壳聚糖-磷酸三钙复合材料的生物相容性研究

目的探讨人牙槽骨细胞与壳聚糖-磷酸三钙复合材料的生物相容性。方法采用冷冻干燥法制备壳聚糖-磷酸三钙复合材料,组织块法培养人牙槽骨细胞,传代扩增后接种到材料上,体外继续培养,扫描电镜观察。结果体外培养的人牙槽骨细胞呈成纤维细胞样细胞,体外生长良好;扫描电镜下可见壳聚糖-磷酸三钙复合材料具有良好的多孔网状结构,人牙槽骨细胞伸出多个伪足样突起,紧密贴附在材料表面,细胞沿材料的孔隙边缘生长并连接成片。结论壳聚糖-磷酸三钙复合材料具有良好的生物相容性。     

成人牙髓干细胞与壳聚糖-磷酸三钙复合材料相容性试验研究

目的:研究成人牙髓干细胞与壳聚糖-磷酸三钙复合材料的生物相容性。方法:采用冷冻干燥法制备壳聚糖-磷酸三钙复合材料。酶消化法分离,培养人牙髓干细胞,并将达到一定数量级的牙髓干细胞与支架材料进行复合培养,通过扫描电镜观察细胞的生长情况。结果:扫描电镜可见复合材料具有良好的多孔网状结构,成人牙髓干细胞与材料表面紧密贴附,生长良好。结论:复合壳聚糖-磷酸三钙进行培养的成人牙髓干细胞生长良好,具有良好的生物相容性。表明壳聚糖-磷酸三钙完全符合生物支架材料的要求,是一个具有很好应用前景的牙髓组织工程支架材料。     

人牙龈和牙周韧带成纤维细胞体外矿化能力的比较研究

目的：研究人牙龈和牙周韧带成纤维细胞体外矿化能力的差异。方法：用组织块法培养同一患者的牙龈和牙周韧带成纤维细胞，取第4-8代细胞用矿化培养液长期培养，倒置显微镜下观察矿化情况，von Kos-sa染色显示钙盐沉积，生化法测定各组碱性磷酸酶活性，扫描电镜及X线能谱法分析矿化结节中钙磷比例。结果：倒置显微镜下观察牙周韧带成纤维细胞可呈复层生长，形成肉眼可见的白色结节，von Kossa染色显示结节内有钙盐沉积，碱性磷酸酶活性测定表明随着矿化培养时间的延长牙周韧带成纤维细胞组ALP活性比牙龈成纤维细胞组增高明显，扫描电镜下表明结节处电子反射增强，X射线能谱分析显示钙化结节内的钙磷比例与矿化组织相似；牙龈成纤维细胞及对照组体外不能形成钙化结节。结论：人牙龈和牙周韧带成纤维细胞体外矿化能力不同。     

人牙龈和牙周韧带成纤维细胞的体外培养及生物学特性研究—细胞形态，生长曲线及碱性磷酸酶活性测定

目的：建立人牙龈和牙周韧带成纤维细胞体外培养模型并对其生物学特性作初步探讨。方法．；采用组织块法常规条件下分别进行牙龈和牙周韧带成纤维细胞的培养，通过光镜，透射电镜，生长曲线及碱性磷酸酶测定等手段对其部分生物学特性进行研究。结果：两种培养的原代及传代细胞在光镜下细胞排列及结构无明显判别，传代培养时牙龄纤维细胞有接触抑制现象，而牙周韧带成纤维细胞则可呈复层生长，牙周韧带成纤维细胞排列方向性较明显，生长曲线表明牙周韧带成纤维细胞增殖活性高于牙龄成纤维细胞；碱性磷酸酶活性测定及染色法显示两者有明显的判别。结论：体外培养的两种细胞在形态及排列上相似，但百细胞亚型的组成上存在差异。     

壳聚糖-磷酸三钙复合材料的动物相容性评价

目的:通过壳聚糖、磷酸三钙的复合制备一种具有较好生物相容性和生物可降解性的组织工程支架材料。方法:采用冷冻干燥法将2种材料复合成具有较高孔隙率的复合材料,对此材料进行动物实验以评价其生物安全性。结果:壳聚糖/磷酸三钙与肌肉组织可以形成紧密的结合,降解较快。结论:壳聚糖/磷酸三钙复合材料在生物学评价实验中符合评价标准,可用作组织工程支架的基质材料。     

Scleraxis在牙周韧带细胞、牙龈成纤维细胞中的表达

目的研究碱性螺旋-环-螺旋转录因子 Scleraxis 能否在人牙周韧带细胞、牙龈成纤维细胞、骨髓基质细胞中表达,及其与牙周韧带细胞分化能力的关系。方法体外培养人牙周韧带细胞、牙龈成纤维细胞和骨髓基质细胞,RT-PCR 法检测牙龈成纤维细胞、骨髓基质细胞及不同代次牙周韧带细胞中 Scleraxis 的表达。结果 Scleraxis 在牙周韧带细胞、骨髓基质细胞及牙龈成纤维细胞中的表达差异有统计学意义(P<0.05)。其 Scleraxis 与β-肌动蛋白吸光度比值分别为0.877±0.024,0.438±0.031,0.313±0.083。Scleraxis 在牙周韧带细胞中的表达最强,在牙龈成纤维细胞中表达最弱。牙周韧带细胞中 Scleraxis 的表达随培养代次的增加而减弱。结论 Scleraxis 可表达于体外培养的牙周韧带细胞、牙龈成纤维细胞和骨髓基质细胞,Scleraxis 可能在牙周韧带细胞的分化过程中起重要作用。     

人牙周韧带细胞在聚羟基乙酸支架上体外三维培养的实验研究

目的：应用聚羟基乙酸(polyrglycolic acid，PGA)作为人牙周韧带细胞(periodontal ligament cell，PDLC)的三维体外培养支架，观察细胞的形态学特征和生物学性状。方法：将人牙周韧带细胞与PGA三维支架进行体外复合培养，用倒置相差显微镜和扫描电镜观察细胞形态结构及其与支架的粘附性和组织相容性，并用Ⅰ型胶原抗体检测细胞的Ⅰ型胶原分泌情况。结果：光镜和扫描电镜显示，人PDLC在PGA三维支架上粘附良好，分泌基质旺盛。免疫组化染色显示细胞支架复合物中Ⅰ型胶原表达阳性。结论：人PDLC在PGA三维支架上能够维持其形态学特征及生物学性状。聚羟基乙酸具有良好的粘附性和生物相容性，适宜进一步作为构建组织工程化牙周韧带的支架材料。     

纳米羟基磷灰石-壳聚糖复合材料对细胞粘附的影响

目的：制备纳米羟基磷灰石-壳聚糖（nano hydroxyapatite-chitosan,nHA/CS）复合材料,观察其对成纤维细胞粘附行为的影响.方法：将溶胶-凝胶法制得的纳米羟基磷灰石充分混合于2%壳聚糖乙酸溶液中,冷冻干燥法制备纳米羟基磷灰石-壳聚糖复合材料,并对材料进行X射线衍射分析（XRD）、红外光谱分析（FT-IR）、扫描电镜（SEM）、透射电镜（TEM）检测.将NIH3T3细胞分别接种于复合材料和致密羟基磷灰石（dense hydroxyapatite,HA）表面,细胞计数法计算细胞粘附数量,扫描电镜下观察细胞粘附形态.结果：XRD分析结果表明溶胶-凝胶法制备的HA和nHA的晶体结构符合标准羟基磷灰石的空间6方晶体结构.TEM分析结果显示nHA/CS材料中羟基磷灰石为纳米级粉体.接种5、7、9 d后nHA/CS材料表面的细胞粘附数量高于HA组,差异有显著性（P＜0.05）.扫描电镜下,细胞以多个突起粘附于复合材料表面,并具有良好的伸展状态.结论：与HA相比,nHA/CS材料更有利于成纤维细胞的粘附,生物相容性良好.     

人牙周韧带细胞与β-磷酸三钙多孔生物陶瓷三维培养的实验研究

目的 :通过将人牙周韧带细胞 (humanperiodontalligamentcells ,PDLCs)接种到三维多孔 β -磷酸三钙( β -tricalciumphosphate ,β -TCP)陶瓷支架材料上 ,探讨以 β -TCP为牙周组织工程支架材料的可能性。 方法 :取新鲜拔除的健康第一前磨牙牙周膜 ,用组织块培养法培养PDLCs。β -TCP多孔陶瓷加工成片状 ,作为细胞支架 ,将 4-7代PDLCs与 β -TCP进行体外三维培养 ,2周后观察细胞生长状况。 结果 :PDLCs在 β -TCP支架材料上附着、增殖并复层生长。结论 :β -TCP具有良好的生物相容性 ,有望成为牙周组织工程的支架材料     

人牙龈和牙周韧带成纤维细胞的体外培养及生物学特性研究——细胞形态、生长曲线及碱性磷酸酶活性测定

目的 :建立人牙龈和牙周韧带成纤维细胞体外培养模型并对其生物学特性作初步探讨。方法 :采用组织块法常规条件下分别进行牙龈和牙周韧带成纤维细胞的培养 ,通过光镜、透射电镜、生长曲线及碱性磷酸酶测定等手段对其部分生物学特性进行研究。结果 :两种培养的原代及传代细胞在光镜下细胞排列及结构无明显差别 ,传代培养时牙龈成纤维细胞有接触抑制现象 ,而牙周韧带成纤维细胞则可呈复层生长 ,牙周韧带成纤维细胞排列方向性较明显 ,生长曲线表明牙周韧带成纤维细胞增殖活性高于牙龈成纤维细胞 ;碱性磷酸酶活性测定及染色法显示两者有明显的差别。结论 :体外培养的两种细胞在形态及排列上相似 ,但在细胞亚型的组成上存在差异。     

载药纳米粒明胶纤维缓释支架对牙周膜细胞MMPs的影响

目的 :研究载免疫抑制剂SB203580的纳米粒-明胶(Ms-SB203580-gelatin)纤维缓释支架对牙周膜细胞(human periodontal ligament cells,h PDLCs)的基质金属蛋白酶(matrix metalloproteninases,MMPs)表达的影响。方法 :通过透析法制备载药纳米胶束(Micelles-SB203580,Ms-SB203580),并通过电纺法构建载纳米粒明胶支架,检测支架材料的细胞相容性和对牙周膜细胞MMP-2、MMP-13基因和蛋白的表达影响。结果:透射电镜显示载药纳米粒能负载于明胶纤维中;细胞与支架复合后增殖情况良好;实验组MMP-2、MMP-13的表达低于阳性对照组。结论:载药纳米粒明胶纤维缓释支架能明显地抑制炎症因子,可进一步应用于牙槽骨骨组织工程。     

人牙周膜细胞和牙周膜组织的初级纤毛观察

目的:观察牙周膜组织和体外培养的牙周膜细胞的初级纤毛情况。方法:切取人牙根中1/3的牙周膜组织的冰冻切片和切取小鼠切牙牙周膜组织石蜡切片,原代培养人牙周膜细胞至P3,采用acet-α-tubulin利用间接免疫荧光的方法观察初级纤毛结构。结果:人及小鼠牙周膜组织以及人牙周膜细胞均可见绿色短棒状荧光信号,位于细胞核附近,长度约2~3 μm。 结论:牙周膜组织及体外培养的人牙周膜细胞均含有初级纤毛结构     

聚己内酯电纺纤维支架培养人牙周膜细胞的体外研究

目的：研究聚己内酯（PCL）电纺纤维支架上人牙周膜细胞的生物学行为，初步探讨PCL电纺纤维支架材料应用于牙齿再生和牙周组织工程研究的可行性。方法：采用静电纺丝法制备PCL电纺纤维支架。组织块法培养人牙周膜细胞（PDLC），传代扩增后接种于PCL电纺纤维支架上。激光共聚焦显微镜、扫描电镜观察人PDLC在支架材料上的黏附、生长情况，MTT法检测PCL电纺纤维支架对PDLC增殖的影响。结果：PCL电纺纤维支架呈无纺多孔网状结构，直径范围为338～424nm，纤维形态光滑均一。激光共聚焦显微镜、扫描电镜显示PDLC在支架上贴附牢固，伸展充分，增殖旺盛并分泌大量的细胞外基质。MTT法检测显示：PCL电纺纤维支架材料对PDLC生长增殖的影响与对照组培养板相比无统计学差异（P〉0．05）。结论：PCL电纺纤维支架具有良好的生物相容性，有望作为一种新型的支架材料应用于牙周组织工程。     

牙周膜成纤维细胞在三维静电纺丝纳米纤维支架上的培养

目的:研究人牙周膜成纤维细胞与静电纺丝聚乳酸/聚己内酯纳米纤维支架体外培养的生物相容性.方法:分离、培养人牙周膜成纤维细胞,接种在静电纺丝纳米纤维支架上,与常规培养条件下的细胞进行比较,观察生长形态、生长曲线、倍增时间及活性.结果:人牙周膜成纤维细胞生长情况与常规培养基本一致,2组间的倍增时间比较无统计学差异(P＞0.05),活细胞百分率与正常培养无明显统计学差异(P＞0.05).结论:人牙周膜成纤维细胞在三维静电纺丝纳米纤维上生长、增殖,该支架材料具有很好的生物相容性,可作为牙周膜组织工程候选支架材料.     

孕酮对人牙周膜细胞增殖及成骨分化的调控作用

目的：通过细胞免疫组织化学方法检测人牙周膜细胞（hPDLCs）中孕激素受体（PR）的表达,研究孕酮在hPDLCs增殖及成骨分化过程中的作用。方法：原代培养hPDLCs,取第4～6代细胞用于实验。分为空白对照组,孕酮组,抑制剂组。用含有不同浓度（1,10,100 nM）孕酮的培养液培养hPDLCs 1,2,3,4,5,6,7 d,采用MTT法检测在孕酮作用下hPDLCs生长曲线的变化情况。检测普通培养液和成骨诱导培养液中的各组细胞在孕酮作用后茜素红染色钙化结节面积的变化。结果：PR在hPDLCs的胞质和胞核中均有表达,且在胞核的表达明显高于胞质。孕酮干预hPDLCs后,细胞的增殖高于对照组,孕激素受体抑制剂能明显抑制hPDLCs的生长。孕酮能够促进茜素红染色钙化结节的形成。在成骨诱导液中,孕酮同样有促进成骨的作用。与普通培养组相比较,孕酮对成骨诱导组的成骨促进作用更为明显。结论：人牙周膜细胞中有PR的表达,孕酮能够促进人牙周膜细胞的增殖和成骨分化。     

氟化钠对人牙周膜细胞增殖及矿化能力的影响

目的:观察氟化钠对体外培养的人牙周膜细胞增殖及矿化能力的影响,为氟添加入牙周组织工程药物中的应用提供依据.方法:原代培养并鉴定人牙周膜细胞,应用CCK8检测不同浓度NaF对hPDLCs增殖的影响,并筛选出4个浓度用于矿化实验.矿化条件下,将0、1×10-5、5×10-4和1×10-3 mol/L的NaF作用hPDLCs后,通过碱性磷酸酶(ALP)染色、茜素红染色和实时荧光定量PCR检测矿化能力及成骨相关基因的表达.采用SPSS20.0软件包对数据进行单因素方差分析.结果:5×10-5、1×10-4、5×10-4 mol/L的NaF均能促进hPDLCs增殖,且以5×10-4 mol/L效果最佳(P＜0.05).而1×104 mol/L的NaF碱性磷酸酶染色阳性面积最大、茜素红染色矿化结节数量最多(P＜0.05).RT-PCR结果根据时间、指标变化程度较大.结论:5×10-5、1×10-4、5×10-4 mol/L的NaF能促进hPDLCs的增殖能力,1×10-5 mol/L的NaF能提高hPDLCs的碱性磷酸酶活性及钙结节形成.     

褪黑素对人牙周膜细胞成骨分化能力的影响

目的 探讨褪黑素对人牙周膜细胞(hPDLCs)成骨分化能力的影响.方法 原代培养法成功提取hPDLCs后,加入不同浓度的褪黑素作为实验组,空白对照组不加褪黑素.MTT法检测不同浓度褪黑素对细胞增殖的影响,相关试剂盒检测碱性磷酸酶(ALP)的活性和表达后,采用茜素红S染色、Real-time PCR和Western Bl...     

聚己内酯静电纺丝支架与人牙周膜干细胞的生物相容性

目的：观察荧光标记的人牙周膜干细胞在聚己内酯静电纺丝支架上的生长情况,评价聚己内酯静电纺丝支架与人牙周膜干细胞的生物相容性.方法：采用有限稀释法,体外分离培养人牙周膜干细胞.用荧光染料对牙周膜干细胞进行标记,检测细胞增殖情况,评价荧光标记对细胞生长特性的影响.制备聚己内酯静电纺丝支架,与牙周膜干细胞直接接触共培养7d,激光共聚焦显微镜观察细胞在支架材料上的黏附和增殖情况,扫描电镜观察细胞在支架材料上的生长状态.结果：成功分离培养人牙周膜干细胞;荧光染料标记后细胞发红色荧光,标记对细胞形态和生长特性无显著影响.激光共聚焦显微镜观察,可见牙周膜干细胞能够在聚己内酯静电纺丝支架上黏附增殖,局部细胞生长融合.扫描电镜观察,可见牙周膜干细胞在聚己内酯静电纺丝支架上黏附牢固,可进入支架内部复层生长.结论：荧光标记的牙周膜干细胞在聚己内酯静电纺丝支架上生长良好,聚己内酯静电纺丝支架与牙周膜干细胞具有良好的生物相容性,有望作为牙周组织工程的载体材料.