先天性膜性白内障一家系致病基因的遗传分析

目的 分析一个先天性白内障家系的遗传规律,对其突变基因进行初步研究.方法 选取一先天性膜性白内障家系,对家系成员进行临床检查并采集静脉血.标准饱和酚/氯仿抽提法提取DNA,选取多态性微卫星遗传标记,合成引物,聚合酶链反应,聚丙烯酰胺凝胶电泳,基因分型,等位基因共享分析法对已知候选基因进行排除性定位.结果 该家系为常染色体显性遗传性先天性白内障家系.其致病基因与D22S315联系紧密,重组发生在以D22S303和D22S1167为上下边界的范围内.对该范围内已知的先天性白内障致病基因CRYBB1、CRYBB2、CRYBB3、CRYBA4进行DNA直接测序,未发现突变.结论 该家系致病基因定位于22q11.2～q12.1的2.4 Mbp范围内,其致病基因与已知基因座不同.该范围内可能存在导致先天性膜性白内障的新的致病基因.     

常染色体显性遗传先天性核性白内障一家系致病基因的初步定位

目的 初步定位一个显性遗传性先天性核性白内障家系的致病基因.方法 在已知与先天性白内障相关的致病基因附近选择合适的微卫星标记,基因组PCR扩增后进行基因分型,由LINKAGE软件处理,对该家系进行连锁分析.结果 在22q的D22S258、D22S315、D22S1163显示最大LOD值2.11（重组率θ=0）.单倍型分析提示致病基因位于D22S1174～D22S270大约18.5 Mbp的遗传距离.结论 该家系的致病基因定位于22q11.2～22q13,该范围内的CRYBB1、CRYBB2、CRYBB3、CRYBA4为其可能致病基因.     

常染色体显性先天性白内障一家系致病基因的连锁分析

背景先天性白内障约1／3的病例是由遗传所致,已发现遗传性白内障有着极为明显的遗传异质性,了解先天性白内障的致病基因对其基因治疗极为重要。目的分析一个具有常染色体显性遗传特点的先天性白内障家系的临床表型特征,进行已知致病基因的筛查定位。方法对遗传性先天性白内障一家系共16名成员眼部进行详细的临床检查,包括6例患者,确定为本家系白内障患者的临床表型。收集其中11名家系成员的血液样本提取DNA,包括3名正常家系成员及其配偶、5例患者。利用连锁分析进行排除定位,并采用Schuelke报道的新方法,只合成普通引物及一种荧光标记的通用引物M13,进行聚合酶链反应（PCR）,对连锁区域内的候选基因进行基因序列分析。结果本家系的白内障遗传方式符合常染色体显性遗传特征。基因连锁分析表明,在D22S315得到最高LOD值为1．20,在D16S3068得到LOD值为0．6。CRYBB2基因所有编码区及外显子与内含子交界处未发现基因序列突变。结论本家系初步排除了CRYBB2基因与此家系先天性白内障的相关性。对这个家系的基因定位需要更进一步的全基因组扫描,以发现致病基因在染色体上的可疑区间。连锁分析中进行微卫星位点的PCR扩增时,利用合成荧光标记的通用引物M13,可以显著降低成本,并取得同样的实验结果。     

先天性白内障一家系全基因组扫描基因定位及候选基因序列分析

目的应用全基因组扫描、连锁分析的方法对常染色体显性遗传性先天性白内障（ADCC）一家系进行基因定位、寻找候选基因并进行突变筛查。方法提取该家系成员外周血DNA,进行全基因组扫描。在ABI 3130-avant全自动遗传分析仪上读取370对微卫星标记物的等位基因片段大小,并采用Genescan 3.1和Genotyper 2.0软件进行两点法计算LOD值并构建单体型。根据连锁分析的结果,对该区域内在晶状体中呈高表达,且对维持晶状体纤维细胞的分化状态起重要作用的基因-BFSP1进行直接的序列分析。结果该家系的致病基因位于20p12-20p11.2的13.96 cm区域内。在该区域内的基因-BFSP1全部外显子及外显子与内含子交界处均未发现任何突变。结论首次将一常染色体显性遗传绕核型先天性白内障家系的致病基因定位于20p12-20p11.2的13.96 cm区域内。     

花冠状常染色体显性遗传性先天性自内障致病基因初步定位

目的 初步定位具有花冠状表型的常染色体显性遗传性先天性白内障一家系的致病基因.方法 收集家系成员的资料,提取基因组DNA,据文献报道在已知先天性白内障致病基因和位点附近,选择合适的短串联重复序列多态性标记,使用LINKAGE 5.1软件计算标准LOD值,对此家系进行连锁分析.结果 此表型先天性白内障的致病基因定位在3q22.3-q25.2,即D3S3612至D3S1594之间15.2 cM范围内.在D3S1569和D3S3599处,得到与致病基因住点连锁的最大LOD值均为3.01(重组率=0.00).结论 该花冠状常染色体显性遗传性先天性白内障致病基因初步定位在第3对染色体上3q22.3-q25.2.     

先天性白内障一家系致病基因的排除性定位

目的 明确一个国人常染色体显性先天性白内障（ADCC）家系致病基因的染色体位点是否位于已知的22个非综合征型ADCC致病位点内，从而初步定位该ADCC家系致病基因的染色体位点。设计 家系遗传研究。研究对象 一个先天性白内障家系。方法 对26例家系成员中的16例进行临床检查、采集静脉血样、提取基因组DNA；在已知的22个非综合征型ADCC致病位点内，分别选取3-6个多态性微卫星标记，对该ADCC家系进行遗传连锁分析。主要指标 先天性白内障临床表型、Lod值。结果 该家系患者为晶状体前囊膜及前囊膜下混浊；所有多态性微卫星标记与致病基因两点间的Lod值均≤-2，证实微卫星标记所在的染色体区域与该ADCC家系的致病基因不连锁。结论 该ADCC家系致病基因的染色体位点不在已知的22个非综合征型ADCC致病位点内，可能是一个新的致病基因导致了该家系的临床表型。     

常染色体显性遗传性白内障一家系致病基因的研究

目的:对一个4代常染色体显性遗传先天性白内障家系进行致病基因研究。方法:对15例家系成员(8例患者,7例非患者)进行眼部检查,采集静脉血,提取基因组DNA,选取已报道的与常染色体显性遗传性白内障相关的19个位点附近的微卫星标记,PCR扩增后进行基因型分析,用连锁分析进行定位;对提示连锁的标记计算Lod值,并构建单体型;对定位区域内已知候选基因测序。结果:该家系患者表型为绕核性白内障;患者在17q11-12有共享基因型,该位点微卫星标记与致病基因间的两点连锁最大Lod值为2.71,证实该位点与该家系的致病基因连锁;测序未发现CRYBA1/BA3突变。结论:该家系的致病突变不是由于CRYBA1/A3外显子和调控区突变,可能是未被发现基因突变或机制参与该家系的发病。     

先天性核性白内障家系致病基因的定位与候选基因突变检测

目的 对中国一常染色体显性遗传性先天性核性白内障家系进行致病基因的定位与候选基因突变检测.方法 实验研究.采集家系成员的外周静脉血,提取基因组DNA.用约400个中密度微卫星标记进行基因扫描,平均遗传距离10厘摩(cM).利用LINKAGE软件包进行连锁分析.在阳性定位区域内选取更为精细的微卫星标记进行精细定位.利用CYRILLIC软件进行单体型分析,确定候选基因所在染色体区域.候选基因直接测序检测基因突变.结果两点间连锁分析在微卫星标记D2S325处获得最大对数优势计分(LOD)值Zmax=2.29(θmax=0.00).精细定位和单体型分析将致病基因定位于微卫星标记D2S117和D2S2382之间,遗传距离约19.04 cM,染色体位置为2q32.3-q35.候选基因直接测序发现CRYGC基因第3外显子第470碱基一个G→A的点突变.结论本研究将我国一个先天性核性白内障家系的致病基因定位于2号染色体2q32.3-q35约19.04cM区域内,并在CRYGC基因发现一个新的点突变与此家系共分离.(中华眼科杂志,2009,45:234-238)     

Avellino角膜营养不良家系致病基因的定位研究

目的：对收集到的一个常染色体显性遗传性Avellino角膜营养不良家系的致病基因进行初步定位。
　　方法：采集家系中所有成员的外周静脉血,从中提取基因组DNA样本。在热点区域内选取微卫星标记进行基因扫描,分别利用LINKAGE软件和CYRILLIC软件进行连锁分析及单体型分析,以确定候选基因所在的染色体区域。
　　结果：该Avellino角膜营养不良家系的连锁分析结果在D5 S396和D5 S393这两个微卫星标记处获得最大优势对数计分(LOD)值,Zmax=3.01(θ=0.00)。单体型分析将致病基因定位于微卫星标记D5 S808和D5 S638之间。
　　结论：该Avellino角膜营养不良家系的致病基因初步定位于染色体5q上的遗传距离约为11.2厘摩( cM)的一段区域内。     

常染色体显性遗传性白内障一家系的临床遗传学及基因定位研究

目的 鉴定导致一个4代遗传性核性白内障大家系的遗传学缺陷.方法 详细收集家族史及临床资料.提取所有家系成员外周血DNA,应用微卫星标记进行基因型建立,并应用连锁分析软件包进行连锁分析.结果 在微卫星标记D1S1 156(LOD score[z]=2.36,recombination fraction[θ]=0.00)和D1S514(LOD score[z]=2.12,recombination frac-tion[θ]=0.00)得到有意义的连锁结果 .单倍体图形的建立显示致病基因位于D1S2 888和D1S3 466之间40 Mb的区域内.该区段内含有位于1q21-25编码缝隙连接蛋白50的GJA8.结论 本研究家系的遗传性核性白内障发生符合常染色体显性遗传规律,并将导致这个大家系发生常染色体显性遗传性白内障的致病基因定位在1q21-25的40 Mb范围内.     

晶状体蛋白βB1基因错义突变引起常染色体显性遗传性白内障

目的对河北汉族一个四代先天性核性常染色体显性遗传白内障家系进行基因分析,了解此家系在候选基因上是否存在突变位点。方法该家系22名成员（包括患者7人,非患者15人）知情同意进人本研究,并接受全面的眼部及全身检查,以排除白内障以及外眼部及全身疾患。该家系成员中患病者经眼部裂隙灯检查发现晶状体均为核性混浊。采集22名家系成员的外周静脉血,提取基因组DNA。选择国内外已报道的与先天性核性白内障发生相关的7个候选基因（CRYBA3/A1、CRYBB1、CRYBB2、CRYGD、GJA3、GJA8和MIP）,设计引物使聚合酶链反应扩增的片段覆盖候选基因外显子,对扩增产物进行测序和序列分析,寻找突变位点。结果发现编码晶状体蛋白Βb1的基因（CRTBB1）第4外显子一个等位基因的第457个碱基发生错义突变C＆gt;A,形成杂合子,导致其编码蛋白第129位氨基酸由丝氨酸（S）转变为精氨酸（R）,其余外显子的碱基序列与GenBank数据库中的正常序列一致。结论该家系的核性先天性白内障是由于CRYBB1基因外显子4的错义突变C＆gt;A引起。     

晶状体蛋白βB2基因突变导致常染色体显性遗传先天性白内障

目的定位常染色体显性遗传先天性粉尘状核性白内障一家系的致病基因。方法收集该家系资料,针对与常染色体显性遗传先天性白内障发病相关的14个热点致病基因设计引物,对此4代先天性白内障家系进行热点突变位点的分析,了解是否有相应的改变。结果此家系患者编码人类晶状体蛋白的基因βB2的第6外显子存在一个C→T突变,此突变导致终止密码子提前出现。该基因的第2外显子的第40个核苷酸存在A/T的单核苷酸多态性。结论编码人类晶状体蛋白的基因βB2是此先天性白内障家系的致病基因。     

一特殊表型的常染色体显性遗传先天性白内障家系致病基因的筛选与鉴定

背景遗传因素是先天性白内障的主要致病因素之一,致病基因的筛查是研究先天性白内障发病分子机制的重要步骤。目的明确一结晶样晶状体混浊的先天性常染色体显性遗传白内障（ADCC）家系的致病基因。方法收集山西省榆社县一个四代先天性结晶样混浊白内障家系22名成员,其中患者10例。在获得知情同意后,该家系成员进行家系调查以确定遗传方式。经裂隙灯显微镜检查和常规眼科临床检查确定表型。采集其中17例家系成员的外周静脉血5ml并提取DNA,ADCC的17个已知致病基因周围选取22个荧光标记的微卫星,通过对微卫星标志物的扩增和基因型分析对该家系进行基因两点连锁分析,并计算对数优势评分（LOD）值。对筛选的候选基因进行直接测序分析。结果该家系患者晶状体混浊表型非常类似,家系分析表明为四代垂直遗传,符合单基因ADCC的特点。基因连锁分析提示,该家系与微卫星D2S325位点和D2S2358位点连锁,最大LOD值分别为1．20（0=0）和0．22（0=0）,位于此区域内的CRYGD基因测序后发现一个已经报道的错义突变c．C70A（p．P23T）。结论CRYGD基因P23T突变是该家系结晶样晶状体混浊的致病原因。     

Homozygous CRYBB1 deletion mutation underlies autosomal recessive congenital cataract

PURPOSE: Some 30% of cases of congenital cataract are genetic in origin, usually transmitted as an autosomal dominant trait. The molecular defects underlying some of these autosomal dominant cases have been identified and were demonstrated to be mostly mutations in crystallin genes. The autosomal recessive form of the disease is less frequent. To date, only four genes and three loci have been associated with autosomal recessive congenital cataract. Two extended unrelated consanguineous inbred Bedouin families from southern Israel presenting with autosomal recessive congenital nuclear cataract were studied. METHODS: Assuming a founder effect, homozygosity testing was performed using polymorphic microsatellite markers adjacent to each of 32 candidate genes. RESULTS: A locus on chromosome 22 surrounding marker D22S1167 demonstrated homozygosity only in affected individuals (lod score > 6.57 at theta = 0 for D22S1167). Two crystallin genes (CRYBB1 and CRYBA4) located within 0.1 cM on each side of this marker were sequenced. No mutations were found in CRYBA4. However, an identical homozygous delG168 mutation in exon 2 of CRYBB1 was discovered in affected individuals of both families, generating a frameshift leading to a missense protein sequence at amino acid 57 and truncation at amino acid 107 of the 252-amino-acid CRYBB1 protein. Denaturing [d]HPLC analysis of 100 Bedouin individuals unrelated to the affected families demonstrated no CRYBB1 mutations. CONCLUSIONS: CRYBB1 mutations have been shown to underlie autosomal dominant congenital cataract. The current study showed that a different mutation in the same gene causes an autosomal recessive form of the disease.     

*常染色体显性先天性缝合状白内障家系致病基因的定位

目的对我国一常染色体显性先天性缝合状白内障家系进行致病基因的定位。方法采集家系成员外周静脉血提取基因组DNA。选用美国Applied Biosystems公司提供的约400个遗传标记物进行基因扫描。数据经Linkage软件包进行连锁分析,初步确定致病基因所在染色体区域。在阳性区域内选取更高密度的荧光标记物进行精细扫描,用Cyrillic软件进行单体型分析。结果两点间连锁分析在D3S1279处获得最大对数优势记分（LOD）值Zmax=2．32（θmax=0．00）。通过精细扫描和单体型分析将致病基因定位于D3S1267和D3S1614之间约38．6厘摩（cM）区域内。结论先天性缝合状白内障家系的致病基因位于3号染色体3q21．1-q26．2约38．6cM区域内。（中华腥科杂志,2006,42：908—912）     

先天性眼组织缺损一家系基因排除定位研究

目的对1个3代常染色体显性遗传性先天性眼组织缺损家系进行致病基因的定位。方法对家系所有成员进行详细的临床检查,排除其他系统疾患。提取家系成员外周血DNA,选取20个位于4、7、10、11号染色体上已知与先天性眼组织缺损相关的4个致病基因及已知基因位点20q13.1附近的微卫星标记物进行多重PCR扩增,经ABI3130型遗传分析仪,Genscan2.1收集数据,Genotyper2.1进行基因分型,Linkage软件计算两点LOD值。研究过程遵循赫尔辛基宣言。结果未发现所选微卫星位点与该家系疾病表型共分离,LOD值均为负值。致病基因与已知的先天性眼组织缺损候选基因不存在连锁关系。结论该家系的遗传与目前已知的致病基因无关,是否存在新的致病基因有待进一步研究。     

Evidence of clinical and genetic heterogeneity in autosomal dominant congenital cerulean cataracts

Autosomal dominant cerulean cataracts (ADCC) have previously been mapped to two loci: one on chromosome 17q24 and the other on chromosome 22q11.2–q12.2, which includes the ß-B2 crystallin (CRYBB2) candidate gene. Using polymorphic markers in these regions (D17S802, D17S836, D17S1806 and CRYBB2, D22S258) for linkage analysis, we excluded these loci in a large Moroccan family presenting with an unusual form of ADCC with early onset of lens opacities and rapid evolution. This finding confirms the clinical and genetic heterogeneity of autosomal dominant congenital cerulean cataracts.     

Evidence of clinical and genetic heterogeneity in autosomal dominant congenital cerulean cataracts

Autosomal dominant cerulean cataracts (ADCC) have previously been mapped to two loci: one on chromosome 17q24 and the other on chromosome 22q11.2-q12.2, which includes the beta-B2 crystallin (CRYBB2) candidate gene. Using polymorphic markers in these regions (D17S802, D17S836, D17S1806 and CRYBB2, D22S258) for linkage analysis, we excluded these loci in a large Moroccan family presenting with an unusual form of ADCC with early onset of lens opacities and rapid evolution. This finding confirms the clinical and genetic heterogeneity of autosomal dominant congenital cerulean cataracts.