多西紫杉醇诱导前列腺癌PC-3细胞自噬的研究

目的：观察多西紫杉醇是否诱导前列腺癌PC-3细胞产生自噬,并初步探讨其可能机制。方法：实验应用MTT法测定细胞的增殖率;透射电镜观察细胞超微结构的变化;免疫荧光和Western blot分别定性和定量检测自噬相关蛋白Ⅱ型微管相关蛋白轻链3蛋白（microtubule-associated protein 1 light chain 3 typeⅡ,LC3-Ⅱ）、底物蛋白（sequestosome 1/SQSTM1,P62）表达水平,RT-PCR检测自噬相关基因Beclin-1 mRNA。结果：MTT结果显示多西紫杉醇能有效抑制PC-3细胞增殖（F=58.684,P=0.000）;10-6 mol/L多西紫杉醇处理PC-3细胞24 h,即可发生明显的自噬,透射电镜观察到自噬体双层膜结构的形成。免疫荧光和Western blot结果显示多西紫杉醇处理PC-3细胞后P62表达降低（P=0.003、P=0.000、P=0.000）,LC3-Ⅱ表达增强（P=0.002、P=0.000、P=0.000）,RT-PCR结果显示多西紫杉醇处理PC-3细胞后可引起细胞Beclin-1 mRNA水平的上调（P=0.000、P=0.000、P=0.000）。结论：多西紫杉醇可以有效抑制前列腺癌PC-3细胞的增殖并诱导自噬,其发生可能与通过上调Beclin-1的mRNA水平有关。     

饥饿对Beclin-1依赖的Ana-1细胞自噬和凋亡的影响

目的：研究饥饿对Ana-1细胞自噬和凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法：体外培养Ana-1细胞,将细胞分为对照组（饥饿0h）和饥饿3、6、9、12、24h组（饥饿组）,观察饥饿对细胞自噬与凋亡的影响;将Ana-1细胞分为空白对照组、饥饿组、3-甲基腺嘌呤（3-MA）组、3-MA联合饥饿组,孵育24 h,采用Western blotting法检测各组细胞中自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值及Beclin-1蛋白表达水平和凋亡相关蛋白Caspase-3蛋白水平,采用倒置显微镜观察饥饿6、12和24 h组细胞形态表现。结果：与对照组比较,饥饿6、12和24h组Ana-1细胞中LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值,饥饿3、6、9、12和24 h组Ana-1细胞中Beclin-1蛋白表达水平均明显升高（P<0.05或P<0.01）,饥饿3、6、9、12和24 h组Ana-1细胞中Caspase-3水平明显降低（P<0.01）,呈时间依赖性;倒置显微镜下观察,与对照组比较,不同时间饥饿组细胞形态发生改变,细胞皱缩、出现碎片,随着时间的延长,细胞变化更加明显。与饥饿组比较,3-MA联合饥饿组Ana-1细胞中LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值和Beclin-1蛋白表达水平及Caspase-3蛋白水平均明显降低（P<0.05或P<0.01）。结论：饥饿可诱导Beclin-1依赖的Ana-1细胞自噬并引起细胞凋亡。     

白藜芦醇对人脑胶质瘤U87细胞自噬的影响

目的 研究白藜芦醇对脑胶质瘤U87细胞自噬的诱导作用及其可能的作用机制.方法 分别用不同浓度的白藜芦醇处理脑胶质瘤U87细胞12、24、48 h后,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测白藜芦醇对U87细胞生长的抑制作用;电子显微镜观察药物处理后U87细胞自噬空泡的出现;逆转录PCR及Western blot分别检测白藜芦醇作用后自噬相关基因微管相关蛋白Ⅰ轻链3(LC-3)、抗Bax交互作用因子(Bif-1) mRNA及蛋白表达的变化.结果 随着药物浓度的增加及作用时间的延长,白藜芦醇对U87细胞的生长抑制作用逐渐增大.电镜检测发现未使用白藜芦醇处理的细胞未出现自噬空泡,而白藜芦醇处理过的细胞出现明显的自噬空泡.白藜芦醇能剂量依赖性地增强自噬相关基因LC-3、Bif-1 mRNA及蛋白水平的表达.结论 白藜芦醇可以通过诱导细胞自噬来抑制U87细胞增殖,LC-3、Bib1基因表达上调是其诱导自噬的可能机制.     

饥饿诱导下小鼠成骨细胞自噬与凋亡相互作用研究

目的:探讨饥饿条件下自噬与凋亡在小鼠成骨细胞中的发生情况与相互关系。方法:培养初代MC3T3-E1小鼠成骨细胞系,将其分为饥饿诱导组与3-甲基腺素(3-MA)预处理饥饿诱导组。其中,饥饿诱导组采用单纯饥饿诱导法,用厄尔氏平衡盐溶液(earle’s balanced salt solution,EBSS)培养1 h、2 h、3 h、4 h、5 h、6 h。3-MA是一种特异性自噬抑制剂,在3-MA预处理饥饿诱导组中,正常培养的小鼠成骨细胞加入3-MA预处理1 h后,再用EBSS平衡盐溶液培养1 h、2 h、3 h、4 h、5 h、6 h。应用透射电子显微镜观察饥饿诱导组小鼠成骨细胞自噬与凋亡的形态学变化,应用Western blot免疫印迹法和Annexin V-FITC/PI双标记流式细胞术检测小鼠成骨细胞中自噬相关蛋白LC3,凋亡相关蛋白caspase 3表达水平的变化。结果:透射电镜结果显示单纯饥饿诱导条件下,细胞在2 h前以自噬为主,2 h后以凋亡为主,并随着时间的延长,凋亡水平逐渐增高。Western blot免疫印迹法结果显示与饥饿诱导组相比,3-MA预处理饥饿诱导组的LC3转化水平在1 h、2 h、3 h、4 h、5 h、6 h都出产生了明显的下降趋势(P<0.05);caspase 3蛋白表达水平在1 h、2 h、3 h和4 h增高(P<0.05),但0 h、5 h和6 h无差异(P>0.05)。Annexin V-FITC/PI双标记流式细胞术检测结果和单纯饥饿诱导组相比,3-MA预处理组仅在1 h、2 h、3 h和4 h促进了细胞凋亡(P<0.05),而并未影响到0 h、5 h和6 h的细胞凋亡(P>0.05)。结论:饥饿发生后,小鼠成骨细胞的自噬作用通过降低caspase 3的活化水平,在细胞饥饿2 h前拮抗凋亡作用,随着饥饿时间的不断延长,细胞自噬的表达水平在3 h和4 h时不断下降,自噬对细胞的保护不断降低,最终走向凋亡,此时自噬对凋亡的发生将不再有任何作用。     

HDAC3负性调控mTOR促进低氧诱导H9C2心肌细胞自噬

目的 研究组蛋白去乙酰化酶3(HDAC3)调控低氧诱导H9C2心肌细胞自噬的功能和机制.方法 体外建立H9C2心肌细胞低氧模型,采用Western blot和免疫荧光染色技术检测自噬相关蛋白LC3B-Ⅱ、Beclin-1和P62的表达变化以及荧光活性.分别转染HDAC3过表达质粒和干扰RNA后,检测自噬调节分子mTOR和LC3B的蛋白表达和荧光活性变化.结果 与对照组比较,低氧1、6、12 h后,H9C2心肌细胞中LC3B-Ⅱ和Beclin-1表达显著增加(P＜0.05);P62蛋白表达先增高(1 h)后降低(6 h)(P＜0.05).低氧1 h和6h后,HDAC3和mTOR蛋白表达明显增高(P＜0.05);低氧12 h后HDAC3和mTOR蛋白表达显著减少.过表达HDAC3能够降低mTOR蛋白表达和荧光活性,增加LC3B的蛋白表达和荧光活性(P＜0.05);下调HDAC3蛋白表达能够升高mTOR蛋白水平和荧光活性,减少了LC3B蛋白表达和荧光活性(P＜0.05).结论 HDAC3负性调节mTOR蛋白,促进了低氧诱导的H9C2心肌细胞自噬.     

饥饿诱导环境下人牙周膜成纤维细胞的自噬作用研究

目的:探讨饥饿环境中自噬作用在人牙周膜细胞中的发生情况。方法:原代培养人牙周膜成纤维细胞,将其随机分为正常对照组与实验组。正常对照组细胞用含10%胎牛血清的DMEM培养基培养;实验组细胞用饥饿诱导方法,分别用厄尔氏平衡盐溶液(EBSS)培养1h、2h、3h、4h、6h;应用透射电子显微镜观察组间人牙周膜细胞中自噬体数量的变化,采用细胞免疫荧光染色和免疫印迹方法检测人牙周膜细胞中自噬相关蛋白LC3的表达。结果:透射电子显微镜结果显示经EBSS饥饿诱导的实验组细胞均出现自噬体,数量明显多于对照组,且在EBSS诱导2h组、3h组、4h组较多。细胞免疫荧光结果表明,经EBSS饥饿诱导的细胞LC3表达量高于对照组,且在EBSS诱导2h、3h、4h组相对较高。免疫印迹检测结果显示,经EBSS饥饿诱导的细胞LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值明显高于对照组(P<0.05)。结论:饥饿诱导环境可诱导人牙周膜成纤维细胞出现自噬作用增多表现。     

异氟醚对Aβ25-35诱导大鼠PC12细胞自噬和凋亡的影响

目的：探讨吸入麻醉药异氟醚对β淀粉样蛋白（Aβ）25-35诱导的大鼠PC12细胞自噬和凋亡的影响,阐明其可能的作用机制。方法：将PC12细胞随机分为正常对照组（C组）、10   μmol•L-1Aβ25-35 处理组（Aβ组）、2%异氟醚处理组（Iso组）和2%异氟醚与10   μmol•L-1Aβ25-35联合处理组（Iso+Aβ组）。各组PC12细胞药物处理6 h后应用透射电镜观察自噬体,Western blotting法检测自噬相关蛋白LC3-Ⅱ、p62和自噬信号调控基因p-mTOR、Beclin-1表达;药物处理24 h后应用四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法检测细胞存活率,Western blotting法检测凋亡相关蛋白Bcl-2和caspase-3表达。结果：与C组比较,Aβ组PC12细胞中可见大量的自噬体,LC3-Ⅱ、Beclin-1和caspase-3表达量升高（P<0.05）,p62、p-mTOR和Bcl-2表达量降低（P<0.05）,细胞存活率降低（P<0.05）;Iso组PCI2细胞未见自噬体,LC3-Ⅱ
表达量降低（P<0.05）,p62、p-mTOR和caspase-3表达量升高（P<0.05）,细胞存活率降低（P<0.05）;与Aβ组比较,Iso+Aβ组PC12细胞仅见少量自噬体,LC3-Ⅱ表达量降低（P<0.05）,p62、p-mTOR、Beclin-1和caspase-3表达量升高（P<0.05）,细胞存活率降低（P<0.05）,Bcl-2表达无明显变化（P>0.05）。结论：异氟醚能够抑制Aβ25-35诱导大鼠PC12细胞自噬的活化,促进凋亡蛋白的表达,其作用机制与激活自噬信号调控基因mTOR、抑制Beclin-1的表达有关。     

氟化钠对心肌细胞LC-3、Beclin-1、 STAT-3表达的影响

目的:观察氟化钠对大鼠心肌细胞中自噬相关基因微管相关蛋白1轻链3(LC-3)、哺乳动物ATG6同源蛋白(Beclin-1)、信号转导与转录激活因子3(STAT-3)基因表达的影响.方法:将大鼠H9c2心肌细胞加入不同浓度氟化钠(NaF)的培养基,培养48 h后提取心肌细胞的RNA,RT-PCR法比较各组心肌细胞中LC-3、STAT-3、Beclin-1 mRNA的表达情况.结果:48 h后,与对照组相比,加入2.5 mg/L、5 mg/L、10 mg/L、20 mg/L、40 mg/L NaF的心肌细胞中LC-3、Beclin-1的表达量明显增高(P<0.05),STAT-3相对表达量降低(P<0.05).结论:心肌细胞LC-3和Beclin-1 mRNA表达量随NaF浓度的增加而增加,STAT-3 mRNA表达量随NaF浓度的增加而减少,提示氟中毒导致心肌细胞活力降低可能与自噬的过度激活有关.     

鹦鹉热衣原体Ⅲ型分泌蛋白SINC通过激活MAPK/ERK信号通路促进宿主细胞自噬

目的 探讨鹦鹉热衣原体（Cps）SINC蛋白对宿主细胞自噬的影响,及MAPK/ERK信号通路在其中的调控作用。方法 用重组的SINC蛋白刺激小鼠单核巨噬细胞（RAW 264.7）,Western blot检测LC3-Ⅱ和Beclin-1的水平及ERK1/2的磷酸化程度,并用间接免疫荧光法检测SINC蛋白刺激后细胞LC3的水平,透射电镜检测自噬特殊结构。用50μmol MEK1/2抑制剂U0126预处理RAW 264.7细胞后1 h,再用不同浓度SINC蛋白刺激不同时间,用间接免疫荧光检测LC3的水平,并用Western blot检测LC3-Ⅱ和Beclin-1的表达水平。结果 Western blot检测结果显示,以2μg/mL SINC蛋白刺激RAW 264.7细胞12 h时,LC3-Ⅱ和Beclin-1的表达水平显著上调,并达到峰值;间接免疫荧光检测发现SINC刺激后可使细胞内LC3荧光斑点数明显增多,透射电镜下可见更多的自噬小体和自噬溶酶体。2μg/mL SINC蛋白刺激RAW 264.7细胞15 min时p-ERK1/2/ERK1/2比值明显上调;加入抑制剂U0126后,LC3...     

金丝桃素介导的光动力学疗法对K562细胞活性与自噬的影响

目的：观察金丝桃素介导的光动力学疗法（Hyp-PDT）对慢性髓性白血病细胞（K562细胞株）活性与自噬的影响。方法：体外培养K562细胞株经过含金丝桃素（0.4 μg/mL）的培养液避光孵育后，采用0.3 mW/cm2光强度及照射4 min实施Hyp-PDT，CCK-8法测定细胞活性。收集照射前，照射后4、8、16 h的细胞悬液，分别在光镜和电镜下观察细胞形态学及自噬体数量，Western blot检测自噬相关蛋白LC3、Beclin-1、p-Akt、Akt的表达水平。结果：金丝桃素组光照后细胞活性随时间延长逐渐降低，与光照前比较，差异均有统计学意义（P＜0.01），且与正常细胞组、DMSO细胞组比，所有时间点的细胞活性均显著降低（均P＜0.01）。Hyp-PDT干预后，金丝桃素组光照后部分细胞出现细胞肿胀变性甚至溶解破裂。透射电镜显示K562细胞照射前即存在自噬体，照射后8 h DMSO组中的自噬体数量开始增多，但金丝桃素组的自噬体数量明显减少。Western blot结果显示：照射后8 h和16 h时金丝桃素组LC3蛋白表达量减少，而DMSO组LC3蛋白含量呈上升趋势；照射后16 h，与DMSO组比，金丝桃素组的Beclin-1蛋白含量明显下降，p-Akt蛋白表达量明显减少（均P＜0.01）。结论：Hyp-PDT可能通过抑制p-Akt磷酸化，影响PI3K-Akt通路，减少K562自噬，促进细胞死亡，起到杀伤白血病肿瘤细胞的作用。     

高剂量葡萄糖对小鼠肌管细胞自噬表达的影响

目的：探讨高剂量葡萄糖对肌管细胞自噬表达的影响。方法：使用分化培养基诱导小鼠成肌细胞分化成肌管细胞,分正常剂量（5.5 mmol/L）和高剂量（17 mmol/L和30 mmol/L）葡萄糖浓度的3组培养基培养肌管细胞,于6、12、24、36、48、60、72 h后分别收集细胞,检测自噬相关蛋白和mRNA表达量,并用串联荧光标记LC3（mRFP-GFP-LC3）慢病毒转染小鼠成肌细胞,动态监测自噬流。结果：高剂量葡萄糖条件下肌管细胞自噬表达存在2个阶段,30 mmol/L组培养24 h自噬表达下降,LC3和Beclin-1蛋白表达水平比5.5 mmol/L组低（P＜0.05）;而在30 mmol/L葡萄糖条件下培养48、60和72 h后自噬水平增强,LC3和Beclin-1的基因表达均明显升高（P＜0.05）。肌管细胞GFP和RFP荧光斑点的定位与数量分析也证明30 mmol/L葡萄糖浓度的培养基培养48、60和72 h后可显著增加自噬体和自噬溶酶体的合成。结论：高剂量葡萄糖对肌管细胞自噬表达有重要影响,不同时间自噬表达存在差异,长期高血糖状态可诱导自噬过度活化。     

自噬相关基因在系统性硬化症患者外周血单个核细胞中的表达及临床意义

目的 探讨自噬相关基因LC-3 mRNA、Beclin-1 mRNA、Agt-3 mRNA、Agt-5 mRNA、Agt-12 mRNA和Agt-16L1 mRNA在系统性硬化症(systemic sclerosis,SSc)患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)中的表达及临床意义。 方法 选取2018年4月—2019年3月于川北医学院附属医院就诊的SSc患者(SSc组)29例和年龄、性别相匹配的对照组(健康体检者)29例,采用RT-PCR检测自噬相关基因在PBMC中的表达水平。运用SPSS 19.0统计学软件比较组间自噬相关基因的表达,分析自噬相关基因与临床资料之间的关系,P<0.05为差异有统计学意义。 结果 (1)与对照组相比,自噬相关基因LC-3、Beclin-1和Agt-3在SSc组中表达增加[LC-3:0.77(0.51,1.00)×10-3 vs. 0.46(0.37,0.63)×10-3;Beclin-1:6.13(5.01,7.88)×10-3 vs. 4.76(3.43,5.34)×10-3;Agt-3:15.67(11.52,23.66)×10-3 vs. 8.65(7.44,11.23)×10-3],而自噬相关基因Agt-5、Agt-12及Agt-16L1组间差异无统计学意义;(2)LC-3在抗核小体抗体、抗SSA/Ro抗体阳性患者中表达更高;(3)LC-3的相对表达量与SSc患者的年龄、ESR呈正相关,r值分别为0.662、0.428(均P<0.05)。 结论 自噬相关基因在SSc患者外周血单个核细胞中表达增加,并与年龄、ESR、抗体相关,提示自噬是SSc发病机制中的一个重要特征。      

神经酰胺通过JNK-c-Jun信号通路诱导胶质瘤细胞自噬性死亡

目的探讨神经酰胺对大鼠脑胶质瘤细胞C6自噬性死亡的影响及其作用机制。方法不同浓度神经酰胺作用于C6细胞后,用MTT法检测细胞的存活率,流式法检测细胞凋亡的改变;Western blotting及电镜的方法观察细胞自噬水平的改变,以及JNK及其下游靶分子c-Jun的磷酸化水平变化;最后进一步借助JNK特异性抑制剂SP600125抑制JNK的活性,观察其对神经酰胺诱导的细胞自噬情况的影响。结果与对照组相比,神经酰胺作用24 h后,C6细胞存活率明显降低,且具有剂量依赖性,差异有统计学意义(P<0.05);与对照组相比,神经酰胺作用24 h后,C6细胞死亡明显升高且具有剂量依赖性,差异有统计学意义(P<0.05),但其中凋亡性死亡比例较低;神经酰胺作用后细胞内自噬小体数目,LC3B/LC3A的比值,Beclin-1的表达水平,以及JNK和c-Jun磷酸化水平都显著升高,差异具有统计学意义(P<0.05);提前给予JNK特异性抑制剂SP600125抑制JNK的活性后,显著阻断神经酰胺诱导的细胞自噬。结论神经酰胺可诱导胶质瘤细胞C6发生自噬性死亡,其诱导胶质瘤细胞发生自噬的机制可能与激活JNK信号通路有关。     

鲍曼不动杆菌OmpA经ROS/NLRP3信号通路调控THP 1细胞自噬和凋亡

目的: 探讨鲍曼不动杆菌外膜蛋白A(outer membrance protein A, OmpA)对人单核巨噬THP-1细胞自噬和凋亡的影响及其可能机制。方法: 构建OmpA/pET-28a载体,转化大肠埃希菌BL21(DE3)表达纯化重组OmpA蛋白,并免疫家兔制备多克隆抗体;采用蛋白质印迹法检测呼吸机相关性肺炎患者发病前后血清中OmpA抗体水平变化。以不同浓度(1、10 μg/mL)重组OmpA蛋白分别刺激THP-1细胞1、3、6 h,采用蛋白质印迹法检测自噬相关蛋白LC-3和Beclin-1表达,流式细胞术检测细胞凋亡率及活性氧产生,荧光实时定量PCR检测细胞含NLR家族Pyrin域NOD样受体家族3(NLRP3)、Caspase-1和IL-1β等mRNA表达。结果： 自制多抗可以识别临床菌株OmpA蛋白。呼吸机相关性肺炎患者发病前后,血清中均可检出OmpA抗体(IgG型),且发病后OmpA抗体水平显著高于气管插管前(P<0.05)。重组OmpA蛋白刺激THP-1细胞后,细胞自噬相关蛋白LC3-Ⅱ和Beclin-1表达显著上升,细胞凋亡率显著升高,呈一定的时间和浓度依赖性(P<0.05)。与对照组比,在重组OmpA蛋白作用1 h时,细胞IL-1β mRNA表达和活性氧含量显著增加(P<0.05);3 h和6 h时,3种mRNA表达量和活性氧含量显著降低(P<0.05)。结论： OmpA通过激活THP-1细胞NLRP3炎症小体,释放活性氧和IL-1β等炎症介质,诱导THP-1细胞自噬和凋亡发生。     

糖氧剥夺/再灌注损伤对人正常肝L02细胞自噬水平的影响

目的 探讨糖氧剥夺/再灌注损伤(OGD/R)对人正常肝L02细胞自噬水平的影响.方法 体外培养人正常肝L02细胞,制备OGD/R模型,模拟临床的肝脏缺血再灌注损伤.分为5组:正常对照组、OGD 6 h/R 1、3、6、12 h组.随后在倒置显微镜下观察L02细胞形态;采用MTT比色法检测L02细胞的相对增殖情况;Western blot法检测自噬相关蛋白LC3、Beclin-1和p62的表达变化.结果 与正常对照组相比,随着再灌注时间的延长,OGD/R组处理L02细胞的形态损伤逐渐加剧,增殖活性逐渐降低,呈时间依赖性.自噬相关蛋白LC3和Beclin-1在OGD 6 h/R 1 h即有所增高,随着再灌注时间的延长,LC3的表达量逐渐增高并于再灌注6 h时大量增加,于再灌注12 h时达到最大值(P<0.01);Beclin-1蛋白的表达量随再灌注时间的延长逐渐增加于6 h和12 h急剧增加(P<0.01);p62蛋白于OGD 6 h/R 1 h时和3 h无明显变化,而在再灌注6 h时开始急剧增加,于12 h达到最大值(P<0.01).结论 OGD/R可诱导人正常肝L02细胞自噬水平上调,并且导致细胞的自噬性死亡.     

脑缺血再灌注不同时间对大鼠海马神经元自噬及PI3K/mTOR通路的影响

目的：探讨脑缺血再灌注不同时间对大鼠海马神经元自噬及PI3K/mTOR通路的影响。方法：72只大鼠随机分为假手术组、脑缺血再灌注组（分别再灌0、6、12、24、36 h）,每组12只。采用四血管阻断法建立大鼠全脑缺血再灌注损伤模型。神经功能缺损评分评价大鼠海马神经功能,HE染色检测大鼠海马神经细胞损伤,透射电镜下观察海马神经元内自噬小体,Western blot检测Beclin-1、LC3 II、p62、p-PI3K、p-Akt及p-mTOR蛋白表达。结果：与假手术组比,随着脑缺血再灌注的时间延长,脑缺血再灌注大鼠神经功能缺损评分、脑梗死面积、自噬小体数量均增加（均P＜0.05）;随着脑缺血再灌注的时间延长,大鼠海马组织自噬相关蛋白Beclin-1和LC3 II表达显著上调、p62表达下调（P＜0.05）;PI3K/mTOR通路相关蛋白p-PI3K、p-Akt、p-mTOR表达显著下调（P＜0.05）。结论：脑缺血再灌注可增强大鼠海马神经元自噬,抑制PI3K/mTOR信号通路。     

Ox-LDL对PMA诱导的THP-1巨噬细胞自噬的影响

目的探讨氧化型低密度脂蛋白（Ox-LDL）对PMA诱导的THP-1巨噬细胞自噬的影响。方法 PMA诱导THP-1细胞24 h,使其分化为巨噬细胞,再分别用0、10、20、40或80 mg/L的Ox-LDL处理24 h,逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和免疫印迹技术（Western blotting）分别检测Beclin-1以及LC3的mRNA及蛋白表达;细胞免疫荧光检测LC3在细胞内的含量;MDC染色检测自噬囊泡的形成。结果随着Ox-LDL浓度的增加,THP-1源性巨噬细胞Beclin-1 mRNA及蛋白表达显著降低（P〈0.05）;LC3 mRNA表达无明显改变（P〉0.05）,但蛋白水平LC3II/LC3I显著降低（P〈0.001）;免疫荧光结果表明随着Ox-LDL浓度的增加,LC3II含量降低,MDC染色结果显示自噬囊泡随着Ox-LDL浓度的增加而减少。结论 Ox-LDL抑制PMA诱导的THP-1巨噬细胞自噬。     

体外探究脱落酸对肺腺癌细胞系Spc-A1自噬的影响

目的观察脱落酸(ABA)作用于肺腺癌细胞株Spc-A1引起自噬方面的变化,研究ABA对Spc-A1细胞自噬的影响。方法以人肺腺癌细胞系Spc-A1为研究对象,ABA给药浓度分别为0.8、20、100μmol/L,采用MTT法检测ABA作用后Spc-A1细胞的活力;激光共聚焦显微镜观察ABA作用于Spc-A1细胞后自噬现象;提取培养细胞mRNA及蛋白质,分别采用荧光实时定量PCR、蛋白印迹法检测自噬相关基因Beclin-1及LC3-Ⅱ的表达。结果 ABA作用后,肺腺癌细胞Spc-A1活力随着ABA浓度的增高而下降,各处理组之间差异具有统计学意义(P<0.001);ABA可诱导Spc-A1细胞自噬,自噬现象随药物浓度增高而增加;ABA处理后Bec-lin-1及LC3-Ⅱ的mRNA表达量随着ABA浓度的增加而增高,各处理组表达量差异具有统计学意义(P<0.05);蛋白表达结果显示ABA 100μmol/L处理组与对照组Beclin-1表达量差异具有显著性(P=0.04);ABA 100μmol/L处理组与对照组LC3-Ⅱ表达量差异具有显著性(P=0.005),ABA 0.8μmol/L组与ABA 100μmol/L组之间LC3-Ⅱ表达量差异具有显著性(P=0.039),余处理组表达量两两之间未见显著性差异。结论 ABA可通过调节自噬信号转导通路中相关基因的表达诱导肺腺癌细胞Spc-A1自噬,随着自噬的增加,可能抑制肿瘤的生长。