丹参中丹酚酸B纯化工艺研究

摘要：目的对丹参药材中丹酚酸B的提取工艺进行研究,比较两种大孔树脂的吸附能力和洗脱能力。方法以丹酚酸B为考察指标,用反相高效液相色谱法考察了丹参药材在6倍量水时的最佳提取时间以及丹参提取液在两种大孔树脂吸附工艺中的最大吸附量和最佳洗脱条件。结果丹参水煮提取时间以40min时,丹酚酸B含量最大。AB-8型大孔树脂最大吸附量是16．8mg·g^-1,最佳洗脱浓度是50％的乙醇,最佳洗脱体积是4BV;1400型树脂的最大吸附量是17．2mg·g^-1,最佳洗脱浓度是60％的乙醇,最佳洗脱体积是5BV。结论利用大孔树脂精制丹参水溶性成分,在有效地保留丹酚酸B等有效成分的同时,可有效减少丹参提取物中非酚酸类及杂质的含量,有利于提高制剂载药量。为丹参水溶性成分新制剂的工业化生产应用确定基础。     

大孔吸附树脂对半枝莲中黄酮类成分的分离研究

目的以半枝莲中黄酮类成分为分离对象,进行大孔树脂分离工艺优化和分离研究。方法采用溶剂提取法对半枝莲中有效成分进行提取,以其总黄酮的含量为指标,比较4种不同种类大孔树脂(D1400,HPD-100,D101,NKA-2)的吸附性能。并选择吸附性能最优的大孔树脂分离半枝莲中的黄酮类组分,结合HPLC进行分析检测。结果采用70%乙醇水溶液提取(药材溶剂比为1∶8),得到理想的出膏率11.67%(g/g)。UV法测定结果表明,半枝莲提取物中黄酮类成分含量较高18.34%(mg/g)。D101树脂对总黄酮的吸附率最高52.9%(mg/mg)。结论半枝莲中黄酮类成分含量较高,采用D101型大孔树脂分离能够达到理想的吸附效果,总黄酮成分主要集中在大孔树脂分离的20%乙醇水溶液洗脱组分中。     

应用大孔吸附树脂技术分离皱瘤海鞘的水溶性成份

目的:利用大孔吸附树脂对皱瘤海鞘的水溶性成份进行初步分离.方法:将皱瘤海鞘的水溶性部分上大孔吸附树脂柱层析,用不同浓度的乙醇溶液洗脱,将样品进行初步分离.结果:将皱瘤海鞘水溶性成份分为不同性质的几个部分.结论:利用大孔吸附树脂可成功分离皱瘤海鞘的水溶性成份.     

大孔吸附树脂分离纯化何首乌有效成分二苯乙烯苷的研究

目的研究不同型号大孔吸附树脂纯化何首乌中二苯乙烯苷的工艺条件及参数。方法以静态饱和吸附量、洗脱量、静态洗脱率为考察指标,比较了7种大孔树脂,并对HPD500树脂的动态比上柱量、比吸附量、比洗脱量进行了考察,以二苯乙烯苷转移率和纯度为指标对树脂吸附工艺条件进行了筛选。结果所比较的7种树脂中,HPD500型树脂具有最佳的吸附及洗脱参数,其动态饱和吸附量达到151.7mg·g-1干树脂,其最佳工艺为以6倍柱体积去离子水、4倍柱体积10%乙醇、6倍柱体积60%乙醇依次洗脱,二苯乙烯苷转移率为95%,其纯度为75.3%。结论HPD500树脂吸附性能较好,适合于何首乌中二苯乙烯苷的纯化。     

大孔树脂吸附技术在中药制剂中的应用

大孔树脂是20世纪70年代末发展起来的一类有较好吸附性能的有机高聚物吸附剂。近年来，大孔树脂吸附技术已广泛用于中草药有效成分的提取、分离、纯化工艺，且越来越多的用于中成药制备工艺。本介绍大孔吸附树脂的性能、分离原理、吸附和解吸作用的影响因素及树脂的预处理和再生。并总结近年来大孔吸附树脂在中药制剂工艺改革中和中药制剂质量控制预处理中的应用。在中药制剂工艺中，使用该技术可以简化工艺，降低成本，使产品的收率和质量明显提高；在中药制剂质量控制预处理中，该技术可有效地除去某些干扰成分，对中药质量控制有良好效果。为大孔吸附树脂在药用植物有效成分分离和复方制剂的纯化中的应用提供参考。     

大孔树脂分离纯化大麻果胶中的总黄酮

目的 研究不同型号大孔吸附树脂纯化大麻科植物汉麻果胶中总黄酮的工艺条件及参数.方法 以总黄酮静态饱和吸附量、静态洗脱率为考察指标,对8种大孔吸附树脂的吸附工艺条件进行筛选.结果 D-101树脂具有最佳的吸附及洗脱参数,其最佳工艺为:上样浓度0.6 g生药/ml,以10倍去离子水、10倍70%乙醇依次进行洗脱,流速为2 ...     

大孔吸附树脂分离纯化鲜地黄叶中梓醇的初步研究

目的：选择合适的大孔吸附树脂对鲜地黄叶中梓醇进行富集纯化。方法：以高效液相为检测手段,梓醇含量为检测指标。采用吸附和解吸试验考察了12种大孔吸附树脂对梓醇的吸附解吸性能,筛选出H103树脂进行了分离纯化研究。结果：H103树脂对梓醇具有很好的吸附解吸性能,其纯化条件为上样液浓度1mg/ml,上样体积2BV,上样吸附速度1～2BV/h,洗脱速度1～3BV/h,10%乙醇洗脱8BV。结论：采用H103树脂分离纯化鲜地黄叶中梓醇,可简化步骤,降低成本,方法简单可行。     

不同型号大孔树脂对分蘖葱头总黄酮吸附的研究

目的 研究不同型号大孔吸附树脂分离纯化分蘖葱头总黄酮的工艺条件和参数,优选分离纯化分蘖葱头总黄酮的大孔吸附树脂。方法 比较了9种大孔树脂对分蘖葱头总黄酮的吸附性能,以分蘖葱头中的代表成分槲皮素为考察指标,对大孔树脂纯化分蘖葱头的工艺进行筛选。结果 AB-8树脂对分蘖葱头总黄酮的吸附性能最好,达到静态交换容量为36．05mg·g^-1干树脂,吸附率为97．29％,动态吸附量为5．07mg·g^-1干树脂,吸附率为83．3％,解吸率为76．9％。结论 AB-8树脂吸附分蘖葱头总黄酮的纯化方法可取,具有良好的应用前景。     

HPLC法测定抗栓保心片中丹酚酸B的含量

目的建立高效液相色谱法测定抗栓保心片中丹酚酸B含量的方法。方法色谱柱为Agilent ZORBAX Eclipse SB-C18（4.6mm×150mm,5μm）;流动相：5%甲醇（含0.5%磷酸）-甲醇（65∶35）;流速：1mL/min;检测波长：286nm;柱温：30℃。结果丹酚酸B保留时间约为14min,与相邻峰的分离度〉1.5。以峰面积对进样浓度（μg.mL-1）线性回归,丹酚酸B回归方程为Y=0.082 50X＋0.376 6,r=0.999 9,线性范围20.90～348.3μg.mL-1。加样回收率为98.3%,RSD为2.0。结论本方法操作简便,测定结果准确可靠,可用于抗栓保心片中丹酚酸B的含量测定。     

丹酚酸B对骨髓间充质干细胞SCF表达的影响

目的研究中药单体丹酚酸B对骨髓间充质干细胞(MSCs)中干细胞因子(stemcell factor,SCF)的影响。方法用贴壁培养法分离、培养和纯化MSCs,取第三代MSCs进行实验。用含不同浓度丹酚酸B的低糖DMEM培养液培养MSCs,ELISA法检测培养24、48、72h的上清中SCF的含量;RT-PCR法检测培养24、48、72h的SCF mRNA的表达。结果膜型和可溶型SCF mRNA均有表达。随着培养时间的增加,0.3μg/ml、3μg/ml、30μg/ml丹酚酸B可明显促进SCF的分泌和SCF mRNA的表达(与空白对照组比较,P<0.05),而0.03μg/ml丹酚酸B组和空白对照组比较无明显差异(P>0.05)。结论丹酚酸B可促进MSCs分泌SCF并促进SCF mRNA的表达,提示SCF可能在中药丹参治疗心肌梗死中发挥了重要作用。     

HPLC 法测定乐脉胶囊中芍药苷和丹酚酸 B 的含量

目的建立HPLC法测定乐脉胶囊中芍药苷和丹酚酸B的含量。方法芍药苷和丹酚酸B均采用C18（4．6mm×250mm,5μm）色谱柱;流动相分别为乙腈-0．05％磷酸（13：87）和乙腈-甲醇-1．7％甲酸溶液（4：27：69）;检测波长分别为230和286nm,柱温为30℃,流速为1．0ml·min^-1。结果芍药苷在0．20403—4．0806μg范围内得芍药苷回归方程Y=1×10^6X＋2631（r=0．9999）;丹酚酸B在0．12573～2．5147μg范围内得回归方程Y=937308X＋560947（r=0．9996）,两组分分别与峰面积呈良好的线性关系。芍药苷的平均回收率为98．9％,RSD为1．8％;丹酚酸B平均回收率为100．4％,RSD为2．8％。结论该方法结果准确,重复性好,可作为乐脉胶囊质量控制的定量方法。     

大孔树脂分离治伤灵口服液中芍药苷的研究

目的 研究D101大孔树脂对治伤灵口服液中芍药苷的吸附性能及分离纯化的工艺参数。方法采用HPLC法测定芍药苷含量,通过考察pH值对吸附的影响、吸附容量、洗脱剂选择及其用量等因素对芍药苷分离纯化的影响,确定工艺参数。结果D101大孔树脂对芍药苷的适宜交换吸附条件为pH=4,最大上柱量以芍药苷计为3．661mg·g^-1树脂,水洗除去杂质,洗脱剂为40％乙醇溶液,用量为8个柱体积（BV）。结论D101大孔树脂能提高芍药苷纯度,为芍药苷含量测定提供保证。     

大鼠服用丹酚酸B合用匹伐他汀后药动学和肝细胞摄取能力的改变

目的 研究大鼠服用丹酚酸B合用匹伐他汀后药动学及肝细胞摄取能力的改变.方法 将SD雄性大鼠随机分为两组,每组6只,实验一组单用丹酚酸B（2.5 g/kg）给药;另一组丹酚酸B合用匹伐他汀（0.5 mg/kg）.两药合用时先丹酚酸B后匹伐他汀相继灌胃,间隔15 min,眼球静脉取血,探讨有机阴离子转运多肽（organic anion transporting polypeptides,OATP）底物匹伐他汀对丹酚酸B的药动学影响.然后,游离大鼠原代肝细胞,考察匹伐他汀对大鼠原代肝细胞摄取丹酚酸B的影响.结果 丹酚酸合用匹伐他汀后,丹酚酸B的药动学特性发生明显变化,AUC（0t）、AUC（0-∞）和Cmax分别增加了54.63％、69.72％、50.56％.随着匹伐他汀浓度增加,其对大鼠原代肝细胞摄取丹酚酸B的抑制作用逐渐增强,IC50为（5.21±1.68）μmol/L.结论 丹酚酸B肝脏转运机制可能与OATP密切相关.     

夏天无总碱的精制工艺研究

目的研究以阳离子交换树脂精制夏天无中总生物碱的方法及其工艺条件。方法采用紫外分光光度法测定夏天无总碱含量,高效液相色谱法测定原阿片碱,延胡索乙素含量。采用732型阳离子交换树脂精制夏天无中总生物碱,考察工艺和参数条件。结果阳离子树脂对夏天无总碱的最大吸附量为31.33 mg/g。上样浓度：1 g/ml。上样流速：1 ml/min,洗脱方法：先用蒸馏水除杂,经氨水碱化后,再用3 BV 80%乙醇洗脱,洗脱率为89.5%,得到的总生物碱含量为62.4%。再经酸碱沉淀纯化后的夏天无总生物碱的含量大于70%。结论阳离子交换树脂对夏天无总生物碱的吸附能力较好,可用于夏天无总生物碱的提取精制。     

21种动物药饮片中总氨基酸的甲醛法测定

目的 完善动物类中药炮制品的质量控制方法.方法 用甲醛法测定动物类中药炮制品及其生品中总氨基酸的含量.结果 炮制品相对于其生品中总氨基酸含量的变化,主要取决于炮制时间的长短.炮制时间控制在7 min以内的样品,其含量高于生品,反之则低于生品.结论 甲醛法为完善动物类炮制品的质量提供了简便易行的方法.     

丹酚酸B对溶血磷脂酰胆碱刺激内皮细胞产生MMP-2的抑制作用

目的　研究抗氧化剂丹酚酸B对溶血磷脂酰胆碱 (LPC)诱导牛主动脉内皮细胞 (BAEC)产生MMP 2的影响。方法　采用体外培养牛主动脉内皮细胞的方法 ,用LPC单独或与丹酚酸B共同作用于BAEC ,明胶酶谱法测定细胞培养上清中基质金属蛋白酶 2 (MMP 2 )活性。结果　LPC显著促进BAEC产生MMP 2 ,当浓度为 0 .0 2 5 μg·L-1时有明显的刺激作用 (P <0 .0 5 ) ,0 .2 5 μg·L-1时作用增强 (P <0 .0 1)。丹酚酸B能抑制LPC刺激MMP 2产生的作用 ,抑制作用具有剂量依赖性 ,在浓度为 0 .0 1μmol·L-1抑制作用达到显著水平 (P <0 .0 5 ) ,在 0 .1μmol·L-1时抑制作用达到极显著性水平 (P <0 .0 1)。结论　LPC能刺激内皮细胞产生MMP 2 ,抗氧化剂丹酚酸B能抑制LPC的刺激作用。     

改良裂解法提取微量组织DNA的研究

为了探讨微量组织核酸的更快速、简便、有效的提取方法,采用改良裂解法提取２５ 例微量胃粘膜组织标本的核酸,同时与经典的饱和酚抽提法和简便的消化煮沸法进行比较（ 各２５ 例） ,用１ ％ 琼脂糖电泳观察结果,并用分光光度法检测提取核酸的量。结果显示该法的提取纯度接近酚抽提法,所获核酸的量较多,而所需的时间最短;由于该法的裂解液中含有 Ｒ Ｎ Ａ 酶抑制剂,所以除了可以提取 Ｄ Ｎ Ａ,还可以获得一定量的 Ｒ Ｎ Ａ,用于反转录 Ｐ Ｃ Ｒ,对微量组织的 Ｒ Ｎ Ａ 提取提供了一种有效而实用的方法。     

大鼠脑损伤后脑组织递质性氨基酸的变化及意义

目的：了解脑损伤后脑组织递质性氨基酸的变化规律，及其对颅脑损伤的影响。方法：采用氨基酸微量检测技术测定了大鼠颅脑损伤后脑组织匀浆中兴奋性氨基酸（ＥＡＡ）－谷氨酸（Ｇｌｕ），门冬氨酸（Ａｓｐ），抑制性氨基酸－γ氨基丁酸（ＧＡＢＡ），甘氨酸（Ｇｌｙ），牛黄酸（Ｔａｕ）的含量变化。结果：伤后１０分钟时Ｇｌｕ，Ａｓｐ即明显下降，１～４小时略回升，８小时又进一步下降，２４小时Ｇｌｕ基本恢复至对照水平，Ａｓｐ则无明显恢复。ＧＡＢＡ，Ｇｌｙ伤后１０分钟明显升高。ＧＡＢＡ伤后１～２小时基本恢复至对照水平，８小时又进一步增高，２４小时低于对照组；Ｇｌｙ在１～２４小时均高于对照组，８小时达峰值。Ｔａｕ无明显变化，除Ｔａｕ外，上述各氨基酸含量变化与伤情有关。结论：递质性氨基酸在脑损伤后的继发性损伤中起重要作用。