绿茶多酚对晚期氧化蛋白产物诱导大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响

血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)增殖和表型改变是动脉粥样硬化的主要病理基础.研究表明,晚期氧化蛋白产物(advanced oxidation protein products,AOPP)参与了糖尿病及动脉粥样硬化等疾病的发生发展过程.本研究观察了绿茶多酚对AOPP诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响.     

柿叶黄酮抑制LDL刺激的大鼠血管平滑肌细胞增殖

目的:观察柿叶黄酮对低密度脂蛋白(LDL)刺激时离体大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞增殖的影响.方法:体外培养大鼠主动脉血管平滑肌细胞,LDL刺激时,应用不同剂量的柿叶黄酮作用24 h后,采用MTS/PES法确定血管平滑肌细胞的增殖状态.结果:与对照组相比,LDL可以明显刺激大鼠血管平滑肌细胞的增殖,柿叶黄酮对LDL刺激下的大鼠血管平滑肌细胞增殖具有明显的抑制作用(P＜0.05),并呈现剂量依赖性.结论:柿叶黄酮可明显抑制LDL刺激下的大鼠血管平滑肌细胞增殖.     

胰岛素合剂对人成纤维细胞增殖影响的实验研究

目的观察不同浓度胰岛素合剂对人成纤维细胞增殖速度的影响。方法用加入不同浓度胰岛素合剂的DMEM改良培养基接种人成纤维细胞,经过静态培养,比较不同浓度培养基中人成纤维细胞增殖速度。结果在不同浓度的改良培养基中人成纤维细胞的增殖速度与变化不一样。结论在一定的胰岛素合剂浓度下,人成纤维细胞的增殖速度与胰岛素浓度成正比,当胰岛素达到一定浓度后,对人成纤维细胞增殖的影响变得不明显或受抑制,从而为下一步研究胰岛素合剂外用于临床的最佳浓度提供一定的参考依据。     

晚期氧化蛋白产物对人巨噬细胞产生NO、ROS的影响及复方黄甘提取物的干预

目的研究晚期氧化蛋白产物对人巨噬细胞产生一氧化氮(NO)和活性氧(ROS)的影响以及复方黄甘提取物(大黄、甘草等)对其的干预。方法人巨噬细胞与晚期氧化蛋白产物共同培养24 h,再给予复方黄甘提取物继续培养24 h后,用Griess还原法测定培养上清一氧化氮(NO)的水平变化,RT-PCR法测定诱导型一氧化氮合酶(iN-OS)的基因表达变化,DCFH-DA荧光探针法测定ROS水平的变化;分别用NF-κB抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐、NADPH氧化酶抑制剂二亚苯基碘和复方黄甘提取物预处理细胞1 h,再用晚期氧化蛋白产物刺激,24 h培养结束后测定ROS水平的变化,RT-PCR和ELISA法分别测定细胞因子TNF-α、IL-1β和IL-6的基因表达及蛋白分泌。结果晚期氧化蛋白产物丧失了诱导人巨噬细胞产生NO的能力,但能升高ROS的产生量,同时TNF-α、IL-1β和IL-6的基因表达和蛋白分泌也显著性升高。当给予复方黄甘提取物继续培养后,可显著性地增加NO水平,降低ROS水平;当给予复方黄甘提取物预处理细胞时,也能降低ROS水平,同时降低TNF-α、IL-1β和IL-6的基因表达和蛋白分泌。结论复方黄甘提取物延缓肾衰的进程可能是通过产生NO来减轻其微炎症反应和通过消除ROS来减弱其氧化应激损伤途径实现的。     

中药复方水提液对人牙周膜成纤维细胞增殖和总蛋白含量影响的实验研究

目的:观察中药复方水提液在不同浓度下对人牙周膜成纤维细胞(HPLF)增殖和总蛋白含量的影响.方法:运用细胞生物学方法,通过MTT法和考马斯亮蓝染色法测定HPLF增殖和总蛋白含量的变化.结果:中药复方水提液浓度在1×10-7～1×10-3g/mL时,均能明显促进HPLF增殖,与对照组比较.有显著性差异,且在1×10-3g/mL浓度时作用效应最大;中药复方水提液浓度在1×10-4～1×10-3g/mL,能够明显增加HPLF总蛋白的合成,与时照组比较,有显著性差异.在此范围内,中药复方水提液的作用显示出明显的浓度依赖效应和时间依赖效应.结论:中药复方水提液可促进HPLF增殖及蛋白质合成.     

蜈蚣酸性蛋白对血管紧张素-Ⅱ诱导心肌成纤维细胞增殖和胶原合成的影响

目的:研究蜈蚣酸性蛋白(centipede acidic protein,CAP)对血管紧张素-Ⅱ(AngⅡ)诱导培养心肌成纤维细胞(cardiac fibroblasts,CFb)增殖和胶原合成的影响,探讨其抑制心肌纤维化的机制。方法:建立AngⅡ诱导乳鼠CFb纤维化模型,噻唑蓝(MTT)法检测CAP对CFb增殖的影响;羟脯氨酸测定CFb胶原合成量;硝酸还原酶法测定细胞培养液中NO含量;半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法测定相关基因c-myc mR-NA表达。结果:AngⅡ模型组与空白对照组比较,CFb增殖及胶原合成显著增加、NO含量显著降低、c-mycmRNA的表达显著增加(P<0.01);CAP高、低剂量组与AngⅡ模型组比较,CFb增殖及胶原合成显著降低、NO含量显著升高、c-myc mRNA的表达显著下调(P<0.05或P<0.01)。结论:CAP具有明显的抑制心肌纤维化作用,其机制与提高NO含量及下调c-myc mRNA表达有关。     

五倍子丹参膏对人瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖的影响

瘢痕疙瘩是一种以胶原等细胞外基质过度沉积为特征的皮肤纤维化疾病,具有侵袭性生长的特性,极易复发。目前对瘢痕疙瘩的发病机制仍不明确,也无满意的治疗药物和方法。     

固真方对人胚肺成纤维细胞增殖影响的实验研究

固真方具有补肾益精、延缓衰老的作用。实验以及胚肺成纤维细胞为对象,研究固真方对细胞增殖的影响,并探讨其对增殖有关基因－原癌基因和抗癌基因表达的调控。研究显示,固真方处理组与对照组相比：细胞计数增加３５．９６％,细胞分裂指数增加３３．２９％,原癌基因的表达增高３３．０５％,抗癌基因的表达降低了４２．３１％。     

4种活血化瘀中药有效成分对血管紧张素Ⅱ诱导的血管外膜成纤维细胞增殖及胶原合成的影响

目的:体外观察盐酸川芎嗪、葛根素、丹参酮Ⅱ_A、丹皮酚对血管紧张素Ⅱ(ANG-Ⅱ)诱导的大鼠血管外膜成纤维细胞(VAF)的增殖及胶原蛋白合成的影响。方法:MTT法检测细胞增殖活性;羟脯氨酸比色法测定细胞培养上清液中胶原蛋白含量。结果:4种中药成分能够显著降低ANG-Ⅱ诱导的VAF增殖及细胞培养上清液中羟脯氨酸含量。结论:盐酸川芎嗪、葛根素、丹参酮Ⅱ_A、丹皮酚能够抑制ANG-Ⅱ诱导的VAF增殖和胶原合成。     

氧化苦参碱对醛固酮诱导心肌成纤维细胞增殖抑制作用的机制

目的:研究氧化苦参碱(OMT)对醛固酮(ALD)诱导心肌成纤维细胞(CFs)增殖中C-Jun氨基末端激酶(JNK)/细胞外调节蛋白激酶(ERK),蛋白激酶B1(Akt1)信号的调控机制。方法:采用胰酶消化及差速贴壁法分离纯化CFs,波形蛋白免疫荧光染色鉴定CFs,实验分为空白组(无血清DMEM),ALD组(1×10-7mol·L-1),OMT低剂量组(3.78×10-4mol·L-1),OMT高剂量组(7.57×10-4mol·L-1)及螺内酯组(Spir,1×10-6mol·L-1)。噻唑蓝(MTT)比色法检测OMT对ALD诱导CFs的增殖抑制作用,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)及蛋白质免疫印迹法(Western blot)分析JNK,ERK,Akt1 mRNA及蛋白表达。结果:MTT结果显示,与空白组比较,ALD显著诱导CFs增殖(P0.05),给予OMT干预后,CFs的增殖被显著抑制(P0.05);Western blot及Real-time PCR结果显示,与空白组比较,ALD明显增加CFs中JNK,ERK及Akt1蛋白和mRNA表达(P0.05)。与ALD组比较,OMT可明显下调ALD诱导的CFs中JNK,ERK及Akt1 mRNA和蛋白表达(P0.05)。结论:OMT可抑制CFs增殖,其机制可能与抑制JNK,ERK及Akt1信号有关。     

柿叶黄酮对肿瘤坏死因子α诱导大鼠血管平滑肌细胞凋亡信号调节激酶1表达的影响

目的:观察柿叶黄酮对肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导的大鼠血管平滑肌细胞凋亡信号调节激酶1的影响。方法:体外培养SD大鼠血管平滑肌细胞,应用柿叶黄酮与TNF-α共同进行作用并设立对照进行比较,采用非放射性的MTS/PES法确定血管平滑肌细胞的增殖状态。利用Western blotting蛋白免疫印迹法测定血管平滑肌细胞凋亡信号调节激酶1蛋白的表达情况。结果:各组的细胞增殖率分别为对照组0.817±0.074;TNF-α20 ng/ml组1.865±0.093;柿叶黄酮50μg/ml组0.905±0.044;TNF-α20 ng/ml联用柿叶黄酮50μg/ml组1.247±0.061。统计分析显示TNF-α20 ng/ml能明显刺激血管平滑肌细胞的增殖。柿叶黄酮单独作用对血管平滑肌细胞细胞增殖率无影响;柿叶黄酮对TNF-α诱导血管平滑肌细胞增于有明显的抑制作用,TNF-α对血管平滑肌细胞的凋亡信号调节激酶1蛋白的表达有显著的增强作用,这种作用部分可以被柿叶黄酮所抑制。结论:柿叶黄酮能明显抑制由TNF-α诱导的大鼠血管平滑肌细胞凋亡信号调节激酶1蛋白的表达。     

疡愈涂剂对糖尿病大鼠创面PCNA表达及成纤维细胞的影响

目的：观察疡愈涂剂对链脲佐菌素（STZ）引起的糖尿病大鼠伤口细胞增殖及体外对成纤维细胞增殖迁移的作用。方法：实验分为正常组、模型组、疡愈涂剂高、中、低剂量组。除正常组外，大鼠腹腔注射STZ，造成高血糖状态。各组动物复合背部全厚皮切除伤口。分别观察疡愈涂剂对创面愈合时间、愈合率；采用免疫组化法观察细胞核增殖抗原（PCNA）表达；及MTT法和体外伤口法观察疡愈涂剂对糖尿病大鼠创面成纤维细胞的增殖和迁移作用。结果：与模型组相比，不同剂量的疡愈涂剂均能明显缩短STZ诱发糖尿病大鼠复合创伤后创面的愈合时间（分别P〈0．01）；提高创面愈合率（P〈0．05，P〈0．01）。创伤3天后疡愈涂剂高剂量组PCNA表达明显高于模型组；中剂量组于5天后开始增高；低剂量组7天后增高；分别P〈0．05，P〈0．01。体外研究表明疡愈涂剂在29．23μg／mL和58．45μg／mL能促进糖尿病大鼠刨面成纤维细胞的增殖和迁移，分别P〈0．01。结论：疡愈涂剂可能通过促进糖尿病大鼠创面成纤维细胞的增殖，从而加速创面的愈合。     

柿叶提取物对高血糖大鼠血糖及肝糖原含量的影响

目的：通过研究柿叶提取物对高血糖大鼠的血糖及肝糖原含量的影响,初步探讨柿叶的降血糖作用及其机制。方法：采用四氧嘧啶制备高血糖大鼠模型,葡萄糖氧化法测定大鼠的空腹血糖,并通过对肝脏组织匀浆糖原含量生化测定和肝脏组织糖原染色及病理评分来初步评价药物对肝糖原含量的影响。结果：与高糖模型组比较,柿叶提取物组可显著降低空腹血糖（P〈0.01）,明显增加肝糖原含量（P〈0.01）,增高糖原染色评分。结论：柿叶提取物具有显著的降血糖作用,并能增加肝糖原的含量。     

染料木素对大鼠成骨细胞增殖与分化的影响

目的:探讨染料木素体外对大鼠成骨细胞增殖与分化的影响。方法:用改良的组织块法分离培养新生大鼠颅骨成骨细胞,染料木素以不同浓度加入细胞培养体系,作用不同时间后,用MTT法检测成骨细胞的增殖情况;用对硝基苯二钠基质动力学法测定细胞内碱性磷酸酶的活性,用改良的Lowry法测蛋白含量。结果:染料木素在1×10~(-5)～1×10~(-9)mol/L浓度范围内作用24h、48h均能促进成骨细胞增殖,在1×10~(-7)～1×10~(-5)mol/L范围内作用72 h可提高成骨细胞内碱性磷酸酶的活性。结论:染料木素体外能促进成骨细胞的增殖与分化。     

柿叶提取物对实验性糖尿病大鼠的药理作用研究

目的:观察柿叶提取物对糖尿病大鼠模型降糖、降脂、抗氧化作用,并初步探讨其作用机制。方法:采用链脲佐菌素(STZ)结合高脂高糖饲料喂养诱导建立糖尿病大鼠模型,给予柿叶提取物灌胃14天,测定血糖含量并分别测定血清TC、TG、HDLC、LDLC、SOD、MDA含量,并观察对肝脏组织形态的影响。结果:与模型组比较,柿叶提取物组可显著降低空腹血糖,并降低血清中甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LD-LC),显著提高高密度脂蛋白胆固醇(HDLC),并具有提高血清SOD活力,降低血清MDA含量的作用。结论:柿叶提取物对实验性糖尿病大鼠具有降低血糖,调节血脂和抗氧化作用。     

丹芍化纤胶囊对体内外活化肝星状细胞增殖的影响

目的:研究中药复方制剂丹芍化纤胶囊对体内外活化肝星状细胞(HSCs)增殖的影响.方法:(1)体内实验:雄性Wistar大鼠57只分为正常组、模型组、治疗组.除正常组外,其余各组采用CCl4、饮酒、高脂低蛋白饮食等复合病因刺激制备肝纤维化动物模型8周,然后治疗组给予丹芍化纤胶囊(1g/kg体重)灌胃治疗8周.实验结束时部分大鼠用于测定肝功能及肝脏纤维化程度;部分用于分离HSCs,流式细胞仪检测细胞周期百分比.(2)体外实验:制备丹芍化纤胶囊大鼠药物血清;分离培养大鼠HSCs,并分为小牛血清组、正常大鼠血清组、丹芍化纤药物血清组,分别加入5%、10%、20%以上3种血清干预培养的HSCs,MTT比色法测定原代HSCs增殖情况.结果:(1)体内实验:治疗组较模型组肝功能、肝脏纤维化程度及HSCs增殖明显减轻.(2)体外实验:丹芍化纤药物血清组较同浓度小牛血清组、正常大鼠血清组明显抑制HSCs增殖,且此作用呈剂量依赖性.结论:丹芍化纤胶囊能显著抑制体内外HSCs增殖.     

钩藤生物碱对自发性高血压大鼠胸主动脉成纤维细胞凋亡/增殖及FN、LN的影响

目的 研究钩藤碱、异钩藤碱和钩藤总生物碱对自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rat,SHR)胸主动脉血管外膜成纤维细胞(vascular adventitial fibroblasts, VAF)凋亡、增殖及Bcl-2、Bax、c-Fos、c-Myc、层黏连蛋白(laminin, LN)、纤维层黏连蛋白(fibronectin, FN)的影响。方法 选择8周龄雄性SHR 40只,随机分为模型组、卡托普利组(17.5 mg/kg)、异钩藤碱组(5.0 mg/kg)、钩藤碱组(5.0 mg/kg)和钩藤总生物碱组(50.0 mg/kg),每组8只。另选取8周龄雄性Wistar大鼠8只作为正常组。模型组和正常组灌胃给予等容量生理盐水。各组给药容积为每次10 mL/kg,每周给药6天,连续8周,随体重变化调整给药量。采用Annexin V-FITC结合PI染色、流式细胞术分析胸主动脉VAF凋亡率;免疫组化法检测胸主动脉VAF Bcl-2、Bax、c-Myc、c-Fos、FN及LN蛋白表达;原位杂交法检测胸主动脉VAF转化生长因子-β1(transforming growth factor, TGF-β1) mRNA表达。结果 与模型组比较,各用药组干预4、8周大鼠尾动脉收缩压均降低,胸主动脉VAF凋亡率、Bax蛋白均升高, Bcl-2、c-Fos、FN、LN蛋白及TGF-β1 mRNA均降低,钩藤碱组、异钩藤碱组及钩藤总生物碱组c-Myc蛋白表达均降低,差异均有统计学意义(P<0.05, P<0.01)。与卡托普利组比较,钩藤碱组、异钩藤碱组及钩藤总生物碱组大鼠尾动脉收缩压、c-Fos蛋白表达及TGF-β1 mRNA差异无统计学意义(P>0.05);胸主动脉VAF凋亡率升高, Bcl-2、c-Myc及LN蛋白表达均降低,差异均有统计学意义(P<0.05, P<0.01);钩藤碱组、异钩藤碱组Bax蛋白表达均升高,差异均有统计学意义(P<0.05, P<0.01);异钩藤碱组FN蛋白表达降低,差异有统计学意义(P<0.05)。钩藤碱组、异钩藤碱组及钩藤总生物碱组间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 钩藤碱、异钩藤碱和钩藤总生物碱可能通过调节原癌基因Bcl-2和Bax蛋白表达,促进SHR 胸主动脉VAF凋亡,通过下调c-Fos、c-Myc蛋白和TGF-β1 mRNA表达途径抑制SHR 胸主动脉VAF增殖,并通过下调FN和LN蛋白表达而减轻细胞外基质的沉积,从而改善胸主动脉外膜重塑,降低尾动脉收缩压。     

龟板组份及配伍对体外培养骨髓间充质干细胞增殖的影响

目的:观察龟板组份及配伍对体外培养骨髓间充质干细胞增殖的影响,筛选龟板组份中进MSC增殖的药效成分方法:从龟板提取物分离出10个组份,以不同浓度(2μl,5μl,10μl,20μl)组份及配伍加入体外培养的MSC中,培养3 d后,MTT法测定细胞活性。结果:与对照组比较,A、B、H、I 20μl浓度组和C、F(10μl～20μl)浓度组和J(5μl～0μl)浓度组细胞活性显著提高,与J组份配伍细胞活性提高(P<0．05);E(2μl-20μl)浓度组细胞活性显著降低,与E组份配伍组细胞活性显著降低;D和G组细胞活性没有影响。结论:7个组分均促进MSC增殖,以J组份最强,与J组份配伍作用提高;E组份抑制MSC增殖,与E组份配伍作用降低;D和G组份无效。     

汉黄芩素调控Ywhaz蛋白抑制结肠癌细胞增殖及侵袭转移

目的:探讨汉黄芩素对人结肠癌细胞HCT116和HT29细胞系的增殖、侵袭能力的影响,并研究汉黄芩素对酪氨酸3/色氨酸5-单加氧酶激活蛋白(Ywhaz)蛋白水平的影响。方法:体外培养HCT116和HT29细胞系,设空白组、汉黄芩素不同浓度组(浓度分别为5,10,20,40μmol·L-1)作用不同时间后,采用细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测汉黄芩素对结肠癌细胞增殖的影响,并用Annexin V-FITC/PI双标后流式细胞仪检测结肠癌细胞的凋亡率;穿透小室(Transwell)小室法检测处理24 h后细胞侵袭和迁移力的变化;实时荧光定量-聚合酶链式反应(q PCR)检测不同浓度汉黄芩素作用24 h后Ywhaz mRNA的水平,并运用蛋白质免疫印迹(Western blot)检测该蛋白及其磷酸化水平。结果:与空白组比较,汉黄芩素可明显抑制结肠癌细胞系的增殖,具有浓度和时间依赖性,并促进结肠癌细胞系的凋亡率,其中20和40μmol·L-1的汉黄芩素抑制细胞增殖作用显著(P0.01),且不同浓度的汉黄芩素(10,20,40μmol·L-1)作用于结肠癌细胞后,明显降低肿瘤细胞的穿膜数(P0.05,P0.01),汉黄芩素可下调Ywhaz mRNA水平和蛋白水平的表达,并降低Ywhaz的磷酸化水平(P0.05,P0.01)。结论:汉黄芩素可显著抑制HCT116和HT29细胞系的增殖、侵袭和迁移能力,并诱导细胞凋亡,其抗肿瘤机制可能与下调Ywhaz的蛋白水平及其蛋白的磷酸化水平有关。