黄芪甲甙治疗Balb/c小鼠慢性柯萨奇B3病毒性心肌炎的疗效

目的观察黄芪甲甙对实验性小鼠柯萨奇B3病毒（CVB3）性心肌炎的疗效。方法Balb／c小鼠80只随机分为模型组（30只）、干预组（30只）、对照组（20只）。模型组和干预组小鼠1次／月腹腔接种CVB3，共3个月；对照组腹腔注射等容积不含病毒的培养液。对照组和模型组小鼠每日以饮用水喂养，干预组小鼠以加有羧甲基纤维素钠助溶的黄芪甲甙饮用水（质量浓度为300mg／L）喂养，观察小鼠生存率。3个月后处死所有存活小鼠，HE染色进行心肌病理检查、苦味酸天狼星红胶原染色后以自动图像分析系统计算胶原容积积分（CVF），采用原位末端标记法检测其心肌细胞凋亡指数，半定量反转录聚合酶链反应进行心肌CVB3 RNA和心肌组织凋亡检测。结果模型组生存率为59．7％，干预组生存率为76．7％，二组比较有显著性差异（χ^2=4．26P〈0．05）；模型组与干预组病理积分分别为（3．86±0．47）、（1．72±0．56），二组比较有显著性差异（t=4．21 P〈0．01）；模型组与干预组CVF分别为（17．4±1．2）％、（8．6±0．9）％，二组比较有显著性差异（χ^2=5．38P〈0．05）；模型组与干预组心肌细胞凋亡指数分别为（19．6±5．2）％、（4．3±2．5）％，二组比较有显著性差异（χ^2=35．16 P〈0．01）。干预组心肌组织中CVB3 RNA水平与模型组比较有非常显著的统计学意义[（0．69±0．38）vs（1．24±0．57），t=4．26 P〈0．01]。结论黄芪甲甙可能成为一种有效的治疗Balb／c小鼠慢性CVB3心肌炎的药物。     

干扰素和黄芪对小鼠病毒性心肌炎TNF-α影响的研究

目的 研究病毒性心肌炎（VM）小鼠外周血肿瘤坏死因子仪（TNF-α）的动态变化以及干扰素、黄芪对其的影响,为临床应用干扰素、黄芪治疗病毒性心肌炎提供客观依据。方法 将小鼠随机分为正常对照组（A组）、病毒对照组（B组）、干扰素治疗组（C组）、黄芪治疗组（D组）。腹腔接种柯萨奇B3（CVB3）病毒液建立VM模型。在感染病毒24h后,C组腹腔注射干扰索1万U／（g·d）,D组用灌胃器喂服黄芪30mg／（g·d）。均连用5d;在接种病毒后第7、14、21天时留取血液、心肌标本。分别进行血清TNF-α及心肌病理检查。并分析TNFnd与心肌病理改变的关系。结果 VM小鼠TNF-α水平升高,并与心肌病理损害程度密切相关;干扰素和黄芪治疗VM,均可降低血清TNF—α水平。减轻心肌病理损害程度;干扰索对VM的治疗效果明显优于黄芪。结论 TNF—α参与了病毒性心肌炎的发生发展过程;通过降低血清TNF—α水平,调节免疫反应,可能是干扰索、黄芪治疗VM的作用机制之一。     

急性病毒性心肌炎患儿血清肿瘤坏死因子-α、白细胞介素-6水平变化的意义

目的探讨急性病毒性心肌炎（AVM）患儿血清肿瘤坏死因子-α（TNF-α）及白细胞介素-6（IL-6）水平变化的意义。方法应用放射免疫法（RIA）和酶联免疫吸附法（ELISA）检测53例AVM患儿及20例健康儿童血清TNF-α及IL-6水平,分析TNF-α及IL-6血清水平与儿童AVM发生的关系。结果AVM组急性期血清TNF-α和IL-6水平分别为（526.7±32.9）和（3.23±0.53）mg/L,健康对照组分别为（383.1±27.5）和（1.63±0.22）mg/L,二组比较均有显著性差异（Pa〈0.05）;临床治愈后,AVM组TNF-α及IL-6分别降至（407.3±34.4）和（1.97±0.29）mg/L,与健康对照组比较均无显著性差异（Pa〉0.05）。结论AVM患儿急性期血清TNF-α和IL-6明显增高,心肌炎治愈后降至正常,检测TNF-α及IL-6血清水平及变化有助于判断AVM患儿病情及心肌损害程度。     

氧化应激在新生大鼠常压高体积分数氧致脑损伤发生中的作用

目的探讨氧化应激在7日龄新生大鼠高体积分数氧（高氧）性脑损伤发生中的作用。方法体质量12～18g的7日龄SD大鼠42只，随机分为空气组和高氧组。高氧组与其乳母一起置于氧箱中，调节氧流量（3L／min），使箱内氧体积分数维持（800±50）mL／L，用数字式测氧仪进行监测。空气组置于同一室内空气中，氧体积分数为210mL／L，饲养条件与高氧组相同。高氧／空气开始暴露30min后，各取3只大鼠，麻醉后采血，行动脉血气分析。高氧／空气暴露12h后2组大鼠各处死8只，化学比色法检测其脑组织还原型谷胱甘肽（GSH）、氧化型谷胱甘肽（GSSG）、GSSG／GSH、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）水平。高氧／空气暴露12h后2组各处死10只大鼠，取其脑组织常规脱水、包埋、切片（经海马），脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的原位缺口末端标记法观察脑组织细胞凋亡指数。结果空气组平均动脉血氧分压[pa（O2）]为（87．0±2．71）mmHg（1mmHg=0．133kPa），高氧组为（219．0±10．7）mmHg，高氧组明显高于空气组[（87．0±2．71）mmHg]（P〈0．05）。高氧组暴露12h脑细胞凋亡指数[（39．20±7．59）％]较空气组[（4．50±1．87）％]显著增加（P〈0．01）。高氧暴露12h组GSH[（0．994±0．230）μmol／g]较空气组[（1．210±0．210）μmoL／g]明显下降（P〈0．05），高氧组暴露12h SOD[（124．60±4．14）×10^3 U／g]也较空气组[（145．0±6．62）×10^3 U／g]明显下降（P〈0．01）；高氧组GSSG[（0．0283±0．0043）μmol／g]、GSSG／GSH（0．0296±0．0045）、MDA[（5．21±0．41）μmol／g]均较空气组[（0．0212±0．0029）μmol／g，0．0181±0．0031，（4．85±0．25）μmol／g]显著升高（Pa〈0．05）。结论常压高氧可引起新生大鼠脑细胞的凋亡及氧化应激，氧化应激与高氧性脑损伤密切相关。     

苦瓜素对柯萨奇B3病毒核糖核酸的作用及其机制

目的　观察苦瓜素对急性柯萨奇B3 病毒 (CVB3 )心肌炎心肌中CVB3 RNA量的影响 ,并对苦瓜素的抗病毒机制及其与干扰素 (INF)的关系进行探讨。方法　以CVB3 感染Balb/C小鼠建立病毒性心肌炎实验模型 ,随机分为苦瓜素处理组和生理盐水对照组 ,同时设立正常小鼠对照组。用定量逆转录聚合酶链反应技术(RT PCR)检测心肌组织中CVB3 RNA量 ,酶联免疫吸附试验 (ELISA)检测小鼠血浆INF α及INF γ含量。结果　苦瓜素处理组心肌中CVB3 RNA量明显低于生理盐水对照组 ,两者比较有显著差异 (t =5 .14 6 8　P =0 .0 0 0 9) ;生理盐水对照组INF α水平较正常小鼠对照组低 ,两者有显著差异 (P <0 .0 1) ,INF γ较正常稍高 ,但两者无显著差异 (P >0 .0 5 ) ;苦瓜素处理组两种INF水平均升高 ,与生理盐水对照组比较 ,INF α水平两者显著性差异 (P <0 .0 1) ,但INF γ水平两组无显著差异 (P >0 .0 5 ) ;心肌组织中CVB3 RNA量与血浆INF α具有明显负相关 (r=- 0 .8390　P =0 .0 0 2 4 ) ,而与INF γ相关性不明显 (r =- 0 .6 0 5 9　P =0 .0 6 34)。结论　苦瓜素抑制CVB3 RNA复制 ,为一种有效的抗CVB3 药物 ,抗病毒作用与诱生干扰素 ,尤其是与INF α有关     

溶酶体组织蛋白酶 L在小鼠病毒性心肌炎心肌组织中表达及意义

目的观察Balb/c小鼠病毒性心肌炎心肌组织组织蛋白酶L(cathepsinL)的表达及意义。方法CVB3m(Nancy株)病毒感染Balb/c小鼠建立病毒性心肌炎实验模型,采用免疫组化和RT-PCR技术,检测小鼠心肌组织中不同时点(正常和感染后第3、7、15、30天)cathepsinL的表达。结果免疫组化与RT-PCR结果显示,感染CVB3m后小鼠心肌组织中cathepsinL的表达随感染时间的延长,呈上升趋势,至30d表达最高,各时点cathepsinL的表达水平与正常小鼠比较差异有显著性(P<0.05)。结论cathepsinL在Balb/c小鼠CVB3病毒性心肌炎的发生发展起一定作用。     

病毒性心肌炎小鼠不同时点胰岛素样生长因子-1及其相关蛋白的表达

目的探讨胰岛素样生长因子-1（IGF-1）及其相关蛋白在病毒性心肌炎病程中的作用。方法取Balb／C小鼠60只，随机分为病毒实验组40只，腹腔感染CVB3病毒，分别于实验d3、7、15、30采血、取心肌组织；空白对组（未感染CVB3病毒小鼠）20只。用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测其血浆IGF-1的表达，用免疫组织化学法和逆转录酶多聚链反应（RT-PCR）技术检测其心肌组织IGF-1及相关蛋白的表达。结果病毒性心肌炎小鼠血浆IGF-1及相关蛋白表达均较空白对照组高，且在感染病毒后表达渐增高，15d达最高峰，30d表达降低，但仍维持一较高水平，与对照组比较仍有显著差异（F=19．53 P〈0.05），其在心肌组织中的表达与血浆中的表达变化规律一致。结论IGF-1及其相关蛋白可能参与小鼠CVB3病毒性心肌炎的病理生理过程。     

胰岛素样生长因子-1在病毒性心肌炎小鼠中的变化及对心肌的保护作用

目的 探讨病毒性心肌炎（VMC）小鼠血清胰岛素样生长因子-1（IGF-1）水平的变化及外源性IGF-1对凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax表达的影响。方法 Balb／c雄性小鼠随机分为3组：正常对照组、柯萨奇B3病毒（CVB3）感染组（感染组）和病毒感染加IGF-1治疗组。分别在实验d7、d14处死动物，留取血清、心肌标本。放射免疫法检测血清IGF-1水平，免疫组织化学法检测心肌组织Bcl-2和Bax蛋白表达。结果 感染组血清IGF-1水平较对照组明显降低，Bcl-2表达减少、Bax表达增加（P〈0．01）；治疗组较感染组Bcl-2表达增加、Bax表达减少（P〈0．01）。结论 IGF-1对VM小鼠的心肌细胞有保护作用。     

新生儿脐血Toll样受体变化及其意义

目的观察新生儿脐血单个核细胞（MNC）rrLR4、TLR2mRNA的表达。方法将46例无窒息新生儿及40例窒息新生儿根据胎龄分组,分离脐血MNC,测定其TLR4／2mRNA表达及上清中TNF-α水平。另外将TLR4／2mRNA表达水平与TNF-α水平进行相关分析。结果无窒息新生儿中足月儿TLR4／2mRNA及TNF-O／．水平分别为0．75±0．12、0．63±0．08、2502．6±273．1ng／t,胎龄≥32周但〈37周早产儿分别为0．37±0．04、0．32±0．03、1218．8±145．7ng／t,胎龄〈32周早产儿分别为0．26±0．03、0．20±0．03、811．8±105．2ng／t;窒息新生儿中足月儿TLR4／2mRNA及TNF-α．水平分别为0．58±0．07、0．50±0．06、1946．4±244．2ng／t,胎龄≥32周但〈37周早产儿分别为0．29±0．03、0．26±0．03、970．0±94．3ng／t,胎龄〈32周早产儿分别为0．17±0．02、0．14±0．02、652．6±60．3ng／t;成人TLR4／2mRNA及TNF-α水平分别为2．71±0．75、2．61±0．33、9270．1±1098．3ng／t。早产儿、足月儿TLR4／2mRNA及TNF-α水平均低于成人,胎龄越低,TLR4／2mRNA及TNF-α水平越低。窒息新生儿TLR4／2mRNA及TNF-α的表达水平均低于同胎龄无窒息新生儿（P〈0．01）。TLR4／2mRNA表达水平与TNF-O／．水平呈正相关关系。结论新生儿,特别是早产儿,TLR水平低下,可能是新生儿天然免疫能力低下,容易患败血症等严重感染性疾病的重要原因之一。     

促肝细胞生长素对大鼠肾缺血再灌注损伤细胞凋亡的干预

目的探讨促肝细胞生长素（pHGF）对肾缺血再灌注损伤（IRI）大鼠肾功能及‘肾小管上皮细胞凋亡的影响。方法雄性Sprague—Dawley大鼠32只，随机分为假手术组（组I）、缺血再灌注组（组Ⅱ）、缺血再灌注前pHGF干预组（组Ⅲ）和缺血再灌注后pHGF干预组（组Ⅳ）。采用无损伤动脉夹钳夹大鼠双侧肾蒂45min，制作肾IRI模型。组I和组Ⅱ腹腔注射等量9g／L盐水（0．8mL），组Ⅲ和组Ⅳ分别在术前和术后腹腔注射pHGF 50mg／kg。于IRI 12 h股动脉采血，处死动物后迅速摘取其左侧肾脏。采用酶法检测血清肌酐（Scr），采用肾组织原位细胞凋亡标记法（TUNEL）检测肾小管上皮细胞凋亡。结果组Ⅱ血清Scr水平（120．850&#177;22．237）μmol／L明显高于组I（22．775&#177;6．508）μmol／L（P〈0．01），组Ⅲ（60．413&#177;10．197）μmol／L和组Ⅳ（69．40&#177;11．443）μmol／L表达水平均明显较组Ⅱ下降（Pa〈0．01）。组Ⅱ肾脏凋亡阳性细胞的表达（26．850&#177;1．476）较组I（0．90&#177;0．385）明显升高（P〈0．01），组Ⅲ（8．30&#177;1．146）和组Ⅳ（9．0&#177;0．869）均较组Ⅱ显著下调（Pa〈0．01）。组Ⅲ和组Ⅳ间各项值比较差异均无显著性差异（Pa〉0．05）。结论pHGF能显著降低肾缺血再灌注损伤大鼠血清Scr水平，显著抑制其肾小管上皮细胞凋亡，对缺血性急性肾衰竭既有保护又有治疗作用。     

基质金属蛋白酶在小鼠病毒性心肌炎中的表达及肾素-血管紧张素系统阻断后的变化

目的探讨基质金属蛋白酶-3（MMP-3）及金属蛋白酶组织抑制因子-1（TIMP-1）在病毒性心肌炎（VM）小鼠中的作用及肾素一血管紧张素系统抑制剂（RASI）的治疗效果。方法100只Balb／c小鼠随机分为对照组（A组）、模型组（B组）、假干预组（C组）、福辛普利组（D组）和缬沙坦组（E组）5组,每组20只。B～E组小鼠腹腔接种0．1ml的柯萨奇病毒B3（CVB3）悬液建立VM模型,A组腹腔注射不含CVB3的0．1mlHep-2细胞冻溶液作对照组。C组、D组及E组于注射CVB324h后分别予生理盐水、福辛普利、缬沙坦灌胃,第14天处死小鼠,心脏切片HE染色计算病理积分,氯氨T法测定心肌胶原含量,RT—PCR法检测心肌MMP．3、TIMP-1mRNA的表达。结果与A组比较,B组、C组心肌MMP-3表达明显上调,TIMP-1表达明显下调,心肌胶原含量显著增高（P均〈0．05）;与B组比较,D组、E组心肌MMP-3表达明显下调,TIMP-1表达明显上调,心肌胶原含量显著减少（P均〈0．05）。结论MMP-3／TIMP-1参与VM小鼠的心肌病理过程,可能是导致心肌胶原重构的重要因素之一。福辛普利及缬沙坦能明显下调MMP-3的表达、上调TIMP-1的表达,逆转心肌胶原重构。     

急性病毒性心肌炎小鼠肿瘤坏死因子-α、单核细胞趋化蛋白-1的表达及卡维地洛的干预作用

目的 探讨TNF-α、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)在急性病毒性心肌炎(VMC)发病中的作用及β受体阻滞剂卡维地洛对其影响.方法 将80只4周龄雄性Balb/c小鼠随机分为3组:心肌炎组(n=30)、卡维地洛组(n=30)和对照组(n=20),心肌炎组及卡维地洛组经腹腔接种柯萨奇病毒B3(CVB3)诱发急性VMC,对照组接种不含病毒的Eagle's液;卡维地洛组于接种病毒次日开始灌服卡维地洛5 mg/kg,心肌炎组和对照组灌服9 g/L盐水,每天2次.于接种后的第7、14天随机从各组抽取8只小鼠取血后处死,HE染色检测小鼠心肌病理积分,ELISA法检测血清TNF-α水平,RT-PCR检测心肌组织MCP-1 mRNA的表达.结果 心肌炎组心肌组织病理积分较对照组明显增高(P＜0.01),卡维地洛组较心肌炎组病理积分降低(P＜0.05);心肌炎组小鼠血清TNF-α水平较对照组升高(P＜0.01),且与心肌病理积分呈正相关(r=0.42,P＜0.05),卡维地洛组TNF-α水平较心肌炎组显著下降(P＜0.05);与对照组比较,心肌炎组小鼠心肌MCP-1 mRNA表达明显增加(P＜0.01),卡维地洛组小鼠心肌MCP-1 mRNA表达较心肌炎组明显下降(P＜0.05).结论 TNF-α和MCP-1参与VMC的发病过程,卡维地洛可能通过下调TNF-α、MCP-1的过表达减轻CVB3感染小鼠的心肌损害,起心肌保护作用.     

溶酶体组织蛋白酶B在小鼠病毒性心肌炎心肌组织中的表达

目的 研究Balb／c小鼠病毒性心肌炎心肌组织溶酶体组织蛋白酶B的表达。方法 采用免疫组织化学技术和RT-PCR技术检测Balb／c小鼠感染和未感染CVB3m(Nancy株)病毒后心肌组织中d3、d7、d15、d30溶酶体组织蛋白酶B表达。结果 小鼠感染CVB3m病毒后心肌组织中组织蛋白酶B均较正常增高且以d3表达最高,d7次之,d15、d30依次降低。d3、d7、d15与正常比较差异有显著性(P<0.05)。心肌组织中组织蛋白酶B的表达增高与心肌损伤程度基本一致。结论 溶酶体组织蛋白酶B在Balb／c小鼠CVB3病毒性心肌炎发病机制中起一定作用。     

新生鼠窒息后心肌基质金属蛋白酶活性与心肌损害的相关性

目的探讨新生鼠窒息后心肌组织心肌基质金属蛋白酶（MMPs）表达与心肌损害的相关性。方法60只7—10日龄Wistar鼠,随机分成对照组（D组）、窒息组（A、B、C3组,分别为窒息复氧后1、7、14d）,每组15只。窒息组模拟新生鼠常压窒息模型,测定cTnI水平;心肌组织MMPs-3、9活性;心肌病理积分及胶原含量。结果cTnI（ng／m1）A组（0．3680±0．40）明显高于D组（0．0783±0．06）P〈0．05,B组下降（0．1889-i-0．15）P仍〈0．05,C组降至正常（0．1338±0．07）P〉0．05;心肌组织MMPs-3活性A组（0．1847±0．04）,B组最高（O．2780±0．05）,C组（0．2014±0．05）,与D组（0．1213±0．03）比较P均〈0．05;MMPs-9活性A、B、C组逐渐增高（0．1502±0．01、0．1715±0．01、0．1868±0．03、P均〈0．05）;心肌胶原含量A、B、C组逐渐增高（35．59±1．09、38．94±0．67、40．69±0．75ng／ml分别为P〉0．05、P〈0．05、P〈0．05）;MMPs-3、9表达与心肌病理积分呈正相关（r分别为0．669、0．667,P均〈0．05）,与胶原含量呈正相关（r分别为0．482、0．679,P均〈0．05）。结论新生鼠窒息后心肌MMPs-3、9过度激活,继发胶原含量增高,MMPs-3、9活性与心肌病理损害密切相关。提示MMPs参与了窒息后心肌损害,可能是心肌间质重塑的因素之一。     

N-乙酰半胱氨酸对新生小鼠肝细胞内毒素损伤的保护作用

目的探讨N-乙酰半胱氨酸对新生小鼠肝细胞内毒素损伤时的保护作用,为新生小鼠内毒素肝损伤的防治研究提供理论依据。方法采用胶原酶消化组织块法分离新生小鼠的肝细胞,将细胞分内毒素处理组（LPS组）及N-乙酰半胱氨酸预处理组（NAC组）。LPS组培养基中加入LPS 10μg／ml;NAC组先在培养基中加入N-乙酰半胱氨酸5mmol／L,孵育1h后再加入LPS 10μg／ml。分别于加入LPS 0、6和12h收集各组肝细胞上清和肝细胞,每组12例,以生化法检测培养上清的丙氨酸氨基转移酶（alanine aminotransferase,ALT）和一氧化氮（nitric oxide,NO）的水平,并以逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法检测各组细胞诱导型一氧化氮合成酶（induced nitric oxide synthase,iNOS）mRNA的表达。结果LPS组在0、6、12h的ALT值分别为（21．1±4．78）U／L、（59．8±8．59）U／L、（89．6±15．30）U／L,NO水平分别为（1．6±0．31）μmol／L、（6．6±0．81）μmol／L、（7．8±1．01）μmol／L,iNOS mRNA水平分别为0．17±0．023、0．71±0．091、0．71±0．097。LPS组的ALT和NO、iNOS mRNA水平在6、12h较0h明显升高,差异有极显著统计学意义（P〈0．01）;NAC组上清中ALT和NO水平在0、6、12h分别为（20．6±5．98）U／L、（40．8±7．30）U／L、（55．4±5．48）U／L和（1．7±0．26）μmol／L、（3．2±0．71）μmol／L、（4．0±0．71）μmol／L,肝细胞iNOS mRNA的表达水平在0、6、12h分别为0．18±0．026、0．41±0．060、0．40±0．067。经NAC预处理后,在6、12h上清中ALT的水平与LPS组比较明显降低,而且NO水平以及肝细胞iNOS mRNA的表达与LPS组比较也明显降低,差异均有极显著统计学意义（P〈0．01）。结论NAC对新生小鼠肝细胞内毒素损伤有保护作用,NAC可能通过抑制LPS激活iNOS而发挥保护作用。     

信号传导和转录激活子与病毒性心肌炎及扩张型心肌病

信号传导和转录激活子（STAT）是存在于细胞质内的一组潜在核转录因子,包括多个家族成员。STAT在急性病毒性心肌炎发病过程中表达明显增加,柯萨奇B3病毒感染不同的STAT基因敲除或活性被抑制的Balb／c小鼠后,心肌炎的发生和预后有显著差异。不同的STAT可诱导辅助细胞（111）向Th1或Th2分化,调控Th1／Th2平衡及调节一些细胞因子的表达,并进而影响病毒复制、炎症反应的发生。扩张型心肌病STAT的表达和活性显著下调,活化的STAT通过减少心肌细胞凋亡和介导心肌内源性保护机制保护心肌免受损伤。STAT有望成为治疗病毒性心肌炎和扩张型心肌病的有效靶分子。     

病毒性心肌炎柯萨奇B组病毒中和抗体的检测

探讨抗柯萨奇B病毒（CVB）中和抗体在正常小儿的水平和诊断病毒性心肌炎中的作用。方法采用微量中和试验方法测定病毒性心肌炎患儿和正常小儿血清中抗CVB中和抗体水平，同时用ELISA方法测定心肌炎患儿CVB特异性IgM。结果正常小儿中和抗体检出率为77．27％（51／66），心肌炎组为95．28％（101／106）；心肌炎组中和抗体异常率73．58％（78／106），中和抗体异常儿中CVB－IgM阳性率为28．38％（21／74）。两组CVB型别分布均以B3感染为最多。结论病毒性心肌炎中以CVB3感染最为多见，因正常小儿CVB感染率很高，只有通过双份血清抗体效价4倍上升或下降才能证明近期存在感染。     

低体积分数氧预处理对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠海马区脑红蛋白变化的影响

目的观察低体积分数氧（低氧）预处理对缺氧缺血性脑损伤（HIBD）新生大鼠脑红蛋白（NGB）变化的影响，探讨低氧预处理与NGB的关系。方法随机将出生7d Wistar大鼠110只分为3组：假手术组（n=10）、HIBD组（n=50）、低氧预处理后HIBD组（n=50），HIBD组和低氧预处理后HIBD组在模型建立后1、5、15、30和60min各个时间点再分为5个亚组。采用双侧颈总动脉结扎的方法建立HIBD模型，应用反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和免疫组织化学方法检测在低氧预处理干预下脑缺氧缺血后NGB mRNA及蛋白质在不同时间的表达量。结果RT-PCR半定量分析：HIBD组NGB mRNA在1、5min时相对表达量均显著高于假手术组（Pa〈0．05）；15、30和60min表达下降，与假手术组比较无统计学意义（Pa〉0．05）。与HIBD组比较，低氧预处理后HIBD组1、5min NGB mRNA相对表达量增加，15、30和60min下降，但差异均无统计学意义（Pa〉0.05）。免疫组织化学结果显示低氧预处理后HIBD组海马区域NGB在1、5、15、30和60min平均吸光度（195．0&#177;11．26，202．41&#177;12．20，182．60&#177;15．72，178．22&#177;14．37，164．86&#177;28．99）与HIBD组（195．59&#177;11．59，201．40&#177;13．61，178．09&#177;18．92，173．75&#177;14．30，163．45&#177;18．66）比较无统计学意义（Pa〉0．05）。结论低氧预处理对新生大鼠的脑保护作用可能与NGB的变化关系不大。     

基于人工神经网络的血清蛋白质指纹图谱模型在先天性巨结肠患儿诊断中的应用

目的建立蛋白质芯片技术检测血清蛋白质指纹图谱的方法，探讨基于人工神经网络（ANN）的血清蛋白质指纹图谱模型在先天性巨结肠（HD）患儿诊断中的应用价值。方法应用蛋白质指纹图谱分析仪测定HD患儿64例、巨结肠类缘病患儿25例和健康儿童23例血清标本的蛋白质指纹图谱，并结合ANN方法进行数据分析。112例标本随机分成训练组66例（HD40例，巨结肠类缘病14例，健康儿童12例）和盲法测试组46例（HD24例，巨结肠类缘病11例，健康儿童11例）。利用从训练组得出的基于ANN的血清蛋白质指纹图谱模型，对46例未知血清进行检测，并与X线影像学检查结果进行比较。结果筛选出质荷比（m／z）位于7211．6和2864．8的蛋白质标志物2个。在HD组表达强度分别为6．15&#177;2．21和2．78&#177;1．21，巨结肠类缘病组表达强度分别为12．82&#177;7．56和4．86&#177;0．91（Pa〈0．01）。筛选出m／z位于6884．2和5639．2的蛋白质标志物2个。HD组表达强度分别为4．09&#177;1．78和15．57&#177;8．87，健康对照组表达强度分别为8．31&#177;3．07和30．31&#177;6．18（P〈0．01）。应用该方法对HD患儿进行诊断的准确率、敏感度和特异度分别为89．13％（41／46例）、87．50％（21／24例）和90．91％（20／22例），明显高于x线影像学检查68．8％（77／112例）、82．8％（53／64例）和50．0％（24／48例）。结论在HD患儿的诊断中，利用从训练组得出的基于ANN的血清蛋白质指纹图谱模型较传统方法有更高的敏感性和特异性。     

哮喘患儿转录因子T-bet/GATA-3 mRNA表达及其与杀伤性T淋巴细胞平衡间的关系

目的研究转录因子T—bet／GATA-3在小儿哮喘发病以及杀伤性T淋巴细胞Te1／Te2失衡中的作用。方法通过半定量RT-PCR检测38例哮喘患儿（哮喘发作组20例,缓解组18例）及20例正常对照组儿童外周血单个核细胞（PBMC）中T—bet、GATA-3mRNA表达情况,同时采用三色荧光流式细胞仪检测哮喘患儿的Te1、Tc2细胞数量,并对T-bet、GATA-3 mRNA表达水平与Te1、Te2细胞比率进行相关分析,了解T—bet／GATA-3对哮喘患儿的Tc细胞分化的调节作用。结果（1）哮喘患儿外周血淋巴细胞转录因子T—bet mRNA表达水平低于正常对照组（0．28±0．03）,其中哮喘发作组（0．14±0．04）显著低于哮喘缓解组（0．21±0．03）（P〈0．05）;转录因子GATA-3mRNA表达水平高于正常对照组（0．37±0．04）,其中哮喘发作组（0．49±0．09）高于哮喘缓解组（0．44±0．08）（P〈0．05）。（2）哮喘患儿外周血淋巴细胞亚群Te1百分率低于正常对照组（31．2±3．8）,其中哮喘发作组（6．6±2．4）又低于哮喘缓解组（14．2±4．3）（P〈0．05）;Tc2细胞百分率高于正常对照组（3．5±1．1）,其中哮喘发作组（10．0±4．2）又高于哮喘缓解组（5．4±2．2）（P〈0．05）。（3）哮喘患儿T-bet mRNA表达量与Tc1细胞比率呈正相关（r=0．704）,与Tc2细胞比率呈负相关（r=-0．629）;GATA-3mRNA表达量与Tc1细胞比率呈负相关（r=-0．612）,与Tc2细胞比率呈正相关（r=0．673）;T-bet／GATA-3mRNA比值与Tel细胞比率呈正相关（r=0．731）,与Te2细胞比率呈负相关（r=-0．642）,与Te1／Te2比值呈正相关（r=0．773）。结论哮喘患儿T—bet／GATA-3mRNA表达水平失调,与哮喘患儿的T细胞呈现Te2优势分化密切相关。