膜联蛋白5对雄性SD大鼠睾酮合成相关蛋白和酶表达的影响

目的 研究注射膜联蛋白5后雄性SD大鼠睾丸类固醇急性调节蛋白(Steroidogenic acute regulatory protein,StAR)、胆固醇侧链裂解酶(P450 cholesterol side-chain cleavage enzyme,P450scc)和3β-羟类固醇脱氢酶(3 beta-hydroxysteroid dehydrogenase,3β-HSD)表达的改变,初步探讨膜联蛋白5影响睾酮分泌的机制.方法 将20只SD大鼠随机分为对照组和实验组,实验组又分为7.5μg/kg组、15μg/kg组和30μg/kg组,每组5只.对照组大鼠腹腔注射等量的pH 8.0Tris-HCl,实验组腹腔注射不同剂量的膜联蛋白5,1次/d,连续20d.用RT-PCR方法分别检测对照组和各实验组SD大鼠睾丸组织中睾酮合成相关的StAR、P450scc和3β-HSD mRNA的表达变化,并用Western blot方法检测以上3种物质蛋白质水平的变化.结果 与对照组相比,在mRNA水平上,7.5μg/kg组和15μg/kg组大鼠睾丸组织P450scc mRNA表达分别增加了25.9%[(0.68±0.04) vs (0.54±0.03),P<0.01]和27.8%[(0.69±0.04) vs (0.54±0.03),P<0.01];3β-HSD mRNA表达分别升高了32.9%[(1.05±0.07) vs (0.79±0.10),P<0.01]和53.2%[(1.21±0.07) vs (0.79±0.10),P<0.01];而30μg/kg组表达差异无统计学意义;在蛋白水平上,15μg/kg组大鼠睾丸组织P450scc蛋白表达提高了34.2%[(0.37±0.04) vs (0.28±0.02),P<0.01],7.5μg/kg组和15μg/kg组的3β-HSD表达也分别增加了14.7%[(1.53±0.10) vs (1.34±0.05),P<0.01]和24.4%[(1.67±0.14) vs (1.34±0.05),P<0.01];而StAR的表达无论在转录水平还是在蛋白水平上,较对照组差异均无统计学意义.结论 膜联蛋白5可通过调节P450scc与3β-HSD的表达来调节睾酮合成.     

膜联蛋白5对大鼠睾丸间质细胞睾酮分泌及3β-羟基类固醇脱氢酶表达的影响

目的先前研究发现促性腺激素释放激素(gonadotropin-releasing hormone,GnRH)刺激Leydig细胞后,膜联蛋白5(annexin 5)及睾酮水平同时增加,推测annexin 5和睾酮之间可能存在某种内在的联系,3β-羟基类固醇脱氢酶(3β-HSD)是间质细胞的标记酶。文中旨在研究annexin 5对大鼠睾丸间质细胞睾酮分泌及3β-HSD表达的影响。方法原代培养大鼠睾丸间质细胞,用不同浓度的annexin 5(0、10-10、10-9、10-8mol/L)处理间质细胞24h和用10-9mol/L的annexin 5处理细胞不同时间(6、12、24、36h),收集培养液,用化学发光法测定培养液中的睾酮含量;Western blotting方法分析睾丸间质细胞中3β-HSD的表达变化。结果不同浓度的annexin 5处理间质细胞24h后,与对照组比较,终浓度为10-10mol/L和10-9mol/L时,睾酮水平分别升高了18%[(14.38±0.30)nmol/Lvs(12.12±0.74)nmol/L](P<0.01)和26%[(15.25±0.47)nmol/Lvs(12.12±0...     

促性腺激素释放激素类似物对大鼠睾丸间质细胞膜联蛋白5和3β-羟类固醇脱氢酶mRNA表达的影响

目的:观察促性腺激素释放激素(GnRH)类似物对大鼠睾丸间质细胞annexin 5和3β-HSD mRNA表达的影响. 方法:原代培养大鼠睾丸间质细胞48h后,分别用不同终浓度的GnRH激动剂(GnRH-agonist, GnRHa)(10-5mol/L、10-6 mol/L、10-7 mol/L)和GnRH 拮抗剂(GnRH-antagonists, GnRHant)(10-6 mol/L、10-7 mol/L、10-8 mol/L)处理细胞,提取细胞总RNA,反转录,设计特异性引物和Tagman探针,荧光定量PCR检测膜联蛋白5(annexin 5)和3β-羟类固醇脱氢酶(3β-HSD) mRNA表达的改变. 结果:荧光定量PCR结果显示,与未加GnRH类似物的对照组相比,当GnRHa的终浓度为10-5mol/L、10-6mol/L时,实验组大鼠睾丸间质细胞annexin 5 mRNA 分别升高了38.89%和35.29%,均具有统计学意义(P<0.05);当GnRHa的浓度为10-5mol/L时,3β-HSD mRNA也显著升高了46.43%(P<0.01).同样,与对照组相比,当GnRHant的浓度为10-6mol/L时,实验组大鼠睾丸间质细胞annexin 5 mRNA下降了45.45% (p<0.05),当GnRHant的浓度为10-6mol/L,10-7mol/L时,实验组大鼠睾丸间质细胞3β-HSD mRNA也分别显著地降低了63.64%(P<0.01)和50%(P<0.05),其余各组与对照组相比,差异无统计学意义. 结论:GnRH类似物能够调控大鼠睾丸间质细胞annexin5和3β-HSD mRNA表达,GnRH类似物可能与睾丸间质细胞上GnRH受体结合后,通过特定的生理机制,进而影响annexin5和3β-HSD mRNA表达,为揭示GnRH类似物调控间质细胞分泌睾酮的作用机制提供了一定的依据,其内在的机制还有待进一步研究.     

去颌下腺对大鼠睾丸膜联蛋白5表达的影响

目的：观察切除颌下腺对大鼠睾丸膜联蛋白5（annexin 5）表达的影响.方法：切除大鼠颌下腺,分别于术后14、28和42d处死大鼠,Western blotting和免疫组织化学分析大鼠睾丸annexin 5表达及分布的改变.结果：Western blotting结果显示,与对照组相比,切除颌下腺14d和28d后,实验组大鼠睾丸annexin 5的表达分别升高了27.5%和35.2%,具有显著性差异（P＜0.05,P＜0.01）;切除颌下腺42d后,实验组大鼠睾丸annexin 5又恢复到与对照组几乎相同的水平.免疫组织化学显示,annexin 5在大鼠睾丸中的分布未见明显改变,但实验组annexin 5免疫组化显色较深,说明annexin 5的表达升高,这与Western blotting的结果基本一致.结论：颌下腺切除影响大鼠睾丸annexin 5的表达,颌下腺切除早期（14、28 d）颌下腺分泌的某些生物活性物质缺乏,而造成睾丸内annexin 5表达的升高.颌下腺切除后期（42 d）,机体内因颌下腺切除而缺乏的某些物质在体内又重新得到了补偿,对睾丸annexin 5的影响消除,睾丸annexin 5的表达也恢复到正常水平.其内在具体机制尚待进一步阐明.     

氯化锰对原代培养大鼠睾丸间质细胞睾酮合成的影响

目的:探讨氯化锰(MnCl2)对SD大鼠体外培养睾丸间质细胞(Leydig cells)睾酮合成的影响.方法:建立SD大鼠睾丸Leydig细胞体外原代培养模型.MnCl2染毒剂量组分为对照(0 μmol/L)、1.0 μmol/L、2.5 μmol/L、5.0 μmol/L、10.0 μmol/L、25.0 μmol/L、 50.0 μmol/L、100.0 μmol/L,培养24 h后,采用台盼蓝染色法测定细胞存活率.同法分组,采用放射免疫法检测加入人绒毛膜促性腺激素(HCG)与不加HCG条件下,上述剂量MnCl2对Leydig细胞合成睾酮的影响.结果:随着MnCl2染毒剂量的升高,Leydig细胞存活率逐渐下降.MnCl2剂量≥5.0 μmol/L时,细胞存活率均低于对照组(P<0.05).基础状态下(不加HCG)MnCl2剂量≥5.0 μmol/L时睾酮水平均低于对照组(P＜0.05);HCG刺激状态下MnCl2剂量≥10.0 μmol/L时睾酮水平低于对照组(P＜0.05).结论:锰可以直接影响原代培养Leydig细胞睾酮的合成.     

镉对小鼠睾丸间质细胞睾酮合成的影响

目的 探讨镉对小鼠睾丸间质细胞睾酮合成的影响.方法 镉处理组采用20 μmol/L CdCl2处理TM3细胞,分别在加入CdCl2 4 h和8 h后收集细胞上清液,对照组TM3细胞给予等容积磷酸盐缓冲液(DPBS).采用ELISA法测定细胞上清液中睾酮含量,采用RT-PCR和Western blot技术检测睾酮合成关键酶mRNA和蛋白表达水平.结果 镉处理组细胞上清液中睾酮含量明显降低(P＜0. 01).与对照组相比,镉显著下调TM3细胞类固醇激素合成急性调控蛋白(StAR)、细胞色素P450胆固醇侧链裂解酶(P450scc)与 17β-羟类固醇脱氢酶(17β-HSD) mRNA表达(P＜0.01),镉处理组TM3细胞StAR、P450SCC、细胞色素P45017α-羟化酶(P45017α)、3β-HSD与17β-HSD的蛋白表达水平也明显降低,与对照组相比,差异均有统计学意义(P＜ 0.05,P＜0.01).结论 镉抑制小鼠睾丸间质细胞睾酮的分泌,其原因可能与镉抑制间质细胞部分睾酮合成关键酶mRNA和蛋白表达水平有关.     

Annexin5对大鼠睾丸间质细胞睾酮分泌过程中StarD7表达的影响

目的先前研究发现annexin 5刺激大鼠睾丸间质细胞后,3β-羟类固醇脱氢酶(3βbeta-hydroxysteroid dehydro-genase,3β-HSD)及睾酮水平都增加,推测annexin 5和睾酮之间可能存在某种内在联系。文中旨在研究annexin 5对大鼠睾丸间质细胞睾酮分泌过程中的StarD7(START domain containing 7)表达的影响,探讨annexin 5影响睾酮分泌的机制。方法原代培养大鼠睾丸间质细胞,1nmol/L的annexin 5处理间质细胞24h,分别提取细胞总mRNA和总蛋白。RT-PCR检测StarD7的mRNA表达改变。Western blotting方法分析睾丸间质细胞中StarD7的蛋白表达变化。收取细胞爬片,利用免疫细胞化学的方法对StarD7在睾丸间质细胞中进行定位。结果与对照组相比,在mRNA水平上,加药组StarD7 mRNA的表达增加了44.5%(1.10±0.02 vs 1.59±0.09,P<0.05)。在蛋白水平上,加药组StarD7蛋白的表达增加了44.3%(1.49±0.10 vs 2.15±0.16,P<0.05)。StarD7主要定位在大鼠睾丸间质细胞的胞浆内,加药组的染色强度明显强于对照组。结论 StarD7在基因和蛋白水平均受annexin 5的调控,结合先前发现annexin 5可调控睾丸间质细胞睾酮合成的结果,提示annexin 5调控睾酮合成可能是通过调控StarD7的表达来实现的。     

氯化锰对大鼠睾丸间质细胞睾酮合成及去势大鼠生殖内分泌的影响

目的:观察氯化锰对大鼠睾丸间质细胞睾酮合成及去势大鼠生殖内分泌的影响,探讨氯化锰的抗雄激素样作用.方法:①Percoll梯度离心分离、纯化大鼠睾丸间质细胞,根据氯化锰染毒剂量分为对照(0 mol/L氯化锰)和1.0 × 10-6、2.5 × 10-6、5.0 × 10-6、1.0 × 10-5、2.5 × 10-5、5.0 × 10-5 及1.0 × 10-4 mol/L氯化锰组,培养24 h后,采用台盼蓝染色法测定大鼠睾丸间质细胞存活率.②同法分组,观察氯化锰对基础状态和人绒毛膜促性腺激素(HCG)刺激下睾丸间质细胞睾酮合成的影响.③将行睾丸摘除术的大鼠随机分为6组(n=10):溶剂对照组皮下注射玉米油0.2 mL,阴性对照组皮下注射丙酸睾酮(TP)1.0 μs,氯化锰低、中、高剂量组皮下注射1.0μg TP后分别注射氯化锰7.5、15.0和30.0 mg/kg,阳性对照组皮下注射1.0 μg TP后注射氟他胺(100.0 mg/kg),1次/d,连续7 d.7 d后,用放射免疫法测定各组去势大鼠血清睾酮水平和前列腺特异抗原(PSA)含量,分离雄激素依赖组织,称量,计算脏器系数.结果:①随氯化锰染毒剂量的升高,大鼠睾丸间质细胞存活率逐渐下降(F=15.297,P=0.023).②基础状态和HCG刺激下各组大鼠睾丸间质细胞睾酮水平差异均有统计学意义(F=32.639和25.187,P均<0.001);基础状态下氯化锰剂量≥5.0 × 10-6 mol/L时睾酮水平均低于对照组(P<0.05),HCG刺激状态下氯化锰剂量≥1.0×10-5 mol/L时睾酮水平低于对照组(P<0.05).③各组去势大鼠血清睾酮、PSA含量、腹侧前列腺及精囊腺脏器系数相比,差异均有统计学意义(F=39.920,25.403,15.562和9.476,P均<0.05),但氯化锰低、中和高剂量组去势大鼠血清睾酮和PSA水平与阴性对照组比较,差异均无统计学意义(P均>0.05).氯化锰高剂量组腹侧前列腺和精囊腺脏器系数均低于阴性对照组(P<0.05).结论:氯化锰可能有抗雄激素样作用.     

催乳素对原代培养恒河猴睾丸间质细胞睾酮合成的影响

目的 研究催乳素对睾丸间质细胞睾酮生成的调节作用. 方法 采用无血清培养方法 分析催乳素时原代培养恒河猴睾丸间质细胞睾酮合成的影响. 结果 催乳素可增强恒河猴睾丸间质细胞对猴绒毛膜促性腺激素(mCG)刺激的反应,睾酮分泌量显著高于mCG和催乳素单独作用时的总和.在mCG存在下,催乳素可调节不同的睾酮前身物孕烯醇酮、孕酮和17α-羟孕烯醇酮转化为睾酮.低剂量的催乳素(10～100 ng·mL-1)可使一定剂量的睾酮前身物转化为睾酮的量明显增加,而高剂量的催扎素(300～1000 ng·mL-1)却明显地抑制睾酮前身物为睾酮,其中以17α-羟孕烯醇酮的作用最为显著. 结论 催乳素对睾丸间质细胞睾酮合成的作用,可能部分是通过其促进17α-羟孕烯醇酮转化为睾酮来实现的.     

老年人睾丸间质细胞结构及StAR和P450scc蛋白表达的变化

目的：观察老年人睾丸间质细胞结构以及类固醇激素合成快速调节蛋白（steroidogenic acute regulatory protein,StAR）和胆固醇侧链裂解酶（cholesterol-side-chain cleavage enzyme,P450scc）蛋白表达的变化,以探讨迟发性性腺功能减退症的机制。方法：青年人（20~30岁）及老年人（70~90岁）睾丸标本各10例,对患者进行AMS(Aging Male’s Symptoms)评分。应用HE染色观察睾丸组织形态学变化,电子显微镜观察睾丸间质细胞的超微结构改变,Western blot法比较青年组和老年组睾丸组织中StAR和P450scc蛋白表达水平的差异,并用ELISA法检测其血清总睾酮水平的差异。结果：老年组AMS评分显著高于青年组（61.25±7.08 vs. 20.75±3.73,P<0.001）,且血清总睾酮水平显著低于青年组（3.12±0.58 μg/L vs. 6.29±1.17 μg/L,P<0.05）。HE染色显示,老年人睾丸呈老年退行性改变,电子显微镜下观察到老年睾丸间质细胞线粒体肿胀,线粒体嵴消失。睾丸组织中StAR和P450scc蛋白表达水平显著低于青年组（P<0.05）。结论：老年人睾丸间质细胞结构、线粒体的损伤,以及StAR和P450scc蛋白表达水平的下降等病理变化均与老年人迟发性性腺功能减退症症状和血清总睾酮水平变化密切相关,其确切机制有待深入研究。     

米非司酮对体外培养大鼠睾丸间质细胞分泌睾酮的影响

目的 :研究米非司酮对大鼠睾丸间质细胞 (Leydigcells)睾酮的基础分泌及促性腺激素刺激的睾酮分泌的影响。方法 :将雄性大鼠处死 ,取睾丸间质细胞加药进行体外培养 ,用放射免疫分析方法测定睾酮含量。结果 :10 μmol·L-1米非司酮对睾酮基础分泌和促性腺激素刺激的睾酮分泌的抑制率分别为 65 18% (P <0 0 0 1)、 72 78% (P <0 0 5 )。结论 :本研究表明米非司酮能直接影响睾丸甾体激素的合成     

睾丸Leydig细胞移植提升老年大鼠血浆睾酮和抗疲劳的研究

目的观察老年大鼠Leydig细胞移植后的血浆睾酮和抗疲劳能力的变化。方法受体鼠为18个月龄的老年鼠60只，分为一次移植组、二次移植组和对照组，每组20只。供体鼠采用90只1个月龄的同种大鼠，经体外细胞培养后取纯化的Leydig细胞行细胞移植。结果老年鼠睾丸呈退行性改变，生精上皮、间质细胞数都显着减少；血浆睾酮下降。Leydig细胞移植后大鼠血浆睾酮明显升高，动物负重游泳试验显示：移植组大鼠游泳时间较对照组延长。结论老年大鼠Leydig细胞移植可以提高血浆睾酮水平，提升大鼠耐缺氧能力，对延缓老年PADAM有一定帮助。     

邻苯二甲酸二丁酯对成年大鼠睾丸Leydig细胞中Cx43蛋白表达及睾酮分泌的影响

目的:观察邻苯二甲酸二丁酯(DBP)对成年大鼠睾丸Leydig细胞中连接蛋白43(Cx43)的表达及睾酮分泌的影响,探讨DBP对睾酮的调节是否与Cx43有关联。方法:将SD大鼠无菌脱臼处死,原代培养纯化Leydig细胞,将细胞分为溶剂对照组(0.1%DMSO)、DBP组(50 mg·L^-1 DBP)、Cx43增强剂组(50 mg·L^-1 DBP+10 μmol·L^-1 PGE2)和特异睾酮阻断剂组(40 μmol·L^-1氟他胺),分别处理细胞24 h;放射免疫法测定Leydig细胞睾酮水平;细胞免疫荧光和Western blotting法检测细胞中Cx43蛋白表达。结果:细胞染毒24 h后,与DMSO组比较,DBP组Leydig细胞中Cx43蛋白表达水平和睾酮水平均降低(P<0.05);与DBP组比较,DBP+PGE2组Leydig细胞中Cx43表达水平升高(P<0.05),但睾酮水平变化不明显(P>0.05);与DMSO组比较,氟他胺组Leydig细胞中睾酮水平和Cx43蛋白表达水平均明显降低(P<0.05)。结论:DBP对睾酮分泌及Cx43表达均有影响,Cx43对睾酮合成无抑制作用,而睾酮可反向调节Cx43表达;DBP对Leydig细胞睾酮合成抑制作用并不一定以Cx43为靶点。     

UT-B基因敲除小鼠睾丸间质细胞睾酮分泌水平变化及其对性成熟的影响

目的：利用尿素通道蛋白B（UT-B）基因敲除小鼠模型探讨UT-B基因对雄性小鼠睾丸间质Leydig细胞分泌睾酮能力的影响。方法：饲养、繁殖并鉴定UT-B基因敲除（UT-B－／－）小鼠;选取4周龄遗传背景相同的野生型（UT-B+/+）雄性小鼠和UT-B－／－雄性小鼠各5只,采用放射免疫法检测2种小鼠血清睾酮和黄体生成素（LH）水平;分离培养并鉴定Leydig细胞,测定培养液上清中睾酮的水平。结果：成功获得UT-B－/－雄性小鼠和UT-B+/+雄性小鼠;成功分离培养原代Leydig细胞并经3β-HSD染色方法鉴定纯度达80%以上;4周龄UTB－／－雄性小鼠血清睾酮水平［（7.29±1.27）×10-2 μg•L^-1］明显高于UT-B+/+雄性小鼠 ［（5.53±1.58）×10-2 μg•L^-1］（P<0.05）,2种小鼠血清LH水平比较差异无统计学意义(P>0.05);UTB－／－雄性小鼠Leydig细胞培养上清中睾酮水平［(17.300±1.179) nmol•L^-1］明显高于UT-B+/+雄性小鼠［（12.300±0.916） nmol•L^-1］（P<0.01）。结论：4周龄UT-B－／－雄性小鼠Leydig细胞分泌睾酮的能力明显高于UT-B+/+小鼠,这可能是UT-B－／－雄性小鼠比UT-B+/+小鼠生殖育龄提前的原因之一。
     

干扰原代Leydig细胞糖皮质激素受体表达的重组腺病毒构建研究

目的:获得可对原代大鼠Leydig细胞的糖皮质激素受体(Glucocorticoid receptor,GR)产生干扰作用的含miRNA的重组腺病毒.方法:首先设计并构建针对大鼠GR基因的4对miRNA表达载体,将此4种miRNA表达载体经脂质体转染大鼠胚胎成纤维细胞(Rat embryonic fibroblast,...     

ATP50对生长激素诱导大鼠睾丸间质细胞睾酮分泌的影响

目的:研究ATP50在SD大鼠睾丸Leydig细胞中对生长激素(Growth hormone,GH)诱导睾酮合成及生长激素受体功能的影响.方法:采用离体细胞体外孵育法,观察反义ATP50寡脱氧核苷酸(Oligo deoxy nucletides,ODN)对GH诱导大鼠睾丸Leydig细胞分泌睾酮的影响及GH受体功能的影响,以睾酮放射免疫试剂盒测定睾酮合成的情况,cAMP放免试剂盒检测cAMP含量来评定GH受体的功能,免疫组织化学检测ATP50蛋白的表达.结果:反义ATP50 ODN呈剂量依赖性抑制GH诱导睾丸Leydig细胞睾酮的分泌(P＜0.05),同时使Leydig细胞中ATP50蛋白表达下降,而无义tat ODN则没有相应的作用,免疫组织化学显示ATP50蛋白阳性颗粒在Leydig细胞中中呈密集性分布,表达强度明显高于GH组(P＜0.05).结论:在SD大鼠睾丸Leydig细胞中,ATP50可能通过增强GH受体的功能,进而刺激GH诱导睾酮的合成.提示ATP50参与GH诱导大鼠睾丸Leydig细胞睾酮的分泌过程.     

胸腔积液间皮细胞和巨噬细胞对良、恶性胸腔积液的鉴别诊断价值

对８７ 例结核性胸腔积液与５４ 例恶性肿瘤所致的胸腔积液,进行间皮细胞和巨噬细胞对比分析,结果发现间皮细胞在结核性胸腔积液和恶性肿瘤胸腔积液的比例分别为０ ．０２３ 和０ ．１８８ ,巨噬细胞在结核性胸腔积液和恶性肿瘤胸腔积液的比例分别为０．０１６ 和０ ．００２ ,差异均有显著性（ Ｐ＜０ ．０５） ,结果表明：胸腔积液间皮细胞和巨噬细胞在胸腔积液细胞中的比例,对胸腔积液的良性与恶性有重要鉴别诊断价值,是重要的鉴别诊断依据之一     

蒺藜提取物对小鼠损伤睾丸间质细胞超微结构的影响

目的 观察蒺藜提取物对小鼠损伤睾丸间质细胞超微结构的影响,探讨蒺藜对小鼠损伤睾丸的保护修复作用.方法 健康雄性小鼠60只,随机分为对照组、模型组和给药组,再分热处理后6 d和14 d两个时间组,每组10只;建立睾丸热损伤模型,给予治疗剂量的蒺藜提取物,透射电镜标本制备,镜下观察.结果 模型组与对照组相比胞质内脂滴较多,...