钙调神经磷酸酶信号通路与心肌细胞肥大

目的　探讨不同来源的细胞内Ca2 ([Ca2 ]i)在钙调神经磷酸酶 (CaN) 活化T细胞核因子 3 (NFAT3 )介导的心肌肥大中的作用。方法　分别用血管紧张素Ⅱ (AngⅡ )或雷尼丁刺激培养的大鼠心肌细胞外Ca2 跨膜内流或细胞内Ca2 释放 ,检测CaN、NFAT3、锌指转录因子 (GATA4)蛋白量、NFAT3定位以及氚 亮氨酸 (3H Leu)掺入量 ,环孢素A作为CaN特异抑制剂。结果　AngⅡ、雷尼丁刺激 1、3d ,心肌细胞CaN、NFAT3、GATA4蛋白表达及3H Leu掺入量较对照组明显增高(P值 <0 0 5或 <0 0 1)。AngⅡ和雷尼丁刺激第 1天 ,心肌细胞NFAT3表达由胞质转入胞核表达为主。环孢素A可抑制上述作用 ,与刺激组相比差异有显著性 (P <0 0 5或 <0 0 1)。结论　刺激心肌细胞Ca2 内流及Ca2 释放 ,均可激活CaN NFAT3信号通路。CaN NFAT3信号通路的激活与[Ca2 ]i增加有关 ,而与 [Ca2 ]i的来源无关。环孢素A能够抑制AngⅡ和雷尼丁介导的CaN NFAT 3 GATA 4表达的增加和蛋白质合成     

钙调神经磷酸酶调控精氨酸升压素诱导大鼠心脏成纤维细胞增殖的作用

目的　探讨钙调神经磷酸酶 (CaN)信号通路对精氨酸升压素 (AVP)诱导新生大鼠心脏成纤维细胞 (CFs)增殖的调控作用。方法　采用胰酶消化法培养新生Sprague-Dawley大鼠CFs,MTT比色法测定细胞数目 ,应用流式细胞仪分析细胞周期 ,CaN活性通过分光光度计测定。结果　 (1)CFs的MTT比色法吸光度A490 值随着AVP作用浓度的升高而增加 ,其中10 -7mol/LAVP和 10 -6mol/LAVP组A490 值(分别为 0 17±0 0 1和 0 18± 0 0 1)与空白对照组 (0 11± 0 0 1)比较有显著差异 (P <0 0 1) ;不同浓度的AVP CsA组A490 值均较相应的AVP组降低 ,其中 10 -7mol/LAVP CsA组和 10 -6mol/LAVP CsA组分别为 0 13± 0 0 1和 0 15± 0 0 1,与 10 -7mol/LAVP和 10 -6mol/LAVP组比较显著降低 ,并有统计学意义 (P <0 0 1)。(2 ) 10 -7mol/LAVP作用下CFs细胞周期S期百分率为 17.86± 3.18,与空白对照组 (12 .10± 2 .38)比较明显升高 ,并有统计学意义(P <0 0 1)。 10 -7mol/LAVP CsA组CFs细胞周期S期百分率 (13 76± 2 5 2 )与 10 -7mol /LAVP组比较有显著差异(P <0 0 5 )。 (3) 10 -7mol/LAVP组CFs的CaN活性为 0 30± 0 0 6kU/mg,与对照组 (0 14± 0 0 3kU/mg)比较差异显著(P <0 0 1)。结论　C     

钙调神经磷酸酶信号通路与心肌重构

心肌重构是心脏对缺氧或压力负荷过重的一种适应性反应。心肌细胞适应不良性肥大和心肌细胞坏死或凋亡是心肌重构的基础改变因素。已知细胞内钙超载与心肌重构有关 ,但对其作用机制还不清楚。最近研究表明 ,由Ca2 + 活化的钙调神经磷酸酶 (CaN)在心肌重构的信号传导中起重要作用 ,其可能是Ca2 + 信号导致肥大基因活化的偶联环节。同时 ,CaN通过影响其他信号通路对细胞凋亡有调节作用 ,但对其作用机制还不清楚。应用抑制CaN活性的药物CsA及FK5 0 6可以阻滞心肌肥大的发生发展 ,提示Ca2 + CaN依赖的信号传递通路可能是介导心肌重构的一条新的、重要的通路     

三磷酸肌醇受体参与心肌钙调神经磷酸酶信号通路的激活

目的:研究激活心肌细胞三磷酸肌醇受体（IP3R）是否触发钙调神经磷酸酶（CaN）介导的心肌肥厚信号通路。方法:培养的乳鼠心肌细胞检测心肌细胞蛋白合成,细胞内钙变化,CaN、活化T细胞核因子3（NFAT3）及锌指转录因子（GATA4）,胚胎基因（αskeletalactin,βMHC）及即刻早期基因（cfos,cmyc）蛋白表达。结果:三磷酸肌醇（IP3）能显著致原代培养的心肌细胞时间和剂量依赖性地增加心肌细胞蛋白合成,能显著致心肌细胞的早期即刻基因和胚胎基因表达,能显著增加心肌细胞内游离钙。IP3剌激IP3受体,能显著激活心肌细胞CaN/NFAT3/GATA4信号通路,使心肌细胞早期即刻基因（cfos、cmyc）及胚胎基因（αskeletalactin,βMHC）表达增加。结论:激活IP3R介导的CaN/NFAT3/GATA4信号通路能显著地促使心肌细胞肥大,这条信号通路不同于已知的G蛋白偶联受体介导的心肌肥厚信号转导途径。     

三磷酸肌醇受体/钙调神经磷酸酶信号通路激活致心肌肥厚的研究

目的 研究激活心肌细胞三磷酸肌醇受体（IP3R）是否触发钙调神经磷酸酶（CaN)介导的心肌肥厚信号通路。方法 培养Wistar乳鼠心肌细胞检测心肌细胞蛋白和核酸合成，细胞内钙变化，CaN，活化T细胞核因子3（NFAT3）及锌指转录因子（GATA4），胚胎基因（α-actin,β-MHC）及即刻早期基因（c-fos,c-myc)表达。结果 给予IP3能时间和剂量依赖性也增加心肌细胞蛋白和核酸合成，能明显致心肌细胞内钙增加；IP3刺激心肌细胞IP3受体，能明显激活心肌细胞CaN/NFAT3/GATA4信号通路，促使心肌细胞的早期即刻基因和胚胎基因表达。结论 激活IP3R介导的CaN/NFAT3/GATA4信号通路能显地促使心肌细胞肥大，这条信号通路不同于已知的G蛋白偶联受体介导的心肌肥厚信号转导途径。     

钙调神经磷酸酶调控精氨酸升压素诱导大鼠心脏成纤维细胞增殖的作用

目的探讨钙调神经磷酸酶(CaN)信号通路对精氨酸升压素(AVP)诱导新生大鼠心脏成纤维细胞(CFs)增殖的调控作用.方法采用胰酶消化法培养新生Sprague-Dawley大鼠CFs,MTT比色法测定细胞数目,应用流式细胞仪分析细胞周期,CaN活性通过分光光度计测定.结果 (1)CFs的 MTT比色法吸光度A490值随着AVP作用浓度的升高而增加,其中10-7 mol/L AVP和10-6 mol/L AVP组A490值(分别为0.17±0.01和0.18±0.01)与空白对照组(0.11±0.01)比较有显著差异(P<0.01);不同浓度的AVP+CsA组A490值均较相应的AVP组降低,其中10-7mol/L AVP+CsA组和10-6 mol/L AVP+CsA组分别为0.13±0.01和0.15±0.01,与10-7mol/L AVP和10-6 mol/L AVP组比较显著降低,并有统计学意义(P<0.01).(2)10-7mol /L AVP 作用下CFs细胞周期S期百分率为17.86 ±3.18,与空白对照组(12.10±2.38)比较明显升高,并有统计学意义(P<0.01).10-7mol /L AVP +CsA组CFs细胞周期S期百分率(13.76±2.52)与10-7mol /L AVP组比较有显著差异(P<0.05).(3)10-7 mol/L AVP组CFs的CaN活性为0.30±0.06 kU/mg,与对照组(0.14±0.03 kU/mg)比较差异显著(P<0.01).结论 CaN的特异性抑制剂环孢素A(CsA)可抑制AVP诱导的CFs增殖,AVP可升高CFs内CaN活性,表明CaN信号通路在AVP诱导CFs增殖过程中起到了重要的调控作用.     

钙调神经磷酸酶信号通路在心肌肥厚中的作用

心肌肥厚是许多心血管病的病理结果,可引起心力衰竭,增加猝死发生率。因此,探讨心肌肥厚发生机制,寻求延缓和治疗心肌肥厚的新途径,早已引起人们的重视。近年来,研究发现钙调神经磷酸酶(Ca2 /钙调素调节的丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶)可通过多种信号通路参与心肌肥厚的形成。现综述钙调神经磷酸酶信号通路在心肌肥厚发展中的作用。     

钙调神经磷酸酶与心肌肥厚的研究现状

心肌肥厚是临床上高血压、心肌梗死等心血管疾病共有的病理过程。初期有一定的代偿作用,晚期可以导致心律失常、猝死、心力衰竭。研究表明〔1〕:心肌肥厚的启动和发展与多条细胞信息通道有关,如钙调神经磷酸酶系统(CaN)、蛋白激酶C(PKC)系统、Wnt信号通路、丝裂素活化蛋白激酶(MAPK)系统、mir-RNA133和磷脂酰肌醇3(PI3K)介导的信号系统等。     

钙调神经磷酸酶活性测定

钙调神经磷酸酶是一种钙离子敏感的蛋白磷酸酶 ,广泛分布于包括心脏在内的全身组织中 ,参与多种生物功能的调节。本文对四种钙调神经磷酸酶活性测定法的原理、操作要点及其特点进行简要综述。     

钙离子-钙调磷酸酶对肺成纤维细胞表型转化的影响

目的探讨钙离子-钙调磷酸酶在大鼠肺成纤维细胞向肺肌成纤维细胞表型转化中的作用。方法体外分离培养大鼠肺成纤维细胞,免疫组织化学法检测波形蛋白鉴定细胞;以Fluo3-AM为钙离子荧光示踪剂,激光共聚焦显微镜检测细胞内基础Ca2＋水平以及给予转化生长因子β1（TGF-β1）刺激后细胞内钙离子水平变化;Westernblot检测各组细胞内α—sMA、P—Smad2的表达。结果①大鼠肺成纤维细胞波形蛋白胞浆表达呈阳性;②TGF-β1刺激后大鼠肺成纤维细胞胞内钙离子水平升高;③TGF—β1刺激组,α—SMA表达明显增加,加用环孢素A后不能抑制a-SMA的表达;TGF-β1与环孢素A共刺激1h、4h、24h各组与TGF-β1刺激组相比,p-Smad2水平均明显增加,且以环孢素A作用1h增加最为明显,而4h组和24h组比较差异无统计学意义。结论TGF-β1刺激后大鼠肺成纤维细胞胞内钙离子水平升高。钙调磷酸酶可能参与肺成纤维细胞向肺肌成纤维细胞表型转化。     

胆固醇对大鼠心脏成纤维细胞增殖的影响

目的 :研究胆固醇 （CL）对大鼠心脏成纤维细胞增殖的影响 ,并对其机制进行探讨。方法 :分离、纯化、培养乳鼠心脏成纤维细胞 ,完全随机分为 3组 :对照组、中浓度胆固醇组 （0 .5g/L）和高浓度胆固醇组 （1.2g/L）。以3 H TdR掺入法测定各组细胞的增殖情况 ,并以流式细胞仪 （FCM）测定细胞周期。采用免疫组织化学染色方法观察各组c fos的表达情况。结果 :中浓度CL可使培养的乳鼠心脏成纤维细胞3 H TdR掺入量显著升高 （P <0 .0 5vs对照组 ） ,流式细胞仪检测表现为S期细胞明显增多。高浓度CL则抑制细胞生长 ,3 H TdR掺入量显著降低 （P <0 .0 5vs对照组 ） ,S期细胞数明显减少。同时中浓度CL显著升高Fos样免疫阳性细胞数及染色强度 （P <0 .0 5vs对照组 ）。结论 :中等浓度胆固醇可促进大鼠心脏成纤维细胞增殖 ,其机制可能与影响细胞内c fos基因的表达有关。     

Urocortin对心肌成纤维细胞增殖和胶原合成作用的影响

目的 :探讨 urocortin对大鼠心肌成纤维细胞 （CFs）增殖和胶原合成作用的影响。方法 :消化法培养新生Sprague-Dawley （SD）大鼠的 CFs,采用四氮唑盐 （MTT）比色法测定细胞数目 ,流式细胞分析仪 （FCM）检测细胞周期 ,EL ISA法检测 型胶原合成 ,分别观察不同浓度 urocortin对 CFs增殖和胶原合成的影响。结果 :1随着 uro-cortin浓度的增高 ,CFs MTT比色法 A490 值呈明显的递增趋势 ,其中 10 - 10 、10 - 9、10 - 8、10 - 7和 10 - 6 mol/L组的 A490值分别为 0 .183± 0 .0 0 4、0 .2 2 2± 0 .0 0 4、0 .2 51± 0 .0 0 7、0 .2 80± 0 .0 0 6和 0 .3 17± 0 .0 0 2 ,均较对照组 （A490 值 0 .167± 0 .0 0 4）显著升高 （P均 <0 .0 1）。 2 FCM细胞周期分析结果表明 ,10 - 7mol/L urocortin作用 48h,CFs的 G0 /G1期细胞百分率均较对照组显著降低 （P<0 .0 1） ,S期细胞百分率、G2 /M期细胞百分率和增殖指数则较对照组显著增高 （均 P<0 .0 1）。 3 CFs的 型胶原分泌随着 urocortin作用浓度的增高呈明显的递增趋势 ,其中 10 - 10、10 - 9、10 - 8、10 - 7和 10 - 6 m ol/L urocortin组的 型胶原 A值分别为 0 .576± 0 .0 10、0 .614± 0 .0 0 8、0 .771± 0 .0 47、0 .83 9±0 .0 54和 0 .90 8± 0 .0 0 6,均较对照组     

比索洛尔对高血压大鼠心肌成纤维细胞增殖及胶原合成的影响

目的:探讨比索洛尔对培养的高血压大鼠（SHR）和W istar大鼠心脏成纤维细胞（CFs）增殖及胶原合成的影响。方法:采用胰酶消化法培养CFs,采用3H-胸腺嘧啶核苷（3H-TdR）掺入法测定CFs的DNA合成功能,四氮唑蓝（MTT）比色法测定细胞增殖,3H-脯氨酸（3H-Proline）掺入法测定胶原合成。结果:①基础状态下,SHR组CFs的3H-Proline掺入量3、H-TdR掺入量及MTT比色法A值均明显高于W istar组。②不同浓度比索洛尔对两组大鼠CFs3H-TdR掺入量及MTT比色法A值均无明显作用。③不同浓度比索洛尔以浓度依赖的方式抑制CFs3H-Proline掺入量,与W istar大鼠组相比,SHR组CFs受抑制的效应更强。结论:SHR的CFs细胞数目、DNA合成及胶原含量均存在异常,比索洛尔呈浓度依赖性抑制CFs的胶原合成,但对CFs增殖及DNA合成无明显作用。     

丝裂原活化蛋白激酶在醛固酮诱导心室成纤维细胞增殖中的作用

目的:探讨醛固酮诱导心肌成纤维细胞(CFs)增殖的信号转导机制.方法:用胰酶消化法分离、培养新生大鼠CFs,采用3H-胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)掺入法、western-blotting技术从DNA合成、蛋白表达等方面观察MAPK活化与醛固酮促CFs增殖的关系.结果:①醛固酮剂量依赖性促CFs DNA合成,10-5mol/L PD98059 [(782±152)个·min-1] 可逆转 10-7mol/L醛固酮 [(1879±169)个·min-1]的作用;②10-7mol/L醛固酮对活化MAPK蛋白表达有显著增强作用,在4 h达峰作用(8.11±0.46),10-7mol/L 醛固酮的作用(8.11±0.46)被10-5mol/L PD98059 (1.21±0.10, P<0.01)阻断.结论:醛固酮能激活CFs的MAPK,MAPK表达及活化参与醛固酮诱导的CFs增殖.     

辛伐他汀对血管升压素诱导鼠心脏成纤维细胞增殖和胶原合成的影响

目的探讨辛伐他汀（S imvastatin,S im）对血管升压素（AVP）诱导的新生SD大鼠心脏成纤维细胞（CF）增殖和胶原合成作用的影响,为防治高血压左室肥厚提供理论依据。方法以培养的新生SD大鼠CF为实验模型,采用胰酶消化、差速贴壁法培养CF,运用MTT比色法和3H-脯氨酸掺入法分别观察不同浓度S im对AVP诱导CF增殖和胶原合成的作用及甲羟戊酸（m evalonate,MVA）干预的影响。结果①CF的3H-脯氨酸掺入率随着S im干预浓度的增加而降低,其中1μmol/L和10μmol/L S im组的3H-脯氨酸掺入率分别为（3.67±0.39）mBq/cell和（2.35±0.36）mBq/cell,明显低于对照组（5.01±0.58）mBq/cell（P<0.01）;②MTT比色法A490值随S im浓度的增加而降低,其中1μmol/L和10μmol/L S im组的A490值分别为0.221±0.038和0.163±0.021,均较对照组A490值（0.395±0.039）显著降低（P<0.01）;③10μmol/L S im+1 mmol/L MVA组的3H-脯氨酸掺入率和MTT比色法A490值分别为（5.38±0.72）mBq/cell和0.419±0.051,均显著高于同组10μmol/L S im（P<0.01）。结论S im抑制AVP诱导的CF增殖和胶原合成,其机制可能通过MVA代谢途径实现。     

p27蛋白表达对精氨酸加压素介导心脏成纤维细胞增殖的影响

目的 :观察精氨酸加压素 （AVP）作用下 p2 7蛋白表达在心脏成纤维细胞 （CFs）中的变化 ,探讨 p2 7蛋白调控AVP促 CFs增殖的作用。方法 :以培养的新生 SD大鼠 CFs为实验动物模型 ,采用胰酶消化、差速贴壁法培养CFs,四氮唑盐 （MTT）比色法检测细胞增殖 ,碘化丙啶标记细胞 DNA ,p2 7蛋白的单抗和标记了 FITC的二抗标记细胞内的 p2 7蛋白 ,采用流式细胞分析仪技术测定细胞周期及 p2 7蛋白表达的阳性率。结果 :1随 AVP浓度的增加 ,MTT法测得的 CFs的 A值呈递增趋势 ,其中 10 - 7,10 - 6 m ol/ L AVP组分别为 0 .30 7± 0 .0 0 9,0 .337± 0 .0 0 7,均明显地高于对照组 （0 .2 98± 0 .0 0 9） ,并有统计学意义 （分别 P<0 .0 5 ,P<0 .0 1） ;2随 AVP浓度的增加 ,CFs的 S期细胞百分率和细胞增殖指数 （PI）逐渐增加 ,G0 / G1 期百分率下降 ,10 - 7,10 - 6 mol/ L AVP组与对照组比较差异非常显著 （P<0 .0 1） ;3CFs的 p2 7蛋白表达阳性率随 AVP浓度的增加而呈递减趋势 ,其中 10 - 7,10 - 6 m ol/ L AVP组 （分别为 71.6 %± 2 .2 % ,6 3.1%± 2 .3% ）明显低于对照组 （86 .5 %± 2 .3% ） ,并有统计学意义 （P<0 .0 1）。结论 :p2 7蛋白是 AVP促 CFs增殖过程的重要负性调节因子 ,AVP通过下调 p2 7蛋白发挥促 CFs增殖作用 ,这可     

酒精培养C3A细胞NOTCH信号通路的表达

目的观察Notch信号通路在酒精性肝病体外模型中的表达情况及其对C3A细胞增殖的影响。方法将人CYP2E1目的基因转染到C3A细胞系,筛选出稳定表达CYP2E1的肝细胞系为实验组。同时用空质粒转染C3A细胞系为对照组。两组细胞培养基中均加入等浓度酒精、等体积灭菌水和Notch抑制剂进行培养,采用MTT法检测细胞存活率,采用Western-blot法检测Notch下游蛋白Notch受体胞内区域(NICD1)和Hairy/Enhancer ofSplit蛋白(HES1)的表达,采用RT-PCR法检测Notch1mRNA水平。结果酒精使两组细胞存活率下降,Notch抑制剂提高了实验组细胞的存活率;实验组细胞NICD1和HES1表达高于对照组,加入Notch抑制剂后两者表达明显下降;实验组细胞Notch1mRNA水平高于对照组。结论酒精可以激活C3A细胞的Notch信号通路,Notch信号通路阻断剂可使酒精处理的肝细胞存活率升高。     

Effects of magnesium on matrix metalloproteinase-2 production in cultured rat cardiac fibroblasts

Abstract. The precise correlation between magnesium and cardiac disease remains to be established. Matrix metalloproteinases (MMPs) are important in cardiac disease such as heart failure. Cardiac fibroblasts are the most abundant cell type in the heart and play an important role in the regulation of collagen degradation by MMPs. To assess the association between magnesium and MMPs, we examined the effects of different extracellular magnesium concentrations (0-3.0 mmol/L) on MMP-2 production in cultured rat cardiac fibroblasts. Using gelatin zymography and western blotting, we found that magnesium reduced MMP-2 production dose-dependently, and this effect was inhibited by the tyrosine kinase inhibitors, genistein or herbimycin A. The results of this study indicated that the beneficial effect of magnesium supplementation on the cardiac disease may be due, at least in part, to the inhibitory effect of magnesium on production of MMPs in cardiac fibroblasts, which appears to be mediated by a protein tyrosine phosphorylation related signal transduction pathway.