PKC、CaMK Ⅱ在慢性脑缺血大鼠认知功能损害中的作用

目的 观察慢性脑缺血大鼠海马组织蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)、钙调素依赖蛋白激酶Ⅱ(calmodulin-depend-ent protein kinase Ⅱ,CaMK Ⅱ)水平变化,探讨其在慢性脑缺血认知功能损害中的作用.方法 采用双侧颈总动脉永久性结扎(per-manent occlusion of bilateral common carotid arteries,2-VO)制作慢性脑缺血模型,40只大鼠随机分为假手术组,缺血3周组,缺血8周组,缺血12周组(n=10),Morris水迷宫检测大鼠空间学习记忆能力,Western blot法检测大鼠海马神经元PKC、CaMKⅡ、谷氨酸受体NMDAR1、NMDAR2B的表达水平,并观察其动态变化过程.结果缺血3周组大鼠的空间学习记忆能力较假手术组显著下降(P<0.05),缺血8周和12周组下降更加明显(P<0.01).缺血3周组海马区PKC、CaMKⅡ与谷氨酸受体NMDAR 1、NMDAR 2B表达水平较假手术组增高(P<0.01),缺血8周和12周组表达均降低(P<0.01).结论 PKC、CaMKⅡ与谷氨酸受体NMDAR 1、NMDAR2B变化规律相同,在缺血后期PKC、CaMKⅡ表达减低可能与学习记忆损害有关.     

紫草素对慢性脑低灌注损伤大鼠认知功能的保护作用

目的观察紫草素对慢性脑低灌注损伤大鼠所致认知损害的保护作用。方法雄性SD大鼠经双侧颈动脉结扎建立慢性脑低灌注损伤大鼠模型,将SD大鼠随机分为假手术组、脑缺血模型组和紫草素(SK)治疗组。以Morris水迷宫检测其空间学习记忆能力;取大鼠海马组织测定其丙二醛(MDA)的含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性、乙酰胆碱酯酶(AChE)的活力、乙酰胆碱转移酶(ChAT)含量。结果 SK高剂量组0.7mg·100g~(-1)·d~(-1))、低剂量组0.35mg·100g~(-1)·d~(-1)均可明显改善慢性脑低灌注损伤大鼠学习记忆障碍,可增加海马组织中SOD活性、抑制MDA的形成(P0.01);降低TChE含量、提高ChAT活性(P0.01)。结论 SK可明显改善慢性脑低灌注损伤大鼠模型的学习记忆能力,减轻氧化应激损伤、增强中枢胆碱能系统功能。     

雌激素对慢性脑缺血大鼠认知功能及突触素的影响

目的 研究苯甲酸雌二醇对慢性脑缺血大鼠认知功能及突触素的影响.方法 采用双侧颈总动脉永久性结扎制备慢性脑缺血模型,30只大鼠随机分为3组,A组:假手术组;B组:缺血组;C组:雌激素治疗组.各组于手术60d后,应用Y迷宫、免疫组化及图像分析系统测定大鼠认知功能及海马、齿状回突触素的含量.结果 治疗组较缺血组认知障碍明显改善(P＜0.01),与假手术组相比,缺血组突触素的含量明显下降,治疗组以上变化明显减轻(P＜0.01).结论 苯甲酸雌二醇能改善慢性脑缺血大鼠的认知功能,这可能与增加大鼠脑内突触素的含量有关.     

高压氧治疗对慢性脑缺血大鼠认知功能的影响及其作用机制

目的 探讨高压氧（hyperbaric oxygen,HBO）治疗对慢性脑缺血（chronic cerebral ischemia,CCI）大鼠 学习记忆能力的影响及其作用机制。 方法 选取240只雄性SD大鼠随机分为假手术组、CCI组和HBO组,每组80只。采用双侧颈总动脉阻 断法建立CCI模型,HBO组建模12 h后开始进行HBO治疗28 d,压力0.2 MPa,每日1次,每次60 mi n。采用 Morri s水迷宫实验评估7、14、21、28 d大鼠的学习记忆能力,每个时间点20只,检测前均进行3 d训练, 记录各组大鼠的逃避潜伏时间、穿越平台次数。28 d后处死大鼠取海马组织进行HE染色评估神经元 损伤病理变化,RT-PCR法检测Nogo-A mRNA,Western blot法检测Nogo-A蛋白的表达水平。 结果 ①与假手术组比较,CCI 组7、14、21、28 d逃避潜伏时间均延长（均P＜0.05）,28 d跨越平台次 数减少（P＜0.05）;与CCI 组比较,HBO组7、14、21、28 d逃避潜伏时间均缩短（均P＜0.05）,28 d跨越 平台次数增加（P＜0.05）。②HE染色显示HBO组神经元损伤程度较CCI组减轻;③CCI组Nogo-A mRNA 和Nogo-A蛋白表达水平均较假手术组升高（均P＜0.05）,HBO组表达水平均较CCI组下降（P＜0.05）。 结论 HBO治疗可改善慢性脑缺血大鼠认知功能,其机制可能与下调海马组织中Nogo-A的表达水平 有关。     

高压氧治疗对慢性脑缺血大鼠认知功能的影响及其作用机制

目的 探讨高压氧（hyperbaric oxygen，HBO）治疗对慢性脑缺血（chronic cerebral ischemia，CCI）大鼠
学习记忆能力的影响及其作用机制。
方法 选取240只雄性SD大鼠随机分为假手术组、CCI组和HBO组，每组80只。采用双侧颈总动脉阻
断法建立CCI模型，HBO组建模12 h后开始进行HBO治疗28 d，压力0.2 MPa，每日1次，每次60 mi n。采用
Morri s水迷宫实验评估7、14、21、28 d大鼠的学习记忆能力，每个时间点20只，检测前均进行3 d训练，
记录各组大鼠的逃避潜伏时间、穿越平台次数。28 d后处死大鼠取海马组织进行HE染色评估神经元
损伤病理变化，RT-PCR法检测Nogo-A mRNA，Western blot法检测Nogo-A蛋白的表达水平。
结果 ①与假手术组比较，CCI 组7、14、21、28 d逃避潜伏时间均延长（均P＜0.05），28 d跨越平台次
数减少（P＜0.05）；与CCI 组比较，HBO组7、14、21、28 d逃避潜伏时间均缩短（均P＜0.05），28 d跨越
平台次数增加（P＜0.05）。②HE染色显示HBO组神经元损伤程度较CCI组减轻；③CCI组Nogo-A mRNA
和Nogo-A蛋白表达水平均较假手术组升高（均P＜0.05），HBO组表达水平均较CCI组下降（P＜0.05）。
结论 HBO治疗可改善慢性脑缺血大鼠认知功能，其机制可能与下调海马组织中Nogo-A的表达水平
有关。     

慢性颈内动脉闭塞导致认知功能障碍的研究进展

慢性颈内动脉闭塞(CICAO)是认知功能障碍的独立危险因素,可通过多种机制影响脑部结构及血流动力学情况(包括淀粉样蛋白沉积、炎症介质形成、脑灌注不足等),导致非心脑血管事件风险增加。颈动脉系统重度狭窄或闭塞部位不同所致认知功能减退的表现形式可能存在差异,控制高血压等高危因素可降低其发生风险。临床上对于CICAO患者脑血流动力学情况常用的评估手段为CT灌注成像检查(CTP),其可能通过间接评估侧支循环及其他血流动力学指标来预测患者出现认知功能减退的风险,但准确性仍有争议。目前临床上常用药物可在一定程度上改善患者的认知功能,尚无根治药物,血管内介入治疗可能通过降低脑梗死再发及改善脑灌注而改善认知功能,但对于纳入患者的标准仍需严格评估,其安全性及有效性仍需进一步探索。该文基于该类疾病的研究现状,对其发病机制、影响因素、评估手段及治疗方案进行综述,以期为临床诊疗及后续研究提供参考。     

慢性脑缺血海马CA1区微血管LRP-1的表达及其对认知功能的影响

目的探讨慢性脑缺血大鼠海马CA1区微血管LRP—1表达与认知功能改变的相关性。方法应用双侧颈动脉结扎的方法制作SD大鼠慢性缺血模型;Morris水迷宫对大鼠的认知功能进行测试;免疫组化技术测定海马CA1区微血管LRP-1,Ⅷ因子相关抗原及GFAP的表达;放免技术对脑脊液Aβ蛋白的浓度进行测定。采用 MIAS图像分析系统对免疫组化结果进行平均光密度测定及微血管计数。结果术后1个月手术组大鼠认知功能已明显下降,寻找平台所需游走的距离较假手术显著延长。术后6个月手术组大鼠海马CA1区微血管LRP-1的表达较假手术组大鼠显著降低;GFAP的表达显著增强;但VIII因子相关抗原的表达及微血管计数两组之间无显著差异。微血管LRP-1表达与水迷宫成绩呈负相关。手术组大鼠脑脊液Aβ蛋白含量较假手术组显著下降。结论慢性缺血过程中,大鼠认知功能下降与海马CA1区微血管LRP-1的表达下降有显著相关性。     

番茄红素对血管性痴呆大鼠的认知功能及海马区细胞凋亡蛋白表达的影响

目的 探究番茄红素(LYC)对血管性痴呆(VaD)大鼠认知功能及海马区凋亡相关蛋白caspase9、caspase3表达的影响。方法 选用SD鼠随机分为假手术组(Sham组)、番茄红素干预组(LYC组)和血管性痴呆模型组(VaD组)。采用永久性双侧颈总动脉结扎法(2VO)制备VaD模型,灌胃给予LYC10mg·kg^-1·d^-1,共6w。Morris水迷宫实验评价各组大鼠的空间学习及记忆功能,Western blot检测海马区caspase9、caspase3的表达水平。结果 VaD组与Sham组相比,VaD组大鼠第1～4天的逃避潜伏期明显延长(P<0.05),穿越平台次数明显减少(P<0.05),海马区caspase9、caspase3表达水平显著增高(P<0.05)。LYC干预后,LYC组与VaD组相比,LYC组大鼠第1～4天的逃避潜伏期明显缩短(P<0.05),穿越平台次数明显增多(P<0.05),空间学习及记忆能力提高,海马区caspase9、caspase3表达水平明显下降(P<0.05)。结论 番...     

慢性脑低灌注所致认知障碍大鼠海马区自噬机制的初步研究

目的探索在不同慢性脑低灌注(CCH)时间点时,认知功能障碍大鼠海马区自噬水平的变化。方法 SD大鼠24只,随机分成4组(均n=6):4周假手术组;4周CCH组;8周假手术组;8周CCH组。用改良后两步双侧颈总动脉结扎法构建CCH模型大鼠;采用Morris水迷宫测试各组大鼠空间学习记忆能力;激光散斑血流仪(LSCI)监测各组脑血流(CBF);苏木精-伊红染色观察海马CA1区形态;蛋白印迹法和免疫组化学方法检测海马区自噬相关蛋白Beclin-1、LC3B、P62表达水平;透射电镜观察海马CA1区自噬泡形成情况。结果与4周假手术组比较,4周CCH组空间学习能力无明显下降;与8周假手术组比较,8周CCH组逃避潜伏期从第2天开始明显延长(均P0.05),目标象限游泳百分比(35.30±9.83 vs 47.57±13.94,P0.05)及平台穿越次数(4.29±1.79 vs 6.50±1.73,P0.05)明显减少;4周CCH组脑血流降低为4周假手术组的(73.87±5.30)%(P0.001),8周CCH组与8周假手术组脑血流差异无显著性;8周CCH组海马CA1区神经元凋亡数量较4周CCH组增多;CCH组Beclin-1、LC3B、P62表达水平均高于相应假手术组(均P0.05),尤其8周CCH组的Beclin-1和P62相对表达量较4周CCH组显著增加(P0.05);8周CCH组Beclin-1及LC3B阳性细胞数量较4周CCH组显著增加(均P0.05);4周及8周CCH组自噬囊泡样物质均增多,以8周CCH组最为显著。结论 CCH大鼠随时间延长空间学习记忆能力下降,大脑海马区自噬激活伴随自噬降解功能障碍,且自噬功能改变早于认知功能的明显下降。     

慢性脑低灌注大鼠海马缝隙连接蛋白32和36的表达变化

目的：观察慢性脑低灌注大鼠海马组织中缝隙连接蛋白（Cx）32和Cx36的变化,探讨其在慢性脑低灌注认知功能损害中的作用。方法：双侧颈总动脉永久性结扎（2VO）制作慢性脑低灌注模型,Morris水迷宫检测2VO大鼠空间学习记忆能力变化,免疫组化检测2VO大鼠海马各区Cx32和Cx36的表达水平。结果：慢性脑低灌注大鼠的空间学习记忆能力较假手术对照组显著下降,海马Cx32和Cx36的表达也有降低。结论：Cx32和Cx36可能参与了慢性脑低灌注导致的认知功能损害。     

Citicoline Protects Against Cognitive Impairment in a Rat Model of Chronic Cerebral Hypoperfusion

Background and purpose

Cerebral white matter (WM) lesions are frequently observed in human cerebrovascular diseases, and are believed to be responsible for cognitive impairment. Various neuroprotective agents can suppress this type of WM or neuronal damage. In this study, we investigated whether citicoline, a drug used to treat acute ischemic stroke, can attenuate WM lesions and cognitive decline caused by chronic hypoperfusion in the rat.

Methods

Animals were divided into immediate- and delayed-treatment groups. Those in the immediate-treatment group received a sham operation, citicoline (500 mg/kg/day), or phosphate buffered saline (PBS) treatment. Citicoline or PBS was administered intraperitoneally for 21 days after occluding the bilateral common carotid arteries. Rats in the delayed-treatment group were intraperitoneally administered with either 500 mg/kg/day citicoline or PBS for 21 days beginning on the 8th day after the operation. From the 17th day of administration, the rats were placed in an eight-arm radial maze to examine their cognitive abilities. After completing the administration, tissues were isolated for Klüver-Barrera and the terminal deoxynucleotidyl transferase biotin-dUTP nick end labelling (TUNEL) staining.

Results

In the immediate-treatment group, cognitive functions were preserved in the citicoline-treated group, and WM damage and TUNEL-positive cells differed significantly between the citicoline- and PBS-treated animals. In the delayed-treatment group, there was no decrease in WM damage and TUNEL-positive cells, but cognitive improvement was evident for citicoline treatment relative to PBS treatment.

Conclusions

These results show that citicoline can prevent WM damage and aid cognitive improvement, even after a certain extent of disease progression. Citicoline might be useful in patients with acute ischemic stroke as well as in chronic stroke accompanied with cognitive impairment.     

慢性脑低灌注对2型糖尿病模型大鼠空间学习记忆能力的影响及胆碱能神经元损伤的机制探讨

目的探讨2型糖尿病（DM）是否加重慢性脑低灌注（CCH）大鼠胆碱能神经元及空间学习记忆能力损伤。方法SD大鼠24只,随机分为4组（均n=6）：①对照组（正常饮食＋假手术）;②DM组[高脂饮食＋链脲佐菌素（STZ）];③CCH组[正常饮食＋双侧颈总动脉永久性结扎（2-VO）];④DM-CCH组（高脂饮食＋STZ＋2-VO）。采用Morris水迷宫测试各组大鼠学习记忆能力;免疫组化学法检测海马区乙酰胆碱转移酶（CHAT）阳性细胞表达和免疫印迹法检测海马ChAT相对表达量。结果DM＋CCH组逃避潜伏期与对照组比较明显延长,第2-4天（P〈0．001）、第5天（P〈0．01）;目标象限时『目】百分比明显低干对照组（P〈0．01）、DM组（P〈0．05）和CCH组（尸〈O．05）。DM＋CCH组海马区ChAT阳性细胞表达明显减少,ChAT相对表达量较对照组显著减少（P〈0．01）、DM组（P〈0．05）和CCH组（P〈0．05）显著减少。结论DM可加重CCH大鼠的空间学习记忆能力障碍,可能与海马区胆碱能神经元损伤有关。     

癫痫持续状态和慢性癫痫对大鼠学习记忆和情感行为的影响

目的探讨急慢性癫痫发作对大鼠认知功能的影响。方法戊四氮(PTZ)诱导大鼠癫痫持续状态(SE)和慢性癫痫(CEP),用交替电刺激Y迷宫试验、Morris水迷宫试验、抬高迷宫试验和旷场试验检测大鼠学习记忆和情感行为变化。结果SE大鼠致痫后近期水迷宫逃避潜伏期延长(P<0.05),平台象限搜寻时间百分比降低(P<0.01),穿越平台区域次数减少(P<0.05)Y迷宫选择错误总数增多(P<0.05);抬高迷宫开放臂中逃避时间延长(P<0.05),进入次数增多(P<0.05);旷场活动的格子数、站立次数及粪便颗粒数均减少(P<0.05)。远期均恢复正常。CEP大鼠致痫后近期水迷宫部分时段逃避潜伏期延长(P<0.05),远期恢复正常,Y迷宫选择错误总数近期和远期均增多(P<0.05)抬高迷宫开放臂中逃避时间和进入次数及旷场活动格子数、站立次数和粪便颗粒数与对照组相比均无明显差别(P>0.05)。结论癫痫持续状态可导致大鼠短期学习记忆功能受损和情感行为异常慢性癫痫引起的学习记忆能力降低持续时间较长,对情感行为无明显影响。交替电刺激Y迷宫在检测癫痫大鼠学习记忆功能方面可能较Morris水迷宫更灵敏。     

纳洛酮改善东莨菪碱所致大鼠空间工作记忆障碍的神经机制研究

目的　对纳洛酮改善东莨菪碱所致大鼠空间工作记忆障碍的神经机制进行探索。目的　对纳洛酮改善东莨菪碱所致大鼠空间工作记忆障碍的神经机制进行探索。方法　大鼠随机分成三组:正常组、东莨菪碱组和纳洛酮治疗组,采用Morris水迷宫延缓性匹配任务试验记录每只大鼠前后两次逃避潜伏期的时间。利用免疫组化及图像分析技术,定量测定各组大鼠海马和前额叶皮层胆碱乙酰转移酶(ChAT)合成,利用电子显微镜技术,观察大鼠海马CA1区超微结构的改变。结果　(1)前后两次逃避潜伏期在正常组呈极显著性差异(t =7.32, P =0.00),东莨菪碱组无差异 (t =1.01, P =0.35),纳洛酮治疗组呈显著性差异(t =3.19, P =0.02)。(2)各组大鼠海马CA1、CA3区, 前额叶皮层神经元ChAT量无差别(P >0.05)。(3)各组大鼠锥体细胞胞体超微结构正常,但东莨菪碱组CA1区神经元突触超微结构明显改变。结论　M-型胆碱能受体阻滞剂东莨菪碱能损害大鼠空间工作记忆;阿片受体阻滞剂纳洛酮能够改善这种损害,其神经机制并非是增加 ChAT活性,而是能促进神经元突触囊泡Ach向突触间隙大量释放,及增加突触后致密物质密度。     

依达拉奉对慢性脑低灌注大鼠脑自由基代谢及海马CA1区HIF-1α表达的影响

目的:观察依达拉奉对慢性脑低灌注大鼠前脑组织SOD、MDA代谢变化及海马CA1区HIF-1α表达的影响,并探讨其意义。方法:实验分假手术组,模型组及依达拉奉组,后两组采用永久性大鼠双侧劲总动脉结扎术(2-vesselocclusion,2VO)制备慢性脑低灌注模型,各组在术后八周后行水迷宫试验后断头,取前脑组织制备成10%脑组织匀浆检测其SOD活性及MDA含量,并采用免疫组化技术观察海马CA1区HIF-1α表达变化。结果:模型组与假手术组相比水迷宫完成时间显著延长(P<0.05),前脑组织SOD活性降低,MDA含量增加(P<0.01),海马CA1区可见HIF-1α少量表达。依达拉奉组较模型组水迷宫结果显著改善(P<0.01),前脑组织SOD活性增加,MDA含量减少(P<0.01),且海马CA1区可见HIF-1α大量表达。结论:慢性脑低灌注可显著损害大鼠空间学习记忆能力,依达拉奉可能通过抑制黄嘌呤氧化酶和次黄嘌呤氧化酶活性,降低羟自由基的浓度,促进HIF-1α表达等多种途径改善血管性认知障。     

人类脂肪干细胞对慢性脑缺血大鼠认知功能障碍的影响

目的 观察人类脂肪干细胞（human adipose-derived stem cells,hASCs）对慢性脑缺血大鼠认知功能障碍的影响。方法 体外分离、培养及扩增hASCs;利用结扎双侧颈总动脉的方法制备慢性前脑缺血大鼠模型（two-vessel occlusion model,2VO模型）,分别于造模后1d、1周、3周经尾静脉注射hASCs（2×106/ml）。造模5周后进行行为学实验,观察缺血后不同时间点应用hASCs对大鼠认知功能障碍的影响。结果 模型组的游泳时间明显长于假手术组（P <0.01）;造模后3周给予hASCs对模型组大鼠的认知功能障碍有改善作用（P <0.05）,而造模后1d及1周组的结果无统计学意义（P >0.05）。结论 静脉给予hASCs可改善慢性脑缺血大鼠的认知功能,且慢性期治疗效果较急性期好。     

金纳多对血管性痴呆大鼠认知功能及生长抑素表达的影响

目的研究金纳多对血管性痴呆(vascular dementia,VD)大鼠认知功能及生长抑素(SS)表达的影响。方法采用结扎双侧颈总动脉方法制备慢性前脑缺血动物模型。将100只老龄大鼠随机分为假手术组、模型组和金纳多组。应用水迷宫及免疫组化方法对各组大鼠学习记忆及SS表达进行观察。结果模型组与假手术组学习记忆能力差异有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,金纳多治疗30 d后大鼠学习记忆能力明显改善(P<0.05),SS阳性神经元表达增加(P<0.05)。结论金纳多可增加SS阳性神经元表达,改善VD大鼠学习记忆能力。     

代谢型谷氨酸受体激动剂3,5-二羟基苯甘氨酸对大鼠学习记忆行为的影响

目的研究代谢型谷氨酸受体激动剂3,5-二羟基苯甘氨酸(DHPG)对SD大鼠学习记忆行为的影响。方法选用雄性SD大鼠,随机分为DHPG组和人工脑脊液(ACSF)组,利用大鼠脑立体定位方法分别于两侧海马CA1区微量注射DHPG和ACSF。应用Morris水迷宫进行定位航行实验和空间探索实验测定两组大鼠DHPG和ACSF注射前后的学习记忆能力。结果 DHPG组海马CA1区注射DHPG后,与ACSF组比较,大鼠定位航行实验中逃避潜伏期延长(P0.05);空间探索实验中穿越原平台次数、目标象限路程均减少(P0.05)。结论 DHPG可能与大鼠学习记忆障碍有关。