多西环素与地塞米松抑制碱烧伤大鼠角膜新生血管的对比研究

目的 对比多西环素、地塞米松对碱烧伤大鼠角膜新生血管的抑制作用.方法 健康SD大鼠48只,随机分为对照组、多西环素组、地塞米松组,每组各16只.建立角膜碱烧伤模型后,分别予眼液溶媒、5g·L-1 多西环素眼液、1g·L-1地塞米松眼液点眼,每天4次.于碱烧伤后3d、7d、14 d、21 d裂隙灯显微镜下观察,计算炎症指数和角膜新生血管面积.结果 3d、7d多西环素组、地塞米松组结膜充血、角膜水肿较对照组轻,炎症指数多西环素组分别为0.45±0.03、0.22±0.14,地塞米松组分别为0.50±0.14、0.22 ±0.07,炎症指数均明显低于对照组(均为P＜0.05),多西环素组、地塞米松组间差异无统计学意义(P ＞0.05);14 d、21 d地塞米松组炎症指数分别为0.44±0.30、0.47±0.19,显著高于多西环素组(0.04±0.06、0.19±0.11),差异均有统计学意义(均为P＜0.05).多西环素组、地塞米松组各时间点角膜新生血管面积小于对照组(均为P＜0.05),3d、7d地塞米松组角膜新生血管面积小于多西环素组(均为P＜0.05),14 d、21 d两组比较差异均无统计学意义(均为P＞0.05).地塞米松组前房出血12.5％,对照组为43.8％,多西环素组为6.3％.对照组角膜溃疡5眼,地塞米松组为8眼,多西环素组为1眼.除多西环素组无一眼发生眼内炎外,余两组均有眼内炎发生.结论 碱烧伤后短期内地塞米松抑制大鼠角膜新生血管的作用强于多西环素,但长期效果后两者无显著差异.     

多西环素对碱烧伤大鼠角膜组织中NF-κB和bcl-2表达的影响

目的 研究多西环素作用下碱烧伤大鼠角膜组织中核因子κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)和抗凋亡因子bcl-2表达情况,探索多西环素诱导炎症细胞凋亡的机制. 方法 制备SD大鼠(64只,64眼)一侧眼角膜碱烧伤动物模型,以3g·L-1多西环素眼液滴眼为实验组(32只,32眼),以溶媒滴眼为阴性对照组(32只,32眼).于角膜碱烧伤后第3天、第7天、第14天、第21天分别取下烧伤侧角膜组织行荧光定量RT-PCR,检测角膜组织中bcl-2基因的表达情况,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测角膜组织中NF-κB的表达情况.结果 RT-PCR检测显示:烧伤后第3天、第7天、第14天阴性对照组bcl-2 mRNA的相对表达量分别为0.87±0.15、0.91±0.14、0.99±0.13,第3天、第7天、第14天多西环素组bcl-2 mRNA的相对表达量分别为0.30±0.15、0.22±0.08、0.42±0.06,多西环素组与阴性对照组相比bcl-2 mRNA表达显著下降(均为P＜0.05).ELISA检测显示:角膜碱烧伤后第3天、第7天阴性对照组NF-κB蛋白相对含量分别为(45.87±1.15)ng·L-1、(47.52±2.34)ng·L-1,第3天、第7天多西环素组NF-κB蛋白相对含量分别为(23.30±2.15)ng·L-1、(24.96±7.14)ng·L-1,角膜碱烧伤后第3天、第7天时多西环素组NF-κB与阴性对照组相比表达有显著下降(均为P＜0.05).角膜烧伤后第3天、第7天时NF-κB蛋白表达量与bcl-2 mRNA相对表达量呈明显正相关(r =0.746,P＜0.05;r =0.772,P＜0.05).结论 多西环素作用于碱烧伤大鼠角膜可下调NF-κB、bcl-2基因的表达,这可能是多西环素诱导炎症细胞凋亡、减轻炎症反应的机制之一.     

注射用盐酸多西环素对兔角膜新生血管的抑制作用

目的　研究基质金属蛋白酶抑制剂盐酸多西环素对兔角膜新生血管（corneal neovascularization,CNV）生长的影响。方法　成年大耳白兔33只（66眼）,随机分为对照组、碱烧伤组和多西环素组。对照组3只（6眼）不做处理。剩余30只（60眼）利用1 mol·L^-1NaOH滤纸片建立双眼碱烧伤模型,右眼为多西环素组,左眼为碱烧伤组。碱烧伤组不给予药物治疗,多西环素组隔日结膜下注射0.1 mL注射用盐酸多西环素（10 g·L^-1）。观察兔CNV的生长情况,应用免疫组织化学化法检测角膜组织中血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）、基质金属蛋白酶-2（matrix metalloproteinase-2,MMP-2）、组织型金属蛋白酶抑制剂-2（tissue inhibitors of metalloproteinase-2,TIMP-2）的表达情况。结果　造模后3 d,可见碱烧伤组和多西环素组CNV长入透明角膜。造模后4 d、7 d、14 d、21 d,多西环素组CNV的面积分别为（6.15±2.85）mm²、（14.39±4.04）mm²、（18.07±5.74）mm²、（19.44±6.95）mm²,碱烧伤组CNV的面积分别为（17.00±4.60）mm²、（37.93±6.91）mm²、（42.25±9.32）mm²、（38.81±4.87）mm²,各时间点多西环素组CNV的面积均明显小于碱烧伤组（均为P<0.05）。造模后1 d、4 d、7 d、14 d、21 d,多西环素组角膜上皮层VEGF灰度值分别为167.74±10.59、140.14±12.14、128.69±9.21、103.06±8.29、176.16±9.72,碱烧伤组角膜上皮层VEGF灰度值分别为129.79±10.97、100.51±21.73、81.38±9.98、62.54±10.30、148.81±8.65,造模后各个时间点多西环素组VEGF的表达均明显少于碱烧伤组（均为P<0.05）。造模后4 d、7 d、14 d,多西环素组角膜上皮层MMP-2灰度值分别为83.50±14.81、123.42±16.20、110.90±8.98,碱烧伤组角膜上皮层MMP-2灰度值分别为65.27±12.84、91.31±13.22、94.28±6.46,造模后4 d、7 d、14 d多西环素组角膜上皮层MMP-2表达均明显低于碱烧伤组（均为P<0.05）。造模后21 d,角膜上皮层TIMP-2的表达最强,但造模后多西环素组角膜上皮层TIMP-2表达和碱烧伤组表达强度相似,两组比较差异无统计学意义（P>0.05）。结论　VEGF、MMP-2、TIMP-2在CNV发生发展中发挥着重要的调控作用,盐酸多西环素可通过抑制基质胶原纤维的降解来降低炎症反应,并通过抑制角膜碱烧伤后兔角膜组织中VEGF、MMP-2的表达,进而抑制CNV的发生发展。     

共聚焦显微镜观察人羊膜匀浆提取液对大鼠碱烧伤后角膜超微结构的影响

目的：通过角膜共聚焦显微镜活体动态观察人羊膜匀浆提取液对大鼠角膜碱烧伤后角膜超微结构的影响,探讨羊膜匀浆提取液应用于角膜碱烧伤后的临床价值及作用机理。方法 SD大鼠40只（40只眼）,通过1 mol/L的氢氧化钠（ NaOH）溶液建立右眼角膜碱烧伤模型。随机分为实验组和对照组,实验组行人羊膜匀浆提取液（ AM）点眼,每日4次,对照组用PBS液点眼,每日4次。碱烧伤后行共聚焦显微镜动态观察大鼠角膜各层细胞数量以及形态的变化。结果实验组角膜上皮层炎症细胞形成晚,数量较少;基质层纤维结构排列较为规则,肌成纤维细胞的增殖和激活较少、角膜新生血管数量少,管径细。结论新鲜人羊膜匀浆提取液可以有效促进大鼠碱烧伤后角膜上皮细胞的增殖,抑制炎症细胞浸润,减少角膜新生血管的形成,抑制成纤维细胞的激活和增殖,减少角膜瘢痕的形成,有利于碱烧伤后大鼠角膜的透明愈合。     

角膜碱烧伤白细胞介素-1ra基因治疗的实验研究

目的探讨阳离子聚合物包装IL-1ra重组质粒、角膜原位转染治疗角膜碱烧伤的疗效。设计实验性研究。研究对象角膜碱烧伤大鼠动物模型。方法制作Wistar大鼠角膜碱烧伤模型，随机分为2组，Ⅰ组为阴性对照（12只），结膜下注射生理盐水。Ⅱ组为IL-1ra基因治疗组（18只），以PeDNA3．1质粒作为IL-1ra基因表达载体，阳离子聚合物为转染介质，角膜基质显微注射20μg IL-1ra质粒。碱烧伤后不同时间点（3、7、21天）处死实验动物取下角膜，HE染色分析角膜组织病理变化，比较两组角膜透明性和新生血管生长情况，对角膜内浸润的炎性细胞进行计数。主要指标角膜透明性和新生血管情况，角膜组织病理变化及炎性细胞计数。结果碱烧伤造模后，对照组角膜浸润水肿明显，且随时间延长而加重，角膜基质内大量炎性细胞浸润和粗大新生血管形成。IL-1ra基因治疗组的角膜基质轻、中度水肿，角膜中性粒细胞、淋巴细胞等炎性细胞计数在不同时间点均少于对照组，角膜新生血管管径均较细。结论角膜基因原位转染可使IL-1ra在局部有效表达，抑制碱烧伤引起的角膜免疫炎症反应，为眼碱烧伤的治疗提供了新的选择。     

不同浓度多西环素对碱烧伤大鼠角膜中转化生长因子β1和基质金属蛋白酶9表达的影响

目的　探讨不同浓度多西环素对碱烧伤大鼠角膜中转化生长因子β1（transforming growth factor-β1，TGF-β1）和基质金属蛋白酶-9（matrix metalloproteinase-9，MMP-9）表达的影响及其调节作用。方法　SD大鼠右眼制备成角膜碱烧伤模型，随机分为对照组、0.5 g·L^-1多西环素组和1.0 g·L^-1多西环素组，每组15只。3组分别于造模后每天给予20 μL眼液溶媒、0.5 g·L^-1多西环素、1.0 g·L^-1多西环素滴眼至观察期末。于碱烧伤后第3天、第7天、第14天对角膜混浊程度进行评分，并行RT-PCR和ELISA检测角膜组织中TGF-β1、MMP-9 mRNA和蛋白的表达情况。结果　与对照组相比，碱烧伤后第7天、第14天，0.5 g·L^-1多西环素组［（2.80±0.45）分、（2.20±0.45）分］和1.0 g·L^-1多西环素组［（2.00±0.00）分、（0.60±0.55）分］角膜混浊程度评分降低，且1.0 g·L^-1多西环素组更低，差异均有统计学意义（均为P＜0.05）。碱烧伤后第3天、第7天、第14 天，0.5 g·L^-1多西环素组、1.0 g·L^-1多西环素组TGF-β1 mRNA及蛋白表达量均较对照组低，且1.0 g·L^-1多西环素组表达更低，差异均有统计学意义（均为P＜0.05）。碱烧伤后第3天、第7天，0.5 g·L^-1多西环素组、1.0 g·L^-1多西环素组MMP-9 mRNA及蛋白表达均较对照组低，且1.0 g·L^-1多西环素组表达更低，差异均有统计学意义（均为P＜0.05）。结论　多西环素可下调碱烧伤大鼠角膜中TGF-β1和MMP-9的表达，促进角膜愈合，并呈一定程度的剂量依赖性。     

羊膜匀浆提取液抑制兔角膜新生血管及超微结构的研究

目的: 观察羊膜匀浆提取液对大鼠碱烧伤后抑制角膜新生血管(corneal neovascularization,CNV)以及对角膜超微结构的影响,探讨羊膜匀浆提取液(amnioticmembrane,AM)临床应用的合理浓度。方法: SD大鼠40只40眼,通过1mol/L的NaOH建立角膜碱烧伤模型。对照组(A组)行PBS液点眼4次/d,其余三组(B、C、D组)分别行240,400,560μg/mL的AM点眼。通过裂隙灯显微镜记录并比较四组角膜新生血管的生长情况。角膜共聚焦显微镜动态观察损伤后角膜的超微结构。结果: 损伤后的各个时间点,C组的角膜新生血管面积与A、B两组均有显著性差异(P<0.05),即随着羊膜匀浆提取液浓度的增加,其抑制角膜新生血管的作用增强。但是C、D两组之间的CNV面积差异无统计学意义。角膜共聚焦显微镜观察发现,羊膜匀浆提取液治疗组的多形核细胞浸润明显少于对照组。结论: 羊膜匀浆提取液对碱烧伤后角膜新生血管的抑制作用呈剂量依赖性,但当浓度达到400μg/mL,其对角膜新生血管的抑制作用趋于稳定。这可能部分与羊膜匀浆提取液抑制碱烧伤炎症反应有关。     

血管抑素对角膜新生血管和VEGF表达的作用

目的:探讨血管抑素(angiostatin,AS)对鼠碱烧伤角膜新生血管(corneal neovascularization,CNV)及血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达的作用,探讨 AS对CNV的作用及机制。方法:SD大鼠105只随机分为正常对照组(5只)、生理盐水组、地塞米松组、AS1组、AS2组(各25只),除正常组外,实验各组制作左眼碱烧伤CNV模型,分别予生理盐水、1g/L地塞米松液、10μg/mLAS液、20μg/mLAS液点眼,4次/d,于碱烧伤后1,3,7,14,21d运用裂隙灯、免疫组织化学方法观察新生血管长度及面积、VEGF的表达。结果:AS治疗组碱烧伤后第3d起各时间点CNV面积均明显小于盐水组(P<0.05)。碱烧伤后各时间点AS治疗组VEGF表达量均明显少于盐水组(P<0.05)。结论:AS能显著抑制碱烧伤CNV,可能与其抑制VEGF的表达有关。     

双醋瑞因减轻小鼠角膜碱烧伤炎症反应的实验研究

目的　探讨双醋瑞因减轻小鼠角膜碱烧伤炎症反应的作用。方法　将174只小鼠角膜碱烧伤造模成功的小鼠随机分为三组:双醋瑞因组、地塞米松组和生理盐水组，分别给予双醋瑞因、地塞米松、生理盐水滴眼制剂滴眼，比较造模后2 d、3 d、4 d、5 d各组小鼠的角膜混浊度、病灶面积、上皮缺损面积及炎症细胞的浸润情况。结果　双醋瑞因组造模后4 d、5 d角膜临床评分明显较生理盐水组低（均为P<0.01），地塞米松组造模后3 d、4 d、5 d角膜临床评分较生理盐水组低（均为P<0.05）。对于角膜上皮缺损而言，双醋瑞因组碱烧伤后各时间点角膜上皮缺损面积均小于生理盐水组（均为P<0.05），地塞米松组与生理盐水组角膜上皮缺损无明显差异。对角膜中性粒细胞进行统计发现，双醋瑞因组碱烧伤后各时间点中性粒细胞计量明显少于生理盐水组（均为P<0.01）；地塞米松组造模后3 d、5 d中性粒细胞浸润少于生理盐水组（均为P<0.05）。对巨噬细胞进行统计发现，双醋瑞因组造模后3 d、5 d巨噬细胞均较生理盐水组浸润少（均为P<0.05）；造模后5 d地塞米松组浸润少于生理盐水组（P<0.05）。通过MPO活性测定发现，双醋瑞因组和地塞米松组造模后2 d、3 d、5 d MPO活性均较生理盐水组明显降低（均为P<0.01）。结论　双醋瑞因能够减轻小鼠角膜碱烧伤的炎症反应，改善角膜碱烧伤的预后。     

多西环素对碱烧伤大鼠角膜组织中IL-1和TNF-α表达的影响

目的　通过建立大鼠角膜碱烧伤模型,研究多西环素对碱烧伤角膜组织中白细胞介素-１（ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ-１,ＩＬ-１）及肿瘤坏死因子-α（ｔｕｍｏｒｎｅｃｒｏｓｉｓｆａｃｔｏｒ-α,ＴＮＦ-α）表达的影响,探索多西环素作用于角膜碱烧伤的抗炎机制。方法　使用自制模具建立６４只ＳＤ大鼠一侧眼角膜碱烧伤动物模型,分成以３ｇ?Ｌ－１多西环素眼液滴眼的实验组和以溶媒滴眼的阴性对照组,每日滴眼４次。于碱烧伤后３ｄ、７ｄ、１４ｄ、２１ｄ分别取下３２只大鼠烧伤侧角膜组织行酶联免疫吸附实验（ＥＬＩＳＡ）,检测角膜组织中ＩＬ-１、ＴＮＦ-α的表达情况。结果　ＥＬＩＳＡ检测显示碱烧伤后第３天阴性对照组ＩＬ-１蛋白相对表达量为（１２７．５８±３５．９２）μｇ?ｇ－１,第７天为（８９．５４±４２．６３）μｇ?ｇ－１,第３天多西环素组ＩＬ-１蛋白相对表达量为（５３．７７±２１．１８）μｇ?ｇ－１,第７天为（３６．６０±１０．７８）μｇ?ｇ－１,第３天、第７天时多西环素组ＩＬ-１与阴性对照组相比表达显著下降（均为Ｐ＜０．０５）;第１４天、第２１天与阴性对照组比较ＩＬ-１蛋白表达差异均无统计学意义（均为Ｐ＞０．０５）。碱烧伤后第３天阴性对照组ＴＮＦ-α蛋白相对表达量为（６９．４５±２１．４３）μｇ?ｇ－１,第７天为（５５．３７±１８．３４）μｇ?ｇ－１,第３天多西环素组ＴＮＦ-α蛋白相对表达量为（２４．０６±９．３９）μｇ?ｇ－１,第７天为（１４．８１±５．７２）μｇ?ｇ－１,碱烧伤后第３天、第７天时多西环素组ＴＮＦ-α与阴性对照组相比表达显著下降（Ｐ＜０．０５）;第１４天、第２１天与阴性对照组比较ＴＮＦ-α蛋白表达差异均无统计学意义（均为Ｐ＞００５）。结论　多西环素作用于碱烧伤大鼠角膜可下调ＩＬ-１、ＴＮＦ-α基因的表达,这可能是多西环素下调炎症因子表达,减轻炎症反应的机制之一。     

五苓散对糖尿病视网膜病变大鼠血-视网膜屏障的保护作用

目的：探讨五苓散对糖尿病视网膜病变(DR)大鼠血-视网膜屏障的保护作用及其机制。

方法：SD雄性大鼠50只随机分为空白组、模型组、高剂量组、低剂量组、阳性对照组,每组10只,采用高脂高糖饮食联合腹腔注射链脲佐菌素诱导糖尿病大鼠模型。高剂量组和低剂量组大鼠采用五苓散水煎液灌胃,模型组和空白组大鼠采用等量生理盐水灌胃,阳性对照组大鼠右眼球内注射康柏西普。给药12wk后,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测大鼠血清C反应蛋白(CRP)和可溶性细胞间黏附分子1(sICAM-1)表达水平,HE染色观察视网膜组织结构,伊文思蓝(EB)渗漏试验观察大鼠血-视网膜屏障通透性,免疫组织化学法检测血管内皮生长因子(VEGF)在视网膜中的表达。

结果：模型组大鼠空腹血糖水平和视网膜组织EB渗透量、CRP和sICAM-1表达均较空白组明显升高,高剂量组大鼠视网膜组织EB渗透量、CRP和sICAM-1表达均低于低剂量组和阳性对照组(均P<0.05)。模型组大鼠视网膜神经节细胞层结构紊乱,视网膜水肿,VEGF表达明显升高; 与低剂量组和阳性对照组比较,高剂量组大鼠视网膜组织神经节细胞排列较清晰,水肿减轻。

结论：五苓散能有效降低糖尿病大鼠血清炎症因子水平,降低视网膜组织中VEGF的表达,减轻水肿,保护血-视网膜屏障。     

Expression of cell adhesion molecules on limbal and neovascular endothelium in corneal inflammatory neovascularization.

PURPOSE: To investigate the expression of cell-adhesion molecules on corneolimbal and neovascular endothelium and the associated leukocyte infiltration in an experimental model of inflammatory corneal neovascularization (NV). METHODS: Corneal NV was induced in BALB/c mice by placement of nylon sutures. Interleukin-1 receptor antagonist (IL-1ra) was used topically to determine whether suppression of IL-1 could affect adhesion molecule expression and leukocytic infiltration. At set time points, corneal samples were analyzed immunohistochemically for expression of P-selectin, E-selectin, intercellular adhesion molecule (ICAM)-1, vascular adhesion molecule (VCAM)-1, and platelet- endothelial adhesion molecule (PECAM)-1. Leukocytic infiltration at different time points was quantified histologically. In companion experiments mice deficient in ICAM-1 were investigated to determine the functional relevance of this molecule in corneal leukocyte infiltration. RESULTS: Significant enhanced expression of ICAM-1 was detected on the corneolimbal vascular endothelium as early as 8 hours and on the newly formed corneal NV by day 3, and treatment with IL-1ra led to significant suppression of this expression. IL-1ra-induced suppression of ICAM-1 expression was accompanied by a profound decrease in corneal leukocytic infiltration by 44.6% at day 1 (P < 0.003), 71.8% at day 3 (P < 0.001), 60.1% at day 7 (P < 0.001), and 63.8% at day 14 (P < 0.001), compared with control corneas. Similarly, in ICAM-1 knockout mice, the corneal leukocytic infiltration was 50.3%, 52.9%, and 36.4%, compared with wild-type control animals on day 1 (P < 0.001), day 7 (P < 0.005), and day 14 (P < 0.001), respectively. Expression of PECAM-1 was constitutively present on perilimbal vascular endothelium and had no response to IL-1ra treatment. No significant expression of P-selectin, E-selectin, or VCAM-1 was detected in this experimental model. CONCLUSIONS: These results suggest that leukocytic infiltration in this model of inflammatory corneal NV is closely associated with ICAM-1 expression, and that topical IL-1ra displays corneal anti-inflammatory effects, largely by suppressing ICAM-1 expression on vascular endothelial cells.     

新鲜羊膜移植对碱烧伤大鼠角膜缘干细胞增殖效应的影响

目的：观察新鲜羊膜移植对碱烧伤大鼠模型角膜缘干细胞增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)表达的影响。

方法：SD大鼠40只40眼制作眼碱烧伤模型; 随机选取20只20眼行新鲜羊膜移植为实验组,对照组为不处理的烧伤模型眼。于术后1,2,3,4wk取角膜缘组织,采用免疫组化技术观察PCNA在角膜缘干细胞的表达情况。

结果：PCNA在实验组和对照组的角膜缘干细胞中均有表达,位于角膜缘上皮细胞基底层的细胞核内,但羊膜移植组显著高于对照组,两者比较有统计学意义(P<0.05); 羊膜移植术后1,2,3,4wk时PCNA蛋白在角膜缘干细胞的表达不一致,呈线性趋势,1wk达到高峰,以后逐渐降低。

结论：眼碱烧伤后行羊膜移植术可促进角膜缘干细胞的增殖表达,利于角膜上皮的修复。     

FasL抑制剂对大鼠角膜移植术后角膜细胞凋亡及Treg的影响

目的：探索大鼠角膜移植术后玻璃体腔内注射FasL抑制剂对角膜细胞凋亡，角膜Fas、FasL表达，全血和颈部淋巴结中Treg数量及排斥反应指数的影响。

方法：将24只SD大鼠24眼行穿透性角膜移植术，术后随机分为玻璃体腔内注射PBS组(12只12眼)、FasL抑制剂组(12只12眼)，每周记录角膜排斥反应指数，术后1、3、5wk取全血、颈部淋巴结检测Treg数量，取角膜组织测Fas、FasL表达及凋亡细胞数量。

结果：FasL抑制剂组角膜Fas、FasL表达较PBS组明显下降(均P<0.05)； FasL抑制剂组角膜细胞凋亡较PBS组明显减少，FasL抑制剂组术后5wk凋亡最少； 术后3wk开始FasL抑制剂组Treg数量较PBS组明显升高(均P<0.05)，FasL 抑制剂组角膜移植排斥反应评分明显低于PBS组(均P<0.05)。

结论：大鼠角膜移植术后玻璃体腔内注射FasL抑制剂可减少角膜各层细胞凋亡，增加全血、颈部淋巴结中Treg的数量，减轻排斥反应。     

沉默信息调节因子1 调控胆固醇合成对大鼠视神经损伤后RGCs修复的作用机制

目的：探讨沉默信息调节因子1( silent information regulator 1, SIRT1)调控胆固醇合成在视神经损伤修复中的作用机制。
　　方法：制备视神经损伤的大鼠模型,随机数字法将70只大鼠分为正常组10只,白黎芦醇治疗组(实验组)30只和PBS缓冲液对照组(对照组)30只;再将实验组和对照组分别分为三组,每组各10只;将白黎芦醇或PBS分别注射实验组和对照组大鼠,观察视神经损伤后第7,14,21 d处死大鼠。分离视网膜,观察各组大鼠视网膜神经节细胞( retinal ganglion cell ,RGCs)的存活数量。分离术眼视神经,检测其胆固醇含量;RT-PCR法检测SIRT1、SREBP2和HMGCR的mRNA表达水平;Western blot法检测SIRT1、SREBP2和HMGCR蛋白表达水平。
　　结果：损伤模型大鼠的视网膜RGCs的存活数量以及视神经胆固醇含量均明显减少( P<0.01);SIRT1、SREBP2和HMGCR的mRNA和蛋白表达水平均下降( P<0.05),并呈时间依赖关系。三组分三个时间点,随时间延长损伤均加重,而治疗组损伤程度较对照组明显减弱。而白黎芦醇治疗组的视神经胆固醇含量以及SIRT1、SREBP2、HMGCR的mRNA和蛋白表达水平,RGCs存活数量均明显回升(P<0.01),且呈时间依赖关系。
　　结论：白黎芦醇通过上调SIRT1、SREBP-2及其下游调控基因HMGCR的表达,从而进一步促进神经元细胞的胆固醇合成以及视网膜神经节细胞的损伤后修复过程。     

MRG15在正常及年龄相关性白内障晶状体上皮细胞中的表达

目的：研究MRG15（死亡因子相关基因）在年龄相关性白内障（ age－related cataract,ARC）、正常晶状体上皮细胞的表达差异。
　　方法：性成熟的健康雌性SD大鼠40只,随机分为研究组、对照组,每组20只,研究组切除双侧卵巢、低浓度萘长间隔给药,建立围绝经期ARC模型;对照组常规饲养。以消减杂交改良法克隆MRG15,并对其cDNA片段应用地高辛标记制作探针。获取两组大鼠晶状体前囊膜切片后,再通过原位杂交法明确晶状体上皮细胞的表达差异。
　　结果：克隆出的MRG15通过BamH1和EcoR1酶切以及琼脂糖电泳,可获取长为639bp的cDNA片段。 GeneBank对比显示,其同源性达到99．0％。原位杂交显示,ARC患者及正常晶状体上皮细胞内均可见MRG15表达。研究组阳性细胞百分率与对照组相较,有统计学差异（P＜0．05）。研究组积分指数与对照组相较,有统计学差异（ P＜0．05）。结论：MRG15在ARC 和正常晶状体上皮细胞中均有表达,并且ARC较正常晶状体上皮细胞表达增高,这可能与MRG15对晶状体上皮细胞中一部分关键基因的转录产生抑制效应有关,通过降低晶状体上皮细胞的功能,使其出现衰老样改变,进而形成白内障,临床应对此进行更进一步的研究。     

单眼慢性阿托品化对视觉发育关键期内大鼠视觉发育的影响

目的：探讨单眼阿托品化对视觉发育关键期内大鼠视觉发育的影响。
　　方法：将20只出生14 d的健康SD大鼠随机分为实验组和对照组,每组10只,均选取左眼为干预眼,右眼作为对照眼。实验组1%硫酸阿托品眼用凝胶点左眼,每日3次,右眼生理盐水点眼,每日3次。对照组大鼠给予生理盐水点双眼,每日3次。在点眼前及点眼后的7,14,21,28 d分别行闪光视觉诱发电位检查及带状检影法测量屈光度。在点药后28d,从实验组和对照组中各随机选取3只大鼠,检测c-fos mRNA的表达;后在实验组与对照组中再各随机选取3只大鼠,放入暗室2d后给予2h正常饲养环境光线刺激,再次检测c-fos mRNA的表达。
　　结果：实验组点药后14d产生屈光参差,两眼相差3.9D(P<0.05),实验组大鼠左眼F-VEP的P1波在点药后21 d峰时值延长为88.9±1.889ms,与右眼相比差异有统计学意义(P<0.05)。点药后28d,实验组大鼠左侧视皮层中c-fos mRNA表达较右侧视皮层高,但无显著差异;但在放入暗室2d后再给予2h光线刺激,实验组大鼠左侧视皮层中c-fos mRNA表达为右侧视皮层的5倍,有显著统计学差异(P<0.05)。
　　结论：在视觉发育关键期内大鼠的单眼慢性阿托品化可形成屈光参差,使视传导发生延迟,阻碍了视皮层的正常发育。大鼠的单眼慢性阿托品化可作为制作屈光参差的研究模型。     

y-39983预处理对缺血-再灌注损伤大鼠视网膜的保护作用

目的:探讨ROCK抑制剂y-39983对缺血再灌注(ischemia reperfusion,IR)大鼠视网膜的保护作用。方法:SD大鼠60只随机分为正常组(n=15)、IR组(n=15)、生理盐水组(n=15)、y-39983治疗组(n=15)。正常组不做任何处理,后三组制作视网膜IR模型(前房加压灌注法),其中生理盐水组和y-39983治疗组于造模前5min分别向实验眼玻璃体腔内注入无菌生理盐水和y-39983各10μL。采用免疫组化方法检测细胞间黏附分子-1(intercellular cell adhesion molecules-1,ICAM-1)表达。荧光金逆行标记计数各组大鼠视网膜神经节细胞(retinalganglion cells,RGCs)。应用组织病理学方法和视网膜电流图评估视网膜损伤程度。结果:y-39983预处理能降低ICAM-1蛋白表达和视网膜水肿程度,并且显著提高了视网膜神经节细胞存活率及b波和O2相对恢复率,缓解IR损伤所致的内层视网膜变薄的情况。结论:y-39983能减轻视网膜IR损伤,而这一保护效应在一定程度上与其抑制ICAM-1异常表达增加有关,表明y-39983对IR损伤相关的视网膜疾病有治疗作用。     

骨形成蛋白-7在大鼠角膜损伤愈合的表达及作用

目的:通过观察大鼠角膜损伤愈合过程中骨形成蛋白-7(bone morphogenetic protein 7,BMP-7)的表达规律来探讨其在大鼠角膜损伤愈合过程中可能发挥的作用。方法:雄性Wistar大鼠42只,随机分为7组,每组6只,其中一组为正常对照组,动物模型组均取右眼制造角膜针刺损伤模型。于损伤后各时间点(6h;1,3,5,7,14d)取角膜标本,HE染色行组织病理学检查,免疫组织化学染色观察BMP-7的表达与分布,计算机图像分析系统对结果进行分析。结果:鼠角膜上皮BMP-7的表达于损伤后1,3d逐渐升高(P<0.05);损伤后5d时表达逐渐降低,至损伤后14d时表达恢复正常。角膜基质层及角膜内皮层中BMP-7的表达未见明显变化。结论:BMP-7在大鼠角膜上皮层均有表达,可能作为负性的生长因子参与角膜损伤愈合过程。     

糖尿病大鼠早期视网膜神经节细胞凋亡机制的探讨

目的：探讨糖尿病大鼠模型早期视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells,RGCs)凋亡的机制。

方法：SD大鼠60只,随机分为对照组(CON)及糖尿病组(DM),糖尿病组一次性腹腔注射1% STZ诱发糖尿病鼠模型,两组于第4,8,12wk分别行HE、透射电镜及TUNEL法检测RGCs的凋亡情况,并应用激光共聚焦显微镜检测RGCs内钙离子浓度的变化。

结果：糖尿病组第8wk开始出现RGCs数量减少、细胞排列紊乱的病理改变,第12wk更为明显。糖尿病组透射电镜下可见第4wk时RGCs出现线粒体肿胀; 第8wk时RGCs内肿胀的线粒体更为明显、数目增多,染色质边集于核膜周边,部分细胞体积缩小、细胞器减少; 第12wk时出现RGCs体积变小,甚至出现细胞核断裂。TUNEL阳性RGCs最早于糖尿病组第4wk时出现,随病程延长凋亡的阳性细胞逐渐增多,凋亡指数与同期对照组相比,差异有统计学意义(P<0.01)。糖尿病组第8,12wk时RGCs内钙离子浓度明显高于同期对照组,差异显著(P<0.01); 糖尿病组第8wk与第12wk比较,升高差异亦有统计学意义(P<0.05)。

结论：糖尿病早期出现了视网膜神经节细胞的凋亡,其机制可能与细胞内钙离子浓度升高有关。