逆转录病毒介导重组CXCR4对前列腺癌细胞侵袭力的影响

目的:构建CXCR4基因重组逆转录病毒表达载体pLEGFP-CXCR4,并转染PC-3细胞,探讨趋化因子受体CXCR4对人前列腺癌细胞体外侵袭能力的影响.方法: 分离健康人外周血单个核细胞,提取总RNA,以其为模板, RT-PCR法扩增CXCR4,获取CXCR4基因全长序列,装入带有绿色荧光蛋白(GFP)的逆转录病毒质粒pLEGFP-N1,用脂质体法转染PC-3细胞,采用实时定量PCR和Western blotting观察CXCR4表达情况,并通过体外细胞-基质粘附试验和Transwells小室检测肿瘤细胞体外侵袭能力的变化.结果: 成功构建pLEGFP-CXCR4载体,转染人前列腺癌细胞 72h后,CXCR4 mRNA及蛋白质水平明显上调,细胞的体外侵袭力明显增强,增殖活性增强.结论: CXCR4转染能够明显提高CXCR4基因mRNA及蛋白水平,提高人前列腺癌细胞体外侵袭能力.     

CXCR4-siRNA逆转录病毒载体对宫颈癌Caski细胞CXCR4基因表达的抑制作用

目的: 构建针对趋化因子受体CXCR4的RNA干扰逆转录病毒载体,检测由逆转录病毒介导的RNA干扰对人宫颈癌Caski细胞CXCR4基因表达的抑制作用. 方法: 人工合成CXCR4特异性小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)片段,将其插入带有绿色荧光蛋白(EGFP)的逆转录病毒载体质粒pSOS,测序正确后进行重组,转染PT67细胞包装成病毒,收获病毒上清用其转染Caski细胞,采用实时定量PCR和Western blot分别从mRNA水平和蛋白水平检测其对Caski细胞CXCR4表达的抑制作用. 结果: 成功构建pSOS-siCXCR4逆转录病毒载体,筛选出高效抑制序列,与对照组比较,在Caski细胞的mRNA水平,CXCR4-siRNA在24h、48h和72h对CXCR4 mRNA表达的抑制率分别为29.9%、56.8%和62.8%,而在蛋白水平对CXCR4蛋白的抑制率分别为43.6%、49.6%和62.9%. 结论: pSOS-HUS-siCXCR4干扰载体可以有效抑制Caski细胞中CXCR4表达.     

脂质体介导CXCR4 RNA干扰对结肠癌细胞SW480迁移与侵袭影响的研究

目的:探讨CXCR4 RNA 干扰对结肠癌细胞株SW480 CXCR4 mRNA和CXCR4蛋白凋亡、迁移和侵袭能力的影响.方法:采用脂质体转导CXCR4 RNA干扰序列sihCXCR4-3,RT-PCR检测CXCR4 mRNA相对含量,蛋白质印迹法检测CXCR4蛋白表达水平,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell小室评价SW480细胞迁移与侵袭能力.结果:sih-CXCR4-3组CXCR4 mRNA的抑制率为81.40％,CXCR4蛋白相对含量为9.62％.早期凋亡率各组间均无差别,晚期凋亡率sihCXCR4-3组为(7.62±0.88)％,高于SW480细胞组(6.41士0 26)％,P=0.0451.迁移实验显示,sihCXCR4-3组平均细胞数为84.25±22.46,低于SW480组(154.63±44.53,P=0.002 6)与NCsihCXCR4组(110.63+ 20.16,P=0.026 6).侵袭实验发现,sihCXCR4-3组平均细胞数为0,低于SW480组(294.43±70.10,P=0.000 0)与NCsihCXCR4(201.43±54.41,P=0.000 0).结论:CXCR4 RNA干扰抑制SW480细胞CXCR4基因与蛋白表达,促进凋亡,降低迁移和侵袭能力.     

小干扰RNA对骨肉瘤细胞株CXCR4基因表达和侵袭力的影响

目的：研究小干扰RNA（siRNA）对骨肉瘤细胞株中趋化因子受体CXCR4基因表达和侵袭力的影响。方法：采用单细胞克隆技术，从人骨肉瘤细胞系MG-63中分离培养出高表达CXCR4的骨肉瘤细胞株，设计合成针对CXCR4基因的siRNA，脂质体法转染骨肉瘤细胞株后用RT—PCR检测CXCR4基因表达水平的变化，荧光检测转染效率，Transwell趋化侵袭实验观察转染后细胞株侵袭能力的变化。结果：转染效率约为43．82％，CXCR4编码基因序列特异性siRNA能有效下调CXCR4基因表达水平，与空白组和阴性对照组比较，其差异有统计学意义（P〈0．05），细胞株穿过侵袭膜的细胞数也较转染前减少（P〈0．05）。结论：小分子干扰RNA技术能有效抑制骨肉瘤细胞株CXCR4基因的表达和体外侵袭能力。     

CXCL12／CXCR4生物学轴诱导前列腺癌骨转移的作用机制研究进展

研究发现趋化因子CXCL12（Stromal—derived factor-1,SDF-1）和受体CXCR4[chemokine（C—X—Cmotif）receptor4]广泛表达于组织和器官上,相关的研究发现其与前列腺癌细胞的黏附、侵袭、增殖和生存有关,并认为其在前列腺癌骨转移的发生中发挥重要作用。通过阐明CXCL12／CXCR4生物学轴和前列腺癌骨转移之间的关系,从而寻找有助于疾病治疗的新途径。     

逆转录病毒介导的IL6／IL2融合基因转导对小鼠B16细胞…

为探讨细胞因子之间对肿瘤细胞修饰的协同效果及融合基因用于肿瘤细胞转染的可行性，我们采用ＰＣＲ及柔性接头连接的方法。构建了含人ＩＬ６／ＩＬ２融合基因的逆转录病毒载体，将其转梁小鼠Ｂ１６黑色素瘤细胞，对基因转导后细胞的粘附及实验性肺转移能力进行了测定。     

霞草苷Ⅱ对前列腺癌细胞侵袭力的影响

 目的观察霞草苷Ⅱ对前列腺癌DU145细胞侵袭力的影响，并探讨其可能的作用机制.方法前列腺癌DU145细胞经霞草苷Ⅱ处理后，用四甲基偶氮唑蓝法检测其生长与增殖的变化；细胞侵袭小室法观察其体外侵袭能力的变化；免疫细胞化学方法研究其基质金属蛋白酶-2（MMP-2）、CXC 趋化因子受体4（CXCR4）的表达变化.结果经霞草苷Ⅱ处理后，DU145细胞的增殖受抑制；体外侵袭实验结果显示，对照组每100倍视野穿过的细胞数平均为180.3个±14.6个，而0.25、0.5、1 μg/ml 霞草苷Ⅱ作用24 h后，每100倍视野穿过的细胞数分别为100.4个±1.5个、80.2个±2.7个和60.1个±5.3个，比对照组明显减少，（P＜0.05）；免疫细胞化学显示，经霞草苷Ⅱ处理后，MMP-2表达下调，CXCR4表达下调.结论霞草苷Ⅱ抑制DU145细胞侵袭力的作用可能与其下调MMP-2的表达有关；霞草苷Ⅱ可能通过下调DU145细胞CXCR4的表达从而抑制癌细胞向骨转移。     

大蒜素对 Jurkat 细胞 CXCR4表达的影响

目的：探讨大蒜素对体外培养的 Jurkat 细胞中 CXCR4启动子活性的影响。方法：克隆人 CXCR4启动子序列,构建报告载体 PgL4.17- CXCR4,转染 Jurkat 细胞,G418筛选分组后,大蒜处理分高、中、低浓度3组（40μg/ ml、20μg/ ml、10μg/ ml）,以未做任何处理的转染细胞作为对照组,以注射用水处理的转染细胞作为注射水对照组,各组处理24h 后,在相应的条件下进行荧光素酶活性测定。结果：成功构建了含人 CXCR4启动子序列的 PgL4.17- CXCR4报告载体,6组荧光素酶活性比较,差异有统计学意义（P <0.001）,其中大蒜素处理组荧光素酶活性均低于对照组（P <0.001）。结论：大蒜素能降低 CXCR4启动子的表达,有效抑制体外培养的 Jurkat 细胞中的 CXCR4启动子活性。     

RNAi阻断CXCR4基因对胰腺癌AsPC-1细胞肺转移能力的影响

目的:观察针对CXCR4基因的RNAi(RNA interference)转染AsPC-1细胞后肿瘤细胞增殖、迁移、侵袭的情况及在裸鼠肺内血行转移的情况,探讨SDF-1/CXCR4在胰腺癌转移中的作用.方法:利用小发夹结构RNA作为载体设计针对人CXCR4基因的RNA干扰,利用慢病毒成功转染人胰腺癌细胞系AsPC-1细胞,然后分为转染组(LV-siCXCR4-1)、阴性对照组(AsPC-1-LV-con)和空白对照组(AsPC-1细胞),三组加入SDF-1α后采用MTT法检测细胞增殖,Transwell小室检测细胞迁移,体外侵袭实验检测细胞的体外侵袭能力,并将三组细胞注入已建立急性血行转移模型的裸鼠尾静脉,45天后观察裸鼠肺部转移结节和肺脏组织,计数肿瘤转移结节的数目并进行HE染色.结果:SDF-1α可促进阴性对照组和空白对照组细胞增殖、迁移和体外侵袭.空白对照组和阴性对照组裸鼠可见大量肺转移结节,而转染组裸鼠未见明显肺转移结节.结论:CXCR4基因RNAi可显著抑制AsPC-1细胞增殖、体外迁移和侵袭及肺血行转移.CXCR4/SDF-1受体配体系统参与了胰腺癌的转移,通过RNAi干扰技术可抑制胰腺癌细胞的转移.     

特异性下调CXCR4表达对食管鳞癌细胞迁移侵袭能力的影响

目的:探讨特异性下调CXCR4分子的表达对食管鳞癌细胞系TE-1迁移侵袭能力的影响。方法:根据CXCR4基因序列,设计合成CXCR4特异性小干扰RNA,采用siRNA技术下调CXCR4的表达,转染48h后,RT-PCR和Western blot检测各组细胞CXCR4在mRNA水平和蛋白质水平表达,通过Traswell小室实验检测细胞系迁移侵袭能力的差异。结果:小干扰RNA下调CXCR4表达后,Western blot和RT-PCR证实TE-1细胞中CXCR4表达明显下调,Traswell小室实验证实,下调CXCR4表达后,TE-1细胞的体外迁移侵袭潜能显著降低。结论:小干扰RNA下调CXCR4基因后,降低了食管鳞癌细胞TE-1的迁移侵袭能力,CXCR4表达水平与食管鳞癌的迁移侵袭能力呈正相关,抑制CXCR4表达能够使食管鳞癌细胞迁移侵袭能力明显降低。     

Dynamics of CXCR4 positive circulating tumor cells in prostate cancer patients during radiotherapy

Ablative radiotherapy is a highly efficient treatment modality for patients with metastatic prostate cancer (PCa). However, a subset of patients does not respond. Currently, this subgroup with bad prognosis cannot be identified before disease progression. We hypothesize that markers indicative of radioresistance, stemness and/or bone tropism may have a prognostic potential to identify patients profiting from metastases-directed radiotherapy. Therefore, circulating tumor cells (CTCs) were analyzed in patients with metastatic PCa (n = 24) during radiotherapy with CellSearch, multicolor flow cytometry and imaging cytometry. Analysis of copy-number alteration indicates a polyclonal CTC population that changes after radiotherapy. CTCs were found in 8 out of 24 patients (33.3%) and were associated with a shorter time to biochemical progression after radiotherapy. Whereas the total CTC count dropped after radiotherapy, a chemokine receptor CXCR4-expressing subpopulation representing 28.6% of the total CTC population remained stable up to 3 months. At once, we observed higher chemokine CCL2 plasma concentrations and proinflammatory monocytes. Additional functional analyses demonstrated key roles of CXCR4 and CCL2 for cellular radiosensitivity, tumorigenicity and stem-like potential in vitro and in vivo. Moreover, a high CXCR4 and CCL2 expression was found in bone metastasis biopsies of PCa patients. In summary, panCK⁺CXCR4⁺ CTCs may have a prognostic potential in patients with metastatic PCa treated with metastasis-directed radiotherapy.     

RNAi沉默CXCR6基因对肺癌A549细胞增殖、体外侵袭力和裸鼠成瘤能力的影响

目的：探讨RNAi沉默CXC型趋化因子受体6（CXCR6）基因对A549细胞增殖、体外侵袭力和裸鼠成瘤能力的影响。方法 MTT法和Transwell小室模型检测稳定沉默CXCR6基因的A549细胞增殖和细胞侵袭迁移能力。将稳定沉默CXCR6的A549细胞与正常A549细胞分别皮下接种裸鼠,观察接种后肿瘤生长情况。结果稳定沉默CXCR6基因的A549细胞与正常A549细胞相比,前者增殖速率下降（P﹤0.05）,平均增殖抑制率为30.70%;前者的体外侵袭力也降低（P﹤0.05）,平均侵袭抑制率为74.93%,平均迁移抑制率为70.19%。裸鼠体内实验显示,稳定沉默CXCR6基因的A549细胞与正常A549细胞相比,其裸鼠体内成瘤能力降低（P﹤0.05）,瘤体重量下降了62.5%。结论 RNAi沉默CXCR6基因,可以抑制A549细胞的增殖、体外侵袭力和成瘤能力。     

CXCR4单克隆抗体对人乳腺癌细胞MCF-7凋亡的影响

目的:探讨CXCR4单克隆抗体对人乳腺癌细胞MCF-7凋亡的影响。方法:以CXCR4单克隆抗体作用于MCF-7细胞,通过DNA梯状电泳、Hochest33258/PI荧光染色进行凋亡定性分析,以Annexin V/PI双染法定量检测MCF-7细胞的凋亡。结果:与对照组相比,CXCR4单克隆抗体作用后MCF-7细胞出现凋亡,凋亡率明显升高。结论:CXCR4单克隆抗体明显促进MCF-7细胞的凋亡,提示CXCR4/SDF-1生物学轴对乳腺癌细胞MCF-7的凋亡也有重要影响。     

CXCR4和CXCR7在肿瘤中的研究进展

以往的研究认为趋化因子受体4(chemokine receptor 4,CXCR4)是趋化因子CXCL12的唯一受体,CXCL12/CXCR4生物轴在肿瘤发展过程中起重要作用,然而最近研究发现CXCL12尚存在CXCR7这一新的受体,并且CXCL12/CXCR7生物轴同样对肿瘤的发生发展起重要作用.本文就有关趋化因子受体CXCR4和CXCR7在肿瘤中的表达、促进肿瘤增殖和转移、促进血管新生以及肿瘤治疗等方面的研究作一综述.     

vMIP-Ⅱ通过 CXCR4拮抗乳腺癌转移作用的初步研究

背景与目的: CXCR4-SDF-1α体系在乳腺癌靶向转移中具有重要作用,已证明多种 CXCR4拮抗剂对乳腺癌转移有抑制作用.本研究拟探讨作为 CXCR4封闭因子的病毒巨噬细胞炎症蛋白Ⅱ( viral macrophage inflammatory protein-Ⅱ , vMIP-Ⅱ)对乳腺癌细胞株 MCF 7转移相关因素的影响.方法: MTT法检测不同浓度 vMIP-Ⅱ刺激下 MCF-7的增殖效应;软琼脂集落形成实验评价克隆形成率;粘附和趋化实验观察 vMIP-Ⅱ对不同转移阶段 MCF-7细胞的作用.结果:(1)系列浓度的 vMIP-Ⅱ处理细胞 72h后,细胞没有表现出增殖效应( P >0.05). (2)vMIP-Ⅱ以浓度依赖的方式抑制细胞集落的形成, 50、 100、 500和 1 000 ng /ml vMIP-Ⅱ作用后,细胞的琼脂集落抑制率在 18.2%～ 54.6%之间. (3)经 300 ng/ml 的 vMIP-Ⅱ处理不同时间( 0 min、 30 min、 2 h 和 6 h)后,细胞在 2 h对纤维连接素( FN)和 Matrigel的粘附都达到了抑制高峰. (4)在趋化实验中, 500 ng/ml vMIP-Ⅱ组穿膜细胞数( 24± 10)比对照组( 60± 9)要低( P< 0.05).结论: MCF 7的克隆形成率与 vMIP-Ⅱ的刺激浓度呈负相关. vMIP-Ⅱ能降低 MCF-7对 FN和 Matrigel的粘附和有效抑制 MCF-7 对人肺蛋白粗提物的靶向性趋化作用.     

The role of CXCR3 and CXCR4 in colorectal cancer metastasis

Chemokines and their receptors play key roles in leukocyte trafficking and are also implicated in cancer metastasis. We previously demonstrated that forced expression of CXCR3 promotes colon cancer metastasis preferentially to the draining lymph nodes (LNs), with poor prognosis. Using clinical colorectal cancer (CRC) samples, here, we show that expressions of CXCR3 and CXCR4 are significantly higher in metastatic foci within LNs and liver compared to primary tumors, whereas ligands for CXCR3 and CXCR4 are not. We also have demonstrated that some human CRC cell lines constitutively express both CXCR3 and CXCR4, and that activation of CXCR3 strengthens the CXCR4‐mediated cell migration in vitro in a synergistic manner. By constructing SW620 cell lines with reduced expression of CXCR3 and/or CXCR4 using microRNA, we investigated in vivo metastatic activities in a mouse rectal transplantation model. Six weeks after inoculation, CXCR3‐, CXCR4‐, and CXCR3/CXCR4 double‐knockdowns significantly reduced metastasis to LNs, liver and lungs, compared to the control (p < 0.05). Importantly, its suppressive effect on LN metastasis was significantly stronger in CXCR3‐ and CXCR3/CXCR4 double‐knockdowns. In addition, CXCR3‐ and CXCR3/CXCR4 double‐knockdowns significantly decreased the dissemination of cancer cells to liver and lungs, even after 2 weeks. These results indicate that targeting CXCR3 and CXCR4 can be a promising therapy against CRC metastasis.     

SRC激酶抑制剂对前列腺癌细胞侵袭与增殖的影响

目的：以PP2[4-Amino-5-（4-Chloro-Phenyl）-7-（t-Butyl）Pyrazolo（3,4-d）Pyrimidine]药物（src激酶抑制剂）处理前列腺癌细胞,检测src激酶及E-cadherin蛋白表达水平的变化,探讨PP2对前列腺癌细胞增殖和侵袭能力的影响。方法：PP2处理前列腺癌细胞PC-3,Western blot检测src及其相关蛋白的表达;Boyden小室实验检测细胞侵袭能力;MTT检测细胞的增殖能力。结果：PP2处理PC-3细胞后,src表达水平明显降低,E-cadherin表达水平升高;细胞的增殖和侵袭能力均受到明显抑制,剂量越高抑制作用越明显（P〈0.05）。结论：PP2通过提高细胞黏附分子E-cadherin的表达抑制前列腺癌细胞PC-3的增殖和侵袭能力。     

SRC激酶抑制剂对前列腺癌细胞侵袭与增殖的影响

目的:以PP2[4-Amino-5-(4-Chloro-Phenyl)-7-(t-Butyl)Pyrazolo(3,4-d)Pyrimidine]药物(src激酶抑制剂)处理前列腺癌细胞,检测src激酶及E-cadherin蛋白表达水平的变化,探讨PP2对前列腺癌细胞增殖和侵袭能力的影响。方法:PP2处理前列腺癌细胞PC-3,Western blot检测src及其相关蛋白的表达;Boyden小室实验检测细胞侵袭能力;MTT检测细胞的增殖能力。结果:PP2处理PC-3细胞后,src表达水平明显降低,E-cadherin表达水平升高;细胞的增殖和侵袭能力均受到明显抑制,剂量越高抑制作用越明显(P<0.05)。结论:PP2通过提高细胞黏附分子E-cadherin的表达抑制前列腺癌细胞PC-3的增殖和侵袭能力。