白癜风毛囊无色素性黑素细胞c—kit的表达

目的探讨毛囊无色素性黑素细胞（amelanotic melanocytes,AMMC）和于细胞因子（stem cell factor,SCF）及其受体c—kit（SCF／c—kit）信号通路在白癜风发病机制中的作用。方法采用苏木精伊红（HE）染色和免疫组织化学方法对31例白癜风皮损头皮组织毛囊和30例正常人头皮组织毛囊进行HMB-45、NKI／beteb、c—kit3种特异性抗体染色,观察毛囊AMMC的形态分布特征及c—kit的表达,并以HPIAS-1000彩色病理图文分析系统半定量分析3种特异性标志物表达的强弱,观察两组之间有无差异。结果白癜风皮损头皮组毛囊AMMC的NKI／beteb染色的平均阳性细胞面积率和平均光密度值与正常头皮组织相比,差异无统计学意义（P〉0．05）;白癜风皮损头皮毛囊组AMMC的c—kit染色平均阳性面积率和平均光密度值明显低于正常头皮组,差异具有统计学意义（P〈0．05）。结论白癜风头部皮损毛囊AMMCckit的表达异常,其可能参与了白癜风的发病过程。     

三种人工合成寡核苷酸序列对体外培养的毛囊黑素细胞的影响

目的：研究三种人工合成寡核苷酸序列对体外培养的毛囊黑素细胞形态及酪氨酸酶活性的影响。方法：采用胶原酶和胰酶两步消化法,分离培养毛囊内黑素细胞。多巴氧化法测酪氨酸酶活性,硝酸银染色观察细胞形态的变化。结果：三种人工合成寡核苷酸序列可以显著增强酪氨酸酶活性（P〈0.05）;银染色细胞显示CpG-1826和CpG-2006组胞体变得肥大,黑素化明显,树突增多,与对照组相比有显著差异。结论：部分人工合成寡核苷酸序列可促进毛囊黑素细胞的酪氨酸酶活性和树突增加,为白癜风皮损复色的研究奠定基础。     

人毛囊无色素性黑素细胞及其治疗白癜风的研究进展

毛囊无色素性黑素细胞可以作为皮肤黑素细胞的储库，给白癜风的治疗提供黑素细胞来源。人黑素细胞（melanocyte，MC）起源于胚胎神经嵴，在胚胎发育2～5周开始向表皮和毛囊移行。向表皮移行的黑素细胞最终定居在基底膜上，形成连续产生黑素的成熟黑素细胞；而向毛囊移行的黑素细胞则分为两种类型：一种是位于生长期毛囊毛母质和漏斗部具有黑素合成活性的黑素细胞；另一种是分布于生长期毛发外毛根鞘（Outer Root Sheath，ORS）中，无黑素合成活性、未活化的无色素性黑素细胞（amelanotic melanocyte，AMMC）。     

人胎儿毛囊隆突细胞的培养方法及其向皮脂腺细胞诱导分化的初步研究

目的探讨简单快捷地获得大量人毛囊隆突细胞并保持其干细胞特性的方法,观察其向皮脂腺细胞分化的可行性。方法用传统的器械分离法(简称传统法)和改进的消化分离法(简称改良法)对人胎儿毛囊隆突细胞进行分离培养,比较两种方法的细胞获得效率和细胞生长特性。在对毛囊隆突细胞进行诱导培养后,行抗上皮膜抗原(EMA)抗体免疫组织化学染色,以检测细胞EMA的表达情况。噻唑蓝(MTT)法检测细胞克隆形成率。用亲和素-生物索复合物(ABC)标记法行毛囊隆突细胞角蛋白19(K19)染色。结果传统法每小时可获得8～10个毛囊隆突,贴壁48h后有细胞长出,贴壁率为40%～50%,培养14d左右传代；改良法每小时可获得毛囊隆突100个左右,接种后12h即可贴壁并有细胞长出,贴壁率30%,细胞生长迅速,7d左右即可传代。毛囊隆突细胞诱导培养7d后,细胞体积变大,随着时间延长,细胞进一步变大,细胞质中有脂滴样颗粒围绕在核的周围,细胞形状不规则。诱导培养14d后,抗EMA抗体免疫组织化学染色呈阳性表达。改良法的细胞克隆形成率为(18．2±2．1)%,明显高于传统法[(12．7±3．4)%,P＜0．05]。毛囊隆突细胞K19免疫组织化学染色呈阳性,其细胞分布满视野,细胞质内含有大量棕色颗粒。结论改良法可以获得大量毛囊隆突细胞并保持其干细胞特性,在体外诱导条件下,具有向皮脂腺细胞分化的潜能。     

皮肤黑素细胞酪氨酸酶基因高表达模型的研究

目的细胞黑素的产生与色素基因表达量有关.本研究旨在建立体外黑素细胞色素基因高表达模型,为基因调控、基因治疗、化学治疗的效果和机理的研究提供实验依据.方法应用黑素细胞培养技术培养人皮肤黑素细胞,行Dopa染色和Fantana银染法.黑素细胞经紫外线和内皮素处理后,检测黑素细胞的黑素含量和酪氨酸酶mRNA表达状态.结果黑素细胞经紫外线照射后, 细胞黑素含量由(11±1.5)pg/cell上升至(54±2.3)pg/cell (P＜0.01), 而酪氨酸酶mRNA的表达相对值由(64±1.2)%上升至(142±2.8)% (P＜0.01);内皮素(ET-1)处理黑素细胞后, 黑素的含量也上升至(68±1.9)pg/cell (P＜0.01), 而酪氨酸酶mRNA的表达量上升至(187±3.4)%.结论紫外线和内皮素可以增加黑素细胞的黑素含量和增加酪氨酸酶mRNA的表达量.     

皮肤黑素细胞酪氨酸酶基因高表达模型的研究

目的　细胞黑素的产生与色素基因表达量有关。本研究旨在建立体外黑素细胞色素基因高表达模型 ,为基因调控、基因治疗、化学治疗的效果和机理的研究提供实验依据。方法　应用黑素细胞培养技术培养人皮肤黑素细胞 ,行Dopa染色和Fantana银染法。黑素细胞经紫外线和内皮素处理后 ,检测黑素细胞的黑素含量和酪氨酸酶mRNA表达状态。结果　黑素细胞经紫外线照射后 ,细胞黑素含量由 (11± 1.5 ) pg/cell上升至 (5 4± 2 .3)pg/cell (P<0 .0 1) ,而酪氨酸酶mRNA的表达相对值由 (6 4± 1.2 ) %上升至 (14 2± 2 .8) % (P <0 .0 1) ;内皮素 (ET - 1)处理黑素细胞后 ,黑素的含量也上升至 (6 8± 1.9) pg/cell (P <0 .0 1) ,而酪氨酸酶mRNA的表达量上升至 (187± 3.4 ) %。结论　紫外线和内皮素可以增加黑素细胞的黑素含量和增加酪氨酸酶mRNA的表达量。     

毛囊单位移植过程和存在的问题

1994年,BL Limmer首次提出"毛囊单位移植(follicular unit transplantation, FUT)"的概念,此概念的提出标志着自体毛发移植技术FUT时代的到来.目前,经过多年的探索和改进,FUT技术已日臻完善,并在临床中得到广泛应用[1-2];尤其在发际线、胡须、阴毛、眉毛和睫毛等缺失的治疗方面取得了较好的效果[3-6].但供区不足、手术效率低是FUT技术存在的两大问题.     

毛囊黑色素干细胞在色素沉着障碍性疾病治疗中的前景

毛囊黑色素干细胞(McSCs)是一种特殊的干细胞群, 存在于毛囊隆突区中, 调控含色素毛囊的再生。复杂的外部微环境和宏观环境结合内部因素, 调控着生理性毛发再生和病理损伤中McSCs的静止和激活。McSCs的研究是一个新兴领域, 有助于探索正常黑色素细胞发育的潜在分子机制, 以及干细胞系统缺陷所导致的疾病病理过程。该文通过综述McSCs生存、维持、增殖分化的重要调节因子和信号通路, 以及在色素沉着障碍性疾病治疗中的应用前景, 展示McSCs在细胞治疗和再生医学中作为通用供体的巨大潜力。     

大鼠胚胎皮肤毛囊形态发生与Wnt-10b/β-catenin的表达

目的 研究大鼠胚胎皮肤毛囊的形态发生与Wnt-10b/β-catenin信号的表达情况.方法 取不同胎龄的SD大鼠胚胎及1～3 d新生鼠的背部皮肤,采用石蜡包埋、切片、HE染色,对SD大鼠胚胎毛囊的发生过程及其形态学特征进行描述,同时应用荧光免疫组化染色,观察Wnt-10b及β-catenin在毛囊发育过程中的时空表达.结果 在第14、15天时,胚胎背部皮肤逐渐南单层向多层转化,毛囊最早形态发生的时间约为胚胎第15天后期、第16天早期;毛囊基板形成之前,Wnt-10b及β-catenin均匀表达于表皮;当毛囊基板形成后,Wnt-10b及β-catenin仅仅强表达于基板;随着毛囊继续发育,Wnt-10b及β-catenin的表达局限于紧贴"真皮浓缩"的毛囊上皮及毛基质细胞;毛囊之间的表皮未见明显表达.结论 SD大鼠背部皮肤毛囊的形态发生很可能始于胚胎第15天后期、第16天早期;Wnt-10b及β-catenin参与调控毛囊发生的启动和进一步发育.     

α-黑素细胞刺激素在自体中厚移植皮片中的表达

目的检测α黑素细胞刺激素(αmelanocytestimulatinghormone,αMSH)在人体自体中厚移植皮片中的表达,并与自身正常皮肤作对照,初步认识αMSH在自体移植皮片过度色素沉着中的作用。方法利用免疫组织化学方法,检测人体自体中厚移植皮片与原供区及受区周围自体正常对照皮肤中αMSH的蛋白表达,并行统计学分析。结果αMSH的表达定位于表皮基底部黑素细胞、角朊细胞胞浆,在大部分自体中厚移植皮片中呈强阳性表达,表达率为611%,与自体正常对照皮肤中的表达差异有非常显著性意义(P<001);αMSH在受区与原供区周围正常对照皮肤中的表达差异无显著性意义。结论αMSH在自体中厚移植皮片中的表达较在自体正常对照皮肤中显著增高,在自体移植皮片过度色素沉着中起重要调控作用。     

角蛋白在头皮中的分布及其在干细胞研究中的意义

目的：研究不同类型角蛋白（Cytokeratin，CK）在头皮及毛囊结构中表达分布情况。方法：将头皮病理切片和游离培养的毛囊使用不同类型角蛋白抗体进行免疫组化染色，检测角蛋白的分布情况。结果：CK15主要分布在毛囊隆突部，部分毛囊外根鞘最外层也有一定的表达；CK19主要分布在汗腺、毛囊外根鞘最外层和皮肤的基底层；CK16在表皮层和毛囊外根鞘均有阳性表达；CK10主要分布在头皮表皮的基底上层和皮脂腺腺泡的最外层。结论：不同类型角蛋白在头皮和毛囊结构中具有明显差异性，CK19和CK15阳性表达细胞可能具有干细胞特性。     

自体毛囊种植修复鬓角缺损

目的:探索应用自体毛囊种植修复鬓角缺失的效果。方法:对67例患者,采用枕后安全区头皮,分离成含1～2个毛囊单位的移植物,利用针头穿刺打孔或植发器将毛发移植到缺损处以修复形态,每位患者每侧移植200～600个毛囊单位(U),植入密度为30～40U/cm2。结果:植入毛发生长良好,再造鬓角形态及方向与正常较为一致,效果满意。结论:自体毛囊移植可按设计形态种植修复鬓角形态,具有形态好,创伤小的特点,是修复小面积及形态不规则的鬓角缺损的最佳选择。     

男性雄激素源性脱发患者毛囊干细胞增殖和凋亡的初步研究

目的:了解男性雄激素源性脱发(androgenetic alopecia,AGA)患者毛囊干细胞增殖和凋亡情况.方法:对来自15例男性AGA患者和3例正常人的头皮,采用双重免疫荧光的的方法检测毛囊干细胞增殖和凋亡.结果:CK15标记的毛囊干细胞中增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)阳性细胞率由高到低依次为:正常对照组、患者枕部、脱发过渡区和脱发区,除脱发过渡区与脱发区间比较无显著性差异(P＞0.05)外,其它各组间比较,均有显著性差异(P＜0.05).各组毛囊中CK15阳性的细胞中均无TUNEL阳性细胞,TUNEL阳性细胞主要分布于内毛根鞘,总的TUNEL阳性细胞率在各组间无明显差异(P均＞0.05).结论:毛囊干细胞增殖活性下降可能参与男性AGA的脱发过程.     

自体单株毛囊种植修复眉毛部分缺损

目的:探索应用自体单株毛囊种植修复眉毛部分缺损的效果。方法:对35例女性患者,采用枕后安全区头皮,制成毛干长1cm的单株移植物,利用针头穿刺打孔将毛发移植到缺损处以修复形态,为了使形态协调一致,每侧眉毛中部种植30～40根毛发。结果:植入毛发生长良好,方向形态满意,移植毛发成活率在90%以上。结论:自体单株毛囊移植修复眉毛部分缺损是一个适宜的方法。     

自体单株毛发移植修复女先天性无阴毛或阴毛发育不良

目的探索应用自体毛发单株移植修复女先天性无阴毛或阴毛发育不良的效果。方法对12例成年女性患者,均采用切取枕后区包含全厚皮肤与完整毛囊的条形头皮组织,在手术放大镜下,将头皮条全部分割成1个个单株毛发备用。用规格为0．9mm×38．0mm的针头穿刺打孔,将单株毛发移植到外阴部以增补稀疏的阴毛和扩大分布面积,每例移植400700个单株毛发,阴毛分布形态多选用倒三角形或菱形,密度为阴阜部阴毛按20株／cm^2植入,然后向外扩散密度逐步减小,最少不低于10株／cm^2。结果随访9个月至2年,植人毛发生长良好,阴毛形态及方向和分布范围均与正常接近一致,效果满意。均1次手术成功无需进行2次加密治疗,枕后供区切口瘢痕不明显。结论用毛发移植术补足阴毛,方法简便,创伤小,外形自然美观,是目前补充阴毛不足或无阴毛的理想方法。     

大鼠毛囊细胞构建组织工程全层皮肤

目的:以大鼠毛囊细胞为种子细胞培养组织工程皮肤。方法:分离培养新生SD大鼠毛囊外根鞘细胞和真皮鞘细胞,以这两种细胞为种子细胞构建全层组织工程全层皮肤。结果:成功构建了具有表皮层和真皮层的组织工程皮肤。结论:毛囊细胞可以用作种子细胞来构建组织工程全层皮肤。     

创伤性毛囊新生:成年哺乳动物毛囊再生的新视角

目的综述近年来创伤性毛囊新生(wound-induced hair follicle neogenesis,WIHN)细胞来源及相关信号通路的研究进展。方法广泛查阅近年与WIHN相关的文献,从细胞来源、分子机制等方面进行总结讨论。结果WIHN是一种罕见的成年哺乳动物毛囊再生现象,新生毛囊细胞来源丰富,既有创面周围来源的毛囊干细胞,也有上皮来源的干细胞。WIHN分子机制复杂,是一种多种信号通路调控的再生过程,与免疫系统密切相关,免疫细胞及其产生的各种免疫因子为这一过程提供了适宜的条件。结论WIHN的细胞来源及分子机制等方面仍有许多未解决的问题,加强机制研究将加深对成年哺乳动物毛囊再生的了解,为皮肤功能性愈合提供新思路。     

游离毛囊体外培养模型构建及形态学检查的实验研究

目的：构建游离毛囊体外培养模型，观察离体培养人头皮毛囊形态变化。方法：在Williams E无血清培养基中，建立离体人头皮毛囊培养模型；通过倒置显微镜观察毛囊的形态变化；目镜测微器测量毛囊长度；3H-TdR掺入检测毛囊DNA合成率；组织学检测用冰冻切片光镜观察和电镜切片透射电镜观察。结果：毛囊有不同程度的生长，随时间后移形态结构由清晰逐渐变为模糊；冰冻切片HE染色后在光学显微镜下可清楚分辨出毛囊的结构；培养3天毛囊的内外根鞘中可见凋亡细胞，内皮根鞘较外皮根鞘明显多见。结论：在离体培养人头皮毛囊时，Williams E无血清培养基是合适的选择，该模型也是筛选促进或抑制毛发生长药物的良好模型；离体培养毛囊组织学检测用冰冻切片可以简化步骤；透射电镜可以用来观察离体培养的毛囊的形态和超微结构的变化，也可以用来协助观察细胞凋亡的状况。目镜测微器测量毛囊长度简单可行，辅以3H—TdR掺入则更为客观。