桥本甲状腺炎T细胞的免疫分型及其临床意义

目的:对3型桥本甲状腺炎(Hashimoto thyroiditis, HT)进行T细胞免疫分型,并分析其与滤泡损害程度的相关性,为临床诊治提供依据.方法:对136例细针穿刺(fine needle aspiration biopsy, FNAB)HT标本进行组织学观察并分型(L、P、O型),检测各型患者血清学指标(TPOAb、TGAb、TSH),以20例非毒性甲状腺肿作对照.对其中60例、23例FNAB HT标本分别进行免疫组织化学染色及流式细胞术检查,比较各型HT组织T淋巴细胞浸润程度及CD3 、CD4 、 CD8 T细胞分布情况.分析HT组织滤泡萎缩程度与T淋巴细胞浸润程度及分型的相关性.结果: FNAB组织学观察发现L型(n=58)、P型(n=28)滤泡萎缩程度比O型(n=20)严重(P＜0.05).免疫组化结果显示:L、P、O型HT组织T细胞表达率分别为 45%～60%、30%～50%、18%～35%.流式细胞术检测HT组织L型CD3 、CD4 、CD8 T细胞表达率分别为47%～67%、22%～38%、17%～27%;P型分别为34%～36%、16%～18%、11%～13%;O型分别为 33%～45%、16%～24%、12%～18%.L型滤泡萎缩程度与淋巴细胞浸润呈正相关(r=0.067),而O型 (r=-0.29)、P型 (r=-0.29)均与淋巴浸润呈负相关.结论:对FNAB标本进行T淋巴细胞免疫分型能直观反映HT变化程度,有助于临床诊治.     

移植免疫耐受中调节性B细胞与调节性T细胞的依赖性关系研究

目的 探讨在联合抗Tim-1/抗CD45RB抗体诱导的移植耐受中调节性B细胞(Bregs)与调节性T细胞(Tregs)的关系.方法 建立BALB/c小鼠到C57BL/6小鼠的同种胰岛移植长期耐受模型,将长期耐受小鼠(LTS)的B细胞过继输注至接受胰岛移植的B细胞缺陷小鼠(μMT-/-)体内,或加用抗CD25抗体(PC61)去除CD25+ Treg细胞,观察移植物的存活时间,用流式细胞仪检测Foxp3+ Treg数量变化.将CD4+ Foxp3-GFP-T细胞与Bregs细胞联合过继输注RAG小鼠体内,检测Foxp3+GFP+T细胞的扩增情况.建立小鼠皮肤移植模型,在双抗体治疗的同时加用抗CD20抗体祛除B细胞,观察对Tregs数量的影响.结果 继承性转移长期耐受小鼠的Bregs可诱导83.3％的小鼠长期耐受,但加用抗CD25单抗后,胰岛移植物在较短时间(MST=20 d)内全部被排斥;继承性转移长期耐受小鼠Bregs可使Tregs数量明显增加(P＜0.01),并且可诱导CD4+ Foxp-T细胞表达Foxp3;用抗CD20抗体祛除B细胞后,双抗体诱导的皮肤移植受体小鼠体内Tregs数量明显减少(P＜0.01).结论 在双抗体诱导的移植耐受中,Bregs可能通过促进Tregs生成而延长移植物的存活.     

调节性T细胞与乳腺癌的研究进展

乳腺癌是在世界范围内对女性健康威胁最大的疾病之一,每年恶性肿瘤的新发病例中乳腺癌占23％,且死亡人数中14％死于乳腺癌［1］,乳腺癌已经成为女性最常见的恶性肿瘤。因此,探索乳腺癌发生、发展的机制研究越来越深入。其中机体免疫细胞的状态与肿瘤细胞的增殖、侵袭和转移能力关系密切,尤其是T淋巴细胞,它可通过其表面的抗原特异性受体识别肿瘤表面抗原,最终杀伤肿瘤细胞。但其中有种亚型却扮演着相反的角色,就是调节性T细胞（regulatory T cells ,Tregs）, T regs是机体中重要的免疫调节细胞,它一方面通过对自身抗原的免疫耐受而防止自身免疫疾病的发生,另一方面通过免疫抑制作用促使肿瘤发生免疫逃逸［2］。 Tregs在肿瘤组织中表达,并聚集在肿瘤组织周围及外周血液中,抑制机体多种抗肿瘤免疫细胞,这种抑制作用主要通过细胞间直接接触,其次通过分泌细胞因子方式来发挥抑制作用。近年来越来越多的研究进一步证实,肿瘤组织中 T reg s的数量及活性与肿瘤的发生、发展有着密切的关系。本文将目前T reg s与乳腺癌关系的研究现状综述如下。     

维持性血液透析合并心力衰竭患者血清调节性T细胞与炎性因子的表达及意义

目的观察维持性血液透析合并心力衰竭(心衰)患者外周血调节性T细胞(Treg)和炎性因子的变化,了解Treg与血液透析患者心衰发生、发展的关系及意义。方法选取16例合并心衰的血液透析患者(血透心衰组)、20例无合并症的血液透析患者(血透普通组)和20例健康人(对照组),采用流式细胞术检测各组外周血中CD4+CD2+5CD1-27来定义其外周血中Treg表达的百分比,同时通过免疫比浊法和酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组的血清C-反应蛋白(CRP)、血清白介素-6(IL-6)、IL-10水平。结果血透普通组和血透心衰组的Treg较健康对照组减少,差异均有统计学意义(P<0.05);而两组的血清CRP、IL-6、IL-10水平较对照组均增高,差异有统计学意义(P<0.05)。血透心衰组的Treg及IL-10水平低于血透普通组,血清CRP、IL-6水平高于血透普通组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论血液透析合并心衰患者外周血Treg减少,炎性因子水平增加,改善血透患者的自身免疫功能,可能对改善炎症状态、纠正慢性心衰有积极作用。     

调节性T细胞在肿瘤免疫治疗中的研究进展

调节性T细胞具有免疫抑制功能,在肿瘤的发生、发展及转移中起重要作用。本文就调节性T细胞的基本情况、与肿瘤免疫的关系、调控调节性T细胞数量和功能方法的一些进展作简要的综述。     

补气化痰方对桥本甲状腺炎临床疗效及调节性T细胞的影响

目的:观察补气化痰方对桥本甲状腺炎(Hashimoto thyroiditis,HT)患者临床疗效、甲状腺功能、抗甲状腺自身抗体、调节性T细胞(regulatory T cell,Treg)水平的变化.方法:将桥本甲状腺炎中初发甲状腺功能减退的患者随机分为对照组(40例)与治疗组(40例),两组均采用左甲状腺素钠片作为基础治疗,治疗组加用补气化痰方治疗.治疗12周后,观察并比较两组患者的总体疗效、甲状腺功能、抗甲状腺自身抗体的改善情况,及CD4+T细胞FOXP3 mRNA的表达水平.结果:甲状腺功能改善程度两组相当(P>0.05),治疗组总有效率显著高于对照组,抗甲状腺自身抗体滴度下降水平优于对照组,治疗组CD4+T细胞FOXP3 mRNA的表达水平高于对照组,差异均有显著性意义(P<0.05).结论:补气化痰方治疗桥本甲状腺炎有较好的疗效,能改善患者临床症状,降低抗甲状腺自身抗体滴度,改善调节性T细胞水平,临床可推广应用.     

梅毒血清固定患者外周血调节性T细胞／T h17细胞平衡的变化

目的观察外周血调节性T(Treg)细胞/Th17细胞平衡在梅毒血清固定患者体内的变化。方法将2010年1月至2012年9月东南大学附属中大医院皮肤性病科诊治的梅毒血清固定患者28例纳入观察组,同期选取健康人30例纳入对照组,利用流式细胞仪分别检测外周血Treg细胞、Th17细胞、相关特异性转录因子Foxp3及ROR-γ表达情况并进行比较分析。结果观察组外周血Treg细胞比例[(34.02±12.31)%]高于对照组[(21.86±8.24)%,P<0.05],观察组外周血Th17细胞比例[(3.08±2.17)%]低于对照组[(9.13±1.96)%,P<0.01];观察组CD4+T细胞转录因子Foxp3的表达量[(2 946.35±995.63)]高于对照组(2 468.74±869.63,P<0.05),ROR-γ表达量(1 438.29±659.31)低于对照组(1 831.25±426.37,P<0.05)。结论梅毒血清固定患者外周血存在Treg细胞/Th17细胞失衡,这种机体细胞免疫抑制可能是导致梅毒患者产生血清固定的原因。     

血液系统恶性肿瘤患者CD4+CD25+调节性T细胞的变化及意义

目的 分析血液系统恶性肿瘤患者外周血CD4 CD25 调节性T细胞(简称CD4 CD25 Treg)比例变化,并探讨其意义.方法 采用流式细胞术检测32例急性白血病、11例淋巴瘤患者及15例正常健康对照者外周血CD4 CD25 Treg及CD4 CD25 Foxp3 Treg细胞的比例. 结果 血液系统恶性肿瘤患者外周血CD4 CD25 Treg比例明显高于正常对照[(3.86±1.56)% vs (1.98±0.63)%,P《0.01].同时血液系统恶性肿瘤患者外周血CD4 CD25 Foxp3 Treg比例为(3.71±1.01)%,显著高于正常对照[(1.13±0.32)%,P《0.01]. 结论 血液系统恶性肿瘤患者CD4 CD25 Treg比例增高可能是患者抗肿瘤免疫功能低下的重要原因之一.     

小鼠乳腺癌动物模型中调节性T细胞的动态检测及其实验意义

【摘要】 目的 分析小鼠乳腺癌实验动物模型中调节性T细胞(Tregs)的变化,并探讨其在肿瘤发生中的意义。 方法 建立小鼠乳腺癌动物模型。在肿瘤接种后1周、3周和6周3个不同时间点,流式细胞术（FACS）检测CD4+CD25+ 和CD4+ FOXP3+调节性T细胞在脾脏、引流淋巴结和肿瘤组织中所占的CD4+T细胞细胞的比例, CD4+T细胞中CD25+ FOXP3+双阳的表达情况,肿瘤组织中CD4+T细胞占肿瘤浸润T淋巴细胞（CD3+T）的比例。结果 与正常对照组比较,在小鼠乳腺癌动物模型中,脾脏和淋巴结中CD4+ T细胞占淋巴细胞的比例在荷瘤1周、3周和6周逐渐下降（P0. 05）。 结论 调节性T细胞在恶性肿瘤模型中表达增加,在肿瘤的发生发展中发挥重要作用。     

妊娠期高血压疾病妇女外周血调节性T细胞和辅助性T细胞表达分析

目的 分析妊娠期高血压疾病(PIH)妇女外周血调节性T细胞和辅助性T细胞表达变化。方法 连续选择近期住院确诊的PIH 妇女27例(PIH组),入选对象均接受了外周血调节性T细胞(CD+4CD+25 Treg 和CD+4CD+25 Foxp3+Treg)和辅助性T细胞(CD+3、CD+4、CD+8、CD+4/CD+8)检测,并与同期住院正常怀孕产妇 (对照组,20例)相同测试结果进行比较。结果 调节性T细胞数据中,PIH组血清CD+4CD+25 Treg和CD+4CD+25 Foxp3+ Treg水平明显低于对照组(P均<0.05～0.01)。辅助性T细胞中,PIH组血清CD+4/CD+8表达水平明显高于对照组,而CD+8表达水平则显著低于对照组(P均<0.05～0.01)。结论 PIH患者存在明确的外周血调节性T细胞和辅助性T细胞异常表达。     

糖尿病患者外周血FOXP3+调节性T细胞的检测及其临床意义

目的:探讨不同类型糖尿病患者外周血FOXP3+调节性T细胞表达的差异及其临床意义?方法:研究分为1型糖尿病组(n = 43)?2型糖尿病组(n = 16)和健康对照组(n = 19)?采用放射配体法检测糖尿病患者外周血中自身抗体:锌转运体8蛋白抗体(zinc transporter 8 antibody,ZnT8A)?谷氨酸脱羧酶抗体(glutamic acid decarboxylase antibody,GADA)和胰岛细胞抗体(islet cell antibody,ICA)?采用细胞膜打孔和三色荧光标记流式细胞术检测外周血CD4+T细胞群中CD4+CD25+FOXP3+T细胞所占百分比?CD4+CD25+T细胞所占百分比?结果:①1型和2型糖尿病患者的外周血中CD4+CD25+T细胞占CD4+T淋巴细胞的百分比均低于健康志愿者,差异有统计学意义(P < 0.05);②1型糖尿病患者的外周血中CD4+CD25+FOXP3+T细胞占CD4+T淋巴细胞的百分比低于健康志愿者和2型糖尿病患者,差异有统计学意义(P < 0.05);③1型糖尿病患者的病程与外周血CD4+CD25+FOXP3+T细胞数量?CD4+CD25+T细胞数量均无相关性?结论:1型糖尿病患者外周血FOXP3+调节性T细胞百分比下降,FOXP3+调节性T细胞数量的下降程度与病程无关?FOXP3+调节性T细胞可能参与了1型糖尿病的发生和发展,与2型糖尿病无显著相关性?FOXP3是调节性T细胞的特征性标志?     

直肠癌患者调节性T细胞的表达及其临床意义

①目的探讨直肠癌患者体内CD4^＋与CD25^＋调节性T细胞（treg）的含量及Fox码基因在treg中的表达覆其临床意义。②方法利用流式细胞仪检测15例直肠癌患者（观察组）术前外周血中调节性T细胞含量，同时采用RT—PCR技术检测FoxP，基因在直肠癌患者外周血treg细胞中的表达情况，并与15例健康志愿者（对照组）的外周血进行对比。③结果直肠癌患者外周血中调节性T细胞占CD4^＋T细胞总数的（11．12±0．57）％，显著高于健康对照组（8．77±0．66）％（P〈0．05）；FoxP3基因在直肠癌患者外周血调节性T细胞中呈现高表达（0．84±0．02）％，高于健康对照组的（0．76±0．03）％（P〈0．05）。④结论直肠癌患者外周血中treg的数量较正常人增高，同时伴随有FoxP，基因高表达，提示FoxP，基因可能对treg发生重要的调节功能。     

重症肌无力患者胸腺调节性T细胞的原位表达及意义

目的 探讨调节性T细胞(Tregs)在胸腺中的原位表达及其对重症肌无力(MG)发病的意义.方法 选取未行免疫抑制治疗的MG患者胸腺39例,对照组9例.用间接免疫荧光双标记方法对胸腺Tregs进行定位分析,借助图像分析软件定量分析.结果 (1)MG组和正常对照组胸腺组织的Tregs均表达在胸腺髓质细胞区.(2)胸腺生发中心的细胞高表达CD25,但CD4表达较弱.表明生发中心多数为B细胞集合.(3)生发中心周围调节性T细胞分布较少.(4)平均视野阳性细胞绝对数MG组(17±3)与对照组(18±4)差异无统计学意义(P>0.05),平均视野阳性细胞比例对照组(45%±7%)高于MG组(36%±7%)(P<0.05).结论 MG患者胸腺组织存在Tregs数量比例的减少,因该种细胞比例的减少引发的免疫调节及抑制功能的下降可能是MG的促发因素之一.     

调节性T细胞与内分泌疾病

调节性T细胞(Treg)是一群有调节功能的T细胞亚群,其具有免疫调节和抑制功能。CD4+CD25+Treg是Treg亚群的重要组分,Foxp3是其特征性细胞表面标志物。近年的研究认为,Treg与自身免疫性疾病密切相关,内分泌疾病的发生可能与Treg的数目及功能异常有关。该文就Treg与骨质疏松症、1型糖尿病、自身免疫性甲状腺疾病等内分泌疾病的关系进行综述。     

慢性乙型肝炎患者外周血调节性B细胞与调节性T细胞的表达频率及其相关性

目的：分析慢性乙型肝炎患者外周血IL-10＋CD19＋调节性B细胞（regulatory B cells,Breg）与CD4＋CD25^high调节性T细胞（regulatory T cells,Treg）的比例及两者的相互作用。方法：收集急性乙肝（acute hepatitis B,AHB）患者28例,慢性乙型肝炎（chronic hepatitis B,CHB）患者31例和健康体检者（健康组）25例。分离外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cells,PBMC）,经CpGODN2006和佛波酯体外作用后,流式细胞术分析Breg、Treg的表达及其相关性,ELISA检测培养上清IL-10水平。通过免疫磁珠剔除CD4＋CD25＋T细胞后分析Breg与Treg表达频率间的相关性。结果：CpGODN 2006和佛波酯作用后CHB组Breg和Treg百分率较AHB组和健康组均明显升高（Breg：P值分别为0．003和0．001;Treg：P值分别为〈0．001,0．005）,AHB组和健康组间两类细胞表达频率差异无统计学意义（Breg：P=0．796;Treg：P=0．227）;Spearman相关性分析显示CHB组Breg与Treg表达百分比存在正相关关系（r=0．50,P=0．004）,而AHB组和健康组无此相关性（r=-0．15,P=0．462;r=0．09,P=0．669）。CHB组IL-10表达高于AHB组和健康组（z值分别为-6．596、-6．373,P均〈0．001）,AHB组和健康组间差异无统计学意义（Z=-0．952,P=0．341）。Spearman相关性分析表明CHB组IL—10与Breg存在正相关关系（r=3．303,P=0．005）。CHB组患者Breg和IL-10的表达在剔除CD4’CD25’T细胞前后间的差异无统计学意义。结论：Breg和Treg在CHB患者中表达频率升高,Breg可能通过IL-10的分泌参与慢性乙肝的免疫调节,且该作用不依赖于Treg。     

下调Foxp3基因表达对人调节性T细胞功能的影响

目的 利用RNA干扰技术下调Foxp3表达,观察其对人CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)表型及功能的影响.方法 利用Foxp3 siRNA转染人CD4+CD25+Treg,荧光显微镜和流式细胞仪(FACS)检测转染效率,实时定量PCR和Western印迹分别鉴定Foxp3基因及Treg功能相关基因表达、Foxp3蛋白表达,细胞增殖实验检测Treg抑制功能,FACS测Treg表型标记,ELISA检测细胞因子表达.结果 Foxp3 siRNA转染人CD4+CD25+Treg效率为68%,与对照组相比,转染后的细胞Foxp3基因下调了61.4%(P<0.01),Foxp3蛋白表达较低,Treg功能相关基因和主要表型标记也较对照组有改变,差异有统计学意义.功能试验提示无论是在异种还是同种抗原刺激的淋巴细胞反应中,Foxp3 siRNA转染的Treg与对照组相比,对效应性T细胞的抑制作用较弱(异种抗原组83%比48%,P<0.05;同种抗原组65%比28%,P<0.01),且主要抑制性和效应性细胞因子的表达下降,差异有统计学意义.结论 Foxp3是人天然Treg 维持其抑制性功能的核心细胞内标志.

Abstract：

Objective To employ the technology of interfering RNA (RNAi) to identify the role of Foxp3 in the in vitro suppressive effect of human regulatory T cell (Treg) on effector T cells. MethodsExpanded human Treg were transfected with siRNA targeting Foxp3 genes. The transfection efficiency, the level of corresponding gene and its protein expression were measured by fluorescent microscopy, fluorescence-activated cell sorting (FACS), real-time PCR and Western blot respectively. The phenotypes of Treg were analyzed by FACS. The siRNA transfected Treg was then co-cultured with porcine PBMC or human PBMC-stimulated autologous CD4+CD25- T cells. Their proliferations were examined by WST-1. Treg and autologous CD4+CD25- T cell-related suppressive cytokines were assessed by ELISA. ResultsA 68% transfection efficiency in expanded Treg was achieved for Foxp3 siRNA. Real-time PCR revealed a 61.4% mRNA knockdown induced by siRNA targeting Foxp3 genes in Treg versus the control (P<0.01). Some Treg-associated surface markers were significantly altered versus the control. And the production of suppressive cytokines was lowered. These changes were correlated with the diminished Treg activity in suppressing the proliferation of effector CD4+CD25-T cells. There was 83% suppression by non-transfected Treg vs 48% suppression by Foxp3 siRNA transfected Treg in xeno-immune response (P<0.05);and 65% suppression by non-transfected Treg vs 48% suppression by Foxp3 siRNA transfected Treg in allo-immune response (P<0.01). Conclusion Foxp3 is a key intracellular marker for maintaining the phenotypes and functions of Treg.     

间歇性变应性鼻炎患者外周血调节性T细胞和白细胞介素17的变化

目的 观察不同时期间歇性变应性鼻炎(intermittent allergic rhinitis,IAR)患者外周血中调节性T细胞(regulatory T cell,Treg)和白细胞介素17(interleukin-17,IL-17)的变化,探讨Treg和IL-17在IAR中的作用.方法 采集19例IAR患者间歇期、发作期前及发作期外周静脉血,应用流式细胞术检测外周血Treg和IL-17水平,并与对照组进行比较.结果 IAR患者外周血中Treg和IL-17占外周血中CD4+T淋巴细胞的比例从间歇期至发作期逐步升高,但Treg均低于对照组(P＜0.05),IL-17在间歇期低于对照组(P＜0.05),在发作期高于对照组(P＜0.05).结论 Treg细胞数量或功能不足可能是IAR的主要原因,IL-17可能对IAR的发展起促进作用.     

COPD病人外周血CD4+CD25+调节性T细胞检测及意义

目的 检测慢性阻塞性肺疾病(COPD)病人外周血中CD4+ CD25+调节性T细胞( Treg)的频率及血清γ-干扰素(IFN-γ)、白细胞介素4(IL-4)浓度,探讨Treg在COPD发病中的免疫调节作用.方法 采用流式细胞仪检测45例COPD急性发作期病人、33例COPD临床缓解期病人以及25例健康人外周血中Treg亚群的频率,ELISA法检测血清中IFN-γ、IL-4浓度.结果 COPD病人急性发作期组IL-4浓度较临床缓解期组和健康对照组显著增高,临床缓解期组低于健康对照组,差异有统计学意义(F= 192.86,q=11.63～27.66,P＜0.01); COPD病人急性发作期组IFN-γ浓度高于临床缓解期组和健康对照组,差异有统计学意义(F=35.53,q=9.72、10.13,P＜0.01),而临床缓解期组与健康对照组差异无统计学意义(q=1.13,P＞0.05);临床缓解期组IFN-γ/IL-4比值最高,急性发作期组次之,健康对照组最低,差异有统计学意义(F=230.95,q=7.79～30.10,P＜0.01);CD4+ CD25+Treg频率在COPD急性发作期组高于临床缓解期组和健康对照组,而临床缓解期组低于健康对照组,差异有显著性(F= 146.08,q=8.68～12.72,P＜0.01).结论 COPD病人存在Th1/Th2动态变化,急性发作期以Th2免疫为主,临床缓解期则以Th1免疫为主;Treg在COPD的发生发展中担负着重要的免疫调节作用.     

29例免疫性血小板减少性紫癜中调节性T细胞/Th17细胞的改变

目的探讨调节性T细胞/Th17细胞在免疫性血小板减少性紫癜(ITP)患者中的表达及意义。方法应用流式细胞术检测29例ITP患者和28例正常人外周血中的CD4+CD25+T细胞、CD4+CD25highT细胞(Treg)、CD4+IL-17A+T细胞(Th17)占总CD4+T细胞的比例,并评价其与血小板计数的相关性;酶联免疫吸附(ELISA)法测定血浆中IL-10I、L-17水平;RT-PCR法检测外周血Foxp3 mRNA、RORc mRNA的表达水平。结果与正常对照组比较,ITP患者组外周血CD4+CD25+T/CD4+T细胞比例升高(P<0.05)、Treg/CD4+T细胞比例明显下降(P<0.05),Th17/CD4+T细胞比例组间比较差异无统计学意义(P>0.05),Treg/Th17细胞比值明显降低(P<0.05)。ITP患者血浆中IL-10水平明显低于正常对照组(P<0.05),而IL-17水平与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。ITP患者组较正常对照组外周血中转录因子Foxp3 mRNA水平明显降低(P<0.05),而RORc mRNA表达则较对照组明显升高(P<0.05)。Treg/CD4+T细胞比例及Treg/Th17细胞比值在效佳组显著高于效差组(P<0.05),Th17/CD4+T细胞比例效佳组显著低于效差组(P<0.05)。治疗前血小板计数与Treg/CD4+T细胞比例、Treg/Th17细胞比值成正相关(P<0.05),而与Th17/CD4+T细胞比例则无显著相关性(P>0.05)。结论 ITP患者存在Treg/Th17细胞平衡紊乱,T细胞亚群的功能失调可能与ITP免疫发病机制有关,并与糖皮质激素治疗效果有关。