肾疏宁调节肾小球硬化细胞因子网络平衡的研究

目的：探讨肾疏宁对肾小球硬化模型大鼠肾组织细胞外基质及其主要调控细胞因子的作用。方法：采用单侧肾切除并阿霉素尾静脉注射建立大鼠肾小球硬化模型,分组观测肾组织细胞外基质成分collagenⅣ、FN、LN表达及含量,逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）方法测定HGF和TGF-β1的基因表达。结果：模型组HGF基因表达明显下降,TGF-β1表达上升。细胞外基质成分显著增多。肾疏宁治疗组HGF基因表达上升,TGF-β1基因表达降低。结论：肾疏宁能调节HGF和TGF-β1基因表达的平衡,减少细胞外基质增多,防治肾小球硬化进展有效。     

大黄虫丸对阿霉素肾硬化大鼠系膜基质增生抑制作用的实验研究

目的:探讨大黄虫丸对阿霉素肾硬化大鼠系膜基质增生的抑制作用。方法:通过单侧肾切除、分次尾静脉注射阿霉素、高脂饲料喂养的方法,制作弥漫性系膜增生伴局灶节段性肾小球硬化动物模型,并应用大黄虫丸进行干预,同时设立假手术组、空白组作阴性对照,观察时间为12周。分别留取各组第4、8、12周末24h尿样标本测定尿蛋白含量。第12周末,处死大鼠,光镜观察肾组织病理形态学变化,计算系膜基质指数;应用免疫组化方法检测纤维连接蛋白(FN)、胶原Ⅳ(CoLⅣ)含量。结果:大黄虫丸可降低阿霉素肾硬化大鼠尿蛋白含量,抑制FN、CoLⅣ的过度表达,减少细胞外基质在肾小球中的积聚。结论:大黄虫丸防治肾小球硬化进展的机制与其减少蛋白尿,抑制系膜细胞、系膜基质增生扩张的功能有关。     

辛通畅络法对系膜增生性肾炎模型大鼠IL-1、IL-6和细胞外基质的影响

目的:观察辛通畅络中药复方肾苏Ⅱ对系膜增生性肾炎(MsPGN)模型大鼠肾组织白介素1(IL-1)、白介素6(IL-6)及肾小球细胞外基质(ECM)的影响,探讨中医药防治MsPGN的有效途径。方法:采用抗Thy-1系膜增生性肾炎大鼠模型,以中药复方肾苏Ⅱ为治疗药物,贝那普利为对照药物,于治疗6周末,分别观察各组大鼠肾组织IL-1、IL-6和肾小球纤维连接蛋白(FN)、层粘连蛋白(LN)和Ⅳ型胶原(ColⅣ)表达的变化情况。结果:治疗6周末,中药组在抑制MsPGN大鼠肾组织IL-1、IL-6表达,减少肾小球FN、LN、ColⅣ表达量等方面显示疗效优势,且均明显优于西药组。结论:以辛通畅络立法的中药复方肾苏Ⅱ,具有减轻MsPGN模型大鼠肾小球ECM积聚,改善肾小球硬化的作用。     

大黄(庶虫)虫丸对阿霉素肾硬化大鼠系膜基质增生抑制作用的实验研究

目的:探讨大黄<庶虫>虫丸对阿霉素肾硬化大鼠系膜基质增生的抑制作用.方法:通过单侧肾切除、分次尾静脉注射阿霉素、高脂饲料喂养的方法,制作弥漫性系膜增生伴局灶节段性肾小球硬化动物模型,并应用大黄<庶虫>虫丸进行干预.同时设立假手术组、空白组作阴性对照,观察时间为12周.分别留取各组第4、8、12周末24h尿样标本测定尿蛋白含量.第12周末,处死大鼠,光镜观察肾组织病理形态学变化.计算系膜基质指数;应用免疫组化方法检测纤维连接蛋白(FN)、胶原Ⅳ(CoLⅣ)含量.结果:大黄<庶,虫>虫丸可降低阿霉素肾硬化大鼠尿白含量,抑制FN、CoLⅣ的过度表达,减少细胞外基质在肾小球中的积聚.结论:大黄<庶虫>虫丸防治肾小球硬化进展的机制与其减少蛋白尿,抑制系膜细胞、系膜基质增生扩张的功能有关.     

肾络通对阿霉素肾病大鼠细胞表型转化的影响

目的:肾络通对阿霉素诱导的肾病大鼠细胞表型转化的影响.方法:单侧肾切除加重复阿霉素尾静脉注射制作肾病模型,以α-SMA、FN、LN等为观察指标,采用免疫组化、病理图像分析和流式细胞检测等方法,进行阳性表达细胞定位和半定量及蛋白表达定量分析.结果:阿霉素肾病模型组大鼠肾小管间质有α-SMA明显表达,阳性细胞率和蛋白表达定量分析明显高于假手术组,且伴有FN、LN在肾小管间质和肾小球的大量沉积,肾络通组各项指标较模型组为低.结论:肾络通能抑制肾小管上皮细胞表型转化,减少FN、LN等细胞外基质的沉积.     

谊肾颗粒对腺嘌呤致肾衰竭大鼠细胞外基质的影响

目的:观察谊肾颗粒对腺嘌呤致肾衰竭大鼠血清及肾小球细胞外基质含量的影响。方法:腺嘌呤灌服制作大鼠肾衰竭模型,随机将动物分为正常对照组,模型组及谊肾颗粒高、低剂量组,两用药组给谊肾颗粒灌胃。治疗6周后检测大鼠血清纤维联接蛋白(FN)、Ⅳ型胶原(Col-Ⅳ)、层黏蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原(PC-Ⅲ)含量,图像分析肾组织Col-Ⅳ、FN的表达量。结果:谊肾颗粒能降低血LN、Col-Ⅳ、PC-Ⅲ,提高血FN含量;减少肾衰竭大鼠肾小球细胞外基质FN、Col-Ⅳ的病理性聚集,降低肾小球硬化指数。结论:谊肾颗粒能通过减少肾小球细胞外基质的增生,减轻肾小球硬化程度。     

肾康注射液对肾小球系膜基质作用的血清药理学研究

目的:探讨肾康注射液对人肾小球系膜细胞(MC)细胞外基质(ECM)不同成分的影响.方法:制作单侧肾切加链脲佐菌素诱导的大鼠DN模型,采用血清药理学的研究方法,观察具有益气活血泄浊功效的中药制剂肾康注射液对人MC中的EMC不同成分的影响,双抗夹心ELISA法测定FN,LN,ColⅣ采用放射免疫分析方法测定.结果:(1)病理组肾小球MC上清FN、LN、ColⅣ检测值明显高于常规培养组与正常组(P＜0.01);(2)肾康高剂量组与肾康低剂量组FN、LN、ColⅣ检测值均明显低于病理组(P＜0.01);洛汀新组FN和ColⅣ检测值亦明显低于病理组(P＜0.01);(3)高剂量肾康注射液含药血清对MC产生FN、LN、ColⅣ的抑制作用优于洛汀新与肾康低剂量组(P＜0.01).结论:肾康注射液含药血清对MC合成和分泌FN、LN和ColⅣ均有不同程度的抑制作用.     

肾络通对大鼠系膜细胞外基质分泌及转化生长因子β1表达的影响

目的: 探讨肾络通药物血清对大鼠系膜细胞外基质不同成分的抑制作用及对转化生长因子β1(TGF-β1)表达的调节作用.方法:以体外培养大鼠肾小球系膜细胞及血清药理学方法为基础,采用酶联免疫吸附试验检测细胞外基质中纤维连接蛋白(FN)、Ⅳ型胶原(ColⅣ)的含量;采用逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)检测TGF-β1 mRNA的表达.结果:细胞外基质FN,ColⅣ的含量与TGF-β1 mRNA的表达呈正相关关系,肾络通对二者均有抑制作用.结论:肾络通能够减少细胞外基质的积聚,抑制TGF-β1的分泌与表达,从而进一步明确了其防治多种肾小球疾病,延缓肾小球硬化的作用机制.     

肾络通对大鼠系膜细胞外基质分泌及转化生长因子β1表达的影响

目的:探讨肾络通药物血清对大鼠系膜细胞外基质(ECM)不同成分的抑制作用及对转化生长因子-β1(TGF-β1)表达的调节作用.方法:以体外培养大鼠肾小球系膜细胞(MCs)及血清药理学方法为基础,采用酶联免疫吸附试验(ELAIS)检测细胞外基质中纤维连接蛋白(FN)、Ⅳ型胶原(ColⅣ)的含量;采用逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)检测TGF-β1 mRNA的表达.结果:细胞外基质FN、ColⅣ的含量与TGF-β1 mRNA的表达呈正相关关系,肾络通对二者均有抑制作用.结论:肾络通能够减少细胞外基质的积聚,抑制TGF-β1的分泌与表达,从而进一步明确其防治多种肾小球疾病,延缓肾小球硬化的作用机制.     

褐藻多糖硫酸酯对阿霉素肾硬化大鼠肾组织FN、TGF-β、MMP-9的影响

目的 观察褐藻多糖硫酸酯(FPS)对阿霉素肾硬化大鼠肾脏的保护作用.方法 将40其SD大鼠分成正常组、模型组、海昆肾喜组(褐藻多糖硫酸酯组)、盐酸贝那普利组.建立阿霉素肾硬化大鼠模型,分别采用相应药物干预;8周后观察各组大鼠肾脏病理改变,PAS观察肾小球系膜基质,免疫组化观察肾脏组织纤连蛋白(FN),Western blot观察转化生长因子β(TGF-β)和金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达.结果 FPS能减轻肾小球系膜基质增生,且能减少TGF-β、FN表达,上调肾皮质MMP-9的表达.相关性分析研究显示,TGF-β值与FN、系膜基质指数呈正相关;MMP-9值与FN、系膜基质指数呈负相关.结论 FPS可能通过调控TGF-β及MMP-9表达,减轻FN沉积,从而抑制肾小球硬化.     

IgA肾病中肾小球系膜细胞表型转化及肾络宁的防治作用

目的探讨IgA肾病大鼠肾小球系膜细胞的表型转化及中药复方肾络宁的作用。方法SD大鼠随机分为正常组、模型组、肾络宁组、肾炎康复片组;采用牛血清白蛋白和葡萄球菌肠毒素B复合感染的方法建立大鼠IgA肾病模型;常规检测尿红细胞、尿蛋白、血肌酐,光镜、电镜、荧光免疫观察肾组织病理;免疫组织化学染色和计算机图象分析系统观察大鼠肾小球系膜细胞α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、纤维连接蛋白(FN)、细胞间黏附分子(ICAM-1)的表达情况。结果模型组肾小球系膜区α-SMA、FN、ICAM-1明显阳性表达(P<0.01),系膜区重度IgA沉积,系膜细胞中度增生,基质增多,毛细血管狭窄,血尿及蛋白尿、血肌酐明显增高;肾络宁及肾炎康复片组α-SMA、FN、ICAM-1表达明显减低(P<0.01),IgA轻度沉积,系膜细胞及基质轻度增多,血尿、蛋白尿及血肌酐明显减低。结论IgA肾病大鼠肾小球系膜细胞发生表型转化,中药复方肾络宁可明显抑制IgA肾病大鼠肾小球系膜细胞的表型转化,改善临床及病理变化,肾络宁是防治IgA肾病的有效方药。     

辛通畅络法干预局灶节段性肾小球硬化大鼠细胞外基质积聚的实验研究

目的 观察辛通畅络法对局灶节段性肾小球硬化(FSGS)大鼠肾小球细胞外基质(ECM)增殖的影响.方法 阿霉素注射法诱发FSGS型阿霉素肾病大鼠模型,以辛通畅络法的载体中药复方肾苏Ⅱ为治疗药物,贝那普利为对照药物进行干预.于治疗第12周末,切取肾脏进行病理学观察及免疫组化检测,现察肾小球硬化、基质积聚程度及其主要成分表达.结果 病理学观察及免疫组化检测显示,中、西药组均出现肾小球硬化进展减缓,基质增殖抑制,FN、LN及ColⅣ表达降低,且中药组具干预优势.结论 辛通畅络法可通过抑制FSGS大鼠肾小球ECM的过度积聚,延缓其肾小球硬化进展.     

肾康注射液对糖尿病肾病大鼠细胞外基质影响的实验研究

目的:探讨肾康注射液(SKI)对DN肾小球硬化的防治作用及机制.方法:采用单肾切除加链脲佐菌素诱导的方法制造大鼠糖尿病肾病(DN)模型,设置高低两种剂量的肾康注射液治疗组,洛汀新对照组,模型组和正常组.观察各组肾小球中的细胞外基质(ECM)不同组份的变化.结果:DN大鼠肾小球中ECM成份FN、LN和CoⅣ的合成和分泌明显增多.SKI能明显抑制肾小球合成和分泌FN、LN和CoⅣ,其药物作用优于洛汀新,并且与剂量呈依赖关系.结论:减少肾小球合成和分泌FN、LN和CoⅣ是SKI防治DN肾小球硬化的作用机制之一.     

益肾降浊冲剂干预肾小球硬化的实验研究

目的:探讨益肾降浊冲剂对阿霉素肾病大鼠肾小球硬化的干预作用与机制。方法:SD大鼠随机分为对照组、模型组、他汀组、益肾降浊冲剂(低、中、高剂量)组,每组6只。采用单侧肾切除加阿霉素重复注射建立肾小球硬化模型。用药8周后观察各组大鼠24h尿蛋白定量、血生化、氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)的变化,PAS、Masson染色评估肾小球硬化程度,免疫组化观察肾小球氧化低密度脂蛋白受体(LOX-1)的表达,Western Blot检测Ⅰ型胶原(ColⅠ)、纤连蛋白(FN)的表达。结果:与对照组比较,模型组大鼠24h尿蛋白量、尿素氮(BUN)、肌酐(Scr)、胆固醇(Cho)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、ox-LDL、肾小球硬化评分、系膜肾小球系膜基质比(M/G)均明显升高,肾小球LOX-1、ColⅠ、FN表达显著增加(P<0.01)。与模型组比较,益肾降浊冲剂组呈剂量依赖性降低24h尿蛋白量、Bun、Scr、Cho、LDL-C、ox-LDL水平以及肾小球硬化评分、M/G(P<0.01),下调LOX-1、ColⅠ、FN的表达(P<0.01)。结论:益肾降浊冲剂组能通过纠正脂代谢紊乱、抑制LOX-1的表达、减轻细胞外基质的沉积、改善肾小球硬化。     

肾络宁对IgA肾病大鼠系膜细胞及细胞外基质的影响

目的：通过建立IgA肾病大鼠模型,观察肾络宁对IgA肾病大鼠系膜细胞及细胞外基质的影响。方法：通过建立大鼠IgA肾病模型,同时给予肾络宁治疗,16周后检测α-肌动蛋白（α-SMA）、纤维连接蛋白（FN）和细胞间粘附分子-1（ICAM-1）在肾小球系膜的表达。结果：正常组均有基础表达,模型组明显增高,治疗后明显下降。结论：肾络宁既能降低IgA肾病大鼠系膜细胞α-SMA的表达,又能降低FN、ICAM-1的表达,表明肾络宁对IgA肾病的系膜细胞损伤厦细胞外基质增生有一定的治疗作用．     

肾络通对大鼠系膜细胞外基质分泌及转化生长因子β1表达的影响

目的探讨肾络通药物血清对大鼠系膜细胞外基质不同成分的抑制作用及对转化生长因子β₁(TGFβ₁)表达的调节作用。方法以体外培养大鼠肾小球系膜细胞及血清药理学方法为基础,采用酶联免疫吸附试验检测细胞外基质中纤维连接蛋白(FN)、Ⅳ型胶原(ColⅣ)的含量;采用逆转录多聚酶链反应(RTPCR)检测TGFβ₁mRNA的表达。结果细胞外基质FN,ColⅣ的含量与TGFβ₁mRNA的表达呈正相关关系,肾络通对二者均有抑制作用。结论肾络通能够减少细胞外基质的积聚,抑制TGF-β₁的分泌与表达,从而进一步明确了其防治多种肾小球疾病,延缓肾小球硬化的作用机制。     

荔枝核总黄酮对高糖联合肿瘤坏死因子诱导大鼠肾小球系膜细胞纤维黏连蛋白、Ⅳ型胶原蛋白表达的影响

目的观察荔枝核总黄酮(total flavonoids of litchi,TFL)对高糖联合TNF-α诱导大鼠肾小球系膜细胞分泌纤维黏连蛋白(FN)、Ⅳ型胶原(ColⅣ)蛋白表达的影响。方法以大鼠肾小球系膜细胞(HBZY-1)为研究对象,用不同浓度荔枝核总黄酮干预高糖联合TNF-α诱导的大鼠肾小球系膜细胞,作用48 h后,采用酶联免疫分析法(ELISA)和细胞免疫组化法检测HBZY-1表达FN、ColⅣ蛋白情况。结果高糖联合TNF-α刺激大鼠肾小球系膜细胞48 h,FN、ColⅣ蛋白表达明显增高〔(59.946±0.307)vs.(66.825±0.929);(46.445±0.653)vs.(59.443±4.102),P0.01〕,经荔枝核总黄酮干预后FN、ColⅣ蛋白表达明显降低〔(66.825±0.929)vs.(59.496±1.258)、(62.553±1.022)、(52.541±0.608);(59.443±4.102)vs.(51.252±3.676)、(47.742±1.396)、(48.438±0.207)、(47.046±1.810),P0.01〕。结论高糖联合肿瘤坏死因子能够促进大鼠肾小球系膜细胞纤维黏连蛋白、Ⅳ型胶原蛋白的表达,且荔枝核总黄酮干预后FN、ColⅣ蛋白表达明显降低,提示荔枝核总黄酮干预糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)肾纤维化作用的部分机制可能与下调纤维黏连蛋白、Ⅳ型胶原蛋白的表达有关。     

辛通畅络法对系膜增生性肾炎大鼠IL-10、IL-13和细胞外基质的影响

目的:观察辛通畅络中药复方肾苏II对系膜增生性肾炎(MsPGN)模型大鼠肾组织白介素10(IL-10)、白介素13(IL-13)及肾小球细胞外基质(ECM)的影响,探讨中医药防治MsPGN的有效途径。方法:采用抗Thy-1系膜增生性肾炎大鼠模型,以中药复方肾苏Ⅱ为治疗药物,贝那普利为对照药物,于治疗6周末,分别观察各组大鼠肾组织IL-10、IL-13和肾小球纤维连接蛋白(FN)、层粘连蛋白(LN)和IV型胶原(ColIV)表达的变化情况。结果:治疗6周末,中药组在改善MsPGN大鼠肾组织IL-10、IL-13表达,减少肾小球FN、LN、ColIV表达量等方面显示疗效优势,且与西药组之间具有显著性差异。结论:以辛通畅络立法的中药复方肾苏Ⅱ,能够减轻肾小球ECM积聚,改善肾小球硬化。     

红花对局灶节段性肾小球硬化大鼠细胞外基质的影响

目的：观察红花对局灶节段性肾小球硬化（FsGS）大鼠细胞外基质（Extracellular matrix,ECM）的影响并探讨其部分作用机理。方法：30只健康雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组和红花组。采用一侧肾切除加两次尾静脉注射阿霉素的方法复制FSGS大鼠模型,8周后观察各组大鼠肾组织病理。并用免疫组织化学染色方法评价纤维连接蛋白（FN）、层黏连蛋白（LN）的表达。结果：模型组肾组织出现局灶节段性肾小球硬化,免疫组织化学提示FN、LN在肾小球及小管中表达明显（P〈0．01）;红花组FN、LN表达明显降低（P〈0．01）。结论：红花能抑制FN和LN的表达,减少细胞外基质的合成及其在肾小球及小管间质中的过度沉积,延缓其病程进展。     

五苓散含药血清对大鼠系膜细胞增殖性及细胞外基质的影响

目的:观察五苓散含药血清是否能够抑制内皮素刺激下,体外培养的大鼠系膜细胞的增生及纤维连接蛋白(fibronection,FN)、层粘连蛋白(lam in in,LN)和Ⅳ型胶原(Ⅳtype collagen,ColⅣ)的分泌。方法:采用常规血清药理学方法,以内皮素(endothelin,ET)-1为刺激因子,用MTT法检测五苓散含药血清对细胞增殖性的影响;用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞外基质中FN、LN及ColⅣ的含量。结果:五苓散含药血清可以抑制内皮素刺激下体外培养的大鼠系膜细胞的增生及纤维连接蛋白(FN)、层粘连蛋白(LN)和Ⅳ型胶原(ColⅣ)的分泌。结论:系膜细胞是五苓散治疗肾病的重要靶细胞,五苓散可以拮抗内皮素对系膜细胞的作用,这是其发挥疗效的作用机理之一。