细胞凋亡与相关基因p16、bcl-2在人类皮肤肿瘤中表达

本实验运用三羟末端标记法和免疫组化技术 ,原位观察皮肤鳞癌及正常组织中细胞凋亡、ｐ16与ｂｃｌ 2蛋白的表达 ,探讨其在皮肤组织恶性转化进程中的作用和关系。1　材料与方法1.1　材料收集　我校附院病理科 1994～ 1999年活检的部分标本 ,皮肤鳞癌 80例 ,10例正常皮肤取自肿瘤边缘 5ｃｍ以上切缘 ,分别做ＨＥ、细胞凋亡及ｐ16与ｂｃｌ 2蛋白免疫组化染色。患者平均年龄 5 4 8岁。按ＷＨＯ分级标准分级 :Ⅰ级 38例 ,Ⅱ级 18例 ,Ⅲ级 2 4例。诊断均经两位病理主任医师证实。所有患者术前均未作放疗、化疗及免疫治疗。1.2　试剂与方法　与细胞…     

大肠腺瘤及癌中细胞凋亡和bcl—2,bax基因的表达

探讨细胞凋亡及其调控基因ｂｃｌ－２和ｂａｘ与大肠癌发生发展之间的关系。方法：采用Ｆｅｕｌｇｅｎ染色，ＴｄＴ酶介导的生物素化ｄＵＴＰ缺口末端标记技术和免疫组织Ｓ－Ｐ法，分别检测大肠正常粘膜、腺瘤、癌及癌旁非腺瘤性不典型增生中细胞凋亡率和ｂｃｌ－２、ｂａｘ基因的表达。     

Bcl-2过表达抑制乙醇诱导的HCC-9204肝癌细胞凋亡

目的探讨凋亡相关基因bcl-2过表达对乙醇诱导的肝细胞癌(HCC)细胞凋亡的影响.方法将含有人bcl-2cDNA的逆转录病毒表达载体pDOR-SB质粒转染到不表达bcl-2蛋白的人肝癌细胞系HCC-9204细胞中,用免疫组织化学ABC法检测bcl-2蛋白的表达情况.连续克隆化直至获得100%表达bcl-2蛋白的单克隆细胞株,并进行流式细胞术检测.用6%乙醇分别作用于上述细胞6h后,用MTT法和TUNEL法和流式细胞仪检测细胞凋亡发生程度.结果转染pDOR-SB的细胞大部分为bcl-2蛋白表达阳性,而转染pDOR空载体或未转染的HCC-9204细胞均为bcl-2蛋白阴性.连续3次克隆化后,流式细胞检测表明所获得的单克隆细胞株100%稳定表达bcl-2蛋白,命名为HCC-bcl-2.6%乙醇作用后,HCC-bcl-2细胞和未转染的HCC-9204细胞经MTT法检测的吸光度值分别为0.519±0.053和0.366±0.046,前者明显高于后者(P<0.01);TUNEL指数分别为0.387和0.613,亚二倍体凋亡峰比例分别为3.8%和10.7%,前者均明显低于后者(P<0.05).结论bcl-2蛋白过表达能够抑制乙醇诱导的HCC-9204肝癌细胞凋亡.     

bcl—2在一氧化氮诱导血管平滑肌细胞凋亡中的作用

目的：对一氧化氮（NO）作用下血管平滑肌细胞（VSMC）中bcl-2蛋白表达的变化进行定量检测,并进一步探讨bcl-2过表达对NO诱导VSMC凋亡的影响,以确定bcl-2在NO诱导VSMC凋亡中的作用。方法以亚硝基乙酰青霉胺（SNAP）作为NO供体,将5－8代的大鼠VSMC接种于Petri培养皿中,条件培养液培养24－48h,换成含0．5mmol/LSNAP的条件培养液8－10h后,固定细胞、间接免疫荧光法检测抗原,借助粘附式细胞仪对细胞中bcl-2蛋白表达进行定量检测,通过逆转录病毒载体将bcl-2基因导入VSMC,使其过量表达,检测SNAP作用下细胞的凋亡率,并与未经转染的VSMC进行比较,结果：SNAP使得VSMC中B蛋白表达下调,而bcl-2过表达能够抑制SNAP作用下VSMC的凋亡。结论下调bcl-2表达是SNAP诱导VSMC凋亡的途径之一。     

肝细胞癌和肝硬变中bcl—2蛋白表达与细胞凋亡的关

研究肝细胞癌和肝硬变中ｂｃｌ－２蛋白表达与细胞凋亡的关系。方法，应用原位脱氧核糖酸末端转移酶标记法和Ｓ－Ｐ免疫组化技术检测２８例肝硬变和３５例肝细胞癌组织中凋亡细胞的分布、密度及ｂｃｌ－２蛋白的表达。     

Bcl-2基因家族在调节细胞凋亡中的作用

Bcl-2基因家族包含抑制和促进细胞凋亡两类功能相反的蛋白质,在细胞凋亡中发挥重要的调节作用。本文结合近年来的研究进展,综述了Bcl-2基因家族中两类蛋白质分子的结构特征、亚细胞分布、相互间的作用方式以及与它们发挥功能的关系,为认识细胞凋亡中复杂的分子调控机制,寻找凋亡紊乱相关疾病中可资利用的药物干预靶点提供了重要启示。     

妇科肿瘤组织中细胞凋亡相关基因表达及其与mtDNA突变相关性的研究

目的 研究妇科肿瘤患者原发性肿瘤组织细胞凋亡相关基因bcl-2,bax,caspase3的表达及其与mtDNA突变的相关性。方法 取32例妇科恶性肿瘤组织进行研究。应用RT-PCR方法检测bcl-2,bax,caspase3基因的表达。采用PCR-SS-CP及DNA测序检测mtDNA突变。结果 在妇科恶性肿瘤组织中，bcl-2,bax,caspase3基因的表达率分别为78.1%,43.8%及34.4%,bcl-2与caspase3,bax表达之间呈明显的负相关，Caspase3与Bax基因表达的共同阳性率和共同阴性率分别为71.4%及94.4%。在mtDNA突变的22例中，20例（90.9%)同时检测到bcl-2的表达，Bax及caspase3基因在mtDNA突变组的表达率分别为27.3%和13.6%。明显低于非突变组。结论 在妇科恶性肿瘤组织中存在bcl-2基因的高表达和bax,cas-case3基因的低表达，bcl-2与aspase3,bax表达之间呈明显的负相关，caspase3与bax基因存在共表达关系。细胞凋亡相关基因表达与mtDNA突变亦存在一定的相关性。     

抗凋亡基因bcl—2在大肠癌中的表达及意义

本研究采用免疫组织化学ＳＡＢＣ法对７７例大肠癌ｂｃｌ－２进行了检测。结果表明，在７７便大肠癌中，ｂｃｌ－２阳性６７例（８７．０１％）；在作为对照的５７例癌周组织中，ｂｃｌ－２阳性占４７例（８２．４５％）；在４６例高分化的大肠癌中，比１５例低分化腺癌表达要强（Ｐ〈０．０１）。结论：ｂｃｌ－２在绝大部分大肠癌中都有表达，这表明其参与了大肠癌的凋亡调控，其表达与大肠癌的分化有关。     

大肠癌及腺瘤中细胞凋亡和bcl-2Bax基因的表达

大肠癌及腺瘤中细胞凋亡和ｂｃｌ２Ｂａｘ基因的表达徐晓丽殷智榕黄孝立张云汉细胞凋亡（ａｐｏｐｔｏｓｉｓ）是受基因调控的细胞死亡方式，在生理条件下，它与细胞有丝分裂相辅相成，维持组织中细胞数目及状态的衡定。细胞凋亡及其调控基因的异常，导致细胞生死平衡紊...     

人肺癌细胞凋亡与p53、bcl-2、Bax的表达

目的：探讨人肺癌组织细胞自发凋亡的发生,ｐ５３基因及凋亡相关基因ｂｃｌ－２、Ｂａｘ在肺癌组织中的表达及与肺癌细胞凋亡和生物学行为的关系。方法：用甲基绿－派诺宁染色检测５０例肺癌组织切片中凋亡细胞,ＬＳＡＢ免疫组化法检测ｐ５３和Ｂａｘ的蛋白表达,原位杂交方法检测ｂｃｌ－２ ｍＲＮＡ的表达。结果：１００％小细胞肺癌凋亡发生数１０个／ＨＰＦ,２１％的肺鳞癌和１５％的肺腺癌凋亡发生数〉１０个／ＨＰＦ。ｐ５     

细胞凋亡的线粒体调控与Bcl-2基因家族

线粒体结构和功能障碍是各种刺激因素诱导细胞凋亡的中心事件 ,由此导致线粒体内凋亡诱发因子释放 ,参与对细胞凋亡的调控 ;Bcl 2基因家族与此调控密切相关。     

高温诱导低分化鼻咽癌细胞系CNE—2Z凋亡及其b …

探讨高温诱导低分化鼻咽癌细胞系ＣＮＥ－２Ｚ凋亡的作用。方法：用激光共聚焦显微技术，核酸电泳，免疫组化等方法分析了４２．５℃高温处理６，１２，２４ｈ后鼻咽癌细胞的变化。结果：激光共焦显微镜观察可见高温处理６ｈ肿瘤细胞出现空泡，有不同程度的固缩；１２ｈ染色质浓缩缘边化，呈“半月形”，细胞出芽，出现凋亡小体，２４ｈ后大部分细胞死亡。     

角化棘皮细胞凋亡和bcl—2,bax表达及其相互关系

目的：探讨角化棘皮瘤（ｋｅｒａｔｏａｃａｎｔｈｏｍａ，ＫＡ）在细胞凋亡方面的生物学特点。方法：用末端脱氧核苷酰转移酶（ＴｄＴ）介导的ｄ－ＵＴＰ生物素缺口末端标记技术（ＴＵＮＥＬ），原位检测２０例角化棘皮瘤中凋亡细胞；应用免疫组织化学技术检测皮损部位ｂａｘ和ｂｃｌ－２基因产物的表达．结果：ＫＡ中８０％（１６／２０）瘤中心出现凋亡细胞。３０％（６／２０）肿瘤边缘ｂｃｌ－２呈弱阳性染色。全部病例ｂａｘ染     

四环素调控表达的反义bcl-2对人神经母细胞瘤细胞系SK-N-MC生长和凋亡的作用

目的 研究由四环素调控的反义bcl-2的表达对人神经母细胞瘤细胞系SK－N－MC细胞的生长和凋亡的作用并初步探讨其相关机制。方法 非定向克隆构建携带反义bcl-2 cDNA片段的由四环素调控表达的真核细胞表达载体PUCCOMB1^CMV/Asbcl-2;应用脂质体Lipofectamine^TM介导转染SK－N－MC细胞,同时以空载体转染细胞作为对照。MTT法研究细胞的生长和增殖状况,提取DNA梯带和应用流式细胞术检测凋亡细胞。逆转录－聚合酶链反应（RT－PCR）研究细胞凋亡中bcl-xL/bcl-xS基因在mRNA水平上表达的变化。Western杂交检测bcl-2及其上下游相关基因caspase-3、PARP的变化。结果 转染反义bcl-2的细胞生长增殖缓慢,在去血清培养的相同的时间内其凋亡细胞数也明显多于对照组细胞,提前出现DNA梯带。在细胞的凋亡过程中检测到非活性caspase-3酶原蛋白减少并检测到bcl-2、PARP蛋白的降解产物条带。但bcl-xL/bcl-xS基因在mRNA水平上表达无明显变化。结论 反义bcl-2 mRNA可抑制SK－N－MC细胞的生长和增殖,促进去血清培养所诱导的SK－N－MC细胞的凋亡。大细胞凋亡过程中caspase-3被激活,bcl-2和PARP蛋白被裂解,但bcl-xL/bcl-xS在反义bcl-2 mRNA诱导的SK－N－MC细胞的凋亡过程中无变化。     

鼻咽癌组织中bcl—2,bax和p53的表达及其与瘤细胞？…

目的;了解鼻咽癌细胞中瘤细胞ｂｃｌ－２、ｂａｘ和ｐ５３的表达及其与瘤细胞凋亡指数的关系。方法：对３８例未经治疗的鼻咽癌组织,应用免疫组化ＬＳＡＢ法检测瘤ｂｃｌ－２、ｂａｘ和ｐ５３的表达;末端标记细胞死亡检测法（ＴＵＮＥＬ）计算癌细胞的凋亡指数。结果：（１）３７例（９７．４％）中有９０％左右的瘤细胞呈ｂｃｌ－２过表达;（２）３８例（１００％）中有７０％左右的瘤细胞过表达ｂａｘ;（３）２９例（７６．３     

乙醇诱导的肝癌细胞HCC—9204凋亡及其与Bax和Bcl—2蛋白的关系

目的 探讨乙醇对肝癌细胞凋亡的诱导作用及其与凋良心相关基因bax和 bcl-2表达的关系。方法 用噻唑蓝（MTT）法检测浓度分别为20-100mL-L的乙醇对肝癌细胞系HCC-9204的杀伤作用,然后,用60mL/L乙醇作用6h诱导HCC——9204细胞凋亡,以May-Grunwald-Giemsa(MGG)染色法、末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记（TUNEL）法和流式细胞术分别分析凋亡细胞的形态学变化、DNA断裂情况和不同细胞周期的DNA含量变化,用免疫细胞化学染色图象分析法,检测诱导凋亡前、后Bax和Bcl-2蛋白表达水平的变化。结果 随着乙醇浓度的增加,其对HCC-9204细胞的杀伤作用逐渐增强,60mL/L乙醇可使HCC-9204细胞发生明显的细胞凋亡的形态学变化,并且大部分细胞为TUNEL阳性着色,流式细胞术分析可见明显的亚二倍体凋亡峰,诱导凋亡后的HCC-9204细胞Bax蛋白的表达水平明显增高,而Bcl-2在诱导凋亡前、后的HCC——9204细胞中均未见表达,结论 低浓度乙醇对肝癌细胞HCC——9204具有明显的凋亡诱导作用,其凋亡的发生与Bax蛋白表达水平的增高有关。     

细胞凋亡的分子调节：Bcl—2及其相关蛋白

细胞调亡是机体细胞衰老与死亡过程的一种主要形式，它是一个生理性调节机制。它参与调节机体的发育、细胞的分化、体内正常细胞的更新和异常细胞的清除。目前认为它与细胞分裂，细胞分化类似是一个级联式基因表达的结果，同时受到许多因素的调控，近年来研究发现Ｂｃｏ－２及其相关蛋白在细胞凋亡的分子调节中起着重要的作用。