NO的生物代谢及检测方法

一氧化氮（ＮＯ）在机体内通过一氧化氮合酶（ＮＯＳ）的作用而生成，ＮＯ生物合成的调节可通过对底物、辅助因子、产物、催化反应的酶进行选择性干预。组织细胞ＮＯ含量的检测方法有：电化学方法的Ｃｌａｒｋ电极法和聚合卟啉微感器法、ＥＳＲ法、ｃＧＭＰ检测、瓜氨酸量的测定、ＮＯ－２／ＮＯ－３含量的测定、形态学方法、血红蛋白测定法、化学发光法、分子生物学技术     

参附注射液对肝脏缺血再灌注大鼠iNOS和NO水平的影响

目的探讨参附注射液(SF)对大鼠肝脏缺血再灌注损伤肝组织中诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和血清一氧化氮(NO)的影响。方法32只Wistar大鼠随机分为参附实验组(SF组)和肝缺血再灌注组(IR组)。SF组腹腔注射参附注射液(10ml·kg-1),IR组大鼠给予相同剂量的生理盐水。两组均采用Pringle's法阻断肝门缺血15min再灌注1h、3h,测定血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)以及NO水平,并应用免疫组织化学法测定肝组织中iNOS表达。结果大鼠肝脏缺血15min再灌注1h和3h,SF组血清ALT、AST以及NO水平低于IR组(P<0.05),SF组肝组织iNOS阳性产物平均吸光度值、阳性面积百分率(%)明显低于IR组(P<0.05)。结论参附注射液抑制iNOS的表达,减少过量NO的生成,可能是其对肝脏缺血再灌注损伤的保护作用机制之一。     

参麦注射液对心肌缺血-再灌注大鼠一氧化氮合酶系统的影响

目的:探讨参麦注射液(SM)对大鼠心肌缺血-再灌注损伤的防治作用及机制。方法:结扎冠状动脉前降支复制大鼠心肌缺血-再灌注损伤模型,描记标准肢体II导联,测定心肌组织中丙二醛含量及结构型、诱导型一氧化氮合酶(cNOS,iNOS)活性,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法测其cNOSmRNA、iNOSmRNA表达。结果:SM组心律失常发生率明显低于其他各组;cNOS活性及其mRNA表达显著增高(P<0.01),iNOS活性及其mRNA表达显著降低(P<0.01)。结论:SM能减轻缺血-再灌注引发的损伤,其作用机制可能与增加cNOS活性,促进cNOSmRNA表达,抑制iNOS活性,降低iNOSmRNA表达有关。     

家兔急性心肌缺血时脊神经节一氧化氮合酶的表达

目的　观察急性心肌缺血时家兔脊神经节一氧化氮合酶 (NOS)表达的情况。方法　结扎家兔冠状动脉左室支30min ,造成实验性急性心肌缺血。采用还原型尼克酰胺嘌呤二核苷酸脱氢酶 (NADPH d)法显示C5～T5脊神经节的NOS表达变化。结果　心肌缺血组左侧脊神经节的NOS表达比正常组增加。结论　心肌缺血可影响脊神经节NOS的表达 ,一氧化氮(NO)可能是内关与心脏相关联系的重要介质。     

大鼠心肌缺血预适应对I/R心肌细胞凋亡及bcl-2表达的影响

目的:对缺血预适应(IP)第一保护窗对大鼠缺血再灌注(I/R)心肌细胞凋亡和凋亡抑制基因bcl-2表达的影响进行研究。方法:采用TUNEL法、免疫组化和原位杂交方法测定大鼠缺血再灌注心肌细胞凋亡和bcl-2的表达。结果:①IP+I/R_3h组TUNEL法阳性心肌细胞核数量及阳性心肌细胞核占总心肌细胞核数的百分比均明显少于I/R_3h组(P＜0.05,P＜0.01);②IP+I/R_3h组表达bcl-2蛋白阳性的心肌细胞数及阳性心肌细胞占心肌细胞总数的百分比均明显高于I/R_3h组(P＜0.01);IP+I/R_1h组表达bcl-2mRNA阳性的心肌细胞数及阳性心肌细胞占心肌细胞总数的百分比均明显高于I/R_1h组(P＜0.01)。结论:①大鼠心肌IP第一保护窗能够显著减少I/R心肌细胞凋亡;②IP通过上调凋亡抑制基因bcl-2基因表达可能是其减少I/R心肌细胞凋亡的机制之一。     

心通胶囊对心肌缺血大鼠心室肌亚硝酸盐和cGMP含量的影响

目的:探讨心通胶囊对实验性大鼠心肌缺血的预防效果及其与一氧化氮形成的相关机制。方法:应用垂体后叶素致大鼠急性心肌缺血模型,以心电图上ST段的抬高作为心肌缺血的指标。测定大鼠心肌缺血心室肌组织一氧化氮(NO)代谢产物(NO₂^-/NO₃^-)和cGMP含量。结果:急性心肌缺血组大鼠的心室肌组织NO₂^-/NO₃^-和cGMP含量分别为(486±59)nmol/gprotein和(0.38±0.08)nmol/gprotein,明显低于正常对照组大鼠的NO₂^-/NO₃^-和cGMP含量,有显著差异(P＜0.01);急性心肌缺血前使用心通胶囊组的心室肌组织NO₂^-/NO₃^-和cGMP含量为(845±105)nmol/gprotein和(0.51±0.10)nmol/gprotein明显高于缺血组(P＜0.01)。与正常组比较,缺血组的心电图ST段抬高明显抬高(P＜0.05);心肌缺血前使用心通胶囊,可使心肌缺血得以改善。结论:心通胶囊提高急性心肌缺血大鼠心室肌组织的NO含量,进而使cGMP含量升高,达到改善心肌缺血的作用。     

脑动脉内皮细胞缺氧时内皮型一氧化氮合酶基因表达的变化及蛋白激酶C的作用

目的：研究缺氧时脑动脉内皮细胞(CAECs)内皮型一氧化氮合酶(eNOS)基因表达的变化，并探讨可能的分子机制。方法： 分别采用RT-PCR和蛋白质免疫印迹技术检测原代培养的猪脑动脉内皮细胞缺氧2、6、12、24、48 h后eNOS mRNA和蛋白质表达的变化，并观察蛋白激酶C(PKC)抑制剂对缺氧24 h引起的eNOS mRNA和蛋白质变化的影响。加入转录抑制剂放线菌素D后观察缺氧24 h对eNOS mRNA稳定性的影响。结果：缺氧2 h后脑动脉内皮细胞eNOS mRNA和蛋白质表达均增加，12 h达到高峰，约分别为常氧组的2.5倍和2.0倍，缺氧48 h仍高于常氧组。缺氧对eNOS mRNA稳定性无明显影响。选择性PKC抑制剂BIM I(1 μmol/L)、G6983(1 μmol/L)均能降低缺氧24 h所引起的eNOS基因表达的上调。结论： 脑动脉内皮细胞缺氧时可通过PKC信号途径上调eNOS基因的表达，并可能由此介导缺氧时脑血管的扩张反应，发挥其神经保护作用。     

心肌缺血-再灌注反应相关基因研究进展

心肌缺血 再灌注可诱导许多基因表达发生改变 ,如立早基因、抗氧化酶、一氧化氮合酶、凋亡相关基因、生长因子、热休克蛋白、炎症因子、环氧合酶 2等 ,全面了解这些基因表达改变及其意义 ,对于揭示心肌顿抑和缺血预适应现象的分子机制 ,进一步探索治疗心肌缺血 再灌注损伤的分子靶具有重要意义。     

肝移植围术期血浆一氧化氮和一氧化氮合酶活性的变化及意义

目的：动态观察肝移植围术期血浆一氧化氮（NO）水平和一氧化氮合酶（NOS）活性的变化，并探讨其意义。 方法： 30例终末期肝病患者接受原位肝移植术。用放免法、比色法分别测定肝移植围术期5个时点血浆NO2-/NO3-水平和NOS活性，观察其动态变化。同步抽取桡动脉和肺动脉血做血气分析，记录不同时期的PO2、PCO2、SO2、Hb，根据肺内分流标准模型公式计算(Qs/Qt)。并监测围术期心输出量（CO）、心率（HR）、中心静脉压（CVP）、平均动脉压（MABP）、体循环阻力（SVR）。 结果： (1) 无肝前10 min NO2-/NO3-水平明显高于麻醉后术前。无肝期30 min NO2-/NO3-显著低于无肝前10 min。新肝期30 min NO2-/NO3-显著高于麻醉后术前、无肝期30 min。（2）TNOS活性各时点无显著差异。无肝前10 min、新肝30 min时iNOS活性明显高于麻醉后术前。与无肝30 min值比较，新肝期30 min iNOS活性显著升高。（3）MABP在开放下腔静脉后1 min明显下降，CO和CVP在无肝期下降，新肝期增高。SVR在无肝期增高，新肝期明显下降。（4）Qs/Qt在无肝期下降，新肝期30 min升高。 结论： 在肝移植围术期各个时段，NO水平及iNOS活性各不相同。高NO水平可能是新肝期低阻力、肺内分流增加的原因。     

一氧化氮在实验性NIDDM大鼠心肌病变中的变化

目的:用非胰岛素依赖型糖尿病(NIDDM)模型,研究一氧化氮(NO)、构建型一氧化氮合酶(cNOS)与NIDDM早期心肌病关系。方法:给大鼠尾静脉注射小剂量链尿佐菌素,使大鼠糖耐量异常,然后加喂高热量食物,引起大鼠肥胖,饲养8周,可形成类似NIDDM模型。观察实验性NIDDM大鼠心肌超微结构、心肌NO产物NO₂^-/NO₃^-、cNOS表达的变化。结果:①透射电镜观察发现,NIDDM大鼠心肌有超微结构改变,例如:线粒体肿胀、心肌闰盘间隙增宽。②NIDDM大鼠心肌组织NO₂^-/NO₃^-水平显著低于正常对照大鼠(P＜0.01),L-精氨酸组心肌组织NO₂^-/NO₃^-显著高于NIDDM组(P＜0.01)。③NIDDM大鼠心肌组织cNOSmRNA表达显著低于正常对照大鼠(P＜0.01)。结论:NIDDM早期存在心肌病变,NO与其发生机制有关,L-精氨酸对NIDDM大鼠心肌病有一定的防治作用。     

心血管组织钙化大鼠心肌肌浆网一氧化氮合酶的改变

目的:观察心血管组织钙化大鼠心肌肌浆网一氧化氮合酶/一氧化氮系统的改变,以探讨是否SR上NO的过量生成是钙化心肌SR功能抑制的重要机制。方法:维生素D3肌肉注射和nicotine灌胃复制大鼠心血管组织钙化的模型。差速离心制备心肌肌浆网,检测SR中NO生成及NOS的活性和蛋白表达。结果:心血管组织钙化处理6周大鼠心肌钙含量比对照组高4倍(P＜0.01),钙化组心肌SR的NO产生高于对照组,NOS活性增加,NOS蛋白表达比对照组高54%(P＜0.01)。钙化处理2周左右尽管心肌钙化尚不明显,但SR的NOS/NO系统已经发生改变。结论:心血管组织钙化大鼠心肌SR的NOS/NO系统的上调,是钙化心肌SR功能抑制的重要机制之一。     

脑挫伤后一氧化氮合酶阳性细胞及一氧化氮含量的变化

目的　探讨脑挫伤后一氧化氮合酶 (NOS)阳性细胞和一氧化氮 (NO)的变化和意义。方法　采用自由落体法致Wistar大鼠顶叶皮质挫裂伤动物模型。伤后 2 4h、72h和 7d取脑 ,制作冰冻切片 ,采用NADPH组织化学染色 ,显示脑挫伤区NOS阳性细胞。用硝酸还原酶法测定血液和脑组织中NO含量。结果　脑挫伤后 72h ,NOS阳性细胞数密度 (Nv)和面密度(Sv)明显增高 (P <0 0 5 ) ,而且 7d时仍无明显下降。血液和脑中NO含量也增高 ,并与NOS细胞呈平行关系。结论　脑挫伤后不同时间NOS细胞数目和NO含量有明显改变 ,提示NOS和NO参与了脑挫伤的病理过程     

人类神经型一氧化氮合酶原核表达载体的构建和在大肠杆菌中的表达（英文）

目的:构建在大肠杆菌中表达重组人神经型一氧化氮合酶的高表达系统。方法:用PCR方法从cDNA中扩增目的编码基因,然后将编码基因连接入表达载体pCWori+,将重组的质粒转染入大肠杆菌BL21进行蛋白高表达,经Western blot确认表达后,进行大量培养,通过层析方法精制此酶,并用吸收光谱法对酶的性质进行测定。结果:从该表达系统中可以获得3 mg/L培养基的高产量的一氧化氮合酶。结论:从该表达系统中可获得大量有活性的人一氧化氮合酶。     

诱导型一氧化氮信号通路在代谢型谷氨酸受体2/3介导的脑缺血耐受中的作用

AIM: To explore the role of NO/ inducible nitric oxide synthase (iNOS) in the metabotromi glutamate receptor 2/3C (mGluR2/3) mediated-brain ischemic tolerance induced by cerebral ischemic preconditioning (CIP), and to observe the influences of α-methyl- (4-tetrazolyl- phenyl) glycine (MTPG), an antagonist of mGluR2/3, on the expression of iNOS during the induction of brain ischemic tolerance. METHODS: Thirty-six Sprague-Dawley rats were subjected to four vessel occluding global brain ischemic model. Thionin staining and immunohistochemistry were used for neuropathological evaluation and assay of iNOS expression in the hippocampal CA1 subregion of the rats. RESULTS: In the sham group, weak expression of iNOS was detected. The expression of iNOS in the CIP and CIP+ischemic insult groups were increased significantly compared with that in the sham group. Administration of MTPG via lateral cerebral ventricle 20 min before CIP blocked the up-regulation of iNOS induced by CIP, but had no influence on the pyramidal neuron survival. However, in the MTPG+CIP+ischemic insult group, the expression of iNOS was extremely intensive compared to that in CIP and MTPG+CIP groups. Importantly, this up-regulation was accompanied with obvious delayed neuronal death. CONCLUSION: NO/iNOS pathway plays an important role in the process of mGluR2/3 mediated-brain ischemic tolerance induced by CIP.     

一氧化氮对成纤维细胞内游离Ca2+浓度的影响

目的: 研究一氧化氮(NO)对成纤维细胞内游离Ca²⁺浓度的影响。方法: 体外培养人胚肺成纤维细胞(HLF), 给予NO前体-L-精氨酸(L-Arg)及一氧化氮合酶(NOS)抑制剂-硝基-L-精氨酸(L-NNA), 采用比色法测定细胞培养液NO水平, 采用Fura-2/AM荧光法测定细胞内游离Ca²⁺浓度, 观察NO对成纤维细胞内游离Ca²⁺浓度的影响。结果: 随着细胞培养液NO水平逐渐升高, 成纤维细胞内游离Ca²⁺浓度逐渐升高[实验组NO水平、Ca²⁺ 浓度比正常对照组NO水平、Ca²⁺浓度分别为(3.82±0.53) mol/L比(2.62±0.55) mol/L和(894.48±93.01) nmol/L比(824.56±33.22) nmol/L, P<0.05]; 但进一步升高NO水平, Ca²⁺浓度却逐渐降低[实验组NO水平、Ca²⁺浓度比正常对照组NO水平、Ca²⁺浓度分别为(5.82±0.45) mol/L比(2.62±0.55) mol/L和(162.11±68.50) nmol/L比(824.56±33.22) nmol/L, P<0.01]。结论: NO对成纤维细胞内游离Ca²⁺浓度具有双向调节作用。即低水平NO升高细胞内游离Ca²⁺浓度, 高水平NO降低细胞内游离Ca²⁺浓度。     

从氧自由基、一氧化氮探讨四逆汤抗急性失血性休克的肝脏机制

目的:从氧自由基、一氧化氮探讨四逆汤抗急性失血性休克的肝脏机制。方法:复制急性失血性休克大鼠模型, 分为假手术对照组;单纯休克模型组;休克+生理盐水复苏组;休克+四逆注射液复苏组。四逆注射液(浓度1000g生药/L), 剂量0.1mL/200g大鼠。用生理盐水或四逆注射液治疗3h后处死动物并取组织。测定各组肝脏超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)水平, 一氧化氮(NO)水平。采用免疫组化染色法, 观察诱导型一氧化氮合酶(iNOS)在肝细胞中的变化特点。RT-PCR观测肝细胞iNOS和内皮源性一氧化氮合酶(eNOS)基因表达的变化。结果:模型组在休克1h后SOD活性明显低于对照组(P＜0.01)、MDA水平明显高于对照组(P＜0.01)。四逆汤组复苏3h后肝组织SOD明显高于生理盐水组(P＜0.01)、MDA低于生理盐水组(P＜0.01)、NO水平明显高于生理盐水组(P＜0.01)。生理盐水组iNOS在肝细胞中染色阳性单位明显高于四逆汤组(P＜0.05)。生理盐水组促进iNOSmRNA的表达。四逆汤组eNOSmRNA的表达增强。结论:四逆汤通过清除氧自由基, 升高NO, 改善肝组织微循环, 减少诱导型iNOS表达的各种因素, 理论上减轻了NO与氧自由基生成的ONOO的细胞毒作用和血管的低反应性, 并对肝脏起到保护作用。     

大鼠严重烧伤后体内一氧化氮水平变化与预后的关系

目的:研究一氧化氮(NO)及一氧化氮合酶(NOS)在严重烧伤早期大鼠体内的变化规律及其与预后的可能联系。方法:检测严重烧伤前后大鼠血液中NO代谢产物NO^-₂/NO^-₃及脑、肺脏和十二指肠组织中神经型(nNOS)和诱生型一氧化氮合酶(iNOS)蛋白的水平,同时统计各组大鼠的存活率。结果:烧伤后大鼠血液中NO^-₂/NO^-₃水平显著增高,非选择性NOS抑制剂L-NAME和选择性iNOS抑制剂氨基胍(AG)对其均有抑制作用,以L-NAME为甚;nNOS蛋白在伤后部分升高,L-NAME和AG均轻度上调nNOS水平;iNOS在正常组织中不表达,烧伤后表达异常增高,L-NAME和AG对此均无影响;与对照组比较,AG组大鼠存活时间延长,L-NAME组存活时间缩短。结论:严重烧伤后的血管扩张、血压降低和血管反应性低下与iNOS蛋白水平过度增高及其释放的大量NO关系密切。