蒽贝素体外抑制人胰腺癌细胞Mia PaCa-2细胞增殖和诱导凋亡的作用及其机制研究

目的 探讨X连锁凋亡抑制蛋白（XIAP）抑制剂蒽贝素抑制人胰腺癌细胞Mia PaCa-2凋亡的作用及其可能机制。方法 MTT法和流式细胞术检测不同剂量蒽贝素对Mia PaCa-2细胞增殖和凋亡的影响;RT-PCR法对蒽贝素处理前后Mia PaCa-2细胞中XIAP基因的表达进行检测。Western blotting方法检测蒽贝素作用后细胞XIAP、Caspase 3、促凋亡蛋白Bax和抗凋亡蛋白Bcl-2表达的变化。结果 蒽贝素对人胰腺癌细胞增殖具有显著抑制作用（P<0.05）,经不同剂量蒽贝素处理后Mia PaCa-2细胞凋亡率明显增高,与未处理组比较差异具有显著性（P<0.01）;RT-PCR显示对照组细胞中XIAP的-△△CT值是实验组的11.31倍;经蒽贝素作用24 h后,Mia PaCa-2细胞出现Caspase 3裂解片段,且Bax/Bcl-2比值增大。结论 蒽贝素在体外可显著抑制Mia PaCa-2细胞增殖,诱导细胞凋亡,其机制可能是通过拮抗XIAP的作用,激活Caspase相关性的细胞凋亡内源性途径而诱导人胰腺癌细胞发生凋亡。     

蒽贝素对雄性大鼠血浆性激素水平及附睾精子质量的影响

目的 研究蒽贝素对雄性大鼠血浆性腺激素水平、附睾精子质量、睾丸组织结构的影响,探讨蒽贝素降低雄性大鼠生育能力的作用机制。方法 给雄性性成熟大鼠sc蒽贝素铵盐溶液30 d,末次给药后2 h,测定血浆性激素水平;检查附睾精子质量;观察睾丸组织结构。结果 与对照组比较,给药30 d后,蒽贝素高、中剂量（40、20 mg/kg）组大鼠血浆睾酮、黄体生成素、卵泡刺激素水平、附睾精子活率、精子密度明显降低,组间差异有统计学意义（P＜0.05）,附睾精子畸形率和顶体完整率无明显变化,显微镜下见睾丸组织呈萎缩性病变,曲精细管扁平、塌陷,管内精母细胞减少,附睾精细管内精子稀少。结论 蒽贝素抑制丘脑-垂体-性腺轴活动,降低雄性大鼠血浆性激素水平,引起睾丸萎缩和附睾精子活率、精子密度降低,使雄性大鼠生育能力下降。     

弱碱性蒽贝素氨水溶液小鼠尾静脉注射急性毒性实验研究

目的研究小鼠尾静脉注射弱碱性蒽贝素氨水溶液的急性毒性反应,测定经该途径给药后,小鼠半数致死剂量及其99%平均可信限。方法小鼠尾静脉注射弱碱性蒽贝素氨水溶液,预试出最大0%和最小100%致死剂量。再分别给12组小鼠尾静脉注射按1:0.8等比稀释的系列浓度溶液0.01 m L·g-1,剂量在最大0%致死剂量和最小100%致死剂量之间,观察给药后7日内各组小鼠中毒死亡情况。解剖检查死亡小鼠主要器官。计算半数致死剂量及其99%平均可信限。结果给药剂量在60~448 mg·kg-1间时,最低、最高剂量组小鼠死亡率介于30%和70%之间,剂量对数与死亡机率单位之间呈近似线性关系,可以用综合法计算半数致死剂量及其99%平均可信限。结论以蒽贝素量计,尾静脉注射弱碱性蒽贝素氨水溶液小鼠半数致死剂量为153.525 mg·kg-1,其99%平均可信限为153.525±40.815 mg·kg-1。     

蒽贝素理化性质及毒理药理活性研究进展

目的 掌握蒽贝素的理化性质及毒理药理作用研究概况,为蒽贝素抗乳腺癌药效研究提供理论依据。方法 查阅国内外相关文献,并对其进行归纳、分析和总结。结果 从酸藤子中提取纯化得到的蒽贝素显弱酸性,可通过红外、紫外光谱以及高效液相色谱、薄层色谱等检测。毒理研究显示注射最小100%死亡剂量为560 mg·kg^-1和最大0%死亡剂量为50 mg·kg^-1。经计算显示小鼠半数致死剂量为 153.525 mg·kg^-1。蒽贝素具有良好的抗炎、抗肿瘤的药理作用,但有一定的神经毒性。结论 蒽贝素毒性小,效果好,对抗炎、抗肿瘤研究具有重要意义。     

5-氟尿嘧啶联合蒽贝素治疗结肠癌的研究

目的：探讨5-氟尿嘧啶（5-FU）联合蒽贝素对结肠癌的治疗作用。方法：MTT法和肿瘤球生长实验考察5-FU联合蒽贝素对结肠癌C26细胞的毒性。建立结肠癌小鼠移植瘤模型,随机分为生理盐水组、5-FU组、蒽贝素组和联合给药组。各组小鼠均3d一次尾静脉注射给药。观察给药过程中瘤体体积的变化,考察不同给药组对小鼠肿瘤生长的抑制效果。结果：给药48h后生理盐水组肿瘤细胞存活率为95％,5-FU组、蒽贝素组和联合给药组肿瘤细胞存活率分别为48％、69％和18％,与单独给药组相比,联合给药能够显著增强对C26细胞的增殖抑制作用（P〈0．01）。给药7d后,生理盐水组肿瘤球持续生长,体积增大1．52倍,3个给药组肿瘤球体积出现了不同程度的减小,5-FU组、蒽贝素组和联合给药组分别使肿瘤体积减小到原体积的71％、89％和33％（P〈0．01）;生理盐水组、蒽贝素组、5-FU小鼠肿瘤体积成长分别变为给药前肿瘤体积的1．85倍、1．79倍和1．49倍,而联合给药组为1．21倍（P〈0．01）。联合给药组与蒽贝素组和5-FU组单独给药组间差异具有统计学意义（P〈0．01）。同时联合给药能够延长荷瘤小鼠的中位生存期。结论：5-FU与蒽贝素都具有抗结肠癌作用．且二者联合使用效果更显著。     

三氧化二砷诱导粒细胞性白血病原代细胞凋亡的研究

目的：探讨三氧化二砷（As2O3)对慢性粒细胞性白血病（CML）慢性期原代细胞生长的影响。方法：通过细胞增殖,活力检测,形态学观察,粒系髓系集落形成（CFU－GM）集落培养,凝胶电泳等方法检测。结果：As2O3可抑制CML原代细胞增殖,经平均浓度5．0umol.L^-1 As2O3处理5d时抑制率为50％,经大于等于2．6－5．0umol.L^-1 As2O3培养2－5d,可引起细胞凋亡的形态学改变及DNA片段化,As2O3浓度2．5umol.L^-1,CFU－GM的形成抑制率＞50％,结论：As2O3可以抑制CML慢性期原代细胞的增殖,并诱导凋。     

白血病抑制因子与干细胞研究进展

白血病抑制因子(Leukemia inhibitory factor,LIF)是由Tomida于1984年研究鼠骨髓样白血病M1细胞时发现的,它对鼠骨髓样白血病细胞具有抑制作用,故根据其功能而     

X染色体连锁的凋亡抑制蛋白对米非司酮诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡的影响

目的观察X染色体连锁的凋亡抑制蛋白(XIAP蛋白)对米非司酮诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡的影响。方法 XIAP重组质粒转染HeLa细胞,共聚焦显微镜观察其在细胞内的分布;流式细胞仪检测米非司酮处理和未处理的各组细胞凋亡率。结果 XIAP在HeLa细胞中弥漫分布于细胞核和细胞浆,米非司酮可诱导HeLa细胞凋亡,XIAP能抑制由米非司酮诱导的HeLa细胞凋亡。结论米非司酮能促进HeLa细胞凋亡,XIAP能抑制由米非司酮诱导的HeLa细胞凋亡。     

三氧化二砷治疗复发及难治性早幼粒细胞白血病的疗效观察

急性早幼粒细胞白血病(APL)是临床上第一个应用诱导分化治疗取得成功的人类恶性肿瘤,应用三氧化二砷(As2O3)治疗APL,包括对全反式维甲酸(ATRA)耐药的病例,明显提高了本病的完全缓解率(CR),且无严重的骨髓抑制等毒副作用.自1998年以来,我院共收治APL患者26例,其中难治和复发患者9例,我们应用As2O3进行静脉滴注治疗,取得了较好的治疗效果,现总结如下.     

载As2O3白蛋白纳米粒对人K562细胞的增殖抑制作用

目的采用白蛋白纳米粒包载As2O3,通过肿瘤细胞摄取载药纳米粒来增强As2O3对K562细胞的增殖抑制作用。方法采用去溶剂化法制备白蛋白纳米粒(ALB-NP),以异硫氰酸(FITC)标记ALB-NP,荧光显微镜观察K562细胞对ALB-NP的摄取;以ALB-NP包载As2O3制备载As2O3白蛋白纳米粒(As2O3-ALB-NP),MTT法比较As2O3与As2O3-ALB-NP对K562细胞增殖抑制率的差异。结果 As2O3-ALB-NP在低浓度(<0.8μmol.L-1)即可显著抑制K562细胞增殖,而As2O3在该浓度对其无抑制作用。结论与As2O3相比,利用ALB-NP载As2O3可显著增强其对K562细胞的增殖抑制作用,有望实现对As2O3用药的增效减毒,为其用于抗肿瘤治疗提供了新的给药策略。     

三氧化二砷对人肝癌细胞凋亡及Bcl-2、caspase-3蛋白表达的影响

目的研究三氧化二砷（arsenic trioxide,As2O3）诱导HepG2细胞凋亡及其机制。方法采用MTT法、形态学观察及流式细胞术方法检测As2O3对HepG2细胞的生长抑制、凋亡作用的影响,用Western blot检测As2O3处理后HepG2细胞内凋亡相关蛋白Bcl-2和caspase-3的表达。结果As2O3对HepG2细胞有明显的抑制增殖作用,且呈浓度和时间依赖性,细胞呈典型的凋亡形态学改变,As2O3呈时间依赖性诱导HepG2细胞凋亡。As2O3处理不同时间后,Bcl-2蛋白表达水平下调,caspase-3蛋白表达水平升高。结论As2O3具有诱导人肝癌HepG2细胞凋亡的作用,其机制可能与其下调Bcl-2蛋白的表达,促进caspase-3活化有关。     

三氧化二砷治疗急性早幼粒性白血病患者骨髓和血液中砷分布的临床检测

目的检测使用三氧化二砷(As2O3)治疗急性早幼粒细胞性白血病(APL)后患者骨髓和血液中砷的浓度,分析砷暴露及暴露时间对机体的影响。方法对30名砷暴露患者及28名非砷暴露患者进行调查,对30名暴露者,其中包括砷暴露1年半以上(13人)、一年半以内(17人)以及未暴露组进行调查研究;同时随机抽取7名暴露者,采用氢化物发生原子吸收分光光度法检测骨髓和血液中砷代谢产物,对其骨髓和血液中砷浓度进行对比。结果 7例暴露组患者的骨髓与血液中砷浓度对比,骨髓砷浓度(7.99±0.15)μg/L;血液中的砷浓度(7.98±0.15)μg/L,差异无统计学意义(P>0.05);同时对暴露一年半以上,暴露一年半以内及对照组进行单因素分析t检验的方法,其两两之间进行比较发现暴露一年半以上组与暴露一年半以内组差异有统计学意义(P<0.05),两个暴露组与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 As2O3治疗ALP,砷可以到达骨髓并进行缓慢代谢,且在骨髓中的代谢与在血液中基本相同,随着暴露时间间隔的延长砷浓度有下降趋势。     

三氧化二砷对肝门部胆管癌细胞增殖及凋亡的影响

目的利用人肝门部胆管癌细胞系（FRH-0201）接种裸鼠,建立肝门部胆管癌原代移植瘤模型;研究三氧化二砷（As2O3）对肝门部胆管癌细胞增殖及凋亡的影响。方法将FRH-0201细胞系（120代）接种于50只Balb／c裸小鼠脾脏,建立肝门部胆管癌原代移植瘤模型。荷瘤裸鼠分为未用药组和三氧化二砷组。用药后观察各组裸鼠移植瘤体积变化;采用原位末端标记法检测肿瘤组织细胞凋亡;利用免疫组化观察移植瘤中核增殖抗原（PCNA）的表达。结果建立了肝门部胆管癌原代移植瘤模型;三氧化二砷组对原代移植瘤瘤体体积具有抑制作用;三氧化二砷组能诱导细胞凋亡,抑制癌细胞增值,降低PCNA的表达,与未用药对照组相比差异显著（P〈0．05）。结论在原代人肝门部胆管癌动物模型中．三氧化二砷能缩小肿瘤体积,诱导肿瘤细胞凋亡,并能降低肿瘤细胞的PCNA表达。     

三氧化二砷对大鼠睾丸细胞酶的作用

目的:探讨药理浓度的三氧化二砷(As2O3)对雄性大鼠血清睾丸酶及精子生成的影响.方法:不同剂量的As2O3(2mg·kg-1·d-1,4 mg·kg-1·d-1和8 mg·kg-1·d-1)给予大鼠腹腔内注射,2周后检测大鼠血清睾丸酶的含量,同时,测定大鼠血清砷的含量、睾丸脏器系数、睾丸精子头计数,并计算每日精子生成量.结果:中剂量组各种酶都有所下降,G-6-PD、LDH及LDH-X的减少有统计学意义(P＜0.01,P＜0.01和P＜0.05);大剂量组ACP、ALP、G-6-PD、LDH及LDH-X均明显下降(P＜0.01).随着给大鼠腹腔注射的As2O3浓度增加,血中砷浓度明显增加(P＜0.01).3种剂量组的睾丸脏器系数与对照组差异均无显著性(P＞0.05),大剂量组睾丸精子头数和每克睾丸每日精子生成量与对照组比较减少明显(P＜0.01),血清砷含量与大鼠精子头数之间呈直线负相关(r=-0.515,P＜0.01).结论:As2O3对睾丸酶的抑制,影响了睾丸精子的生成而导致雄性生殖毒性.     

三氧化二砷介入治疗骨肉瘤肺转移效果分析

目的 研究三氧化二砷(As2O3)介入治疗骨肉瘤肺转移的效果.方法 对19例骨肉瘤肺转移的患者行股动脉穿刺、血管造影(DSA)后明确肿瘤的位置和范围,将导管头分别置于骨肉瘤供血动脉及支气管动脉内,共注入As2O3 30 mg,1次/疗程,1疗程/月,给予4个疗程.结果 骨肉瘤软组织肿块体积缩小50%以上7例,缩小10%～49%9例,骨肉瘤肿瘤软组织肿块体积增大25%以上2例,骨肉瘤肿瘤软组织肿块体积无变化1例;总显效率84.2%.肺转移瘤体积缩小50%以上6例,缩小10%～49例,肺转移瘤体积无变化3例,总显效率84.2%.结论 应用AS2O3介入治疗对骨肉瘤肺转移的患者近期疗效确切,毒副反应低,具有一定的治疗价值.     

三氧化二砷对结肠癌SW-480细胞凋亡及polo-like kinase-1基因的

目的观察三氧化二砷对人结肠癌细胞SW-480并探讨其作用机理。方法采用不同浓度的三氧化二砷作用结肠癌SW-480细胞后,采用MTT法检测细胞的恶性增殖,采用琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪检测凋亡及细胞周期情况,采用定量PCR检测polo-likekinase-1(PLK1)mRNA水平。结果三氧化二砷能抑制结肠癌细胞的恶性增殖,且与浓度相关。三氧化二砷能诱导结肠癌细胞凋亡,且呈浓度依赖性。流式细胞仪检测发现,三氧化二砷将细胞阻滞在G2/M期。三氧化二砷能下调结肠癌PLK1mRNA水平,且呈药物浓度和作用时间依赖性。结论三氧化二砷有效地抑制结肠癌SW-480细胞增殖,其机制可能与其下调PLK1表达,从而诱导凋亡有关。     

MEK抑制剂联合三氧化二砷对髓系白血病细胞凋亡的研究

目的:研究MEK抑制剂PD98059联合三氧化二砷(As2O3)对髓系白血病细胞凋亡的影响及其作用机制。方法:将PD98059、As2O3单独或联合作用于髓系白血病细胞系HL-60、K562细胞,用AnnexinV-FITC法检测细胞凋亡,用流式细胞术检测Bcl-2、Caspapse-3表达。结果:联合组与单用组相比,细胞凋亡率明显增高。Bcl-2在HL-60、K562细胞均高水平表达。As2O3明显抑制HL-60细胞Bcl-2表达,对K562细胞Bcl-2无明显抑制作用。单用PD98059、As2O3及两药合用在诱导HL-60、K562细胞凋亡过程中,活化caspapse-3均明显上升,两药合用较单用PD98059或As2O3活化caspapse-3明显升高。结论:PD98059联合As2O3同时抑制ERK/MAPK和Bcl-2,激活Caspase酶,对HL-60细胞有协同促凋亡效应。两药联合同时靶向作用ERK/MAPK和BCR/ABL,活化Caspase酶,协同诱导K562细胞凋亡。PD98059可增强As2O3对髓系白血病细胞的凋亡诱导作用。     

三氧化二砷联合干扰素抑制人表皮癌细胞株A431的生长

目的探讨三氧化二砷（As2O3）联合干扰素（INF）在不同浓度、不同作用时间对人表皮癌细胞细胞株A431增殖的抑制作用,筛选两药应用的最佳作用时间和剂量。方法通过对A431细胞常规传代培养,采用MTT比色分析法检测不同浓度As2O3、INF及二者联合对人A431细胞增殖抑制的影响;采用流式细胞分析术,检测人A431细胞的细胞周期变化和凋亡的情况。结果与阴性对照组比较,As2O3在1～10μmol/L浓度范围内对A431细胞有明显的增殖抑制作用,在24～72h对人A431细胞的抑制作用随着浓度的增加而增强,且以10μmol/L浓度组作用72h的抑制率最高（P〈0.01）。与阴性对照组比较,INF在一定浓度和时间范围内对A431细胞作用也有相似结果。As2O3能诱导细胞凋亡,随着时间的延长和浓度的增加凋亡细胞数目增加。结论 As2O3和INF均对人A431细胞有明显的抑制作用,且呈现剂量依赖效应关系和时间依赖效应关系,As2O3和INF均能使S期延滞,并提高S期细胞比例,两药联合有协同效应。As2O3诱导A431细胞凋亡的作用显著,但INF能强化As2O3诱导A431细胞凋亡的作用。