鳖甲煎丸抑制肝癌细胞增殖、黏附及侵袭作用的实验研究

目的 研究鳖甲煎丸对肝癌细胞生长增殖、黏附及侵袭能力的影响,初步探讨鳖甲煎丸抗肝癌细胞的转移、侵袭作用机制。方法 运用血清药理学方法,以高、中剂量的鳖甲煎丸含药血清和空白血清分别培养肝癌细胞HepG2,采用MTT 比色法、细胞黏附实验和transwell侵袭实验检测药物对细胞生长、黏附和侵袭作用的影响,以进一步阐明鳖甲煎丸抗肝癌细胞的转移、侵袭作用机制。结果 高剂量和中剂量含药血清可显著抑制肝癌细胞生长增殖,对基底膜的黏附及侵袭穿越迁移亦有抑制作用,且该作用与药物浓度有关。结论 鳖甲煎丸能显著抑制肝癌细胞的生长增殖、黏附及转移侵袭。     

鳖甲煎丸抗肝癌的作用机制和临床研究进展

鳖甲煎丸出自《金匮要略》，临床应用2 000余年，是治疗肝系疾病的经典名方，现代药理研究表明具有抗肿瘤、抗纤维化、增强免疫等作用，广泛应用于肝纤维化、肝炎、肝损伤等疾病的治疗。近年来，越来越多研究表明鳖甲煎丸在恶性肿瘤尤其是肝癌的治疗中有一定疗效，部分医家将其应用到肝癌的辅助治疗中，收获了良好疗效。该文归纳整理近20年文献，从调控细胞生物学行为、抗肝癌前病变、抑制肿瘤新生血管生成、调控信号通路、抑制相关酶活性、调节机体免疫等6个方面总结鳖甲煎丸抗肝癌的作用机制，发现鳖甲煎丸具有抗肝癌细胞增殖、促进肝癌细胞凋亡、抗肝癌细胞侵袭转移、抑制肝癌新生血管生成、增强机体免疫等作用，并参与调控Wnt/β-连环蛋白（β-catenin）、白细胞介素-6/信号传导及转录激活蛋白3（IL-6/STAT3）、NOD样受体3（NLRP3）炎症小体、JAK酪氨酸蛋白激酶-信号传导和转录激活因子（JAK-STAT）、Delta样配体4-Notch（DLL4-Notch）、核转录因子-κB（NF-κB）、Rho激酶（Rho/ROCK）、转化生长因子-β/Smad（TGF-β/Smad）、磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/糖原合成酶激酶-3β（PI3K/Akt/GSK-3β）等信号通路，从分子机制上证实了鳖甲煎丸具有有效的抗肝癌作用；并通过对鳖甲煎丸临床抗肝癌治疗用药进行总结，发现无论合并用药或单药治疗，均可明显改善患者症状，减轻治疗不良反应，提高患者生存时间，临床疗效确切，且长期应用无不良反应，安全性较高，可以在临床推广应用。该文通过分子机制及临床研究全面分析了鳖甲煎丸治疗肝癌的现状，并对当今实验及临床研究提出不足与改进，将为今后本方的深入研究和临床应用以及抗肿瘤新型药物的研发提供相关依据。     

基于PI3K/AKT/GSK-3β信号通路探讨鳖甲煎丸调控肝癌细胞Hep3B增殖转移的机制

目的:研究鳖甲煎丸对肝癌细胞Hep3B增殖和转移的影响,探讨其抗肝细胞癌的作用机制.方法:分别使用不同浓度的鳖甲煎丸药物血清培养肝癌细胞Hep3B,采用CCK8、细胞划痕实验观察肝癌细胞增殖和转移能力的改变;采用Western Blot检测PI3K、p-AKT、GSK-3β、p-GSK-3 β、E-cadherin、N...     

鳖甲煎丸抗肝癌转移的理论依据及分子机制探讨

转移和侵袭是肝癌的基本特征,也是影响肝癌治疗效果的重要因素。肝细胞癌的转移侵袭与Wnt/β-catenin信号通路密切相关。针对肝癌转移的病机特点,从扶正培本、解毒散结及活血化瘀等3个方面分析了鳖甲煎丸抗肝癌转移的防治原则和理论依据。在此基础上,深入探讨鳖甲煎丸干预肝细胞癌转移的作用机制和分子机制,对筛选肝细胞癌的预后指标和寻找新的治疗靶点、深化和完善肝细胞癌转移侵袭的基础理论研究具有十分重要的意义。     

鳖甲煎丸含药血清对SMMC-7721肝癌细胞凋亡的影响

目的研究鳖甲煎丸含药血清对SMMC-7721肝癌细胞凋亡的影响。方法采用MTT法检测鳖甲煎丸不同浓度含药血清(0%、2%、4%、6%、8%、10%、12%、14%、16%)对肝癌细胞增殖抑制作用;流式细胞术检测鳖甲煎丸含药血清对SMMC-7721细胞凋亡的影响;实时荧光定量PCR检测鳖甲煎丸含药血清对SMMC-7721细胞BAX、Bcl-2、STAT3 mRNA表达;Western blot法检测细胞BAX、Bcl-2、STAT3、p-STAT3蛋白表达。结果分别处理SMMC-7721细胞24、28 h,鳖甲煎丸含药血清能明显抑制肝癌细胞的增殖,具有浓度依赖性。鳖甲煎丸含药血清(5%、10%、15%)作用肝癌细胞24 h后,细胞总凋亡率显著增高(P0.01),随浓度增加而增高。与空白对照组比较,鳖甲煎丸含药血清(10%、15%)上调BAX mRNA表达(P0.05),而BAX蛋白表达不明显;除5%含药血清鳖甲煎丸组Bcl-2 mRNA外,鳖甲煎丸含药血清(5%、10%、15%)下调Bcl-2、STAT3 mRNA和蛋白表达,并能抑制STAT3磷酸化,升高BAX/Bcl-2比值(P0.05,P0.01)。结论鳖甲煎丸含药血清诱导SMMC-7721肝癌细胞发生凋亡可能与影响STAT信号通路有关。     

鳖甲煎丸的临床和实验研究进展

对鳖甲煎丸的现代临床应用和实验研究进展做一综述,为研究鳖甲煎丸抗肾脏纤维化作用奠定基础。目前鳖甲煎丸临床主要用于慢性肝脏疾病的治疗,实验研究多局限于抗肝纤维化研究。根据中医辨证论治的精神,借鉴鳖甲煎丸抗肝纤维化的研究成果,鳖甲煎丸抗肾纤维化的作用应该说是肯定的。但有关鳖甲煎丸抗肾纤维化的临床研究和实验研究尚未见报道。因此,进行鳖甲煎丸的临床研究,并从整体、细胞和分子水平探讨该方抗肾纤维化的可能作用机制,对扩大鳖甲煎丸的临床应用范围,揭示"久病入络"的深刻内涵,具有重要意义。     

鳖甲煎丸影响免疫性肝纤维化大鼠TNF-α表达的研究

目的:观察复方中药鳖甲煎丸对免疫性肝纤维化模型大鼠肝组织TNF-α表达的影响,分析鳖甲煎丸抗肝纤维化的治疗作用并探讨其作用机制;并通过与抗肝纤维化药物秋水仙碱对照,为临床防治肝纤维化用药提供科学依据。方法:雄性Wistar大鼠90只,随机分为6组:正常对照组、模型对照组、秋水仙碱预防组、秋水仙碱治疗组、鳖甲煎丸预防组、鳖甲煎丸治疗组,选用猪血清诱导免疫损伤性肝纤维化模型。各组于10周后取8只大鼠断头处死,取肝组织,免疫组化染色,用图像分析法检测TNF-α。结果:鳖甲煎丸能够从多个环节抑制肝脏纤维化病理改变,明显抑制TNF-α的表达,其作用接近或优于秋水仙碱。结论:鳖甲煎丸具有明显的抗肝纤维化作用。     

鳖甲煎丸对免疫性肝纤维化大鼠胶原及相关细胞因子表达的影响

目的:探讨鳖甲煎丸抗肝纤维化的作用机理.方法:选用猪血清诱导免疫损伤性肝纤维化模型,观察经方鳖甲煎丸对免疫性纤维化模型大鼠肝组织胶原及相关细胞因子表达的影响,分析鳖甲煎丸的治疗作用,并以西药秋水仙碱作对照.结果:鳖甲煎丸能够明显减少Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的表达,并能明显减少TGF-β1mRNA及PDGF-BB、bFGF等细胞因子的表达,作用接近或优于秋水仙碱.结论:鳖甲煎丸具有明显的抗纤维化作用,能够从多个环节抑制肝脏纤维化病理改变.     

鳖甲煎丸对人肝癌细胞Bel-7402VEGF/Dll4-Notch信号通路的影响

目的:观察鳖甲煎丸含药血清促进人肝癌细胞Bel-7402的凋亡作用,探讨其抑瘤作用与VEGF/Dll4-Notch信号通路之间的关系。方法:制备各浓度鳖甲煎丸大鼠含药血清,采用 AnnexinⅤ/PI双染色流式细胞术检测鳖甲煎丸对Bel-7402细胞凋亡的影响,Western blot方法检测细胞中VEGF、Dll4、NICD蛋白表达情况。结果:AnnexinⅤ/PI双染色流式细胞术结果表明鳖甲煎丸可有效促进肝癌细胞Bel-7402的凋亡;Western blot 结果显示鳖甲煎丸能降低VEGF、Dll4、NICD蛋白表达。结论:鳖甲煎丸可通过降低VEGF、Dll4、NICD蛋白表达,阻断VEGF/Dll4-Notch信号转导,抑制肿瘤血管生成,减少肿瘤血液供应,最终控制肿瘤生长。     

鳖甲煎丸化裁对肝癌22荷瘤小鼠抗肿瘤作用的实验研究

目的：研究鳖甲煎丸化裁对肝癌22荷瘤小鼠动物模型肿瘤抑瘤率、T淋巴细胞亚群的影响。方法：建立肝癌22荷瘤小鼠动物模型，随机分为5组，鳖甲煎丸化裁高剂量组、鳖甲煎丸化裁中剂量组、鳖甲煎丸化裁低剂量组、生理盐水组、正常组。通过测定荷瘤小鼠的瘤重、抑瘤率观察鳖甲煎丸化裁对肿瘤生长的影响；通过对荷瘤小鼠血液中T淋巴细胞亚群的变化来观察鳖甲煎丸化裁对其机体的免疫调节效应；通过对本实验各种指标的观察和研究来讨论鳖甲煎丸化裁高、中、低3个剂量在治疗肝癌22荷瘤小鼠动物模型肿瘤作用中的差异及优劣程度。结果：鳖甲煎丸化裁能使肝癌22荷瘤小鼠的瘤重减小，抑制肿瘤的生长，高、中、低组的平均抑瘤率分别为56．66％、48．11％、40．88％；鳖甲煎丸化裁高、中、低剂量组荷瘤小鼠血液内的CD4百分率、CD4／CD8比值均高于生理盐水组（P〈0．05），尤其中剂量组效果尤为突出；另外，鳖甲煎丸化裁中剂量组对荷瘤小鼠肿瘤包膜完整性控制最好。鳖甲煎丸化裁中剂量是对肝癌抑制及治疗作用的具体、有效、安全的优先剂量。结论：鳖甲煎丸化裁能明显抑制肝癌22荷瘤小鼠肿瘤的生长，其作用机制可能是增强荷瘤小鼠的体液免疫功能和细胞免疫功能。     

鳖甲煎丸通过TGF-β/Smad信号通路抑制DEN诱导肝癌大鼠上皮间质转化的机制

目的:通过研究鳖甲煎丸对二乙基亚硝胺(DEN)诱导肝癌模型大鼠中转化生长因子-β(TGF-β)/Smad通路信号分子及下游靶基因的影响,探讨鳖甲煎丸抗肝癌侵袭转移的分子机制。方法:大鼠分为正常组、模型组、鳖甲煎丸组(2.2 g·kg-1·d-1),对模型组及鳖甲煎丸组大鼠使用DEN进行腹腔注射,诱导大鼠肝脏发生肝炎-肝硬化-癌变病理改变,鳖甲煎丸组在肝硬化阶段给予鳖甲煎丸连续灌胃6周,收集血清及肝脏标本。采用试剂盒检测大鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT),天门冬氨酸氨基转移酶(AST),总胆红素(TBIL),白蛋白(Alb),γ-谷氨酰转肽酶(GGT),碱性磷酸酶(ALP);苏木素-伊红(HE)染色观察大鼠肝脏病变;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测转化生长因子(TGF)-β1的mRNA转录水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测TGF-β/Smad通路中TGF-β1,Smad2/3,磷酸化Smad2/3及上皮间质转化标志物N-钙黏蛋白(N-cadherin),E-钙黏蛋白(E-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)的蛋白表达水平。结果:鳖甲煎丸组与模型组之间肝功能指标差异均无统计学意义。与模型组比较,鳖甲煎丸能改善大鼠肝癌组织中细胞呈气球样变性、水肿、凝固性坏死的病理变化,降低肝癌组织中TGF-β1mRNA转录及蛋白表达水平(P0.01),下调磷酸化Smad2蛋白表达水平(P0.01),同时下调下游靶基因蛋白N-cadherin,Vimentin蛋白表达水平(P0.01)。结论:鳖甲煎丸可能通过减少肝癌组织中TGF-β1的表达水平,抑制由TGF-β/Smad通路激活介导的肝癌细胞上皮间质转化(EMT),从而达到抗肝细胞癌转移侵袭的作用。     

基于网络药理学研究鳖甲煎丸抗肝纤维化的作用机制

目的基于网络药理学研究鳖甲煎丸抗肝纤维化的作用机制。方法利用TCMSP、CTD、CNKI数据库获取鳖甲煎丸的主要化学成分及其对应靶点,Uniprot数据库将其转化为标准基因。通过CoolGene、GeneCards数据库获取肝纤维化相关靶点,将鳖甲煎丸成分靶点与疾病靶点进行匹配映射得到鳖甲煎丸抗肝纤维化的关键靶点。利用STRING网站获得关键靶点的PPI网络图,DAIVID数据库进行GO富集分析与KEGG信号通路分析,Cytoscape软件构建成分-靶点网络、疾病-中药-成分-靶点网络,计算网络拓扑参数。通过Systems Dock Web Site软件,将鳖甲煎丸核心成分与核心靶点进行分子对接验证。结果鳖甲煎丸治疗肝纤维化的关键成分有78种,包括β-谷甾醇、槲皮素、山柰酚等;关键靶点有80个,包括STAT3、肿瘤坏死因子(TNF)、白介素-6(IL-6)等。通过富集分析,得到丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)、TNF及磷脂酰肌醇-3-激酶-Akt(PI3K-Akt)等107条信号通路。结论鳖甲煎丸可通过多成分-多靶点-多途径来发挥抗肝纤维化的整体作用。     

鳖甲煎丸对二乙基亚硝胺诱导大鼠肝癌癌前病变的影响

目的:通过观察鳖甲煎丸对二乙基亚硝胺(DEN)诱导大鼠肝癌癌前病变组织及血清cyclin D1(细胞周期蛋白1)、CDK4(细胞周期蛋白依赖性激酶)、白细胞介素2(IL-2)、肿瘤坏死因子β(TNF-β)、自然杀伤细胞(NKC)数值改变,探讨鳖甲煎丸对大鼠细胞因子水平及肿瘤抑制的作用机理及抑制肝癌细胞增殖的机制。方法:选用136只SD大鼠,随机分为3组,正常对照组、模型组、鳖甲煎丸干预组,建立二乙基亚硝胺(DEN)诱导大鼠肝癌癌前病变组织短期动物模型,在制模过程中给予鳖甲煎丸制剂进行干预,通过观察大鼠动脉血清中TNF-β、IL-2、NKC、ALT、AST、AFP、TBIL的变化,免疫组化学染色观察各组大鼠肝组织内Cyclin D1、CDK4、TNF-β、IL-2的表达水平。结果:干预组组织学中Cyclin D1、CDK4、TNF-β、IL-2的表达水平显著低于模型组、对照组(P0.01),血清中TNF-β、IL-2、NKC、ALT、AST、AFP、TBIL也明显低于模型组及对照组。结论:鳖甲煎丸有预防或延缓DEN诱发大鼠肝癌的发生、发展作用,其机制可能通过抑制Cyclin D1、CDK4蛋白的表达,通过阻滞细胞周期,抑制肝癌细胞过度增殖,调整由TNF-β、IL-2和NKC介导的细胞炎症反应,改善肝癌细胞微环境,抑制肿瘤病理进程。鳖甲煎丸对肝癌裸鼠移植瘤的生长有明显的抑制作用。     

鳖甲煎丸对HepG2裸鼠移植瘤Wnt信号通路相关分子及靶基因的影响

目的:通过研究鳖甲煎丸对人肝癌Hep G2裸鼠移植瘤组织中Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路相关信号分子及靶基因表达的影响,探讨鳖甲煎丸抗肝细胞癌的分子机制。方法:建立裸鼠移植瘤肝癌模型,随机分为鳖甲煎丸高、中、低剂量(2.2,1.1,0.55 g·kg-1)组,模型组,正常组,肉眼观察鳖甲煎丸对人肝癌Hep G2裸鼠移植瘤生长的抑制作用,免疫组化检测移植瘤组织中β-catenin和T-框蛋白3(TBX3)的表达水平,免疫印迹法(Western blot)检测其移植瘤组织中p19ARF,双微基因2(MDM2),p53的表达水平。结果:鳖甲煎丸对人肝癌Hep G2裸鼠移植瘤生长具有明显的抑制作用,鳖甲煎丸能够抑制其移植瘤组织中β-catenin和TBX3的表达,和模型组比较,鳖甲煎丸高、中剂量组中β-catenin和TBX3表达均明显降低(P0.05)。同时,鳖甲煎丸能够促进人肝癌Hep G2裸鼠移植瘤组织p19ARF和p53表达,并抑制MDM2表达,鳖甲煎丸高、中剂量组p19ARF,p53,MDM2表达较模型组均有明显差异(P0.05)。结论:鳖甲煎丸能通过影响Wnt/β-catenin通路,调控β-catenin和TBX3的表达,继而通过调控TBX3/p19ARF/MDM2通路激活抑癌基因p53,最终抑制肝癌细胞的增殖并诱导其出现凋亡,从而达到抗肝细胞癌的目的。     

中医药防治肝癌复发转移作用机制的实验研究进展

随着对中医药防治肝癌复发转移机制的逐步深入研究发现，中医药可以通过抑制肝癌细胞的生长增殖、影响肿瘤转移相关基因、调控细胞基质降解酶的表达、调节免疫功能、抗多药耐药、抑制肝癌血管形成、抑制黏附侵袭能力、调控细胞信号通路等方面，干预肝癌细胞的转移与复发，有效提高了肝癌患者的生活质量及生存率。本文将围绕中医理论、实验研究整理汇总，对中医药防治肝癌复发转移作用机制的实验研究进展进行综述。     

鳖甲煎丸含药血清抑制肝癌细胞的miRNA-mRNA调控机制分析

目的探讨鳖甲煎丸干预肝癌细胞后miRNA/mRNA的表达变化和分子机制。方法 CCK-8法检测鳖甲煎丸含药血清干预肝癌细胞后的增殖活性变化,流式细胞术检测鳖甲煎丸含药血清对肝癌细胞细胞周期和凋亡率的影响,全细胞转录组学分析miRNA/mRNA表达变化,差异表达的miRNA和mRNA进行KEGG富集分析,构建miRNA-mRNA调控网络,通过荧光定量PCR和Western blot法验证PNMT和ST8SIA5表达。结果鳖甲煎丸含药血清可抑制肝癌细胞增殖活性,阻滞细胞生长于G_0/G_1期,还可促进细胞凋亡。全细胞转录组学分析找到差异表达的48个miRNA和168个mRNA。通过KEGG富集分析发现代谢通路是主要通路,PNMT和ST8SIA5是其调控的核心基因。鳖甲煎丸含药血清可抑制PNMT的表达和上调ST8SIA5的表达。结论 miRNA-mRNA调控网络是鳖甲煎丸抑制肝癌细胞增殖的分子机制,其中代谢通路是主要调控通路,PNMT和ST8SIA5是调控的核心基因。     

鳖甲煎丸对肝癌皮下转移瘤小鼠肿瘤新生血管及微环境的影响

目的研究鳖甲煎丸对肿瘤新生血管结构及功能、肿瘤微环境的影响。方法建立Hepa1-6小鼠肝癌皮下转移瘤模型,将造模成功小鼠随机分为鳖甲煎丸组、贝伐单抗组和对照组,每组15只。鳖甲煎丸组按6 g/(kg·d)予鳖甲煎丸混悬液灌胃,贝伐单抗组腹腔注射贝伐珠单抗注射液5 mg/(kg·d),对照组腹腔注射等量生理盐水,各组连续干预14天。14天后剥取肿瘤组织,免疫组织化学染色法检测肿瘤组织微血管密度计数、周细胞覆盖率和血管基底膜面积,Evans blue法检测血管通透性,免疫荧光检测肿瘤组织的乏氧区域面积。结果与对照组比较,贝伐单抗组和鳖甲丸组微血管密度计数、Evans blue染料含量及乏氧区域面积均降低,周细胞覆盖及基底膜面积均升高(P<0.05或P<0.01)。鳖甲煎丸组Evans blue染料含量及乏氧区域面积较贝伐单抗组高(P<0.01)。贝伐单抗组和鳖甲丸组微血管密度计数、周细胞覆盖及基底膜面积差异均无统计学意义(P>0.05)。结论鳖甲煎丸对Hepa1-6小鼠肝癌皮下转移瘤具有促使血管结构和功能正常化作用,能够改善肿瘤组织的乏氧状态。     

鳖甲煎丸的临床应用与实验研究进展

综述并分析鳖甲煎丸在临床应用及动物实验等方面的文献,反映5年来鳖甲煎丸在动物实验和临床研究中的最新进展及研究概况.显示鳖甲煎丸临床上可用于治疗肝炎、肝硬化、心绞痛、高血脂症等,实验证明鳖甲煎丸具有抗肿瘤、抗肝纤维化及抗肾间质纤维化作用,但鳖甲煎丸作用绝不仅仅局限于此.根据中医辨证论治原则有必要对鳖甲煎丸进行深入系统的临床及实验研究,阐明其作用机制,为其临床应用提供现代科学依据.     

鳖甲煎丸对肝癌细胞Bcl-2、Bax表达及IL-6/Stat3信号通路的影响

目的探讨鳖甲煎丸对H22小鼠肝癌细胞的作用机制,并对其相关信号通路进行研究。方法制造H22肝癌移植瘤模型,对荷瘤鼠瘤重、胸腺指数进行检测;采用酶联免疫吸附测定(Elisa)法对荷瘤鼠血清IL-6检测;免疫组织化学法检测H22细胞中Stat5b蛋白表达;应用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测鳖甲煎丸对H22细胞的Bcl-2、Bax和Stat3 mRNA表达的影响,蛋白免疫印迹(Western blot)法检测Bax、Bcl-2、Stat3和p-Stat3的蛋白表达。结果与模型对照组相比,鳖甲煎丸降低H22荷瘤鼠瘤重(P0.01),提高胸腺指数(P0.05),降低IL-6的含量(P0.01),具有剂量依赖性;鳖甲煎丸上调Bax mRNA和蛋白表达(P0.01),下调Bcl-2 mRNA和蛋白的表达(P0.01);鳖甲煎丸抑制Stat3 mRNA和Stat3、Stat5b蛋白表达(P0.01),p-Stat3蛋白表达也下调(P0.05)。结论鳖甲煎丸可能通过下调Bcl-2,上调Bax基因表达,并抑制IL-6/Stat信号通路,发挥其抗肿瘤作用。