CD4~+CD25~+调节性T细胞对肺结核患者特异细胞免疫的调节作用

目的探讨调节性T细胞对结核患者特异性细胞免疫的调节作用及其在结核病发生中的意义。方法采用免疫磁珠从健康对照和结核患者外周血单个核细胞中分离CD4+CD25+调节性T细胞,观察其对结核患者外周血免疫反应,包括细胞增殖反应和细胞因子IFN-γ及IL-10分泌的影响。结果体外消除CD4+CD25+调节性T细胞没有显著影响健康对照PBMC对BCG抗原的增殖反应,但可以显著增强结核患者PBMC对BCG抗原的细胞增殖反应、细胞因子IFN-γ及IL-10的分泌。分离的CD4+CD25+调节性T细胞能显著抑制结核患者CD4+CD25-T细胞对BCG抗原及抗-CD3的细胞增殖和细胞因子IFN-γ分泌;CD4+CD25+调节性T细胞也抑制BCG刺激的CD4+CD25-T细胞IL-10的分泌,但不影响抗-CD3刺激的IL-10分泌。结论CD4+CD25+调节性T细胞可能通过抑制结核患者特异性细胞免疫应答促进肺结核病的发生发展。     

增龄对人体外周血CD4+CD25+Foxp3+调节T细胞、CD4+T细胞及细胞因子表达的影响

目的探讨增龄对人体外周血CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺调节T细胞(CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺Treg)、CD4⁺T细胞及细胞因子表达的影响。方法选择青年人(20~45岁)、中老年人(50~75岁)及高龄老年人(≥80岁)各40例,分别检测3组外周血CD4⁺T、CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺Treg的绝对计数,并计算后者占前者的百分比,同时检测并比较3组人群外周血IL-2、干扰素-γ(IFN-γ)、TNF-α、IL-10和IL-17水平。结果高龄老年组CD4⁺T细胞绝对计数较中老年组与青年组显著下降(P<0.05);高龄老年组和中老年组外周血CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺Treg绝对计数均明显高于青年组(P<0.05);中老年组CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺Treg占CD4⁺T细胞百分比明显高于青年组,高龄老年组明显高于中老年组,差异均有统计学意义(P<0.05)。高龄老年组IL-2、IFN-γ和IL-17水平明显低于青年组和中老年组(P<0.05),中老年组IL-2明显低于青年组(P<0.05),高龄老年组IL-10水平明显高于青年组和中老年组(P<0.05),3组TNF-α水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论中老年以后人体外周血CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺Treg绝对计数明显增高,随着增龄,其占CD4⁺T细胞百分比逐渐升高。高龄老年人外周血CD4⁺T细胞绝对计数、IL-2、IFN-γ和IL-17水平明显下降,IL-10水平明显增高,说明老年人免疫功能进一步下降,衰老的微环境发生了改变。     

慢性乙型肝炎患者外周血CD8+CD28+T淋巴细胞百分比的变化及其临床意义探讨

目的 探讨不同病程阶段的慢性乙型肝炎患者外周血CD8⁺CD28⁺T淋巴细胞百分比的变化,以及CD8⁺CD28⁺T淋巴细胞百分比变化与血清HBsAg水平的关系。方法 2018年4月~2018年8月我院诊治的慢性乙型肝炎患者88例,其中免疫耐受期20例,免疫清除期28例,非活动期20例,再活动期20例,另选择健康人20例。使用流式细胞术检测外周血CD8⁺CD28⁺T淋巴细胞百分比。结果 健康人与免疫耐受期患者外周血CD8⁺CD28⁺T淋巴细胞百分比分别为（26.1±3.5）%和（26.3±3.4）%,差异无统计学意义（P>0.05）;免疫清除期患者CD8⁺CD28⁺T淋巴细胞百分比为（40.1±4.7）%,显著高于健康人（P<0.05）;非活动期和再活动期患者外周血CD8⁺CD28⁺T淋巴细胞百分比分别为（20.3±2.2）%和（26.1±2.2）%,显著低于健康人（P<0.05）;外周血HBsAg低、中、高三组人群外周血CD8⁺CD28⁺T淋巴细胞百分比分别为（24.0±7.5）%、（28.4±8.9）%和（33.2±8.5）%,各组间差异有统计学意义（P<0.05）。结论 不同病程阶段的慢性乙型肝炎患者外周血CD8⁺CD28⁺T淋巴细胞百分比存在明显差异,可能与病毒长期刺激机体免疫系统,导致免疫系统功能失调有关,而这种失调可能参与了慢性乙型肝炎的发病过程。     

结核性胸膜炎患者胸液中CD4~+ CD25~+ FoxP3~+调节T细胞抑制抗结核免疫

目的研究结核性胸膜炎患者胸液中CD4+CD25+FoxP3+调节T细胞是否增多,这些调节T细胞是否抑制结核的特异细胞免疫反应。方法使用细胞分离、流式细胞分析及体外细胞培养作细胞增殖及增殖抑制等实验方法,对15例结核性胸膜炎患者及17例健康正常人群胸液及外周血白细胞中CD4+CD25+FoxP3+调节T细胞的量及特征作研究。结果结核性胸膜炎患者胸液中CD4+CD25+FoxP3+调节T细胞明显高于患者及健康人群外周血。在体外,结核性胸膜炎患者胸液中单核细胞对BCG刺激产生γ-干扰素(IFN-γ)的能力明显强于患者及健康人群外周血中单核细胞;把这些调节T细胞从胸液单核细胞中清除,增强了结核患者胸液单核细胞对BCG刺激产生IFN-γ;从结核患者胸液分离的这些调节T细胞能抑制结核患者Th1细胞产生IFN-γ。结论结核性胸膜炎患者胸液CD4+CD25+FoxP3+调节T细胞增多,抑制结核性胸膜炎患者Th1细胞免疫反应,从而参与了结核性胸膜炎的发病。     

活动性肺结核患者血清CXCL10及CXCR3表达与CD27+CD4+T细胞比例的相关性分析

目的 分析活动性肺结核患者血清CXC趋化因子配体10(CXCL10)及其受体CXC趋化因子受体3(CXCR3)与外周血单个核细胞(PBMC)中CD27⁺CD4⁺T细胞比例的相关性。方法 选择2019年4月至2021年4月河南省胸科医院收治的活动性肺结核患者100例(肺结核组),另选择同期健康体检者96名作为对照组。应用酶联免疫吸附法(ELISA)检测受试者血清CXCL10、CXCR3、干扰素-γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达水平。应用流式细胞仪检测PBMC中CD27⁺CD4⁺T细胞水平。采用Pearson相关性分析探讨血清CXCL10、CXCR3水平与PBMC中CD27⁺CD4⁺T细胞水平以及血清IFN-γ、TNF-α水平的相关性。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清CXCL10、CXCR3对活动性肺结核的诊断效能。结果 肺结核组患者血清CXCL10、CXCR3、IFN-γ、TNF-α水平均高于对照组,差异有统计学意义(P <...     

SLE患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞细胞因子分泌的改变

目的研究活动性系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血CD4 CD25 调节性T细胞白细胞介素(IL)-10、转化生长因子(TGF)-β、干扰素(IFN)-γ和IL-4分泌水平的改变。方法免疫磁珠分离活动性SLE患者和正常对照组CD4 CD25 调节性T细胞,流式细胞术(FCM)检测表达IL-10、IL-4或IFN-γ的阳性细胞百分率,体外培养两组CD4 CD25 调节性T细胞,酶联免疫吸附法(ELISA)检测培养细胞上清液中IL-10、TGF-β和IFN-γ的水平。结果在CD4 CD25-和CD4 CD25 T细胞中未发现分泌IL-4的细胞亚群;SLE患者CD4 CD25 T细胞中分泌IL-10的细胞亚群比例较正常人减少(P<0.05);CD4 CD25-和CD4 CD25 T细胞中均存在分泌IFN-γ的细胞亚群,且SLE患者自分泌IFN-γ的细胞亚群比例增高(P<0.05)。SLE患者CD4 CD25 T细胞分泌IL-10和TGF-β较正常人均减少(P<0.05),自分泌IFN-γ增多(P<0.05)。结论活动性SLE患者CD4 CD25 T细胞存在细胞因子分泌功能异常,表现为TGF-β和IL-10分泌降低,IFN-γ产生增多。     

非酒精性脂肪性肝病患者外周血恒定自然杀伤T细胞和CD4+/CD8+T细胞活化差异研究*

目的 分析不同非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)患者外周血恒定自然杀伤T细胞(iNKT)、CD4⁺和CD8⁺ T细胞活化标记物(CD69、CD25、HLA-DR和NKG2D)的表达差异。方法 2020年1月～2022年7月我院诊治的NAFLD患者64例和同期健康体检者50例,对NAFLD患者行肝穿刺活检,使用流式细胞仪检测外周血iNKT、CD4⁺和CD8⁺T细胞CD69、CD25、HLA-DR和NKG2D表达。结果 在64例NAFLD患者中,经组织病理学检查,诊断NAFL 37例和NASH 27例;健康对照者、NAFL和NASH患者健康对照者、NAFL和NASH患者外周血CD69⁺iNKT细胞百分比分别为(10.1±1.7)%、(6.1±1.3)%和(26.7±3.6)%(P<0.05),CD25⁺iNKT细胞百分比分别为(83.0±5.9)%、(94.1±8.0)%和(90.8±7.5)%(P<0.05),HLA-DR⁺iNKT细胞百分比分别为(15.3±1.7)%、(15.8±2.0)%和(22.3±2.0)%(P>0.05),NKG2D⁺iNKT细胞百分比分别为(44.5±3.5)%、(59.7±4.0)%和(71.3±6.0)%(P<0.05);外周血CD69⁺CD4⁺ T细胞百分比分别为(0.7±0.2)%、(0.4±0.1)%和(0.5±0.1)%(P>0.05),CD25⁺CD4⁺ T细胞百分比分别为(1.4±0.6)%、(3.0±1.3)%和(1.5±0.7)%(P>0.05),HLA-DR⁺CD4⁺ T细胞百分比分别为(2.7±0.7)%、(4.1±1.0)%和(3.9±1.0)%(P<0.05),NKG2D⁺CD4⁺ T细胞百分比分别为(1.6±0.5)%、(0.6±0.2)%和(0.9±0.2)%(P<0.05);外周血CD69⁺CD8⁺ T细胞百分比分别为(2.0±0.4)%、(1.6±0.3)%和(2.1±0.6)%(P>0.05),CD25⁺CD8⁺ T细胞百分比分别为(1.3±0.3)%、(1.1±0.2)%和(1.0±0.2)%(P>0.05),HLA-DR⁺CD8⁺ T细胞百分比分别为(5.0±0.7)%、(6.5±1.0)%和(9.6±1.4)%(P<0.05),NKG2D⁺CD8⁺ T细胞百分比分别为(0.6±0.1)%、(0.5±0.1)%和(0.9±0.2)%(P<0.05)。结论 本研究发现NAFL与NASH患者可能存在外周血iNKT细胞、CD4⁺和CD8⁺ T细胞活化的免疫表型差异,显示NASH患者CD69⁺iNK T细胞百分比增高,可能对诊断有帮助,值得进一步研究。     

慢性丙型肝炎患者CD4+CD25+调节性T细胞表达增加

目的:探讨CD4+CD25+调节性T(Treg)细胞在慢性丙型肝炎患者免疫下调中的意义.方法:流式细胞仪检测慢性丙型肝炎患者外周血中CD4+CD25+Treg细胞的数量;与CD4+CD25-T细胞共同培养,检测其抑制功能;流式细胞仪检测其对CD4+CD25-T细胞合成IFN-γ和IL-4的影响;RT-PCR检测CD4+CD25+Treg细胞中Foxp3的mRNA表达.结果:CD4+CD25+Treg细胞约占慢性丙型肝炎患者外周血中CD4+T细胞的14.1±1.6%,显著高于正常对照5.3±0.8%(P＜0.01),显著抑制CD4+T细胞的增殖(P=0.002),以及合成IFN-γ.CD4+CD25+Treg 细胞高表达Foxp3.结论:持续性HCV感染患者CD4+CD25+Treg细胞表达增加,特异性抑制Th1细胞反应.     

HBV感染者外周血自然杀伤样B淋巴细胞、自然杀伤细胞、 B淋巴细胞亚群的变化及临床意义

目的 观察HBV感染者自然杀伤样B淋巴细胞（NKB淋巴细胞）、NK细胞和B淋巴细胞亚群的变化,分析其与临床指标的相关性。方法 选取2017年1月—2018年12月在唐都医院就诊的急性乙型肝炎（AHB）患者15例、慢性乙型肝炎（CHB）患者30例、无症状HBV携带者（ASC）29例和对照者12例。采集外周血,分离血浆和外周血单个核细胞。酶联免疫吸附试验检测血浆IL-18和IFNγ水平。酶联斑点吸附试验检测HBV特异性CD8⁺T淋巴细胞分泌IFNγ水平。流式细胞术检测CD3^-CD19⁺CD56⁺CD16⁺NKB淋巴细胞、不同NK细胞亚群(CD3^-CD19^-CD56^highCD16^-NK细胞、CD3^-CD19^-CD56⁺CD16⁺NK细胞、CD3^-CD19^-CD56<...     

日本血吸虫虫卵抗原诱导CD4+CD25+T细胞及其细胞因子表达

目的 探讨日本血吸虫虫卵抗原诱导宿主免疫应答下调的机制.方法 6～8周龄雌性队LB/c小鼠分为2组,实验组小鼠口服血吸虫虫卵10 000个以及尾静脉注射可溶性虫卵抗原(SEA)200μg,每周免疫1次,共4次;对照组注射PBS.流式细胞仪检测SEA免疫小鼠CD4+CD25+T细胞数量;与CD4+CD25-T细胞共同培养,检测CD4+CD25+T细胞抑制功能;流式细胞仪检测CD4+CD25+T细胞表达IL-4、IL-10与IFN-γ水平;酶联免疫吸附试验检测静脉血IL-10和转化生长因子-β表达水平.结果 实验组小鼠CD4+CD25+T细胞数量为14.7%,对照组为7.4%;实验组IL-10为29.2 pg/ml,对照组为11.0 pg/ml.与CD4+CD25-T细胞相比,CD4+CD25+T细胞主要合成IL-10及少量IFN-γ.CD4+CD25+T细胞显著抑制CD4+T细胞增殖. 结论 日本血吸虫虫卵抗原可能通过诱导CD4+CD25+T细胞和IL-10下调机体免疫应答.     

原发性肝癌患者外周血CD4+T、CD8+T、Tc17、Th17和Treg淋巴细胞的变化及其意义

目的 了解原发性肝癌(PLC)患者外周血CD4+T、CD8+T、Tc17、Th17和Treg淋巴细胞的变化.方法 2018年6月～2019年12月我院诊治的PLC患者83例(巴塞罗那临床肝癌分期A期25例,B期23例,C期18例,D期17例)和健康人35例,采用流式细胞技术检测外周血CD4+T、CD8+T及Tc17(C...     

结核分枝杆菌纯蛋白衍生物（PPD）对CD4＋CD154＋T细胞的影响

目的通过研究结核分枝杆菌纯蛋白衍生物（PPD）对CD154＋ CD4＋T细胞亚群的影响,探讨结核分枝杆菌分泌蛋白的致病性。方法PPD或／和BCG刺激PBMCs后,用流式细胞术检测活动性肺结核的CD154＋ CD4＋T细胞和CD154＋ IFNγ＋T细胞的比例变化。结果①PPD刺激显著下调CD154＋ CD4＋T细胞比例,能够抑制BCG刺激产生的CD154＋ CD4＋T细胞的增殖;②PPD刺激CD154＋ CD4＋T细胞的效果显著低于BCG。结论PPD内存在能显著抑制机体保护性免疫的分泌蛋白,可能是结核杆菌进入人体后抑制机体免疫力的重要因素之一。     

HIV阴性肺结核患者外周血CD4+T淋巴细胞减少的免疫干预意义及影响因素分析

目的: 探讨HIV阴性肺结核患者外周血CD4⁺T淋巴细胞减少的发生率、免疫干预意义和影响因素。 方法: 回顾性分析2020年12月至2021年7月安徽省胸科医院收治的213例肺结核患者,根据外周血CD4⁺T淋巴细胞计数分为CD4⁺T淋巴细胞减少组(计数<410个/μl)和对照组(计数≥410个/μl);将CD4⁺T淋巴细胞减少患者根据是否行免疫干预治疗分为免疫干预组和非免疫干预组。收集研究对象的人口学特征(性别、年龄、职业、文化水平)、吸烟、饮酒、症状数目、治疗分类、合并疾病、耐药情况、影像学及实验室检查结果等临床资料。疗效分析组间比较采用χ²检验。经单因素分析筛选后,采用多因素logistic回归分析探讨HIV阴性肺结核患者外周血CD4⁺T淋巴细胞减少的影响因素。 结果: 213例肺结核患者中,61例发生CD4⁺T淋巴细胞减少,发生率为28.6%。疗效分析显示治疗2~4个月,免疫干预组痰涂片阴性率为93.9%,高于非免疫干预组的75.0%(χ²=4.320,P<0.05)。治疗5~7个月,免疫干预组病灶吸收率为51.5%,高于非免疫干预组的25.0%(χ²=4.462,P<0.05)。单因素分析显示,CD4⁺T淋巴细胞减少组男性、年龄≥60岁、农民职业、文盲文化、症状数目≥4个、并发肺外结核、累及肺野4~6个、肺部空洞、血红蛋白<110g/L、血小板<125×10⁹/L、白蛋白<35g/L、CD8⁺T淋巴细胞计数<190个/μl的构成比(77.0%、44.3%、36.1%、26.2%、36.1%、34.4%、77.0%、55.7%、45.9%、18.0%、68.9%、29.5%)均明显高于对照组(60.5%、11.2%、19.7%、10.5%、19.7%、21.1%、38.2%、40.8%、25.7%、5.3%、44.7%、7.9%),差异均有统计学意义(χ²值分别为5.242、29.060、10.095、13.650、6.290、4.165、26.342、3.929、8.274、8.738、10.137、16.805,P值均<0.05)。多因素logistic回归分析显示,肺结核患者CD4⁺T淋巴细胞减少的危险因素有:年龄≥60岁(OR=4.816,95%CI:1.650~14.052)、病变累及肺野4~6个(OR=3.669,95%CI:1.548~8.696)、血小板<125×10⁹/L(OR=3.753,95%CI:1.069~13.173)、CD8⁺T淋巴细胞计数<190个/μl(OR=3.908,95%CI:1.394~10.954)。 结论: HIV阴性肺结核患者较易发生CD4⁺T淋巴细胞减少,免疫干预治疗对提高患者疗效具有积极意义。高龄、肺部病变累及范围大、血小板减少和CD8⁺T淋巴细胞减少是肺结核患者CD4⁺T淋巴细胞减少的独立危险因素。     

不同病因肝衰竭患者外周血单个核细胞HLA-DR基因水平及血Th17和CD4+CD25+Treg细胞百分比的变化

目的探讨不同病因所致肝衰竭患者外周血单个核细胞（PBMCs）HLA-DR mRNA及Th17和CD4⁺CD25⁺Treg细胞水平的变化及其意义。方法本研究纳入肝衰竭患者50例,其中乙型肝炎肝衰竭15例,药物性肝损伤12例,酒精性肝病13例,自身免疫性肝炎10例;慢性乙型肝炎患者17例和正常人10例。采用PCR法检测PBMCs中HLA-DR mRNA水平,使用流式细胞仪检测CD4⁺CD25⁺Treg和Th17细胞百分比。结果乙型肝炎肝衰竭患者HLA-DR mRNA水平为（134.5±15.2）,显著高于药物性肝损伤组的（17.9±1.2）、酒精性肝病组的（19.6±2.0）和自身免疫性肝炎组的[（11.2±1.2）,P<0.05];不同病因肝衰竭患者Th17和CD4⁺CD25⁺Treg细胞百分比[分别为（4.4±0.6）%和（3.9±0.6）%左右]的差异无统计学意义（P>0.05）,但与慢性乙型肝炎[分别为（3.7±0.2）%和（6.1±0.4）%和正常人（2.1±0.7）%和（7.0±0.9）%比,均有显著性差异（P<0.05）;对不同病因肝衰竭患者进行动态观察发现,19例死亡患者CD4⁺CD25⁺Treg细胞百分比呈持续下降,直至死亡,而31例生存患者则逐渐恢复至接近正常水平。结论外周血单个核细胞HLA-DR mRNA水平及Th17和CD4⁺CD25⁺Treg细胞百分比的变化与肝衰竭患者的病情密切相关,可作为判断肝衰竭严重程度及预后的指标。     

CD4~+CD25~+调节性T细胞在约氏疟原虫感染小鼠应答早期中的作用

目的探讨CD4+CD25+调节性T细胞在约氏疟原虫感染早期的作用及意义。方法用约氏疟原虫(致死型)感染DBA/2和BALB/c小鼠,计数红细胞感染率;在感染后第0d、3d、4d、5d和6d提取脾细胞应为,流式细胞术检测两种小鼠感染不同时间脾细胞悬液中CD4+T细胞和CD4+CD25+T细胞百分含量;ELISA法检测脾细胞培养上清IFNγ、IL10和TGFβ1水平。结果DBA/2小鼠的IFNγ水平在感染后第3d迅速升高后缓慢下降(P<0.01),CD4+CD25+T细胞数仅在感染后第5d出现有意义的升高(P<0.05),而IL10水平和CD4+T细胞数量都无明显改变。BALB/c小鼠的IFNγ水平在感染后第3d出现有意义的升高后迅速下降(P<0.01),CD4+CD25+T细胞数在感染后第3d开始明显升高,于感染后第5d出现下降(P<0.05),而IL10水平自感染后第3～6d持续维持高水平(P<0.05),CD4+T细胞数量于感染后第6天明显下降(P<0.05)。结论CD4+CD25+调节性T细胞在致死型约氏疟原虫感染BALB/c小鼠早期可能通过抑制性细胞因子IL10发挥免疫抑制作用。     

Cytokine activity after allogeneic bone marrow transplantation, V. Analysis of IL-2 and IFN production by isolated CD4+ and CD8+ cells

Summary. Previous studies from this laboratory have shown that PBMC from recipients of an HLA-identical sibling bone marrow transplant produce levels of IL-2 which are 10–100-fold lower than those produced by the same number of PBMC from healthy controls, whereas production of IFN-γ is normal. The present study examined IL-2 and IFN production over a range of cell numbers for PBMC and for isolated CD4⁺ and CD8⁺ cells for controls and marrow transplant recipients. There was a 5-fold lower IL-2 production in marrow transplant recipient CD8⁺ cells compared with equivalent numbers of control cells, whereas no difference was found in IL-2 production by CD4⁺ cells. In contrast, IFN production by CD4⁺ cells from marrow transplant recipients was 4-fold higher than in controls, whereas CD8⁺ cells from both populations produced similar amounts of IFN. When the observed production of cytokine by PBMC was compared with the expected production based on the CD4⁺ and CD8⁺ content of the PBMC, control values were similar, but the expected values for both cytokines were approximately 2-fold higher than the observed values for marrow transplant recipients. The results suggest that the capacity of T cells from marrow transplant recipients to produce IL-2 and IFN is not impaired, but that the frequency of cytokine-producing cells may be reduced, and that a negative interaction present in recipient PBMC, eliminated by isolating T-cell subsets, is responsible for the observed low levels of cytokine production.