胰岛素对高血压大鼠血管平滑肌细胞血小板源生长因子A链和转化生长因子β1表达的影响

探讨胰岛素对体外培养的血管平滑肌细胞（VSMC）增生及其长型血小板源生长因子A（PDGF－A）链和转化生长因子β1（TGFβ1）mRNA表达的影响。结果发现：（1）胰岛素促进自发型高血压大鼠的血管平滑肌细胞（SHR－VSMC）增生,且呈浓度依赖性;而对正常血压的Wistar-kyota大鼠的血管平滑肌细胞（WKY－VSMC）增生无影响。（2）定量RT－PCR分析显示,胰岛素加强WKY－VSMC的TGFβ1mRNA的表达（P＜0．01）。但是减少SHR－VSMC的TGFβ1mRNA的表达（P＜0．001）。（3）胰岛素对二株系VSMC的长型PDGF－A上对表达水平无影响。结果表明,胰岛素选择性地加强SHR－VSMC的增殖,而对WKY－VSMC的增殖无影响。这可能和胰岛素能上调WKY－VSMC自分泌TGFβ1有关;而在SHR－VSMC,此反馈抑制失常,结果SHR－VSMC加速生长。     

胰岛素对自发型高血压大鼠血管平滑肌细胞TGF β及其受体的调节作用

目的:从细胞增生、转化生长因子β₁和受体表达等方面,探讨胰岛素对自发型高血压大鼠血管平滑肌细胞(SHR VSMC)和正常血压Wista-Kyoto大鼠血管平滑肌细胞(WKY VSMC)的影响异同。方法:采用组织移植法培养SHR和WKY大鼠胸主动脉VSMC|用细胞计数仪和流式细胞仪分别检测细胞增生情况|TGF β及其受体的mRNA水平利用定量RT-PCR技术进行检测。结果:(1)胰岛素加强SHR VSMC的增生,而不影响WKY VSMC的增生。胰岛素加强SHR VSMC的增生,且呈剂量依赖方式(2)以20%小牛血清培养基培养VSMC, SHR VSMC的S期百分率为31.44%,而WKY VSMC的S期百分率仅为19.86%|以2%小牛血清培养基培养VSMC,SHR VSMC的G₀／G₁和S期百分率分别为73.23%和9.35%,加入胰岛素后,SHR VSMC的G₀／G₁降低为67.58%,S期百分率则增加到15.64%。但是,加入胰岛素前后,WKY VSMC各期百分率无明显变化|(3)RT-PCR分析结果表明,生长静止的SHR VSMC和WKY VSMC均有TGF β₁、Ⅰ型和Ⅱ型TGF β受体的表达,但SHR VSMC的TGFβ₁、Ⅰ型TGF β受体的表达量高于WKY VSMC的TGF β₁、Ⅰ型TGF β受体的表达量,胰岛素加强了WKY VSMC的TGF β₁、Ⅰ型TGF β受体的表达(P＜0.01和P＜0.05),而削弱了SHR VSMC相应分子的表达(P＜0.01和P＜0.05),胰岛素不影响二株系大鼠VSMC Ⅱ型TGF β受体的表达(P＜0.05)。结论:胰岛素对SHR VSMC和WKY VSMC的TGF β和它的受体表达具有不同的调节作用,这种异常调节作用可能和胰岛素加强SHR VSMC的增生密切相关。     

肺泡Ⅱ型TGFβ_1和PDGF基因表达及其在肺纤维化中的意义

目的 :研究转化生长因子 β1(TGFβ1)和血小板源性生长因子 (PDGF)在肺泡Ⅱ型细胞中的表达及其在肺纤维化过程中的意义。方法 :分离培养正常成年大鼠肺泡Ⅱ型细胞 ,建立大鼠矽肺模型 ,用原位杂交和免疫组化技术检测体外培养的和矽肺病变中的肺泡Ⅱ型细胞TGFβ1和PDGF BmRNA和蛋白的表达。结果 :(1)体外培养的肺泡Ⅱ型细胞免疫组化染色TGFβ1强阳性 ,PDGF B弱阳性 ;原位杂交TGFβ1和PDGF BmRNA均为阳性。 (2 )大鼠矽肺实验组增生的肺泡Ⅱ型细胞明显表达TGFβ1和PDGF BmRNA和蛋白 ;对照组仅有部分正常肺泡Ⅱ型细胞TGFβ1mRNA呈弱阳性。结论 :增生的肺泡Ⅱ型细胞有TGFβ1和PDGF B基因表达 ,其在矽肺纤维化病变中可能起重要作用。     

PDGF-AA对血管平滑肌细胞c-myc、c-myb mRNA及PCNA表达的影响

目的明确血小板源生长因子-AA(PDGF-AA)与自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞(SHR-VSMC)增殖的关系.方法采用Western blot、RT-PCR等方法,观察在SHR和Wistar大鼠VSMC中,PDGF-AA对SHR/Wistar-VSMC增殖细胞核抗原(PCNA)、c-myc、c-myb mRNA表达影响的差异性.结果在不同浓度PDGF-AA刺激下,SHR-VSMC中PCNA、c-myc、c-myb mRNA表达明显高于Wistar-VSMC(P＜0.01),且呈明显的剂量依赖性关系(P＜0.01).结论PDGF-AA特异性的刺激SHR-VSMC异常增殖,可能是导致高血压血管重构的重要原因之一.     

肺泡Ⅱ型TGFβ1和PDGF基因表达及其肺纤维化中的意义

目的：研究转化生长因子β1（TGFβ1）和血小板源性生长因子（PDGF）在肺泡Ⅱ型细胞中的表达及其在肺纤维化过程中的意义。方法：分离培养正常成年大鼠肺泡Ⅱ型细胞,建立大鼠矽肺模型,用原位杂交和免疫组化技术检测体外培养的和矽肺病变中的肺泡Ⅱ型细胞TGFβ1和PDGF-B mRNA和蛋白的表达。结果：（1）体外培养的肺泡Ⅱ型细胞免疫组化染色TGFβ1强阳性,PDGF-B弱阳性;原位杂交TGFβ1和PDGF-B mRNA均为阳性。（2）大鼠矽肺实验组增生的肺泡Ⅱ型细胞明显表达TGFβ1和PDGF-B mRNA和蛋白;对照组仅有部分正常肺泡Ⅱ型细胞TGFβ1 mRNA呈弱阳性。结论：增生的肺泡Ⅱ型细胞有TGFβ1和PDGF-B基因表达,其在矽肺纤维化病变中可能起重要作用。     

调控胰岛素致自发性高血压大鼠VSMC增殖的蛋白

目的：探讨胰岛素对自发性高血压大鼠血管 平滑肌细胞(VSMC)增殖调控中参与调控的蛋白质。方法：分离、培养SHR 、WKY大鼠的VSMC，各分对照组、胰岛素组。双向电泳技 术分离样品，对差异的蛋白质点进行肽质量指纹测定。差异的蛋白质用免疫印迹验证，同时 观察胰岛素干预前后VSMC的增殖率和迁移率。结果：SHR大鼠胰岛素组的 VSMC［3H］-TdR掺入值(counts/min) 14.40±0.85高于WKY大鼠胰岛素组的VSMC［3H]-TdR掺入值(counts/min) 9.21±0.93。SHR大鼠胰岛素组VSMC的迁移率是WKY大鼠胰岛 素组的1.8倍（P<0.05）。双向电泳分析SHR大鼠胰岛素组与对照组相比有312个点相 匹配。19个蛋白质点产生较好的质谱图，其中14个点与已知蛋白质相匹配。免疫印迹证实SH R VSMC中基质蛋白(matrix gla)和骨桥蛋白(OPN)在胰岛素干预后升高，而肌动蛋白（α-SM ）降低。WKY大鼠与SHR大鼠不同的是胰岛素干预后VSMC 中matrix gla、OPN和肌动蛋白变化 不显著。结论：胰岛素刺激后差异蛋白可能在不同遗传背景的大鼠VSMC 异常增殖中具有不同的表现。     

氯沙坦对自发性高血压大鼠左心室肥厚和转化生长因子β_1的影响

目的 :探讨转化生长因子 β1 (TGFβ1 )在自发性高血压大鼠(SHR)左心室肥厚中的作用及氯沙坦对左心室肥厚和TGFβ1 水平的影响。方法 :2 0只SHR随机分成氯沙坦治疗组和未治疗组 ,每组10只 ,用免疫组织化学法检测SHR心肌TGFβ1 的表达及氯沙坦治疗后的改变 ,同时观察心肌肥厚的变化 ,并与正常WKY组对照。结果 :正常组心肌细胞胞浆内TGFβ1 表达呈弱阳性 ,SHR对照组呈强阳性 ,氯沙坦治疗组呈阳性反应。用图像分析仪计算其平均吸光度分别为 17.46± 2 .3 8、15 6.81± 2 1.75、67.19± 7.2 4,并且SHR左心室质量指数 (LVWI)高于WKY组 ,氯沙坦治疗组LVWI低于对照组。结论 :TGFβ1 在自发性高血压大鼠心肌中表达增强 ,而氯沙坦治疗可抑制其表达 ,从而可能延缓SHR左心室肥厚的病理学进展。     

血管紧张素Ⅱ对血管平滑肌血小板源生长因子

目的:观察血管紧张素Ⅱ对血管平滑肌血小板源生长因子(PDGF)受体β亚单位的调节,探讨两条信号转导途径的交互作用在血管平滑肌细胞(VSMC)增殖中的意义。方法:制备两肾一夹肾性高血压大鼠模型,免疫印迹法检测主动脉组织PDGF受体β亚单位的含量。培养大鼠主动脉VSMC,观察血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对PDGF受体β亚单位的影响。结果:两肾一夹大鼠术后8周动脉血压明显增高,同时主动脉PDGF受体β亚单位的表达高于对照组126.6%(P＜0.05)。AngⅡ刺激培养的VSMC可导致PDGF受体β亚单位上调192.74%(P＜0.01),该效应可被Ⅰ型AngⅡ受体(AT₁)的拮抗剂losartan和磷脂酶C(phospholipasec,PLC)的抑制剂U73122完全阻断(P＜0.01),但仅被丝裂原活化蛋白激酶激酶抑制剂PD98059部分阻断(P＜0.01)。结论:AngⅡ可以通过AT₁及下游的信号分子PLC上调PDGF受体β亚单位的表达,而细胞外信号调节激酶可能参与AngⅡ的胞内信号转导。     

生长因子对成年大鼠肺泡型细胞增生的影响

目的　探讨 EGF、TGFα、TGFβ1、PDGF、b FGF对肺泡 型细胞增生的影响。　方法　在原代培养的成年大鼠肺泡 型细胞中 ,加入不同种类、不同剂量的生长因子 ,作用 48h,测定 3H- Td R掺入、细胞数量和 Ki- 6 7标记指数。　结果　 EGF、TGFα均促进肺泡 型细胞 3H - Td R掺入量、细胞数量及 Ki- 6 7阳性标记率增加 ,TGFα比EGF的作用更强 ;TGFβ1的作用与 EGF、TGFα相反。 EGF、TGFα和 TGFβ1对肺泡 型细胞增生的影响均呈明显量效关系。 PDGF和 b FGF对肺泡 型细胞增生的影响未显示出明确的量效规律。同时或先后加入 TGFα和TGFβ1,肺泡 型细胞的增生反应不同。　结论　 EGF、TGFα和 TGFβ1对培养的成年大鼠肺泡 型细胞增生有明显的调控作用 ;TGFα和 TGFβ1共同作用于细胞时 ,其生物效应与加入不同因子的时序有关。     

丝裂原活化蛋白激酶参与胰岛素对自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞的增殖研究

目的:探讨高血压血管平滑肌细胞(VSMC)在胰岛素作用下胞内信号转导途径之一丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)的影响,及其与VSMC增殖的关系。方法:选用6周龄自发性高血压大鼠(SHR)和WKY大鼠,无菌分离主动脉,体外纯化培养VSMC至6~8代,加胰岛素干预和蛋白激酶C(PKC)抑制剂,采用胶内髓磷脂碱性蛋白原位磷酸化法测定VSMC中MAPK活性,并用Western Blot检测VSMC中MAPK的含量, [³H]-TdR测定VSMC的DNA合成量。结果:胰岛素作用后,SHR组的DNA合成量显著增加,MAPK活性及蛋白含量也显著增加,PKC抑制剂可明显降低MAPK活性。结论:SHR体外培养的VSMC增殖与MAPK活性增加有关,胰岛素可影响其活性,并且可能存在胰岛素-PKC-MAPK轴。     

结缔组织生长因子siRNA对大鼠血管平滑肌细胞增殖和迁移的影响

目的观察结缔组织生长因子(CTGF)siRNA对CTGF表达及对大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)增殖和迁移的影响。方法培养大鼠血管平滑肌细胞,用脂质体法将抗CTGF483siRNA进行转染,Western blot法检测转染效果,MTT法及划痕实验测定对VSMC增殖和迁移的影响。结果转染CTGF483siRNA组的CTGF表达明显低于未转染组,MTT法显示转染CTGF483siRNA后VSMCs增殖减慢,划痕试验证实转染CTGF483siRNA后VSMCs迁移受到抑制。结论CTGFsiRNA可以抑制VSMC增殖和迁移,有望为颈动脉粥样硬化性缺血性脑血管病的预防和治疗新靶点。     

卡格列净改善自发性高血压大鼠主动脉重构的作用及其机制

目的：探索卡格列净通过调控血管平滑肌细胞（VSMCs）增殖迁移及肾素-血管紧张素-醛固酮系统（RAAS）/转化生长因子β1(TGF-β1)信号通路,改善自发性高血压大鼠（SHR）胸主动脉重构。方法 ：将大鼠分为正常血压大鼠对照组（WKY组）、SHR组和SHR+卡格列净组。尾袖血压计监测大鼠尾动脉血压,H-E染色评估胸主动脉血管壁中膜厚度及中膜厚度/管腔直径比值,Masson染色检测血管壁纤维化程度。体外分离培养WKY和SHR胸主动脉VSMCs,细胞分为WKY组、WKY+卡格列净组、SHR组和SHR+卡格列净组。CCK-8检测细胞增殖,划痕实验检测细胞迁移,RT-qPCR和免疫印迹检测α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、分泌型磷酸蛋白1(SPP1)、 I型胶原蛋白（Col1a）、Ⅲ型胶原蛋白（Col3a）、血管紧张素原（AGT）、血管紧张素Ⅱ受体1 (AGTR1)、TGF-β1mRNA与蛋白表达。结果 ：给予卡格列净灌胃8周后,与SHR组相比,SHR+卡格列净组大鼠尾动脉血压、胸主动脉中膜厚度、中膜厚度/管腔直径比值、胶原蛋白沉积程度降低。SHR组VSMCs增殖、迁移能力较WKY组明显增强...     

转化生长因子-β_1在自发性高血压大鼠肾小管的表达及作用

目的:研究转化生长因子-β1(TGF-β1)在自发性高血压大鼠(SHR)肾小管的表达及其与肾小管间质纤维化的关系。方法:以同龄雄性正常血压大鼠(WKY)和SHR为研究对象,监测实验前后大鼠尾动脉血压、肾功能及β2-微球蛋白(β2-MG),并采用免疫组织化学方法检测TGF-β1在肾小管中的表达。结果:同WKY组比较,SHR大鼠组24周时β2-MG显著增高,尾动脉血压显著性增高,尿素氮和血肌酐的差异无显著性意义。TGF-β1在WKY组肾小管的表达无或极微量,而在SHR组肾小管的表达明显,且随高血压病程的进展显著性增加。结论:TGF-β1在SHR肾小管的表达显著增加,提示其可能是致肾问质纤维化的重要因素。     

C反应蛋白促进离体SHR大鼠血管平滑肌细胞的增殖

目的： 探讨C反应蛋白（CRP）对SHR大鼠主动脉平滑肌细胞（VSMC）增殖的影响。方法： SHR大鼠VSMC培养，取3-4代细胞进行药物干预。先加入CRP和CRP受体CD32的抗体，测定NF-κB和抑制蛋白I-κB在VSMC中的表达；再使用NF-κB活化抑制剂PDTC，观察对血管紧张素Ⅱ诱发VSMC增殖的影响。结果： 使用CRP后，SHR大鼠VSMC的NF-κB和抑制蛋白I-κB的表达增强；使用CD32抗体可以抑制这种增强； PDTC可以抑制血管紧张素Ⅱ促进平滑肌细胞的增殖作用。结论： CRP可以通过直接激活SHR大鼠VSMC的 NF-κB，促进其VSMC增殖。     

转化生长因子β1及其2型受体在实验性大鼠升主动脉瘤中的表达

目的 研究转化生长因子β1(TGFβ1)及其2型受体(TGFβRⅡ)在实验性大鼠升主动脉瘤中的表达及其意义. 方法 缩窄幼年Wistar大鼠升主动脉制作升主动脉瘤模型,4个月后处死动物,用免疫组织化学和Western blotting方法 检测动脉瘤壁TGFβ1和TGFβRⅡ的表达. 结果 免疫组织化学显示,TGFβ1表达于动脉瘤和对照组动脉全层;TGFβRⅡ大量表达于动脉瘤增生的内膜和中膜平滑肌层,而对照组表达很弱.Western blotting显示,动脉瘤组织中TGFβ1和TGFβRⅡ表达均强于对照组. 结论 TGFβ1和TGFβRⅡ在动脉瘤中表达强于对照组,TGFβ信号通路可能在动脉瘤形成过程中起重要作用.     

黄芩苷抑制大鼠血管平滑肌细胞增殖和新生内膜肥厚

目的 探讨黄芩苷对大鼠血管平滑肌细胞（VSMC）增殖和内皮损伤诱导的新生内膜形成的影响及其机制。方法 采用细胞培养、MTT分析、Western blot及免疫组织化学等方法研究黄芩苷的作用机制。结果 黄芩苷可呈浓度依赖性地抑制血小板源生长因子（PDGF）诱导的VSMC增殖,降低增殖细胞核抗原（PCNA）的表达,阻断PDGF受体的激活和MEK/ERK信号通路的活化。整体实验显示,黄芩苷可预防球囊损伤诱导的血管新生内膜肥厚,明显降低内膜/中膜面积（I/M）比值（P<0.01）;PCNA、细胞间黏附分子（ICAM-1）和血管黏附分子（VCAM-1）蛋白的表达也明显减少（P<0.01）。结论 黄芩苷通过抑制VSMC增殖而阻止球囊损伤诱导的大鼠血管内膜增生。     

香烟提取物影响大鼠主动脉平滑肌细胞结缔组织生长因子的表达

背景：血管平滑肌细胞增殖是心血管系统组织变化的基础。 目的：观察不同浓度香烟提取物对大鼠主动脉平滑肌细胞结缔组织生长因子表达的影响。 方法：取第3代大鼠主动脉平滑肌细胞,分别用体积分数2.5%,5%,10%,20%的香烟提取物进行干预。 结果与结论：实时定量RT-PCR结果显示,体积分数2.5%,5%,10%,20%的香烟提取物作用12 h均可促进大鼠主动脉平滑肌细胞结缔组织生长因子mRNA的表达,以体积分数5%香烟提取物的作用最明显,且其刺激大鼠主动脉平滑肌细胞结缔组织生长因子mRNA的表达在24 h内呈时间依赖性。提示香烟提取物可上调大鼠主动脉平滑肌细胞结缔组织生长因子mRNA的表达,导致大鼠主动脉平滑肌细胞的增殖。     

β3整合素在生长因子促血管平滑肌细胞粘附和迁移中的作用

目的:探讨血小板衍生生长因子(PDGF)对β₃整合素表达的影响及β₃整合素在PDGF促血管平滑肌细胞(VSMC)粘附、迁移和增殖中的作用。方法:用抗β₃整合素胞外域抗体封闭VSMCβ₃整合素后,通过-TdR掺入、细胞粘附、细胞迁移分析及RT-PCR等方法,检测PDGF对β₃整合素表达及对VSMC粘附、迁移和增殖的影响。结果:阻断β₃整合素与细胞外基质(ECM)蛋白相互作用后,可在一定程度上抑制PDGF刺激的VSMC增殖,使-TdR掺入率降低39%;在β₃整合素抗体浓度为10mg/L时,PDGF引发的细胞粘附和迁移受到显著抑制(P＜0.05);PDGF作用于VSMC6h,β₃整合素基因表达活性达到峰值,比对照细胞高87%。结论:PDGF可显著诱导β₃整合素在VSMC中表达;β₃整合素与ECM蛋白相互作用在PDGF促VSMC粘附、迁移方面发挥重要作用。     

血小板衍生生长因子B链与血管新生促进移植物动脉血管病发展

目的以大鼠颈总动脉移植为模型探讨移植物动脉血管病（TA）的病理生理机制。方法建立大鼠颈总动脉移植模型。受体随机分3组，同系组（n=6）：Lewis至Lewis颈总动脉移植；TA组（n=7）：Brown—Norway（BN）Lewis颈总动脉移植；干预组（n=7）：BN至Lewis颈总动脉移植，术后给予阿司匹林80mg／（kg·d）治疗8周。术后8周取移植动脉做病理学分析，观察动脉内膜平滑肌细胞增殖和新生毛细血管生成情况，评估内膜增生程度；免疫组织化学法检测血小板衍生生长因子B链（PDGF-B）和环氧化酶2（COX-2）的表达。结果①同系组移植动脉内膜未见增生；TA组内膜见大量的血管平滑肌细胞（VSMC）增殖，新生内膜中见丰富的新生毛细血管形成；干预组较TA组内膜增生程度减轻（P〈0．05），内膜厚度减少48．0％。②PDGF—B、COX-2在同系组几乎不表达，而在TA组移植动脉内膜显著表达：干预组较TA组PDGF—B、COX-2表达下调，阳性细胞显著减少（P〈0．05）。结论TA的发病是一个多途径、多机制的病理生理过程：新生内膜高表达PDGF—B和血管新生促进了TA的发展。     

00336-37酸味中药复方对糖尿病大鼠动脉硬化的

)诱导的糖尿病大鼠血糖和腹主动脉终末糖化产物(AGES)、腹主动脉α SM 肌动蛋白、血小板源生长因子 A(PDGF A)及血管平滑肌细胞(VSMC)的影响。结果 :酸味中药复方有降低血糖、减少AGES 含量、降低PDGF A水平、提高α SM 肌动蛋白水平以及抑制VSMC增生的作用。结论 :酸味中药复方对糖尿病大鼠的动脉硬化有一定的防治作用。Effect of Compound of Sour Medicinal Herbs on Arteriosclerosis in STZ-Induced Diabetic RatZhu Dezeng,Tao Kaizhong△,Zhang Chuansen Changhai Hospital,Second Military Medical universi