotting检测诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、环氧合酶-2(COX-2)、核转录因子E2相关因子2(Nrf2)和血红素加氧酶-1(HO-1)在分子水平上的变化;最后检测细胞培养上清中细胞因子白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和IL-10的含量。结果通过CCK-8实验确定WSF质量浓度为0.01 mg/mL对细胞无毒性。与对照组比较,LPS刺激能够显著地增加细胞中NO和ROS产生,IL-6和TNF-α水平也明显升高,iNOS和COX-2蛋白表达水平明显提高(P0.01、0.001),而Nrf2和HO-1蛋白表达水平降低(P0.05)。与模型组比较,WSF干预后细胞NO、ROS、IL-6和TNF-α水平显著降低,iNOS和COX-2蛋白表达水平显著降低(P0.05、0.01、0.001),Nrf2和HO-1蛋白表达水平和IL-10水平显著升高(P0.05、0.01、0.001)。结论 WSF可通过激活Nrf2/HO-1通路在LPS诱导的RAW264.7细胞炎症和氧化应激反应中发挥保护效应。     

没药甾酮下调TLR4/NF-κB通路减轻脓毒症相关性脑病神经炎症反应机制探究

目的 探讨没药甾酮（GS）下调Toll样受体4(TLR4)/核转录因子-κB(NF-κB)通路减轻脓毒症相关性脑病（SAE）神经炎症反应的机制。方法 采用脂多糖（LPS）诱导小鼠小胶质细胞系（BV2细胞）制备脓毒症相关性脑病细胞模型。在此细胞模型中,通过CCK-8法检测BV2细胞的增殖凋亡情况,确定LPS和GS的最佳给药浓度;在此给药浓度基础上分为空白对照组（NC组）、LPS组及LPS+GS组,采用Western blotting法检测给药6、12、24 h后TLR4/NF-κB通路关键蛋白的表达情况;最后,采用ELISA法检测细胞因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、转化生长因子-β(TGF-β)、白细胞介素-10(IL-10)的表达情况。结果 当LPS浓度≥3μg/mL和GS浓度>30μg/mL时细胞增殖被显著抑制（P <0.01）,选择LPS(3μg/mL)和GS(30μg/mL)作为联合给药浓度,在此浓度基础上联合给药最长至168 h,BV2细胞增殖仍稳定,故选择此浓度作为最佳给药浓度。与NC组相比,LPS诱导后各时间点TLR4/NF-...     

熄风制动汤对脂多糖诱导小鼠小胶质细胞炎症反应的作用研究

目的 探究熄风制动汤对脂多糖(LPS)诱导的小鼠小胶质细胞(BV-2 细胞)炎症反应的作用。方法 将 BV-2 细胞设置为Control组、LPS组及熄风制动汤组。Control组加入达尔伯克改良伊格尔(DMEM)培养基,LPS组以0.1 mg/L浓度对BV-2细胞进行诱导炎症反应,熄风制动汤组分别以浓度为 12.5、25、50、100、200、400 mg·L^-1的熄风制动汤进行相应干预。采用CCK-8 法观察熄风制动汤对 BV-2 细胞活力的影响;ELISA 法检测细胞上清中一氧化氮(NO)水平;real-time PCR 检测 BV-2 细胞炎症因子水平的表达;Western blot 法及免疫荧光染色法检测一氧化氮诱导合酶(iNOS)、精氨酸-1(Arg-1)蛋白的表达。结果 熄风制动汤不同剂量组或 LPS 组培养 BV-2 细胞后,对其活力无明显影响(P>0.05)。与 Control 组比较,LPS 组 NO 的释放显著增加(P<0.001);M1 型小胶质细胞产物肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)、白介素-1β(IL-...     

黄芪甲苷对脂多糖诱导人胃黏膜上皮细胞GES-1的抗炎作用及机制研究

目的研究黄芪甲苷对脂多糖(LPS)诱导的人胃黏膜上皮细胞GES-1的抗炎作用及有关机制。方法采用LPS不同浓度(0.25、0.5、1、1.5、2μg·mL~(-1))及时间(15、30、45、60、120 min)诱导GES-1细胞炎症反应,筛选LPS诱导的合适浓度、时间。将GES-1细胞分为空白对照组、模型组及黄芪甲苷0.1、1、10μg·mL~(-1)浓度组;黄芪甲苷预处理2 h后,以筛选出的LPS浓度、时间诱导GES-1细胞。采用MTS法检测细胞存活率;采用ELISA法检测细胞上清液中白细胞介素6(IL-6)的含量;采用RT-qPCR法检测细胞诱导型一氧化氮合酶(i NOS)、环氧合酶2(COX-2)mRNA的表达;采用Western Blot法检测细胞丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路相关蛋白(Erk、Jnk/SAPK、P38 MAPK)的磷酸化水平。结果选择0.25μg·mL~(-1)及30 min作为LPS诱导GES-1细胞炎症模型的浓度及时间。黄芪甲苷浓度≤100μg·mL~(-1)时对GES-1细胞存活率无明显影响。与空白对照组比较,模型组细胞的炎症因子IL-6水平明显升高(P0.01),iNOS、COX-2 mRNA表达水平明显升高(P0.01),p-P38、p-Jnk、p-Erk蛋白表达明显上调(P0.001)。与模型组比较,0.1、1、10μg·mL~(-1)不同浓度黄芪甲苷组的细胞IL-6水平均明显降低(P0.01),iNOS及COX-2(10μg·mL~(-1)浓度组)mRNA表达均明显下调(P0.01),p-P38(1、10μg·mL~(-1)浓度组)及p-Jnk(0.1、10μg·mL~(-1)浓度组)、p-Erk(0.1、10μg·mL~(-1)浓度组)蛋白表达均明显下调(P0.05,P0.01,P0.001)。结论黄芪甲苷可能通过抑制MAPK信号通路的激活来抑制LPS诱导的GES-1细胞炎症相关因子产生,从而发挥抗炎作用。     

掌叶半夏凝集素蛋白刺激巨噬细胞的致炎作用研究

为探索掌叶半夏凝集素蛋白(PPL)刺激巨噬细胞诱导炎症的作用与炎症小体NLRP3的相关性。采用凝胶色谱纯化掌叶半夏凝集素蛋白并采用SDS-PAGE凝胶电泳分析其纯度;采用ELISA法以IL-1β为指标考察PPL刺激巨噬细胞释放炎症因子的影响;采用荧光探针DCFH-DA荧光酶标仪检测PPL刺激巨噬细胞后活性氧ROS的水平变化;以ROS抑制剂NAC(N-乙酰半胱氨酸)预处理巨噬细胞,考察PPL刺激ROS的过量生成与炎症因子IL-1β大量释放的相关性;采用Western Blot方法检测PPL对炎症小体生成相关的Caspase-1 p20,NLRP3,TXNIP,ASC等蛋白的表达水平变化。结果显示分离纯化的PPL达到电泳纯;PPL刺激巨噬细胞后引起ROS过量释放,引起强烈的氧化应激反应,胞内炎症因子IL-1β含量显著升高;NAC可抑制PPL导致的ROS过量生成,且IL-1β释放也显著降低。同时PPL可诱导胞内Caspase-1 p20,NLRP3,ASC蛋白表达升高,TXNIP表达显著降低。研究结果表明,PPL刺激巨噬细胞可导致强烈的氧化应激反应,同时能够激活炎症小体NLRP3,导致IL-1β大量生成释放,即PPL能够通过ROS-TXNIP-NLRP3-IL-1β信号通路促进IL-1β的成熟和分泌,导致炎症级联反应。     

地参多糖抗人恶性黑色素瘤的作用及机制研究

目的 探讨地参多糖(LLP)抗人恶性黑色素瘤A375细胞的作用及机制。方法 在LLP(0、10、20、30,60 mg·mL^-1)干预A375细胞24、48、72 h后，采用CCK-8法检测细胞的增殖。在LLP(0、30、60 mg·mL^-1)干预A375细胞24、48 h后，采用划痕实验检测细胞迁移能力；干预48 h后，采用Transwell小室检测细胞侵袭能力；流式细胞术检测细胞周期及凋亡；Real-Time PCR法检测细胞凋亡、周期相关基因的表达；Western Blot法检测细胞凋亡、周期相关蛋白的表达。结果 与对照组相比，LLP在10～60 mg·mL^-1范围对A375细胞的增殖具有显著抑制作用，细胞存活率显著降低(P<0.05,P<0.01)，且呈浓度、时间依赖性；30、60 mg·mL^-1LLP处理细胞48 h后划痕宽度明显增加(P<0.05,P<0.01);LLP 30、60 mg·mL^-1组穿过小室的细胞数量均显著减少(P<...     

五味子乙素对内毒素诱导脓毒症模型的抗炎作用及机制研究

目的:探讨五味子乙素对内毒素(LPS)诱导的脓毒症模型的抗炎作用及机制。方法:将浓度为0～16μmol/L不等的五味子乙素预处理RAW 264.7细胞1 h后,1μg/mL LPS诱导脓毒症,分为模型组(单用LPS)及不同浓度(2、4、8、16μmol/L)五味子乙素组。Griess法测定一氧化氮(NO)水平,MTT法测定细胞存活率,实时PCR法测定细胞TLR4/NF-κB/MyD88通路的mRNA表达。并考察五味子乙素对注射LPS小鼠生存率及血清IL-1β、TNF-α含量的影响。结果:五味子乙素可抑制LPS诱导的RAW 264.7细胞分泌PGE_2、NO、IL-1β、TNF-α、IL-6、HMGB1,下调MyD88、TLR4 mRNA及蛋白的表达,降低LPS激活的RAW 264.7细胞中MAPKs的磷酸化,并能提高LPS作用下小鼠存活率和降低小鼠血清IL-1β、TNF-α的含量。结论:五味子乙素对LPS诱导的炎症和脓毒症具有抗炎作用,其通过TLR4/NF-κB/MyD88信号通路防治内毒素诱导的脓毒症,可能是一种新型的抗炎和免疫抑制药。     

常春藤皂苷元对葡聚糖硫酸钠诱导小鼠溃疡性结肠炎的作用及机制研究

目的 研究常春藤皂苷元对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导小鼠溃疡性结肠炎(UC)的作用及其机制。方法 (1)体外实验：用不同浓度(0、2.5、5、10、20、40μmol·L^-1)常春藤皂苷元处理RAW264.7细胞24 h后,采用MTT法检测细胞存活率。将RAW264.7细胞分为：空白组、脂多糖(LPS)组(1μg·L^-1)、LPS+2.5μmol·L^-1常春藤皂苷元组、LPS+5μmol·L^-1常春藤皂苷元组和LPS+10μmol·L^-1常春藤皂苷元组;采用LPS干预24 h建立体外细胞炎症模型,并用常春藤皂苷元共孵育24 h进行干预。采用ELISA法测定细胞上清液中白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平;Western Blot法检测细胞中TLR4/NF-κB通路相关蛋白的表达水平。(2)体内实验：将C57BL/6小鼠随机分为空白组、模型组、柳氮磺吡啶组(200 mg·kg^-1)及常春藤皂苷元低、中、高剂量组(12.5、2...     

豨莶草醇提物调控TLRs/NF-κB通路及NLRP3炎症小体干预痛风性关节炎的机制研究

目的探讨豨莶草醇提物通过Toll样受体(TLRs)/核因子κB(NF-κB)信号通路及NOD样受体蛋白3(NLRP3)干预痛风性关节炎(GA)的作用机制。方法采用脂多糖(LPS)联合尿酸钠结晶(MSU)刺激急性单核细胞白血病细胞(THP-1)源性巨噬细胞,建立GA炎症细胞模型;以豨莶草醇提物300、200、100μg·mL^-1不同浓度进行干预。采用CCK-8法检测细胞活力;ELISA法检测细胞上清中白细胞介素-1β(IL-1β)的水平;qRT-PCR法检测TLRs/NF-κB信号通路相关基因(TLR2、TLR4、MYD88、IRAK-1、TRAF-6、TAK-1、NF-κB、IL-1β)及NLRP3 m RNA的表达;Western Blot法检测NF-κB、NLRP3、IL-1β蛋白的表达。结果与对照组比较,豨莶草醇提物300、200、100μg·mL^-1浓度对THP-1巨噬细胞活力均无明显影响(P>0.05);模型组的IL-1β水平明显升高(P<0.05),TLRs/NF-κB信号通路相关基因及NLRP3 mRNA表达水平均明显上调(P<0.05),NF-κB、NLRP3、IL-1β蛋白表达水平明显上调(P<0.05)。与模型组比较,豨莶草醇提物300、200、100μg·mL^-1浓度组的细胞IL-1β水平明显降低(P<0.05),TLRs/NF-κB信号通路相关基因及NLRP3 mRNA表达水平均不同程度下调(P<0.05),NF-κB、NLRP3及IL-1β蛋白表达水平亦不同程度下调(P<0.05)。结论豨莶草醇提物可能通过调控TLRs/NF-κB信号通路及抑制NLRP3炎症小体活化,减少炎症因子的产生与释放,进而减轻痛风性炎症反应。     

乌蔹莓醇提物对LPS诱导RAW264.7细胞炎症模型的抗炎作用

目的 探讨乌蔹莓70%醇提物对脂多糖(LPS)诱导RAW264.7细胞炎症模型的作用及其机制。方法 MTT法观察不同质量浓度乌蔹莓醇提物对RAW264.7细胞活性的影响，筛选合适的实验剂量。以LPS(1μg/mL)诱导建立细胞炎症模型，同时加入30、60、120μg/mL乌蔹莓醇提物进行处理，24 h后Griess法检测细胞上清液NO水平，DCFH-DA荧光探针检测细胞内ROS水平，ELISA法检测细胞上清液PGE₂、TNF-α、IL-6、IL-1β水平，RT-qPCR法检测细胞TNF-α、IL-6、IL-1β mRNA表达，Western blot法检测细胞iNOS、COX-2、NF-κB p65、p-NF-κB p65、Akt、p-Akt、p38 MAPK、p-p38 MAPK蛋白表达。结果 乌蔹莓醇提取物质量浓度在180μg/mL及以下时对RAW264.7细胞存活率无明显变化(P>0.05)。与模型组比较，乌蔹莓醇提物组细胞内ROS水平及上清液NO、PGE₂、TNF-α、IL-6、IL-1β水平均降低(P<0.01),细胞T...     

麻芍平喘汤通过PI3K/Akt/mTOR信号通路抑制气道上皮细胞自噬

目的：探讨麻芍平喘汤（MSPC）通过磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路对脂多糖（LPS）诱导的人支气管气道上皮样细胞（16HBE）自噬的影响。方法：选用人支气管上皮细胞16HBE作为研究对象,采用细胞增殖与活性检测（CCK-8）法检测LPS诱导的16HBE活性影响和麻芍平喘含药血清对16HBE细胞活性影响;以CCK-8法筛选出的适宜条件的LPS诱导16HBE细胞,并测定肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量鉴定模型成立,制备麻芍平喘汤含药血清作用于LPS诱导的16HBE,将细胞分为正常组、LPS组、LPS+MSPC组、LY294002+LPS组、LY294002+LPS+MSPC组。透射电镜观察细胞的自噬囊泡和超微结构的变化;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测细胞PI3K、磷酸化PI3K(p-PI3K)、Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR及微管相关蛋白1轻链3B(LC3B)的蛋白表达水平;酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测5组炎症因子白细胞介素（IL）-5、IL-6、TNF-α、IL-10的表达水平。结果：...     

龙牙楤木总皂苷及楤木皂苷A对缺氧/复氧诱导的AC16心肌细胞铁死亡的影响

目的 探讨龙牙楤木总皂苷及其组分楤木皂苷A能否减轻缺氧/复氧诱导的AC16心肌细胞铁死亡。方法 将AC16细胞随机分为正常组、模型组、龙牙楤木总皂苷组、楤木皂苷A组。通过缺氧24小时、复氧12小时建立AC16细胞缺氧/复氧模型,药物组缺氧/复氧损伤前6小时给予药物处理。CCK-8检测细胞存活率,乳酸脱氢酶检测试剂盒检测细胞受损程度,透射电子显微镜观察AC16细胞形态学变化,比色法检测Fe²⁺水平,酶联免疫试剂盒检测丙二醛(malondialdehyde,MDA)和谷胱甘肽(glutathione,GSH)水平,DHE荧光探针检测活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平,蛋白免疫印迹法检测铁死亡相关蛋白p53、SLC7A11、SAT1、GLS2的表达。结果 与正常组相比,模型组AC16细胞存活率明显下降,细胞受损程度明显升高,细胞内的线粒体皱缩、内嵴增厚、膜电子密度增高,Fe²⁺、ROS、MDA水平明显上升,GSH活力明显下降,铁死亡相关蛋白p53、SAT1、GLS2蛋白表达明显升高,SLC7A11蛋白表达明显降低,...     

川陈皮素调节AMPK/NLRP3信号通路对脂多糖诱导的肾小球系膜细胞炎性损伤的影响

目的 探讨川陈皮素(Nobiletin)调节AMP激活的蛋白激酶(AMPK)/NOD样受体蛋白3(NLRP3)信号通路对脂多糖(LPS)诱导的肾小球系膜细胞HBZY-1炎性损伤的影响。方法 将HBZY-1细胞分为5组：正常组、LPS组(100 ng·m L^-1LPS)、川陈皮素组(100 ng·m L^-1LPS+40μmol·L^-1川陈皮素)、AMPK/NLRP3信号通路抑制剂雷帕霉素组(100 ng·m L^-1LPS+0.5μmol·L^-1雷帕霉素)、川陈皮素+雷帕霉素组(100 ng·m L^-1LPS+40μmol·L^-1川陈皮素+0.5μmol·L^-1雷帕霉素)。MTT法检测HBZY-1细胞毒性和增殖;ELISA法检测HBZY-1细胞白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)含量;流式细胞术检测细胞凋亡;Western...     

毛蕊异黄酮对氧糖剥夺再灌注BV2 小胶质细胞极化的影响

目的 探讨毛蕊异黄酮对氧糖剥夺再灌注BV2小胶质细胞极化的影响。方法 将对数生长期BV2细胞随机分为6组：正常组、模型组、尼莫地平组(5μg·mL^-1)、毛蕊异黄酮高剂量组(20μg·mL^-1)、毛蕊异黄酮中剂量组(10μg·mL^-1)、毛蕊异黄酮低剂量组(5μg·mL^-1)。氧糖剥夺3 h后,各给药组换成含药的完全培养基,复氧6 h。采用CCK-8法检测细胞活力;测定细胞上清液中的一氧化氮(NO)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、IL-10含量;免疫荧光双染法检测BV2细胞极化;WesternBlot法检测BV2细胞的iNOS、CD206蛋白表达水平。结果 与正常组比较,模型组的BV2细胞活力显著降低(P<0.01),NO、TNF-α、IL-1β水平明显升高(P<0.05),IL-10水平明显降低(P<0.05);免疫荧光双染检测中M1型小胶质细胞标记物iNOS表达显著增强(P<0.01);Western Blot检测中iNOS蛋白表达明显上调(...     

小钻木脂素类化合物戈米辛R的体外抗炎机制研究

目的 通过脂多糖(LPS)诱导活化小鼠单核巨噬细胞系RAW264.7建立炎症模型,探讨小钻木脂素类化合物戈米辛R对炎症细胞增殖及炎症因子分泌的影响,评价其抗炎活性及机制。方法 采用MTT比色法检测经LPS诱导的RAW264.7细胞存活率并计算半数抑制浓度(IC₅₀);采用ELISA法检测细胞上清液TNF-α、IL-1β、IL-6等炎症因子含量;利用RT-PCR法检测细胞TNF-α、IL-1β、IL-6、IκB-α、NF-κB p65的mRNA表达量;Western blot法检测细胞IκB-α及NF-κB p65蛋白表达量。结果 与LPS模型组比较,戈米辛R可显著抑制LPS诱导的RAW264.7细胞增殖;降低细胞分泌TNF-α、IL-1β及IL-6的含量;升高LPS所致降低的IκB-α mRNA的表达量同时降低LPS引起升高的TNF-α、IL-1β、IL-6、NF-κB p65的mRNA表达量;升高IκB-α并降低NF-κB p65的蛋白表达量,显示出良好的剂量依赖性,具有统计学差异(P<0.05)。结论 戈米辛R可通过抑制TNF-α、IL-1β、IL-6、NF-κB p65的mRNA和NF-κB p65蛋白的表达,增加IκB-α mRNA和IκB-α蛋白的表达,减少致炎因子TNF-α、IL-1β、IL-6的释放,从而发挥显著抗炎活性。