柱前衍生化高效液相色谱法测定鳖甲生、制品中氨基酸的含量

目的:建立柱前衍生化高效液相色谱法分析鳖甲生、制品中氨基酸的组成和含量。方法:采用酸水解法制备鳖甲生、制品的氨基酸样品溶液,以邻苯二甲醛(OPA)和9-芴甲基氯甲酸酯(FMOC)为柱前衍生化试剂,采用C18色谱柱,梯度洗脱。结果:18种氨基酸在38 min内得到较好分离,在一定浓度范围内线性关系良好(r≥0.9991),鳖甲生、制品中检出的16种氨基酸的平均加样回收率在90.43%~110.69%之间,RSD在0.76%~5.89%之间(n=6)。结论:该方法分离效果较好,可用于测定鳖甲生、制品的氨基酸含量。     

柱前衍生RP-HPLC法测定黄芩中氨基酸含量

目的采用柱前衍生RP-HPLC法对黄芩中游离及总氨基酸进行测定。方法以异硫氰酸苯酯为柱前衍生化试剂;色谱柱为Ultimate Amino Acid氨基酸分析专用柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相:A为乙腈-水(80∶20,V/V),B为三水合醋酸钠缓冲溶液(pH 6.5)-乙腈(93∶7,V/V),梯度洗脱;检测波长为254 nm。结果 21种氨基酸在0.002 5~2.500 0 mmol/L内呈良好的线性关系(R20.999 0)。21种游离氨基酸平均回收率在93.72%~105.03%之间,RSD在0.81%~3.15%之间(n=6);总氨基酸平均回收率在95.22%~102.04%之间,RSD在0.47%~2.44%之间(n=6)。结论柱前衍生RP-HPLC法灵敏、准确,具有良好的重复性和稳定性,适合黄芩中氨基酸含量测定。     

PITC柱前衍生HPLC测定柴胡炮制前后17种氨基酸含量

目的:建立一种同时测定鳖血柴胡中17种氨基酸含量的方法,为该药材的质量控制提供参考。方法:以异硫氰酸苯酯(PITC)为柱前衍生试剂,采用Prevail C18色谱柱,流动相[乙腈-水(4∶1)]-[乙酸钠缓冲溶液(p H 6.5)-乙腈(97∶3)]梯度洗脱,检测波长254 nm,测定柴胡炮制前后氨基酸的含量。结果:17种氨基酸在32 min内可良好分离;样品平均加样回收率93.4%~107.1%,RSD 1.8%~3.9%。结论:与其他柱前衍生测定氨基酸含量的方法相比,该方法具有可操作性强、成本低、易推广等优势,可作为柴胡及其炮制品中氨基酸的含量测定方法。     

柱前衍生RP-HPLC测定女贞子中21种氨基酸含量

目的:建立一种采用柱前衍生RP-HPLC检测女贞子中游离氨基酸和水解氨基酸含量的方法。方法:采用HPLC,用异硫氰酸苯酯进行柱前衍生,采用梯度洗脱的方法,检测女贞子中游离氨基酸和水解氨基酸含量。结果:21种氨基酸线性范围在0.002~0.270 mmol·L~(-1),r均≥0.999 5;21种游离氨基酸的平均加样回收率在88.33%~99.88%,RSD为0.6%~2.5%,水解氨基酸的平均加样回收率在90.32%~99.91%,RSD为0.5%~2.5%。结论:该方法适合测定女贞子中游离及水解氨基酸的含量。     

不同采摘期金银花中氨基酸含量的PITC柱前衍生HPLC法测定

目的建立柱前异硫氰酸苯酯(PITC)衍生HPLC测定金银花中水解氨基酸的方法,并比较不同采摘期对金银花氨基酸的含量影响。方法 6 mol·L-1盐酸水解金银花蛋白,以PITC为柱前衍生试剂,采用HPLC法测定不同采摘期金银花中氨基酸的峰面积并计算其含量。结果 18种氨基酸的分离良好,线性关系良好,精密度RSD在0.28%~0.86%之间,重复性RSD在0.92%~2.01%之间,稳定性RSD在0.67%~1.21%之间,加样回收率96.58%~103.52%之间且RSD均小于5%。金银花中18种氨基酸的总量、药用氨基酸合计和增味剂氨基酸合计都是幼蕾期最高,二白期次之。结论该方法简便、快捷,能准确的测定金银花氨基酸的含量。二白期氨基酸含量较佳,适合作为金银花的采收期,为山东金银花的规范化种植提供了理论依据。     

柱前衍生化RP-HPLC测定白芷中氨基酸含量

目的建立柱前衍生RP-HPLC法测定白芷中游离氨基酸含量的方法,并测定不同产地的白芷样品中游离氨基酸含量。方法样品以异硫氰酸苯酯(PITC)为衍生化试剂,经与白芷中氨基酸柱前衍生,并以高效液相色谱法测定其含量,色谱条件采用Waters Symmetry RP18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm),流动相以[50mmol/L乙酸钠缓冲液(以冰醋酸调至p H6.5)](A)-[乙腈-甲醇-水(60:20:20)](B)进行梯度洗脱,柱温35℃,流速1.0 m L/min,检测波长254nm。结果 17种氨基酸均能达到基线分离,17种氨基酸的平均回收率在95.48%~104.30%之间,RSD在3.2%~4.9%之间(n=6)。结论柱前衍生RP-HPLC法灵敏,准确,重现性和稳定性良好,适用于对白芷中的氨基酸含量进行研究,为白芷药材的质量控制和评价提供了科学依据,不同产地的白芷样品中氨基酸的含量存在差异,必需氨基酸的比例也存在差异。     

青葙子中氨基酸的柱前衍生化HPLC-DAD法测定

目的建立柱前衍生HPLC-DAD法测定中药青葙子中游离氨基酸和水解氨基酸的含量方法。方法采用超声提取法和盐酸水解法制备青葙子的2类氨基酸样品溶液,以异硫氰酸苯酯柱前衍生HPLC-DAD法分析青葙子中的氨基酸。结果 18种氨基酸的分离良好,空白无干扰,线性关系良好,精密度RSD在0.30%~1.58%之间,重复性RSD在0.47%~1.92%之间,稳定性RSD在0.42%~1.71%之间,加样回收率96%~103%之间且RSD均小于5%,游离和水解氨基酸的含量分别为0.4022%、6.9082%,药用氨基酸和必需氨基酸含量较高。结论该方法简便、快捷,能准确地测定青葙子中游离和水解氨基酸的含量,为青葙子及其制剂的质量控制提供了依据。     

柱前衍生化HPLC法测定不同基原珍珠粉及贝壳粉中7种氨基酸的含量

目的:建立柱前衍生化HPLC检测不同基原珍珠粉及贝壳粉中7种主要氨基酸的方法。方法:以异硫氰酸苯酯为柱前衍生化试剂,采用C18色谱柱,流动相A:0.1 mol/L醋酸钠溶液(用醋酸调p H值至6.5),流动相B:乙腈,梯度洗脱,检测波长254 nm。结果:氨基酸衍生溶液在24 h内保持稳定,7种氨基酸线性相关系数均大于0.9995,加样回收率在93.16%~103.31%之间。结论:本方法分离效果好,精密度和重复性良好,可用于珍珠粉及贝壳粉中7种水解氨基酸含量的测定。     

柱前衍生RP-HPLC测定仙灵骨葆胶囊中16种氨基酸

目的:建立柱前衍生RP-HPLC同时测定仙灵骨葆胶囊中16种氨基酸的方法。方法:以正亮氨酸为内标物,异硫氰酸苯酯(PITC)为柱前衍生剂,用高效液相色谱测定仙灵骨葆胶囊中水解氨基酸的量。采用Hypersil C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以乙腈-0.1 mol·L-1乙酸钠溶液-乙酸(7∶93∶0.05)为流动相A,乙腈-水(80∶20)为流动相B进行梯度洗脱,体积流量1 m L·min-1,检测波长254 nm,柱温40℃。结果:33 min内可完成仙灵骨葆胶囊中16种氨基酸的分离测定,线性关系良好(r0.996 8),回收率97.5%~100.7%,RSD5%。结论:该方法简便快速、准确可靠,可用于仙灵骨葆胶囊中氨基酸的含量测定。     

PITC柱前衍生HPLC测定复方氨基酸注射液中18种氨基酸的含量

目的：建立柱前衍生高效液相色谱法同时测定复方氨基酸注射液（18AA）中18 种氨基酸含量的方法。方法：样品采用异硫氰酸苯酯（PITC）柱前衍生,以Unitary-C18柱（250 mm×4.6 mm,5 μm）为色谱柱,检测波长为254 nm,醋酸钠缓冲盐及乙腈、甲醇和水的混合体系为流动相,梯度洗脱。结果：优化了衍生试剂用量、衍生时间、缓冲盐浓度以及pH 值和柱温等影响因素,最终在40 min内实现了18种氨基酸的分离,在9~1 021 μg·mL-1浓度范围内线性关系良好,且相关系数大于0.997 7,平均回收率为92.6%~110.7%,相对标准偏差（RSD）为0.01%~5.68%。其定量限（LOQ,S/N=10）为0.02~13.41 μg·mL-1。结论：该方法操作简便、灵敏度高、准确度和精密度好,可用于复方氨基酸注射液中氨基酸的含量测定。     

僵蚕抗凝活性部位中化学成分的初步研究

目的探索僵蚕水煎液、醇沉液和凝胶色谱馏分各部位中的抗凝活性成分。方法用水煎煮、60％醇沉处理和凝胶色谱方法制备抗凝活性部位，用化学反应鉴别、氮测定法、电导、紫外吸收光谱和高效液相色谱方法检测各部位中的蛋白质或多肽和氨基酸类及草酸铵等成分。结果僵蚕的水煎煮提取、醇沉和凝胶色谱分离所得抗凝活性部位中，多肽、氨基酸类和草酸铵都是其中的主要成分，其含量在80％以上。醇沉处理使草酸铵含量下降约52％，而多肽、氨基酸类含量仅降低约8％。凝胶色谱净化后，多肽、氨基酸类含量与水煎部位比约提高28％，与醇沉处理部位比约提高39％；而草酸铵含量与醇沉液部位相当，但比水煎煮部位降低约1倍。各部位的固形物中，15种氨基酸含量在40％～50％，占定氮法测定的蛋白质含量的60％～76％；多肽类成分的分子量为1．0～4．4kDa。结论本研究为僵蚕抗凝活性成分的进一步分离纯化提供了实验基础。     

不同规格鹿茸商品药材中氨基酸含量分析

目的: 测定不同规格鹿茸商品药材中氨基酸的含量,从氨基酸含量方面对不同规格鹿茸进行质量控制. 方法: 采用柱前衍生化法,利用氨基酸自动分析仪对样品中18种氨基酸含量进行测定. 结果: 18种氨基酸线性方程r均大于0.997,平均回收率均在99.1%~108.1%,RSD均小于2.0%;39个不同品种规格鹿茸药材中均含有17种氨基酸及7种人体必需氨基酸,腊片氨基酸含量较高,头茬茸较二茬茸氨基酸含量高,与传统分类相一致. 结论: 该方法可用于鹿茸药材氨基酸含量测定及质量控制.     

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??OBJECTIVE To establish a quantitative method of determining the contents of 15 kinds of free amino acids in the Hericium erinaceus mycelium. METHODS The HPLC analysis was performed after derivatization by using phenyl isothiocyanate (PITC) as a derivative reagent. The chromatographic column was Ultimate Amino Acid(4.6 mm??250 mm, 5 ??m). The mobile phase A was acetonitrile-water (80??20), and mobile phase B was sodium acetate buffer (pH 6.5). Gradient elution was performed at the flow rate of 1.0 mLmin^-1. The detection wavelength was set at 254 nm, and the column temperature was maintained at 40 ??. RESULTS The correlation coefficients of 15 kinds of free amino acids ranged from 0.999 7 to 0.999 9. The average recovery rate (n=6) was between 96.83%-98.60%, and the RSD was between 0.67%-2.67%. CONCLUSION This method is simple, accurate and can be used to determine the contents of 15 kinds of free amino acids in the Hericium erinaceus mycelium.     

雀脑药材的质量标准提升研究＊

目的 进行雀脑药材的鉴别、检查及含量测定研究，为其临床应用、生产使用与市场监督管理提供质量保证。方法 鉴别研究采用显微鉴别及薄层鉴别方法；水分检查采用烘干法，总灰分及酸不溶性灰分检查采用炽灼残渣法；含量测定采用总氮量法及全自动氨基酸分析仪法。结果 雀脑的显微鉴别特征为树突碎片与神经纤维；薄层鉴别以丙氨酸为对照，鉴别氨基酸类成分，随机选取20111001批雀脑药材为对照药材。水分介于5.57%-5.83%，总灰分介于4.40%-4.70%，酸不溶性总灰分介于0.28%-0.38%。总氮量介于6.49%-7.04%。17种氨基酸的线性相关系数介于0.9997-0.9999；精密度实验RSD介于0.11%-0.52%；10小时内稳定性良好，RSD介于0.02%-0.84%；重复性实验RSD介于0.17%-2.27%；回收率实验RSD介于1.24%-2.47%，平均回收率介于97.38%-102.19%；3批雀脑药材的17种氨基酸总含量介于47.61-66.37 mg·g^-1。结论 建立显微鉴别、薄层鉴别及含量测定方法专属性强，重现性好，具有较强创新性，对于控制雀脑药材质量具有显著意义；水分、总灰分、及酸不溶性灰分测定结果，可以为制订雀脑药材质量标准提供实验依据。     

不同种质金线莲氨基酸和矿物质元素量的比较

目的比较不同种质金线莲中氨基酸和矿物质元素的差异。方法采用全自动氨基酸分析仪和原子吸收光谱仪测定11个不同种质金线莲中氨基酸和矿物质元素的量。结果不同种质金线莲必需氨基酸为2.81%~4.47%,总氨基酸量为11.38%~17.06%,其中天门冬氨酸、谷氨酸和精氨酸的量明显高于其他氨基酸组分。矿物质元素中钾元素的量最高,其顺序为KCaMgFeMnZnCrCuPbCd。主成分分析表明丙氨酸、丝氨酸、谷氨酸、天门冬氨酸、苏氨酸、异亮氨酸、丙氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸为金线莲的特征性氨基酸,Fe、Zn、Mn、Ca、Cr、Mg为金线莲的特征性元素。结论金线莲中氨基酸和矿物质元素量存在地域性差异。     

利用柱前在线衍生-高效液相色谱法测定培植牛黄及天然牛黄中18种氨基酸的含量

目的:建立1种利用高效液相色谱同时测定培植牛黄药材中18种氨基酸含量的方法。方法:以邻苯二甲醛(OPA)和9-芴甲基氯甲酸酯(FMOC)为柱前衍生化试剂。色谱柱为AJS-02氨基酸分析专用柱C18(150 mm×4.6 mm,3μm);流动相A为磷酸氢二钠-四硼酸钠缓冲液(pH 8.2),流动相B为甲醇-乙腈-水(9∶9∶2),梯度洗脱;流速为1.6 mL·min^-1;柱温为50℃;检测波长为338 nm(一级氨基酸)和262 nm(二级氨基酸)。结果:各个氨基酸在线性浓度范围内,峰面积与内标比值与浓度呈良好的线性关系(除Lys外,r>0.9990),平均回收率为90%~110%。结论:本方法准确、灵敏、简便,适用于培植牛黄药材中门冬氨酸等18种氨基酸的含量测定。     

蟾蜍油炮制工艺及质量评价方法研究

目的 优化蟾蜍油干燥工艺,并建立以高效液相色谱法（HPLC）指纹图谱及氨基酸含量测定为主的质量评价方法。方法 以氨基酸和浸出物为指标,进行蟾蜍油热风干燥、自然阴干、冷冻干燥及真空干燥工艺的优选,分别考察了热风干燥的加热温度、加热时间、物料厚度,冷冻干燥的预冻时间、冷冻干燥时间,真空干燥的温度及时间对蟾蜍油的影响。采用HPLC建立15批蟾蜍油的指纹图谱,确定共有峰并进行相似度评价;同时,采用柱前衍生化法测定氨基酸含量。结果 蟾蜍油最佳工艺为不叠加样本,50 ℃热风干燥11 h。HPLC指纹图谱中共确定7个共有峰,相似度均大于0.99;异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸质量分数分别为0.40%~0.57%、0.57%~0.78%、0.54%~0.75%、0.26%~0.86%。结论 所确定的工艺及质量评价方法简便、重复性好,可为蟾蜍油的加工炮制及质量评价提供参考。     

基于指纹图谱结合多元统计分析不同干燥方式蟾蜍肉氨基酸类成分

目的 建立不同干燥方式所得蟾蜍肉氨基酸类成分的指纹图谱及4个氨基酸的含量测定方法,比较不同干燥方式对蟾蜍肉品质及其氨基酸含量的影响。方法 采用异硫氰酸苯酯柱前衍生化-高效液相色谱法,建立热风干燥、冷冻干燥、真空干燥和阴干干燥4种方式所得蟾蜍肉干燥样品的指纹图谱,同时测定4个氨基酸含量,并进行相似度评价;运用SPSS 22.0软件进行聚类分析,运用SIMCA 14.1软件进行主成分分析（PCA）和偏最小二乘法-判别分析（PLS-DA）。结果 不同干燥方式得到的16批蟾蜍肉样品指纹图谱相似度结果均大于0.970,共匹配出10个共有峰,指认出缬氨酸、蛋氨酸、异亮氨酸、亮氨酸4个氨基酸;PCA提取出2个主成分,累积方差贡献率为87.95%;PLS-DA得出异亮氨酸、缬氨酸、亮氨酸、蛋氨酸的变量重要性投影（VIP）值均大于0.7,提示4个氨基酸可作为评价不同干燥方式所得蟾蜍肉品质的关键指标;阴干干燥、热风干燥、冷冻干燥和真空干燥4种方式所得蟾蜍肉氨基酸总质量分数测定值分别为7.92%、4.62%~5.37%、7.89%~9.02%和4.60%~9.24%。结论 所建立的指纹图谱及含量测定方法稳定可行,结合多元统计分析发现不同干燥方式对蟾蜍肉氨基酸含量产生较大影响,可为蟾蜍肉干燥方式和质量控制研究提供参考。     

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??OBJECTIVE To establish an UFLC-QTRAP-MS/MS method for simultaneous determination of 15 kinds of amino acids and 12 kinds of nucleosides and nucleobases in different parts of Metaplexis japonica(Thunb.) Makino processed by different methods. METHODS The analysis was carried out on a Waters XBridge Amide column(2.1 mm??100 mm,3.5 ??m) with elution by mobile phase of 0.2% formic acid in acetonitrile-0.2% formic acid in water at a flow rate of 0.6 mL??min^-1. The column temperature was maintained at 30 ??. The target compounds were analyzed by positive ion multiple reaction monitoring(MRM) mode. RESULTS Twenty-seven multiple constituents showed good linearity(r??0.997 3) in the ranges of the tested concentrations. The average recoveries of the 27 components were 98.17%-100.75% with relative standard deviations of 0.90%-2.49%. CONCLUSION The established method is accurate and precise, which provides a reliable solution for selecting the parts and the optimal processing method of Metaplexis japonica(Thunb.)Makino.