黄地安消胶囊调控IRS-1/PI3K/Akt/GSK-3β信号通路改善HepG2细胞胰岛素抵抗

目的:观察黄地安消胶囊改善HepG2细胞胰岛素抵抗的分子生物学机制.方法:MTT实验分离出黄地安消胶囊含药血清最佳作用浓度和作用时间,免疫荧光技术检测p-IRS-1、PI3 K、p-Akt、p-GSK-3β的表达情况;RT-PCR技术检测细胞中IRS-1、PI3K、Akt、GSK-3β的mRNA表达,Western blot技术检测细胞中p-IRS-1、PI3 K、p-Akt、p-GSK-3β的相对表达.结果:与正常组相比,模型组中IRS-1、PI3K、Akt表达降低(P<0.05);GSK-3β表达升高(P<0.05);与模型组相比,黄地安消胶囊含药血清组IRS-1、PI3K、Akt升高(P<0.05),GSK-3β表达降低(P<0.05).结论:黄地安消胶囊可能通过调控IRS-1/PI3K/Akt/GSK-3β信号通路调节蛋白活性,促进糖原合成,降低血糖,改善胰岛素抵抗.     

人参皂苷对胰岛素抵抗大鼠模型中GLUT4和PI3K表达的影响

目的:糖尿病是一种多系统代谢紊乱的疾病,其中以2型糖尿病为主要类型,目前对2型糖尿病的研究以提高胰岛素的增敏性,降低胰岛素抵抗为主要目的。方法:将SD大鼠分组喂以高脂饲料4周,造成2型糖尿病模型,给药组予人参皂苷Re、Rg1、Rb1分别给药4周,对照组予罗格列酮给药四周,取大鼠肝脏、肌肉、皮下脂肪组织,抽提蛋白,采用Western Blot混合上样,分别测肝脏组织中磷酯酰肌醇3激酶(PI3K),肌肉、脂肪组织中葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)蛋白含量。结果:肝脏中PI3K的磷酸化表达Rg1组的蛋白表达要比Rb1组、Re组、高脂组、对照组和正常组有显著性差异,P<0.05;Rb1组、Re组与对照组的蛋白表达相近,但高于高脂组,接近正常组的蛋白表达。肌肉组织中Rb1组的GLUT4蛋白表达和Re组、Rg1组、高脂组、对照组和正常组有显著性差异,P<0.05;Re、Rg组、对照组高于高脂组的蛋白表达,接近于正常组的蛋白表达。脂肪组织中Rb1组GLUT4的蛋白表达和Re组、Rg1组、高脂组和对照组有显著性差异,P<0.05;接近于正常组的蛋白表达,Rg1组和Re组相近,对照组的蛋白和其他各组有显著性差异,P<0.05。结...     

PI3K/AKT信号转导通路与肿瘤转移及其机制的研究进展

PI3K/AKT信号转导通路与肿瘤的发生发展关系密切,本文概述PI3K、AKT的结构特征、PI3K/AKT信号转导通路的活化及其与恶性肿瘤转移的关系及机制。     

氧化三甲胺通过PI3K/AKT/SREBP1通路诱导肾纤维化

目的 探讨尿毒症毒素氧化三甲胺（trimethylamine N-oxide, TMAO）在肾脏纤维化中的作用及其机制。方法 将20只雄性BALB/c小鼠随机平均分为对照组和TMAO组,每组10只。对照组腹腔注射生理盐水,TMAO组腹腔注射含TMAO的生理盐水[20 mg/(kg·d)],每日1次,持续8周;使用HE染色与Masson染色法观察分析小鼠肾脏切片病理及纤维化水平;采用免疫组化法检测肾脏组织中α-肌动蛋白（alpha smooth muscle actin, α-SMA）、重组人纤维连接蛋白片段（recombinant human fibronectin fragment, Fibronectin）、胆固醇调节元件结合蛋白-1(sterol-regulatory element binding protein 1, SREBP1)水平;采用Western blot检测肾脏组织中α-SMA、SREBP1、磷脂酰肌醇3激酶（phosphatidylinositol 3kinase, PI3K）、磷酸化PI3K(phospho-PI3K, p-PI3K)、蛋白激酶B(protei...     

基于PI3K/AKT信号通路探讨中医药治疗肺癌研究进展

磷脂酰肌3-激酶(phosphatidylinositol 3 kinase, PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)信号通路是生物体内重要的信号转导系统之一,具有调节细胞生长、分化、凋亡等多种功能,与肺癌细胞的增殖、凋亡、自噬、侵袭转移、上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transformation, EMT)等细胞活动密切相关。中医药可以通过干预PI3K/AKT通路及其相关靶点蛋白调节细胞周期蛋白与凋亡相关蛋白的表达,从而抑制增殖、诱导凋亡;通过上调自噬相关蛋白的表达,促进肺癌细胞自噬;通过下调基质金属蛋白酶(matrix-metalloproteinase, MMP)的表达,降低肺癌细胞侵袭转移能力;通过多靶点、多机制逆转EMT和耐药。但是,中医药基于PI3K/AKT信号通路治疗肺癌的研究也存在许多不足：(1)PI3K/AKT信号通路与多条通路纵横交错,许多研究发现,中医药可以同时影响多条信号通路的表达,但各条通路之间的相互影响与相互作用尚未阐明。(2)PI3K/AKT信号通路作用广泛,多数研究仅证实中医药的抗肺癌作用与通路...     

白虎二地汤改善2型糖尿病大鼠胰岛素抵抗分子机制的研究

目的 研究白虎二地汤对实验性2型糖尿病（T2DM）胰岛素抵抗大鼠炎症信号通路的影响,并探讨其机制。方法 采用高糖高脂饲料喂养联合低剂量链脲佐菌素(STZ)腹腔注射建立T2DM胰岛素抵抗大鼠模型,将大鼠分为正常对照组、模型组、罗格列酮组、白虎二地汤高、低剂量组。连续给药6周后,观察其空腹血糖（FBG）、空腹胰岛素（FINS）、胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白介素-6（IL-6）的变化,采用Western blot法检测大鼠骨骼肌组织IRS-1、p-IRS-1和PI3Kp85蛋白的表达。结果 白虎二地汤高剂量组可明显降低2型糖尿病大鼠FBG、FINS、HOMA-IR、TNF-α、IL-6(P<0.05),使骨骼肌组织IRS-1和p-IRS-1蛋白表达量降低,PI3Kp85蛋白的表达量升高。结论 白虎二地汤可以改善STZ诱导的T2DM胰岛素抵抗大鼠炎症反应,减轻胰岛素抵抗。其可能的机制是通过炎症信号通路,减轻炎症反应,提高肌肉组织PI3K蛋白的表达,从而减弱外周胰岛素抵抗。      

氯化锂对脑缺血预处理后PI3K/AKT/GSK3β通路的影响机制

目的：研究脑缺血预处理（CIPC）中氯化锂对PI3K/AKT/GSK3β信号通路调节变化及影响。方法：制作脑缺血、CIPC及氯化锂干预模型,进行神经功能缺损评分;TTC法脑组织染色计算脑梗死体积;应用Western blotting检测AKT、p-AKT、GSK-3β、p-GSK-3β（ser9）、Mcl-1的蛋白表达。结果：与脑缺血组比较,氯化锂组及CIPC组p-AKT、Mcl-1、p-GSK-3β（ser9）的蛋白表达均增高,神经功能缺损评分及脑梗死体积降低（P〈0.05）;与CIPC组比较,氯化锂组进一步提高了p-AKT、Mcl-1、p-GSK-3β（ser9）的蛋白表达、降低了神经功能缺损评分及脑梗死体积（P〈0.05）。结论：脑缺血预处理增高p-GSK-3β（ser9）表达,增加p-AKT、Mcl-1的表达。氯化锂可加强脑缺血预处理的这一神经保护作用。     

中药基于PI3K/AKT/mTOR信号通路治疗膝骨关节炎

磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidylinositiol 3 kinase, PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,PKB,又称AKT)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin, mTOR)信号通路在膝骨性关节炎(knee osteoarthritis, KOA)的形成、发展和治疗中起着关键作用,其在软骨增殖与凋亡、软骨下骨重塑和滑膜炎症中扮演重要角色。抑制PI3K/AKT/mTOR信号传导,能够促进自噬,减轻关节炎症反应,恢复关节稳态;激活PI3K/AKT/mTOR信号传导,可以促进软骨细胞增殖分化,减少凋亡。以中药单体和中药复方为研究对象,依据中药基于PI3K/AKT/mTOR信号通路分析其促进软骨细胞增殖、减少凋亡、抑制炎症反应、增强软骨细胞自噬、恢复关节稳态、减轻关节损伤等方面的机制,以期为KOA的临床治疗及基础研究提供思路。     

PI3K/AKT/mTOR信号传导通路在胃癌中的研究进展

胃癌的形成是一个十分复杂的过程,不但涉及到基因的突变,还涉及到细胞内信号传导通路的改变.PI3K/AKT/mTOR通路是细胞内重要的信号传导通路之一,该通路活化可以抑制多种刺激诱发的胃癌细胞凋亡,促进细胞周期进展,促进血管形成,参与胃癌的侵袭和转移[1-2].现就PI3K/AKT/mTOR通路的结构特点及在胃癌发生、发展中作用的研究进展进行综述.     

胰岛素抵抗对肝胰岛素PI3K/Akt/GSK-3信号传导通路的影响

高脂诱导的胰岛素抵抗(insulin resistance,IR)会导致肝脏出现糖原合成减少,肝糖输出增加和肝糖异生作用增强,导致外周血糖升高,诱发2型糖尿病(T2DM)。对胰岛素受体后PI3K/Akt/GSK-3信号通路的研究表明,信号传导减弱或受阻是导致肝脏糖代谢调节能力下降的主要原因。本文主要探讨IR环境下肝胰岛素PI3K/Akt/GSK-3信号通路中各级联蛋白的活性变化,旨在为揭示IR机制及研究制定重建血糖平衡的有效措施提供参考。     

EMP-1 promotes tumorigenesis of NSCLC through PI3K/AKT pathway

This study examined the role of EMP-1 in tumorigenesis of non-small cell lung carcinoma (NSCLC) and the possible mechanism. Specimens were collected from 28 patients with benign lung diseases and 28 with NSCLC, and immunohis to chemically detected to evaluate the correlation of EMP-1 expression to the clinical features of NSCLC. Recombinant adenovirus was constructed to over-express EMP-1 and then infect PC9 cells. Cell proliferation was measured by Ki67 staining. Western blotting was performed to examine the effect of EMP-1 on the PI3K/AKT signaling. Moreover, tumor xeno-grafts were established by subcutaneous injection of PC9 cell suspension (about 5×107/mL in 100 μL of PBS) into the right hind limbs of athymic nude mice. The results showed EMP-1 was significantly up-regulated in NSCLC patients as compared with those with benign lung diseases. Over-expression of EMP-1 promoted proliferation of PC9 cells, which coincided with the activation of the PI3K/AKT pathway. EMP-1 promoted the growth of xenografts of PC9 cells in athymic nude mice. It was concluded that EMP-1 expression may contribute to the development and progress of NSCLC by activating PI3K/AKT pathway.     

镉处理对小鼠睾丸间质细胞PI3K/AKT信号通路的影响

目的 探讨镉对小鼠睾丸间质细胞3-磷酸肌醇激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)信号通路的影响.方法 TM3细胞经20μmol/L CdCl2处理,分别在加入CdCl24 h和8h后收集细胞;对照组给予相应体积的PBS,8h后收集细胞.利用实时定量RT-PCR法测定炎症相关细胞因子白细胞介素(IL)-10、肿瘤坏死因子(TNF)-α、IL-6、单核细胞趋化蛋白(MCP)-1、巨噬细胞炎性蛋白(MIP)-2、MIP-1和环氧合酶(COX)-2 mRNA的表达水平以及用Western blot法检测细胞COX-2、AKT和p-AKT蛋白的表达水平.结果 与对照组相比,镉能够显著诱导TNF-α和IL-6 mRNA的表达(P＜0.01);镉处理4h组MCP-1 mRNA表达水平明显高于对照组(P＜0.01),而镉处理8h组MCP-1 mRNA表达水平与对照组相比差异无统计学意义;镉对TM3细胞MIP-1和MIP-2mRNA表达差异无统计学意义;镉能够明显诱导TM3细胞COX-2蛋白和mRNA的表达(P＜0.01).此外,镉处理组p-AKT蛋白表达水平也明显高于对照组(P＜0.01).结论 镉可能通过激活TM3细胞中PI3 K/AKT信号通路进而选择性调节部分炎症相关细胞因子的表达.     

PDX1真核表达载体的构建及其对PANC-1细胞PI3K/AKT信号途径的影响

目的 构建胰腺十二指肠同源框蛋白1(PDX1)基因真核表达载体并转染至PANC-1细胞,观察其对PI3K/AKT信号通路的影响.方法 从Hela细胞中提取总RNA,逆转后PCR扩增PDX1编码区片段,然后将PDX1的CDS插入PCMV6-Entry质粒构建PCMV6-Entry-PDX1表达重组体.重组体转染至PANC-1细胞中通过G418筛选出稳定表达细胞株.Western blot分析PDX1蛋白水平表达及p-AKT水平变化.结果 PDX1基因成功在PANC-1中表达.利用West-ern blot检测验证获得了稳定的PDX1过表达细胞株.West-ern blot结果显示:过表达PDX1的细胞株AKT表达含量与正常细胞及对照细胞没有区别而p-AKT水平降低.结论 PDX1基因过表达能够降低PANC-1细胞的p-AKT水平.     

蛇床子素通过c-met/PI3K/AKT途径提高顺铂对肺癌细胞的杀伤活性

目的探讨蛇床子素是否能提高顺铂对肺癌细胞的杀伤活性并研究其机制。方法 A549非小细胞肺癌细胞按对照组、蛇床子素组、顺铂组、蛇床子素+顺铂组及蛇床子素+顺铂+c-met质粒组进行分组后,MTT法检测A549细胞活力,Western blot实验检测A549细胞蛋白酪氨酸激酶(cmet)表达水平,磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(AKT)磷酸化水平及半胱天冬酶(caspases)活化水平的影响,流式细胞术检测A549细胞的凋亡。结果顺铂+蛇床子素组A549的细胞活力抑制率[(59.8±3.5)%]显著高于顺铂单治疗组[(16.9±1.2)%,P0.05]和蛇床子素+顺铂+c-met质粒组[(21.6±1.5)%,P0.05]。蛇床子素处理可诱导A549细胞c-met蛋白的下调并抑制A549细胞PI3K和AKT的磷酸化。顺铂+蛇床子素组对A549细胞的凋亡诱导率[(29.7±2.1)%]显著高于顺铂组[(7.8±0.9)%,P0.05]和蛇床子素+顺铂+c-met质粒组[(10.1±1.5)%,P0.05]。顺铂+蛇床子素组A549细胞的Caspase-9、Caspase-3活化水平显著高于顺铂组和蛇床子素+顺铂+c-met质粒组。结论蛇床子素通过下调c-met表达提高肺癌细胞对顺铂的敏感性。     

大黄素介导IRS-2/PI3K/Akt通路干预大鼠非酒精性脂肪性肝炎的实验研究

目的探讨大黄素通过介导IRS-2/PI3 K/Akt通路对非酒精性脂肪性肝炎(NASH)的影响。方法随机选取25只雄性大鼠给予高脂饲料喂养12周制备NASH模型,12周后取5只大鼠进行检测,确定NASH模型制备成功,剩余20只大鼠数字表法随机分为模型组(10只)和大黄素组(10只),另取同龄10只雄性未造模大鼠作为正常对照组。大黄素组大鼠给予20 mg/kg的大黄素灌胃,正常对照组和模型组给予等量生理盐水,连续给予8周。对大鼠肝脏进行称重,计算肝指数;检测空腹血糖和空腹胰岛素,计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR),检测血生化指标。对肝组织进行HE染色,检测肝组织中IRS-2、p-IRS-2、PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt蛋白相对表达量。结果模型组大鼠肝指数、空腹血糖、空腹胰岛素、HOMA-IR、ALT、AST、TG、TC和LDL-C水平较正常对照组增高,HDL-C水平较正常对照组降低(P<0.01);大黄素组大鼠肝指数、空腹血糖、空腹胰岛素、HOMA-IR、ALT、AST、TG、TC和LDL-C水平较模型组降低,HDL-C水平较模型组增高(P<0.05)病理检测发现,模型组出现大量脂肪变性,存在炎性细胞浸润和细胞气球样变性,大黄素组病灶明显较模型组减轻。模型组大鼠IRS-2、p-IRS-2、PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt蛋白相对表达量较正常对照组降低(P<0.05),大黄素组大鼠IRS-2、p-IRS-2、PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt蛋白相对表达量较模型组增高(P<0.05)。结论大黄素可以提高IRS-2/PI3K/Akt通路的活性,改善高脂诱导的NASH大鼠肝脏脂肪沉积及胰岛素抵抗。     

PTEN/PI3K/AKT在溃疡性结肠炎炎症-肿瘤序列演进中的作用

目的 观察抑癌基因第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源物基因(PTEN)与磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/丝氨酸苏氨酸蛋白激酶(AKT)信号通路在溃疡性结肠炎(UC)炎症-肿瘤序列演进过程中的表达变化,为阐明UC的发生及其癌变机制提供依据,并探讨其可能的临床意义.方法 收集65例UC的石蜡包埋标本、25例结直肠癌石蜡包埋标本、25例正常组织石蜡包埋标本,采用免疫组织化学染色法检测UC、结直肠癌及正常组织中PTEN及AKT的蛋白表达,并分析它们之间的相关关系.结果 ①UC组织中PTEN蛋白的表达明显低于正常组织,高于结直肠癌组织(P<0.01).②UC组织中AKT蛋白的表达明显高于正常组织,低于结直肠癌组织(P<0.01).③随着UC病程的增加,PTEN蛋白的表达逐渐降低,AKT蛋白的表达逐渐增强(P<0.01).④PTEN蛋白和AKT蛋白在UC、结直肠癌组织中的表达呈显著负相关(相关系数分别为r=-0.542、-0.674,P<0.01).结论 在UC炎症-肿瘤序列演进过程中,抑癌基因PTEN蛋白表达的降低及原癌基因AKT蛋白表达的增强,可能是UC发生及癌变的重要原因之一.PTEN蛋白表达的明显降低和AKT蛋白表达的明显增强有可能成为早期监测UC癌变的一个辅助指标.     

甲状腺功能亢进症模型大鼠心肌细胞PI3K/Akt通路与胰岛素抵抗的关系

目的探讨甲状腺功能亢进症模型大鼠心肌细胞PI3K/Akt通路与胰岛素抵抗的关系。方法建立甲状腺功能亢进症模型大鼠,随机分为模型组、LY294002组（PI3K抑制剂）、740Y-P组（PI3K激动剂）,每组12只;另取12只SD大鼠设为对照组。分组处理后,酶联免疫吸附法（ELISA）检测甲状腺功能指标血清游离三碘甲状腺原氨酸（FT3）、游离甲状腺素（FT4）、促甲状腺素（TSH）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）水平;测定空腹血糖水平（FBG）、胰岛素抵抗指数（IRI）;TUNEL染色检测心肌细胞凋亡情况;蛋白免疫印迹法检测大鼠心肌组织PI3K/Akt通路蛋白表达。结果与对照组比较,模型组大鼠血清FT3、FT4、TNF-α及IL-6水平、心肌细胞凋亡比例、FBG、IRI显著升高（P<0.05）,TSH、心肌组织p-PI3K/PI3K及p-Akt/Akt显著降低（P<0.05）;与模型组比较,LY294002组大鼠血清FT3、FT4、TNF-α及IL-6水平、心肌细胞凋亡比例、FBG、IRI升高（P<0.05）,TSH、心肌组织p-PI3K/PI3K及p-Akt/Akt降低（P<0.05）;740Y-P组大鼠血清FT3、FT4、TNF-α及IL-6水平、心肌细胞凋亡比例、FBG、IRI降低（P<0.05）,TSH、心肌组织p-PI3K/PI3K及p-Akt/Akt升高（P<0.05）。结论PI3K/Akt通路可调控甲状腺功能亢进症模型大鼠胰岛素抵抗,激活该通路,可使甲状腺功能恢复正常,减轻炎症反应,抑制心肌细胞凋亡,改善胰岛素抵抗。     

立普妥对高糖诱导的HUVEC凋亡及PI3K/AKT/eNOS信号通路的影响

目的探讨立普妥对高糖诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的凋亡及对磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)/内皮型一氧化氮(e NOS)信号通路的影响。方法实验分为正常组,模型组(33.3 mol/L葡萄糖),立普妥组(33.3 mol/L葡萄糖+0.1,1,10μmol/L);MTT法检测各组HUVEC活力;倒置显微镜拍照检测各组HUVEC形态;Annexin V-FITC/PI流式双染法检测各组HUVEC凋亡;Gries法检测各组HUVEC上清NO含量;Western blot分析PI3K/AKT激活状况及e NOS的表达情况。结果与正常组比较,高糖组中HUVEC皱缩,变圆变亮,细胞活力降低,细胞早期凋亡和晚期凋亡率显著提高,NO含量及e NOS、PI3K表达量及AKT磷酸化程度降低,差异均具有显著性(P0.05);与模型组比较,1,10μmol/L立普妥组中HUVEC形态恢复,细胞活力上升,PI3K表达量提高,差异均具有显著性(P0.05);0.1,1,10μmol/L立普妥组HUVEC凋亡程度下降,NO含量、e NOS表达量提高,AKT磷酸化水平上升,差异均具有显著性(P0.05)。结论立普妥可抵抗高糖诱导的HUVEC凋亡,是通过激活PI3K/AKT/e NOS信号通路实现的。     

缺氧条件下Netrin-1通过激活PI3K/AKT通路诱导宫颈癌细胞上皮-间质转化

目的 探讨缺氧条件下Netrin-1通过激活PI3K/AKT通路诱导宫颈癌细胞上皮-间质转化(EMT).方法 qPCR检测正常上皮细胞HaCaT及宫颈癌细胞系SiHa、Caski、Hela中Netrin-1的表达.二氧化钴处理模拟低氧微环境,通过Trans wall和细胞划痕实验观察SiHa、Caski、Hela细胞侵...