乙二醇在人类胚胎慢速冷冻中的应用研究

由于乙二醇(EG)比丙三醇 (PROH)分子量小 ,为了阐述二者在人类胚胎慢速冷冻中的不同效果 ,本研究分别采用EG和PROH作为冷冻保护剂 ,通过观察鼠胚冷冻复苏后的发育情况以及人冻胚移植后的妊娠结局 ,对EG的渗透性及毒性作一评价。6 2位实验组病人来自于 1999年 1月至 2 0 0 0年 5月汉城IVF中心行IVF ET者 ,其移植后的剩余胚胎采取了EG作为冷冻保护剂的慢速冷冻法保存 ;以 1997年 8月至 1998年 12月的 6 0位同类病人作为对照 ,对照组以PROH为保护剂 ,冷冻方法同上。冷冻保护液的组成如下 :①基础液 :含 10 %HFF的PBS +0 .2mol L…     

人类囊胚玻璃化冷冻研究进展

1985年Rall和Fahy首次应用玻璃化法冷冻保存小鼠胚胎以来,玻璃化冷冻技术以其简单、有效、经济受到关注.在人类辅助生殖技术中,囊胚的培养和移植对于提高妊娠率、减少多胎妊娠的发生具有重要意义,因此需要将剩余囊胚有效冷冻保存,玻璃化法可望成为有效冷冻保存多余囊胚的新技术.在玻璃化冷冻技术中,不同的冷冻装置、冷冻保护剂的类型和浓度、解冻方法的不同、囊胚冷冻前的不同处理,都是影响囊胚冷冻后复苏的关键因素.     

中低强度激光人工皱缩在扩张期囊胚玻璃化冷冻复苏中的应用研究

目的通过中低强度激光人工皱缩囊胚腔联合快速玻璃化冷冻在囊胚冻融周期中的应用,为囊胚冷冻复苏周期提供稳定的技术基础。方法选取2015年9月-2017年3月在该院常规体外受精培养至第3天移植和或冷冻后剩余的可利用胚胎在三气培养系统中进行囊胚培养,参照Gardner囊胚评分标准,将发育至第5天或第6天的4CB以上的囊胚分成试验组和对照组。试验组采用中低强度激光打孔,使囊胚腔皱缩后行玻璃化冷冻,对照组直接行玻璃化冷冻。分析177例解冻囊胚周期,比较解冻囊胚周期两种方法冷冻复苏的复苏率、临床妊娠率、种植率、多胎妊娠率及流产率等。结果试验组解冻囊胚复苏率高于对照组,流产率、多胎率低于对照组,但差异无统计学意义(P0.05);试验组临床妊娠率、胚胎着床率显著高于对照组,差异有统计学意义(P0.01);单囊胚移植多胎率显著低于双囊胚移植(P0.05)。结论应用中低强度激光人工皱缩囊胚腔联合玻璃化冷冻技术,能够提高囊胚冻融周期的胚胎复苏率、妊娠率、着床率,降低流产率、多胎率。     

人类囊胚玻璃化冷冻研究进展

1985年Rail和Fahy首次应用玻璃化法冷冻保存小鼠胚胎以来，玻璃化冷冻技术以其简单、有效、经济受到关注。在人类辅助生殖技术中，囊胚的培养和移植对于提高妊娠率、减少多胎妊娠的发生具有重要意义．因此需要将剩余囊胚有效冷冻保存，玻璃化法可望成为有效冷冻保存多余囊胚的新技术。在玻璃化冷冻技术中．不同的冷冻装置、冷冻保护剂的类型和浓度、解冻方法的不同、囊胚冷冻前的不同处理。都是影响囊胚冷冻后复苏的关键因素。     

冷冻膜及冷冻环在人早期胚胎玻璃化冷冻中的应用比较北大核心CSCD

目的探讨冷冻膜和冷冻环2种载体行玻璃化冷冻对人卵裂期胚胎和囊胚的效果。方法采用回顾性队列研究分析912个解冻复苏周期,比较2种载体行玻璃化冷冻后胚胎复苏结局和临床结局的差异及其相关危险因素。结果 (1) 385枚卵裂期胚胎中,冷冻环组(n=251)和冷冻膜组(n=134)的胚胎复苏率、完整胚胎存活率、临床妊娠率、种植率、流产率、移植周期出生率、双胎出生率、早产率及出生男女比率差异均无统计学意义(P>0.05);冷冻环组新鲜周期优质胚胎率(24.78%)、平均移植周期数(1.3±0.6)、复苏后优质胚胎率(40.76%)、复苏后平均移植胚胎数[(2.1±0.4)个]及低体质量儿出生率(19.01%)均明显高于冷冻膜组[18.59%,P=0.002;1.2±0.4,P=0.001;28.13%,P=0.001;(1.9±0.4)个,P=0.000;4.08%,P=0.015]。(2) 527枚囊胚中,冷冻环组(n=287)和冷冻膜组(n=240)的平均移植周期数、胚胎复苏率、完整胚胎存活率、复苏后囊胚扩张率、流产率、双胎出生率、早产率、低体质量儿出生率及出生男女比率差异均无统计学意义(P>0.05);冷冻环组的临床妊娠率(67.94%)、种植率(49.72%)、移植周期出生率(52.96%)、新鲜周期优质胚胎率(27.0%)、平均移植胚胎数[(1.9±0.4)个]显著高于冷冻膜组[54.17%, P=0.001;39.58%,P=0.002;41.25%,P=0.047; 23.0%, P=0.002;(1.8±0.5)个,P=0.004]。Logistic回归显示,新鲜周期优质胚胎数、内膜厚度及冷冻胚胎所用载体类型与冷冻囊胚复苏移植后临床妊娠密切相关(P=0.017、P=0.049、P=0.044),而年龄、复苏后平均移植胚胎个数、复苏后囊胚扩张数、平均移植周期数及内膜分型等差异均无统计学意义(P>0.05)。结论对于卵裂期胚胎,冷冻膜和冷冻环冷冻胚胎的复苏结局和临床结局均是相当的。对于囊胚,冷冻环组的临床结局优于冷冻膜组。     

两种冷冻载体在囊胚玻璃化冷冻复苏中的对比分析

目的对比分析两种商品化的冷冻载体,冷冻麦管(JY Straws)和冷冻环(Crystal Cap)在囊胚玻璃化冷冻复苏中的效果。方法 2013年7月-2016年1月,在该中心进行的囊胚复苏移植周期1 153例。囊胚均采用玻璃化冷冻复苏移植,冷冻麦管组449例,其中D5单囊胚移植142例、D5双囊胚移植174例、D6单囊胚移植69例、D6双囊胚移植64例;冷冻环组704例,其中D5单囊胚移植123例、D5双囊胚移植330例、D6单囊胚移植90例、D6双囊胚移植161例。对比分析两种冷冻载体各分组的临床妊娠情况。结果 D5单囊胚复苏移植中,冷冻麦管组的临床妊娠率和种植率均高于冷冻环组,57.75%vs.46.34%,但差异无统计学意义(P0.05);D5双囊胚复苏移植中,冷冻麦管组的临床妊娠率、种植率均高于冷冻环组,74.71%vs.68.18%、58.62%vs.53.03%,但差异无统计学意义(P0.05);D6单囊胚复苏移植中,冷冻麦管组的临床妊娠率和种植率均高于冷冻环组,42.03%vs.32.22%,但差异无统计学意义(P0.05);D6双囊胚复苏移植中,冷冻麦管组的临床妊娠率、种植率均略低于冷冻环组,51.56%vs.52.17%、33.59%vs.36.65%,但差异无统计学意义(P0.05)。结论两种冷冻载体均可以获得不错的临床结局,冷冻麦管作为新采用的冷冻载体可以放心使用。     

不同冷冻方案对人早期胚胎发育潜能的影响

目的:比较开放式、封闭式玻璃化冷冻技术及程序化慢速冷冻法对辅助生殖技术人早期胚胎冷冻复苏的效果.方法:回顾性分析622例胚胎冷冻复苏资料,将体外受精-胚胎移植(ⅣF-ET)患者第3天需要冷冻的胚胎,分别采用开放式、封闭式麦管玻璃化法及程序化慢速冷冻法冷冻,比较3组胚胎复苏率、空泡出现率、胚胎完整率、植入率、临床妊娠率、周期取消率、胚胎丢失率及流产率.结果:开放式冻存组共复苏280个周期、627个胚胎,胚胎复苏率、胚胎完整率、植入率和临床妊娠率分别为97.13％、94.89％、28.90％、52.61％,与程序化冷冻组(复苏165个周期、477个胚胎)胚胎复苏率(73.79％)、胚胎完整率(70.02％)、植入率(16.75％)和临床妊娠率(35.44％)相比差异有统计学意义(P＜0.05),与封闭式冻存组(复苏177个周期、400个胚胎)相比差异均无统计学意义(P＞0.05),3种冷冻组空泡出现率、周期取消率、胚胎丢失率及流产率差异均无统计学意义(P＞0.05).结论:两种玻璃化冷冻法能获得同样的冷冻效率,且均优于程序化冷冻法;封闭式麦管玻璃化法能更好地保存胚胎复苏后的发育潜能,是冻存人早期胚胎较为理想的方法.     

玻璃化冷冻法保存人类囊胚的临床应用

目的:探讨玻璃化冷冻法保存人类囊胚的临床应用效果。方法:回顾性分析在某医院生殖中心行玻璃化冷冻解冻囊胚患者共12个周期的结局。结果:玻璃化冷冻解冻共21枚胚胎,存活21枚(存活率100%),共解冻12个周期,均有胚胎移植,获得临床妊娠5例(妊娠率41.67%),着床率23.81%(5/21)。结论:玻璃化冷冻法是保存人类囊胚的一种有效方法。     

不同胚胎冷冻方法对冻融胚胎移植患者临床结局的影响

目的:比较人卵裂期胚胎玻璃化冷冻和慢速冷冻解冻后胚胎复苏率、卵裂球完整率、种植率以及临床妊娠率,评价两种方法的有效性。方法:选择2009年7月～2010年3月在辅助生殖中心行F-ET的89例患者,将其分为玻璃化冷冻组(46例)和慢速冷冻组(43例),比较解冻后胚胎复苏率、卵裂球完整率、种植率以及临床妊娠率。结果:玻璃化冷冻组与慢速冷冻组比较具有较高的胚胎复苏率(92.7%vs.66.1%)、卵裂球完整率(89.2%vs.61.4%)、种植率(21.1%vs.4.7%)以及临床妊娠率(47.8%vs.23.3%)。结论:玻璃化冷冻法解冻后胚胎复苏率高,卵裂球完整性好,胚胎具有更好地发育潜能,是人卵裂期胚胎冷冻的有效方法。     

Cryoleaf和Cryoloop冷冻载体冻融胚胎移植结局

目的:比较Cryoleaf和Cryoloop两种玻璃化冷冻载体对冻融胚胎移植(FET)周期妊娠结局的影响。方法:采用回顾性研究方法,将本中心不同冷冻阶段(day3分裂期胚胎,day5/6囊胚期)的胚胎,根据冷冻载体不同分为Cryoleaf组和Croloop组,比较FET的妊娠结局。结果:分裂期胚胎,Cryoleaf组的胚胎存活率、着床率和临床妊娠率均低于Cryoloop组(P0.05);囊胚期Cryoleaf组的胚胎着床率低于Cryoloop组(P0.05),胚胎存活率和临床妊娠率与Cryoloop组比较无差异(P0.05)。结论:FET周期中,采用cryoloop作为冷冻载体较Cryoleaf能获得更好的妊娠结局。     

人类成熟卵母细胞玻璃化冷冻研究

目的:研究人类成熟卵母细胞玻璃化的方法和冷冻液,探讨人类卵母细胞玻璃化冷冻保存的方法及临床应用价值。方法:运用cryoleaf进行人类成熟卵母细胞玻璃化冷冻保存,复苏后行胞浆内单精子注射-胚胎移植或培养至囊胚形成,观察复苏后卵母细胞受精及发育能力。根据冷冻方法分为程序化冷冻组和玻璃化冷冻组,又将玻璃化冷冻组分为自配液冷冻组和成品液冷冻组,比较各组存活率、受精率、卵裂率及囊胚形成率。结果:程序化冷冻组和玻璃化冷冻组间存活率、卵裂率、囊胚形成率均无显著性差异(P>0.05),但是受精率存在显著性差异(P<0.05);程序化组与自配液组、成品液组间存活率、卵裂率均无显著性差异(P>0.05),但受精率存在显著性差异(P<0.05)。成品液组与自配液组、程序化组间囊胚形成率存在显著性差异(P<0.05)。程序化组移植4例,获得临床妊娠并分娩1例,玻璃化组移植7例,获得1例生化妊娠。结论:程序化冷冻与玻璃化冷冻法均可应用于人类成熟卵母细胞,冻融后卵母细胞具备正常受精能力及卵裂能力。玻璃化冻存人类卵母细胞具有更大发展趋势。     

人卵巢组织3种超低温冷冻方法比较

目的:探讨3种玻璃化冷冻降温方案对成人卵巢中各级卵泡和卵巢间质的形态学及分离卵泡活性的影响。方法:采集14例人卵巢组织,随机分成3组:自制冷冻环组、筛网组、微滴组,均采用乙二醇(EG)、二甲基亚砜(DMSO)、蔗糖作为冷冻保护剂,上述3组采用不同载体降温实现玻璃化,冷冻前后卵巢组织通过苏木素-伊红(H-E)染色检测人卵巢中各级卵泡和卵巢间质的形态学改变并计数卵泡数目;用台盼兰染色进一步观察冷冻前后卵巢组织中分离卵泡活性。结果:冷冻前3组新鲜卵巢组织中形态正常卵泡百分比差异无统计学意义(P0.05)。冷冻环组复苏后形态正常卵泡百分率与冷冻前比较差异无统计学意义(P0.05);筛网组和微滴组复苏后均较冷冻前明显下降(P0.01,P0.05),冷冻环组复苏后形态正常卵泡百分率高于筛网组和微滴组;光镜下形态学分析提示冷冻环较筛网可以更好地保存人卵巢间质形态(P0.01);分离卵泡台盼兰染色提示冷冻后卵泡活性明显下降(P=0.016)。结论:用自制冷冻环可以较好地保存人卵巢组织中的始基卵泡和初级卵泡及卵巢间质形态。玻璃化冷冻卵巢组织后分离获得的总卵泡中有活性卵泡比例较新鲜分离卵泡下降。     

Cryoloop和CPS超速玻璃化冷冻人三原核胚胎效果比较

目的:比较冷冻环(Cryoloop)和闭合型拉细麦管(CPS)超速玻璃化冷冻方法冻存人早期卵裂期胚胎的效果差异,以期建立1种有效的超速玻璃化冷冻方法。方法:将人三原核孕卵发育形成的126个6-10细胞胚胎随机分为3组:对照组30个、Cryoloop组36个和CPS组60个。通过形态学观察,比较胚胎复苏后存活率;经罗丹明123染色,激光扫描共聚焦显微镜摄片分析,测定复苏后存活胚胎线粒体跨膜电位(△Ψm)。结果:Cryoloop组复苏后胚胎存活率达100%,显著高于CPS组(P<0.05);Cryoloop组△Ψm显著高于CPS组(P<0.05),而与未冷冻对照组相比,无明显差异(P>0.05)。结论:Cryoloop超速玻璃化冷冻法获得了更高的胚胎存活率和胚胎活力,该方法更适于冷冻人早期卵裂期胚胎。     

胚胎冷冻时间对冻融胚胎移植结局的影响

目的：探讨玻璃化冷冻保存卵裂期胚胎的时间对冻融胚胎移植结局的影响。方法：回顾性分析2017年1月—2020年12月山西医科大学第一医院生殖医学中心进行卵裂期胚胎玻璃化冷冻复苏移植的3 847个周期,包括8 767枚冻融胚胎。根据胚胎冻存时间分为5组,≤1年组,（1~2]年组、（2~3]年组、（3~4]年组和>4年组,比较各组患者的一般情况、胚胎解冻复苏情况及临床结局的差异,并采用二分类Logistic回归分析取卵年龄、移植年龄、冻存时间、移植胚胎数和优质胚胎数对移植结局的影响。结果：各组患者取卵年龄、移植年龄、移植胚胎数、临床妊娠率及活产率比较,差异有统计学意义（P<0.05）。Logistic回归分析显示取卵年龄、移植年龄、冻存时间对临床妊娠、活产无影响（P>0.05）,移植胚胎数及优质胚胎数对临床妊娠、活产有影响（P<0.05）。结论：玻璃化冷冻保存卵裂期胚胎的时间对胚胎复苏及妊娠结局没有显著影响。     

Successful cryoloop vitrification and subsequent in vitro maturation of mouse preantral follicles

The purpose of this study was to assess follicular viability and competence through in vitro maturation (IVM) of cryoloop vitrified mouse preantral follicles. Early mouse preantral follicles were isolated and vitrified using the cyroloop vitrification technique. After thawing, the preantral follicles and oocytes were cultured and in vitro matured for 10 d to the metaphase two stage (M2). Oocytes were assessed for viability at 2 and 10 d of IVM and compared to a control group of freshly isolated preantral follicles undergoing IVM. Of vitrified follicles, 94.0% (345/367) were recovered after thawing. The survival rate after the first two-days of IVM culture was 82.3% (284/345) for the cryoloop vitrified follicles and 100% for the control follicles (437/437). The percentage of oocytes in the cryoloop group that developed to M2 was 70.2% (174/248), comparable to that of the control group at 68.7% (241/351) (p value 0.12). Our results indicate that cyroloop vitrification is a viable and practical technique for cryopreservation of mouse preantral follicles. Human oocyte cryopreservation by means of cryoloop vitrification may prove to be useful as a possible treatment modality for human fertility preservation.     

Effect of type of cryoprotectant on morphology and developmental competence of in vitro-matured buffalo (Bubalus bubalis) oocytes subjected to slow freezing or vitrification

The present study examined the effects of different cryoprotectants on morphology and developmental competence of in vitro-matured buffalo oocytes after slow freezing or vitrification. After slow freezing in dimethyl sulfoxide (DMSO), ethylene glycol (EG) or 1,2-propanediol (PROH), at 1.0 or 1.5 m each, the proportion of morphologically normal oocytes recovered was significantly higher (P < 0.05) with 1.5 than 1.0 m for all cryoprotectants and was highest (P < 0.05) for 1.5 m DMSO. Following vitrification, the percentage of morphologically normal oocytes recovered was lower (P < 0.01) for 40% EG than for 40% DMSO, 20% EG + 20% DMSO or 20% EG + 20% PROH. The most common damage, irrespective of the cryopreservation method, was loss of cumulus mass. The cleavage rate and the proportion of vitrified-warmed oocytes that developed to morulae/blastocysts were significantly higher (P < 0.01) for 20% EG + 20% DMSO than for the other groups. A higher proportion of oocytes developed to morulae (11.5% v. 4.3%) or blastocysts (5.4% v. 0.6%) after vitrification in 20% EG + 20% DMSO than after slow freezing in 1.5 m DMSO. In conclusion, vitrification was more effective than slow freezing for the cryopreservation of in vitro-matured buffalo oocytes.     

雄性生殖细胞冷冻保存研究进展

随着单精子及精子细胞卵胞浆内显微受精技术的发展,雄性生殖细胞冷冻保存技术已成为辅助生殖技术的重要内容,为男性因素不育患者的临床助孕提供了物质保障基础。目前,雄性生殖细胞冷冻方法包括程序化冷冻和玻璃化冷冻;冷冻保护剂可有效降低细胞的冷冻损伤,根据其特性分为渗透性保护剂和非渗透性保护剂两大类;冷冻载体中冷冻环、冷冻叶片等应用较广泛。雄性生殖细胞冷冻的效果与冷冻方法、冷冻保护剂和冷冻载体等密切相关。     

玻璃化解冻和慢速解冻在程序化冷冻胚胎解冻移植中的比较研究

目的 探讨玻璃化解冻(vitrificative thawing,VT)和慢速解冻(slow thawing,ST)对程序化冷冻胚胎解冻移植的影响,优化程序化冷冻胚胎的解冻方案,从而提高不孕不育临床治疗效果.方法 选取2016年1月至2018年12月解放军第九六〇医院生殖医学中心行解冻胚胎移植的400例患者,使用随机数...     

D3低形态学评分胚胎的继续培养及其意义

目的:研究和评估低形态学评分胚胎的囊胚形成率及其价值。方法:将IVF/ICSI患者剩余的D3低形态学评分的胚胎转移至G2液中培养到D6,根据卵裂球生长速度和碎片比例分组,观察各组囊胚形成率和优质囊胚率。结果:低形态学评分胚胎中F1组的囊胚形成率和优质囊胚率均高于F3和F4组,F2组的囊胚形成率高于F4组;C1和C2组囊胚形成率和优质囊胚率均明显高于C3组,C1组的优质囊胚率高于C2组;D1组的囊胚形成率明显高于D2组。结论:低形态学评分的胚胎具有一定的发育潜能和利用价值,其继续发育能力与卵裂球数、碎片比例及发育速度有关。     

Promotion of human blastocyst formation by red cell hemolysate

Recently, blastocyst transfer has been increasingly performed to improve the implantation rate achieved by in vitro fertilization and embryo transfer. This has created the need for new culture methods to improve in vitro blastulation. Culture with erythrocyte hemolysate promotes the development of early mouse embryos due to an antioxidant effect. The present study investigated whether erythrocyte hemolysate could also promote blastulation of human embryos. Eighty surplus embryos were obtained from 15 patients who gave informed consent. These embryos were cultured for 2 to 7 days after oocyte retrieval in medium with or without erythrocyte hemolysate. Blastocyst formation was observed in 53% and 28% of the embryos grown in hemolysate-supplemented and control cultures, respectively. The blastulation rate was significantly higher in hemolysate-supplemented culture than in control group (p = 0.02). These results suggest that culture medium supplemented with erythrocyte hemolysate may promote the blastulation of human embryos.