电磁场干预大鼠骨髓间充质干细胞向心肌方向诱导分化的研究

【目的】观察脉冲电磁场（PEMFs）对5-氮胞苷（5-aza）诱导大鼠骨髓间充质干细胞（MSCs）向心肌样细胞分化的影响。【方法】50Hz脉冲低频电磁场刺激5-aza诱导7d后的MSCs,根据不同的感应强度和作用的时间分为A、B、C组和1、2、3、4亚组,设未暴露PEMFs的为对照组。通过Western印迹法检测不同条件下心肌肌钙蛋白T的变化。【结果】0．5、1和5mT组中20min、30min各亚组cTnT的表达量较对照组,5mT组在10min的表达量减少。【结论】50Hz的0．5～5mT感应强度的PEMFs作用20～30min为促进体外5-aza诱导MSCs向心肌方向的分化的有效窗口。     

电磁场促进骨髓间充质干细胞体外诱导分化时细胞增殖

目的 观察脉冲电磁场(pulsed electromagnetic fields,PEMF)对5-氮胞苷(5-aza)诱导大鼠骨髓问充质干细胞(mesenehymal stem cells,MSCs)向心肌样细胞分化时细胞增殖的影响.方法 50 Hz脉冲低频电磁场刺激5-aza诱导后7 d后的MSCs,根据不同的感应强度分为A、B、C组,每组根据作用时间的不同分为4个亚组;设未暴露PEMFs的细胞为对照组.用MTT法测定细胞增殖变化,用流式细胞技术检测细胞周期.结果 0.5 mT和1 mT的感应强度下20～30 min细胞比对照组有显著性增殖,5 mT作用30～60 min以及1 mT作用60 min与对照组相比较呈显著性抑制.流式检测细胞周期显示0.5 mT和1 mT在20～30 min内可以引起细胞S G2%增高,各感应强度下作用60 min以及5 mT感应强度下作用20 min以上均引起S G2%的下降.结论 50 Hz脉冲低频电磁场0.5 mT和1 mT的感应强度下,作用20～30 min可通过引起诱导后的MSCs周期中S G2%增高而促进它的增殖.     

体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为心肌样细胞的研究

目的探讨用5-氮胞苷(5-aza)体外诱导骨髓间充质干细胞(MSCs)分化为心肌样细胞的最佳条件.方法用Percoll密度梯度离心法分离培养、纯化大鼠MSCs,取第3代MSCs随机分为A、B、C 3组,分别加入5、10、20 μmol/L5-aza;每组分别孵育12、24、48 h,继续培养28 d.相差显微镜观察细胞形态变化,免疫组化法检测细胞肌动蛋白(α-actin)和心肌肌钙蛋白T(cTnT)表达,并通过Western印迹法对细胞cTnT进行定量分析.结果MSCs经5-aza诱导培养28 d后,电镜下见细胞胞浆有散在肌丝样结构,免疫组化检测α-actin和cTnT表达均呈阳性;5 μmol/L的5-aza孵育48 h、10 μmoL/L孵育24 h培养28 d的细胞cTnT表达量与10 μmol/L的5-aza孵育48 h、20 μmol/L 3种孵育时间各组比较无显著性差异,且细胞生物学特性未受到明显影响.结论MSCs在体外经5-aza诱导后可分化为心肌样细胞;5 μmol/L的5-aza孵育48 h和10 μmol/L的5-aza诱导24 h是MSCs体外诱导分化心肌样细胞的理想条件.     

低频脉冲电磁场诱导大鼠骨髓间充质干细胞ACTN2、α-actin和TNNT2表达

目的探讨低频脉冲电磁场(PEMFs)对大鼠骨髓间充质干细胞(rBMSCs)α-辅肌动蛋白-2(ACTN2)、α-肌动蛋白(α-actin)和肌钙蛋白T-2(TNNT2)表达的影响。方法采用差速贴壁分离方法获取rBMSCs,选用第3代rBMSCs用于实验。实验分为4组:①PEMFs诱导组,给予50Hz、1mT低频PEMFs刺激,30min/d,分别刺激10d、15d和20d;②5-氮胞苷(5-Aza)诱导组,给予10μmol/L 5-Aza诱导1d,然后采用完全培养液培养10d、15d和20d;③PEMFs+5-Aza诱导组:采用10μmol/L 5-Aza诱导1d后,再给予PEMFs诱导组相同的处理;④对照组,采用完全培养液培养10d、15d和20d。通过倒置相差显微镜逐日连续观察细胞的生长状况和形态特征。采用实时荧光定量PCR方法检测ACTN2和TNNT2的mRNA表达,采用Western blot方法检测ACTN2、α-actin和TNNT2的蛋白表达。结果在各时间点,PEMFs诱导组、5-Aza诱导组和PEMFs+5-Aza诱导组的ACTN2、α-actin和TNNT2mRNA表达与蛋白表达明显高于对照组。结论 PEMFs可促进体外培养的rBMSCs向心肌样细胞分化。     

丹酚酸B体外干预骨髓间充质干细胞分化过程中cTnT的表达

[目的]观察丹酚酸B(SalB)体外干预骨髓间充质干细胞(MSCs)后细胞形态及心肌特异性蛋白肌钙蛋白T(cTnT)的表达。[方法]培养、纯化及鉴定MSCs,用SalB、5-氮胞苷组(5-aza)、SalB联合5-aza(SalB+5-aza)分别定向诱导分化,观察此过程中MSCs的形态学变化并采用免疫细胞化学法鉴定诱导后MSCs心肌特异性肌钙蛋白T(cTnT)的表达。[结果]诱导后的MSCs体积增大,增殖减慢,并出现肌管样结构;免疫细胞化学结果显示诱导后MSCs表达心肌特异性蛋白cTnT。[结论]SalB在体外定向诱导MSCs分化为心肌细胞的过程中发挥了一定的作用。     

不同强度脉冲电磁场对去势大鼠血清雌二醇的影响

目的探讨不同强度的脉冲电磁场对于去势大鼠股骨骨密度及血清雌二醇的影响。方法采用随机数字表法将雌性3月龄SD大鼠分为:假手术组(SHAM)、去势大鼠模型对照组(OP模型)、以及不同频率脉冲电磁场治疗、、组(OVX、、)。去势造模后,OVX、和组大鼠每天在频率为8 Hz,磁通密度分别为0.77mT、3.82 mT和9.87 mT的磁场环境中照射40 min,共30 d。SHAM组和OP模型组不干预。30 d后股动脉放血处死大鼠,取左侧股骨作骨密度测定,取血清标本作血清雌二醇测定。结果与OP模型组相比,OVX、及组大鼠的股骨骨密度增加(P<0.05或P<0.01),但3组间及与SHAM组之间的差异无统计学意义;SHAM组大鼠的血清雌二醇水平均高于其它4组大鼠的血清雌二醇水平(P<0.05或P<0.01),但OP模型组、OVX、及组大鼠的血清雌二醇水平之间的差异无统计学意义。结论低频脉冲电磁场(PEMFs)能减少大鼠在卵巢切除后的骨量丢失、阻止骨密度下降。在磁场频率一致和干预时间相同的前提下,3种不同磁场强度(0.77 mT~9.87 mT)的PEMFs均有防止去势大鼠股骨骨密度降低的作用。同时,PEMFs并不能提高去势大鼠的血清雌二醇的水平,说明PEMFs对于骨质疏松的治疗作用不是由于提高了血清雌二醇的水平。     

低频脉冲电磁场通过cAMP/PKA信号通路促进成骨细胞分化的研究

目的研究50 Hz 0.6 mT低频脉冲电磁场（pulsed electromagnetic fields, PEMFs）是否通过cAMP/PKA信号通路促进成骨 细胞分化。方法体外培养大鼠颅骨成骨细胞（rat calvarial osteoblasts, ROBs）,传代融合后采用50 Hz 0.6 mT低频脉冲电磁场 处理不同时间后检测细胞内cAMP浓度及PKA磷酸化水平的变化。使用2’,3’-双脱氧腺苷（DDA）抑制细胞内腺苷酸环化酶 （AC）活性,检测经低频脉冲电磁场刺激后细胞碱性磷酸酶（ALP）活性及成骨性基因转录的变化;使用KT5720抑制PKA的磷酸 化,检测经低频脉冲电磁场刺激后细胞成骨性基因转录及蛋白表达的变化。结果采用50 Hz 0.6 mT低频脉冲电磁场处理 20 min 后,ROBs内cAMP浓度显著升高,持续至40 min 后迅速下降,至2 h时再次升高,p-PKA亦表现出同样的变化趋势,说 明低频脉冲电磁场激活了cAMP/PKA信号通路;使用DDA抑制腺苷酸环化酶活性后,由低频脉冲电磁场引起的ALP活性及成 骨性基因转录升高显著下降,同样使用KT5720抑制PKA磷酸化后,由低频脉冲电磁场引起的成骨性基因转录及蛋白表达亦下 降,说明cAMP/PKA信号通路参与低频脉冲电磁场促进ROBs分化的过程。结论50 Hz 0.6 mT低频脉冲电磁场通过cAMP/ PKA信号通路促进ROBs分化。     

体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为心肌样细胞

[目的] 探讨体外培养定向诱导大鼠骨髓间充质干细胞 ( MSCs )向心肌样细胞分化的潜能.[方法] 取大鼠下肢骨骨髓,分离培养 MSCs,用 5-氮胞苷 ( 5-aza )定向诱导 24 h,相差显微镜下观察其形态变化,免疫组化法检测肌钙蛋白 ( cTnT )和心肌细胞结蛋白 ( desmin )表达,并通过 RT-PCR对肌球蛋白重链 ( MHC )在细胞中的表达进行鉴定.[结果] MSCs经 5-aza诱导后,部分细胞呈梭形,并可见肌管样结构.免疫组化检测示诱导后 MSCs的 cTnT阳性细胞数为 15%, Desmin表达强阳性, RT-PCR示诱导后 MSCs有 MHC表达.[结论] MSCs在体外能在一定条件下被诱导分化为心肌样细胞,是心肌缺血干细胞移植的较理想的细胞来源.     

5-氮胞苷诱导大鼠骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化的实验研究

目的:研究体外培养大鼠骨髓间充质干细胞(mensenchymal stem cells,MSCs) 经5-氮胞苷(5-aza) 诱导定向分化为心肌样细胞形态学及分子生物学特征?方法:SD大鼠股骨骨髓经密度梯度离心及贴壁分离培养传代MSCs,体外用5-aza定向诱导向心肌样细胞分化?相差显微镜观察心肌样细胞形态学变化?免疫组化检测肌钙蛋白T(cTnT)?α-肌动蛋白和缝隙连接蛋白Cx43表达?结果:密度梯度离心及贴壁法分离培养的MSCs生长稳定,增殖快?5-aza诱导后,部分细胞形态发生变化,有肌管样结构形成?随诱导后培养时间延长MSCs中cTnT?α-肌动蛋白和缝隙连接蛋白Cx43表达逐渐增强?结论:密度梯度离心及贴壁分离培养可获得大量纯度较高的骨髓间充质干细胞?经5-aza诱导骨髓间充质干细胞体外可分化为心肌样细胞?     

体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为心肌样细胞

【目的】探讨体外培养定向诱导大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)向心肌样细胞分化的潜能。【方法】取大鼠下肢骨骨髓，分离培养MSCs，用5-氮胞苷(5-aza)定向诱导24h，相差显微镜下观察其形态变化，免疫组化法检测肌钙蛋白(cTnT)和心肌细胞结蛋白(desmin)表达，并通过RT-PCR对肌球蛋白重链(MHC)在细胞中的表达进行鉴定。【结果】MSCs经5-aza诱导后，部分细胞呈梭形，并可见肌管样结构。免疫组化检测示诱导后MSCs的cTnT阳性细胞数为15％，Desmin表达强阳性，RT—PCR示诱导后MSCs有MHC表达。【结论】MSCs在体外能在一定条件下被诱导分化为心肌样细胞，是心肌缺血干细胞移植的较理想的细胞来源。     

骨髓间充质干细胞体外培养分化为肌原性细胞的实验研究

目的　研究骨髓间充质干细胞在体外诱导分化为心肌细胞的可行性。方法　由新西兰大白兔胸骨获取骨髓间充质干细胞 ,培养传代后用 5 -氮杂胞苷诱导 2 4h ,免疫组化检测诱导后细胞的变化。结果　 5 -氮杂胞苷诱导后的细胞经免疫组化检测可见细胞被抗肌红蛋白抗体着染显色。结论　骨髓间充质干细胞可在体外经 5 -氮杂胞苷诱导后转化为肌原性细胞。     

不同治疗时间脉冲电磁场对去卵巢大鼠股骨生物力学性能的影响

目的 通过采用不同治疗时间脉冲电磁场(PEMFs)干预去卵巢大鼠骨质疏松模型,观察各组大鼠的股骨生物力学性能的变化,以探索PEMFs治疗骨质疏松的最适治疗时间.方法 将雌性3月龄SD大鼠50只随机分为5组:SHAM组、OVX_0组、OVX_Ⅰ组、OVX_Ⅱ组、OVX_Ⅲ组,每组10只.各OVX组均按文献方法切除双侧卵巢造模,SHAM组仅开腹不切除卵巢.OVX_Ⅰ、OVX_Ⅱ和OVX_Ⅲ 3组大鼠每天在强度为3.8 mT,频率为8 Hz的磁场环境中分别照射20、40、60 min,共30 d.SHAM组和OVX_0组不干预.各组动物均在实验完成后股动脉放血处死,取右侧股骨作生物力学性能测定.结果 OVX_0组大鼠的股骨结构力学指标(包括最大位移、最大载荷及最大能量吸收,下同) 和材料力学指标(包括最大应力、最大应变及弹性模量,下同)低于其它4组大鼠(P<0.05或P<0.01),但SHAM组、OVX_Ⅰ组、OVX_Ⅱ组及OVX_Ⅲ组4组大鼠的股骨生物力学指标之间的差异无统计学意义(P>0.05).结论 采用磁场强度(3.8 mT)和脉冲频率(8 Hz)PEMFs,每天治疗20～60 min,可阻止去卵巢大鼠的股骨生物力学性能下降,使其接近正常的水平,其骨生物力学性能的维持效果相同.     

脉冲电磁场对大鼠骨髓间充质干细胞增殖、成骨分化和Wnt/β-catenin信号通路的影响

目的 探讨脉冲电磁场（pulsed electromagnetic fields, PEMFs）对大鼠骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells, BMSCs）增殖、成骨分化以及对Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法 将培养的第3代大鼠BMSCs分为3组。3个组均以LG-DMEM完全培养基培养1 d,待细胞贴壁后更换新鲜培养基,对照组不做干预处理; PEMFs组进行8 Hz、3.8 mT的PEMFs干预,每天40 min,持续21 d;成骨诱导基(OM)组加入成骨诱导剂,不予磁场干预。采用MTT法测定增殖活性;碱性磷酸酶（ALP）、茜素红S染色进行成骨分化鉴定;利用实时荧光定量PCR（RT-PCR）技术检测Wnt/β-catenin信号通路及成骨分化相关基因的表达。结果 相较对照组,成骨诱导剂在干预第7、14、21 d可提高BMSCs的增殖活性（P<0.05）;PEMFs促增殖作用不明显。在BMSCs分化方面,PEMFs组及OM组ALP、茜素红S染色阳性强度均高于对照组（P<0.05）。定量RT-PCR结果显示,PEMFs组及OM组Wnt1、Wnt3a、LRP5、β-catenin、BMP-2、Runx2、ALP、OC mRNA的表达相较于对照组在相应时间点均有所上调（P<0.05）。PEMFs组各检测结果较OM组低,但趋势基本一致。结论 PEMFs在8 Hz、3.8 mT条件下可促进BMSCs的成骨分化,这可能与激活Wnt/β-catenin信号通路有关。     

恒磁场对成人骨髓间充质干细胞增殖及细胞周期的影响

目的：观察不同强度恒磁场辐射对成人骨髓间充质干细胞(mesenchymal stemce Hs，MSC)增殖水平及细胞周期的影响。方法：用密度梯度离心法分离成人MSC，再经贴壁筛选法筛选，对生长良好的第3代成人MSC进行恒磁场辐射(强度分别为0．05、0．10、0．50和1．00mT)，连续刺激5天(每天8h)后，用单四唑(MTT)法、流式细胞仪法测定细胞增殖、细胞周期和细胞凋亡情况。结果：0．05mT组细胞增殖显著高于对照组；0．10mT组细胞增殖与对照组相比无明显差异；其余剂量组细胞增殖均显著低于对照组。各组均未发现DNA倍体异常细胞。结论：恒磁场对成人MSC增殖的影响与磁感应强度有关，0．05mT的磁场促进MSC的增殖，0．10mT的磁场对MSC无明显影响，0．50mT和1．00mT的磁场抑制MSC的增殖。     

中频交变磁场抑制人舌鳞癌细胞的增生

目的 探讨不同强度的交变磁场辐照对人舌鳞癌细胞(TCa8113)增生的影响.方法 不同强度的交变磁场(5mT、8mT、11mT)对人舌鳞癌细胞进行连续3天的辐照刺激,每天1h,通过MTT法和流式细胞术检测细胞的增生、凋亡和细胞周期的变化.对照组(假实验组)采用相同的实验条件和作用时间但不加磁场辐照.结果 MTT法检测实验组与对照组辐照后24h、48h、72h的OD值,通过SPSS软件分析显示实验组比对照组的OD值显著降低(P<0.01).流式细胞术检测电磁场组与对照组细胞凋亡率无差异.但细胞周期有显著改变(0.5mT).结论 不同强度的交变磁场辐照对人舌鳞癌细胞增生有明显抑制作用,并可阻滞细胞周期,但对舌鳞癌细胞的凋亡未发现明显影响.     

骨髓间充质干细胞体外定向诱导心肌样细胞的实验研究

目的研究兔骨髓间充质干细胞（mensenchymal stem cell,MSC）经5-氮杂胞苷（5-azacytidine,5-aza）诱导在体外定向分化为心肌样细胞形态学及分子生物学特征,为心肌样细胞鉴定提供依据。方法取兔髂骨骨髓,分离并培养骨髓间充质干细胞,用5-氮杂胞苷定向诱导向心肌样细胞分化。相差显微镜、透射电镜观察心肌样细胞形态学变化及超微结构特征,RT—PCR检测心房利钠肽、受磷蛋白、β-肌球蛋白重链表达。结果5-氮杂胞苷诱导后,部分细胞体积增大,呈“棒状”或“珠状”结构,有肌管样结构形成,透射电镜下有肌丝、心房颗粒及线粒体等心肌样细胞超微结构形成,RT—PCR检测显示有心房利钠肽、受磷蛋白、β-肌球蛋白重链表达。结论经5-氮杂胞苷诱导骨髓间充质干细胞体外可分化为心肌样细胞。