蝙蝠葛苏林碱调控Akt/mTOR信号通路对胶质瘤细胞增殖及自噬的影响

目的 探讨蝙蝠葛苏林碱（DAS）对胶质瘤U251和U87细胞生长与增殖的影响及其分子机制。方法用2.5、5.0和10.0μmol/L DAS(DAS组)、10.0μmol/L替莫唑胺（TMZ组）和空白对照（对照组）处理U251和U87细胞。采用CCK-8法检测DAS对细胞活力的影响,细胞集落形成和Edu实验检测DAS对细胞增殖的影响,流式细胞术检测DAS对细胞凋亡的影响,透射电镜观察自噬小体的形成,Western blotting检测DAS对胶质瘤细胞凋亡、自噬和Akt/mTOR信号通路相关蛋白表达的影响。结果 CCK-8结果显示,与对照组比较,不同浓度DAS组胶质瘤细胞活力逐渐降低（P <0.05）,DAS组细胞活力低于TMZ组（P <0.05）。胶质瘤U251和U87细胞IC50分别为5.11μmol/L和6.35μmol/L。Edu和克隆结果显示,DAS能抑制胶质瘤细胞增殖,且随着药物浓度升高细胞增殖逐渐减少（P <0.05）。流式细胞术结果显示,DAS能诱导胶质瘤细胞凋亡,且随着药物浓度升高细胞凋亡增加（P <0.05）。DAS能增加胶质瘤细胞Bax、L...     

不同水平自噬对替莫唑胺抑制神经胶质瘤细胞增殖的影响

目的探讨不同水平自噬对替莫唑胺抑制神经胶质瘤细胞增殖的影响。方法使用0（对照）、10、25、50滋g/L的雷帕霉素（RAPA）预处理人胶质瘤细胞（U87细胞）0.5h;再加入200滋mol/L替莫唑胺作用24h,收集U87细胞。采用流式细胞术检测自噬标志物微管相关轻链蛋白3（LC3）-Ⅱ表达量,RT-PCR法检测自噬相关基因Beclin-1mRNA相对表达量,MTT法检测细胞增殖抑制率。结果对照组、10滋g/L组、25滋g/L组和50滋g/L组U87细胞LC3-Ⅱ表达量、Beclin-1mRNA相对表达量及细胞增殖抑制率比较,差异均有统计学意义（均P＜0.05）;经两两比较发现,随着RAPA浓度的增加,LC3-Ⅱ表达量及Beclin-1mRNA相对表达量均逐渐升高（均P＜0.05）,而细胞增殖抑制率先下降后逐步升高（均P＜0.05）。结论不同水平自噬对替莫唑胺抑制神经胶质瘤细胞增殖产生不同的影响,随着自噬水平的提高,替莫唑胺对神经胶质瘤细胞的增殖抑制率先下降后逐渐升高。     

人参皂甙20（R）-Rg3对人胶质瘤U87细胞凋亡的影响

目的探讨人参皂甙20（R）-Rg3对人胶质瘤U87细胞凋亡作用的影响。方法应用MTT法及流式细胞术观察不同浓度的Rg3对U87细胞凋亡的影响,采用细胞吖啶橙／溴乙锭荧光观察凋亡形态学改变,采用WesternBlot技术检测细胞Bcl2、Bax、p-Akt及tAkt蛋白表达。结果Rg3显著抑制U87细胞增殖,Rg3呈剂量依赖性诱导肿瘤细胞凋亡。不同浓度Rg3作用U87细胞24h,U87细胞中Bax表达逐渐增高,Bcl-2表达降低．Bax／Bcl-2呈浓度依赖性升高,细胞p-Akt蛋白表达降低,而t—Akt蛋白未见改变。结论Rg3通过抑制P13K／Akt信号转导通路中的Akt磷酸化,影响胶质瘤U87细胞系Bcl-2蛋白表达降低,促凋亡Bax蛋白表达增加,调控胶质瘤细胞的凋亡。     

转染TRIM29-siRNA对胶质瘤U87MG细胞周期和凋亡的影响

目的：探讨转染三结构域蛋白（TRIM）家族成员三结构域蛋白29（TRIM29）-siRNA对胶质瘤U87MG细胞周期和凋亡的影响,阐明TRIM29在胶质瘤发生发展中的作用。方法：将体外培养的U87MG细胞分为对照组（未转染）、NC-siRNA组（转染阴性对照NC-siRNA）和TRIM29-siRNA组（转染TRIM29-siRNA）,采用实时荧光定量PCR法检测3组U87MG细胞中TRIM29 mRNA表达水平,流式细胞术检测3组不同细胞周期U87MG细胞百分率和凋亡率,Western blotting法检测3组细胞中TRIM29、CyclinD1、P21、Bcl-2和Bax蛋白表达水平。结果：3组细胞中TRIM29、CyclinD1、P21、Bcl-2和Bax蛋白表达水平,TRIM29 mRNA表达水平,G₀/G₁期、S期、G₂/M期U87MG细胞百分率及细胞凋亡率比较差异有统计学意义（P<0.05）。与对照组比较,NC-siRNA组U87MG细胞中TRIM29 mRNA和TRIM29、CyclinD1、Bcl-2蛋白表达水平和G₁/G₀期、S期、G₂/M期U87MG细胞百分率及细胞凋亡率差异无统计学意义（P>0.05）;与对照组和NC-siRNA组比较,TRIM29-siRNA组U87MG细胞中TRIM29 mRNA和TRIM29、CyclinD1、Bcl-2蛋白表达水平以及S期和G₂/M期U87MG细胞百分率均明显降低（P<0.05）,G₀/G₁期U87MG细胞百分率和细胞凋亡率以及P21、Bax蛋白表达水平明显升高（P<0.05）。结论：转染TRIM29-siRNA可诱导U87MG细胞周期阻滞和凋亡,其作用机制可能与下调CyclinD1、Bcl-2蛋白表达和上调P21、Bax蛋白表达有关。     

重组人生长激素对肝癌细胞MHCC-97H的作用及机制

目的探讨重组人生长激素（rhGH）对肝癌细胞MHCC-97H的作用及机制。方法以无血清培养液诱导肝癌细胞MHCC-97H凋亡,再以浓度为0μg/L（GH0组）、5μg/L（GH5组）、25μg/L（GH25组）、50μg/L（GH50组）、100μg/L（GH100组）和500μg/L（GH500组）的rhGH完全培养液进行培养,MTT法观察MHCC-97H细胞生长情况,流式细胞技术检测细胞凋亡率、细胞周期和细胞增殖指数,RT-PCR和Western blotting法分别检测凋亡相关基因Bax和Bcl-2 mRNA和蛋白表达情况。结果与GH0组比较,GH25组、GH50组、GH100组和GH500组MHCC-97H细胞增殖明显,S期细胞百分比和细胞增殖指数显著增加（P〈0.05）;GH25组、GH50组和GH100组细胞凋亡率显著降低（P〈0.05）,Bax mRNA和蛋白表达显著降低（P〈0.05）,Bcl-2 mRNA和蛋白表达显著增加（P〈0.05）。结论 rhGH体外显著促进肝癌细胞MHCC-97H增殖,并通过调节凋亡相关基因Bax和Bcl-2的表达来抑制无血清培养液诱导的细胞凋亡。     

天麻素调节cAMP/PKA/GRK2信号通路对脑胶质瘤细胞增殖、凋亡的影响

摘要:目的 探讨天麻素(Gastrodin)对脑胶质瘤细胞增殖、凋亡的影响及作用机制。方法 不同浓度的天麻素(2.5 ~80.0μmol/L)分别处理 U87细胞24、48、72h,检测细胞增殖确定最佳给药浓度;U87细胞分为对照组(Control组)、天 麻素低、中、高浓度组(Gastrodin-L、Gastrodin-M、Gastrodin-H 组,天麻素工作浓度分别为5、10、20μmol/L)、天麻素+ cAMP/PKA 信号通路抑制剂组(Gastrodin+H-89组,20μmol/L 的天麻素与10μmol/L 的 H-89共同处理细胞),分别 检测 U87细胞增殖、凋亡及cAMP及 CyclinD1、p21、Bax、Bcl-2、Caspase-3、p-PKA、PKA、p-GRK2、GRK2的蛋白表达水 平。结果 2.5~80.0μmol/L的天麻素均可抑制 U87细胞增殖,选择浓度为5、10、20μmol/L的天麻素进行后续实验。 与 Control组比较,Gastrodin-L、Gastrodin-M、Gastrodin-H 组 G0/G1期细胞比例、细胞凋亡率、cAMP、p21、Bax、Caspase3、p-PKA、p-GRK2蛋白表达水平均显著升高(均P<0.05),S期与 G2/M 期细胞比例、集落形成数、CyclinD1、Bcl-2蛋 白表达水平显著降低(均P<0.05),且呈药物浓度依赖性;与 Gastrodin-H 组比较,Gastrodin+H-89组 G0/G1期细胞比 例、细胞凋亡率、cAMP、p21、Bax、Caspase-3、p-PKA、p-GRK2蛋白表达水平显著降低(均 P<0.05),S期与 G2/M 期细 胞比例、集落形成数、CyclinD1、Bcl-2蛋白表达水平显著升高(均P<0.05)。结论 天麻素可能通过激活cAMP/PKA/ GRK2通路抑制脑胶质瘤细胞增殖,并诱导其凋亡。     

MicroRNA-25表达下调对神经胶质瘤U87细胞增殖与凋亡的影响

目的探讨microRNA-25（miR-25）表达下调对神经胶质瘤U87 细胞增殖与凋亡的影响,以及miR-25 与B 细胞淋巴瘤/ 白血病-2 基因（Bcl-2）在胶质瘤细胞增殖与凋亡过程中的调节作用。方法通过慢病毒介导反义miR-25 寡聚核苷酸转染U87 细胞;分为3 组,实验组（转染anti-miR-25）、对照组（转染negative control）和空白组（空白PBS）;实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测miR-25 和Bcl-2 的mRNA 表达水平;CCK-8 法检测细胞增殖情况;流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡。结果实验组miR-25 和Bcl-2 的mRNA 表达量与空白组和对照组比较,差异具有统计学意义（P <0.05）,实验组降低;实验组相对于空白组和对照组,细胞增殖活性降低,细胞周期延缓,细胞凋亡率升高。结论在胶质瘤U87 细胞,miR-25 表达下调通过作用于Bcl-2 靶基因,延缓细胞周期,抑制细胞增殖,促进细胞凋亡。     

白桦脂酸联合沙利度胺诱导U266细胞凋亡机制研究

目的：探讨白桦脂酸联合沙利度胺诱导多发性骨髓瘤（ MM）U266细胞凋亡的机制。方法：分别用白桦脂酸（20、40、60和80 mg/L,白桦脂酸组）、沙利度胺（10、50和100 mg/L,沙利度胺组）及白桦脂酸（40 mg/L）联合沙利度胺（联合组,白桦脂酸40 mg/L,沙利度胺10、50和100 mg/L）分别处理U266细胞,同期设对照组;MTT法和流式细胞术分别检测不同浓度白桦脂酸组、沙利度胺组及联合组U266细胞增殖抑制率和凋亡率;Real-time PCR检测4组U266细胞中Survivin、Cyto-C、Bcl-2、Bax mRNA的表达,蛋白免疫印迹法检测4组U266细胞中Survivin、Cyto-C、Bcl-2、Bax蛋白表达水平。结果：随着白桦脂酸浓度的增加,U266细胞增殖抑制率增加,差异有统计学意义（ P＜0.05）,最适浓度为40 mg/L;与沙利度胺组相比,联合组U266细胞的增殖抑制率和凋亡率明显升高,差异具有统计学意义（ P＜0.05）;与沙利度胺组或白桦脂酸组相比,联合组 U266细胞中Survivin、Bcl-2 mRNA的表达明显降低,Cyto-C和Bax mRNA表达明显升高,差异具有统计学意义（ P＜0.05）;与沙利度胺、白桦脂酸组相比,联合组U266细胞中Survivin、Bcl-2蛋白表达明显降低,Cyto-C和Bax蛋白表达明显升高,差异具有统计学意义（ P＜0.05）。结论：白桦脂酸联合沙利度胺可以促进多发性骨髓瘤U266细胞凋亡,其机制可能与凋亡分子Survivin、Bcl-2、Cyto-c和Bax相关。     

SP2509联合顺铂调控LSD1的表达而诱导骨肉瘤细胞的凋亡和自噬

目的:探究SP2509联合顺铂对骨肉瘤细胞凋亡和自噬的影响及机制。方法:qRT-PCR检测LSD1在骨肉瘤细胞MG-63、Hu O9、U-2OS以及人成骨细胞h FoB1.19中的表达。CCK8法检测SP2509和顺铂的IC50值。MG-63细胞分为对照组、SP2509组(20μmoL/L)、顺铂组(10μmoL/L)、SP2509(20μmoL/L)联合顺铂组(10μmoL/L),流式细胞术检测各组细胞凋亡水平,Western blot检测各组细胞LSD1、LC3-Ⅱ、P62、Caspase3、Bcl-2表达。结果:LSD1在骨肉瘤细胞MG-63、HuO9、U-2OS中的表达显著高于其在hFoB1.19中的表达,MG-63中LSD1表达最高。SP2509和顺铂IG50值分别为40和20μmoL/L。相比于对照组,SP2509组和顺铂组MG-63细胞凋亡水平显著增加(P<0.05),Caspase 3表达显著增加(P<0.05),Bcl-2表达显著下调(P<0.05),LC3-Ⅱ表达显著增加(P<0.05),P62表达显著下调(P<0.001),LSD1表...     

蛋白酶体抑制剂MG-132对体外人U87胶质瘤细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨蛋白酶体抑制剂MG-132对体外人U87胶质瘤细胞增殖和凋亡的影响.方法 分别以不同浓度(0、2.5、5、10和20μmoL/L)的MG-132培养U87胶质瘤细胞,通过四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测不同培养时间(12、24、48、72 h)对U87胶质瘤细胞增殖的影响,流式细胞仪分析MG-132对U87胶质瘤细胞凋亡的影响,HE染色观察细胞形态学变化.结果 通过与正常对照组比较,2.5～20μmoL/L浓度的MG.132在12、24、48及72 h均可抑制U87细胞增殖并诱导其凋亡,并在一定范围内呈时间和剂量依赖性;各亚组与对照组差异具有统计学意义(P<0.05);形态学检查呈现凋亡细胞的特征.结论 MG-132可抑制U87胶质瘤细胞增殖并诱导其凋亡,在一定范围内呈时间和剂量依赖性.     

麻疹的双相移位研究进展

近年新生儿、婴儿、成人麻疹患者逐年增加,临床表现一般仍较典型,成年人麻疹患者全身中毒症状较重。麻疹抗体检测结果阳性是主要的诊断依据。麻疹发病的双相移位的机理可能是,免疫保护力不足,婴儿出生时麻疹抗体力低。孕期母传胎的麻疹抗体减弱,母经乳汁传给婴儿的抗体减弱,成人麻疹抗体水平逐年下降。预防措施是怀孕前给予育龄妇女麻疹疫苗接种,鼓励母乳喂养,麻疹疫苗计划免疫适当提前,在成人追加麻疹疫苗的免疫,加强病毒变异的研究等。     

尿液pH值对红细胞检验影响的探讨

[目的 ]通过尿液 pH值对红细胞检验影响的观察 ,更加科学、准确地诊断血尿和血红蛋白尿。[方法 ]采用干化学分析仪检测和尿液显微镜红细胞计数 ,观察 180例正常人尿标本加入正常人血标本后 ,不同 pH值 ,不同时间内 ,观察红细胞溶解情况。 [结果 ]pH <5 .5以下时 ,随着时间的延长 ,红细胞溶解现象明显。 1h后观察有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ;2h后有非常显著性差异 (P <0 .0 1)。[结论 ]pH <5 .5时对红细胞计数影响较大 ,易致红细胞发生溶解现象 ,出现假性血红蛋白尿 ,对血尿和血红蛋白尿很难区分 ,给临床诊断造成不便 ,更易引起漏诊和误诊。     

醋柳黄酮缓释片的药动学初步研究

目的:研究醋柳黄酮缓释片在家犬体内的药动学过程,测定其药动学参数,计算缓释片相对于普通片的生物利用度。方法:将实验动物分为两组,分别用醋柳黄酮缓释片和普通片进行口服给药,用高效液相色谱法测定血浆药物浓度,应用3P97软件求算药动学参数。结果:醋柳黄酮缓释片及普通片的tm ax分别为4.87 h和2.87 h,Cm ax分别为每小时0.46μg.L-1和每小时0.56μg.L-1,缓释片的相对生物利用度为111.7%。结论:醋柳黄酮缓释片与普通片均符合一室模型,缓释片与普通片具有生物等效性,且醋柳黄酮缓释片有明显的缓释效果。     

主动脉窦瘤破裂的外科治疗

报告２０例主动脉窦瘤破裂修复术的结果。１７例男性，３例女性。年龄７～５６岁。痊愈１９例，另一例因急性肾功能衰竭一周后死亡。作者就发病机理，诊断和合并畸形的处理进行了讨论。     

正常增殖期子宫内膜细胞增生状态的定量观察

以＾３氢－胸腺嘧啶核苷放射自显影法及ＨＥ染色，观察并分别测定了１８例正常子宫内膜增殖中期，１５例增殖晚期的腺上皮细胞或间质细胞的标记指数、分裂指数。结果显示：子宫内膜增殖晚期腺上皮细胞或间质细胞之ＬＩ均明显高于增殖中期。同时，增殖晚间质细胞之ＭＩ也明显高于增殖中期，即此两种细胞在增殖晚期中增生明显，其增生状态初步获得了定位定量测定的正常值。     

上颌骨牙源性囊肿刮除手术的疗效观察

目的探讨对上颌骨牙源性囊肿患者进行囊肿彻底刮除手术的临床疗效。方法对我科在2010年1月～2017年9月收治的73例上颌骨牙源性囊肿患者行囊肿彻底刮除手术治疗,对患者术区肿胀消退、术后伤口感染、伤口愈合、牙龈再附着、术后复发、骨质改建、骨质修复等情况随访观察。结果 73例患者术后肿胀消退时间为1～4 d。73例患者术后均未发生伤口感染,伤口均一期愈合。所有患者牙龈再附着情况好,术后均未见复发。术后未见并发症。骨质改建效果好,骨质修复的效果因影像学资料过少,缺乏客观依据,暂不下有效结论。结论对上颌骨牙源性囊肿患者进行囊肿彻底刮除手术,术后患者的恢复情况良好,值得在临床治疗上进行推广。     

颅咽管瘤切除术后并发症的处理

目的　讨论颅咽管瘤切除术后并发症的处理原则。方法　分析 36例颅咽管瘤切除术后并发症的临床资料。结果　术后并发尿崩症者 14例、高热 11例、电解质紊乱 8例、消化道出血 3例、癫痫 5例 ,死亡2例。结论　颅咽管瘤术后并发症较多 ,加强早期监测和处理 ,可进一步提高该病的治愈率     

阴道炎1236例病原检查分析

对１２３６例阴道炎患者的阴道分泌物作直接镜检和病原菌分离培养检查；结果，细菌感染９００例，念珠菌２３４例，滴虫１０２例。９００例细菌经鉴定；葡萄球菌３００例，阴道加特纳菌２７６例，淋病奈瑟菌１７０例，其它细菌１２４例。结果表明，葡萄球菌，阴道加特纳菌，淋病奈瑟菌是细菌性阴道炎最常见的致病菌。     

碱量法测定壳多糖脱乙酰度的方法探讨

目的：评价壳多糖脱乙酰度测定的减量法的影响因素。方法：通过实验评价碱量法的精准度及样本含潮量等因素对测定结果的影响,并对汪氏推荐计算公式和本文作者提出的改良公式作出评价。结果：碱量法测定壳多糖脱乙酰度受样本性状、含潮率、反应体系中酸量的影响。改良公式更能反映样本实际脱乙酰度。结论：碱量法简便易行,评价指标在可接受范围,可用于壳多糖研制中的质量评价。     

喉癌主癌灶手术切缘的临床特点分析

目的探讨研究喉癌主癌灶手术的安全切缘在临床上的特点。方法回顾性分析2007年6月—2011年3月已经确诊喉癌的患者100例,随机分成A、B两组,A组为观察组50例,主要采取手术切缘后,然后采取镜下观察分析;B组为观察组50例,主要采取手术切缘后,然后采取肉眼观察分析,将结果进行临床特点分析比较。结果早期的喉癌患者和晚期的喉癌患者的阳性切缘例数,差异无统计学意义（P〉0.05）;晚期的阳性切缘发生次数高于早期的阳性切缘发生次数,差异有统计学意义（P〈0.05）。声门上区[SG]2、3和5、10mm;跨声门型[TG]2、3mm和5、10mm的切缘对比,差异有统计学意义（P〈0.05）。SG、G、TG、IG的2mm和3mm,5mm和10mm对,差异无统计学意义（P〉0.05）。肉眼阳性切缘观察39个,镜下阳性切缘观察43,两者差异无统计学意义（P〉0.05）。结论依据原发不同部位、不同分期和不同范围选取适合的切线,就可以有效地减少阳性切缘的发生。