快速诊断布鲁氏菌病胶体金免疫层析法的建立

目的:研发一种布鲁氏菌病快速诊断试剂.方法:应用胶体金免疫层析法(GICA),经布鲁氏菌病病人和健康人不同血清用量的测试,选择最佳血清用量,建立快速检测诊断布鲁氏菌病的新方法.结果:胶体金免疫层析法快速检测布鲁氏菌病最佳血清用量为10 μl,检测布鲁氏菌病敏感性和特异性分别达到93.6%和94.9%,youden指数为0.885,检测结果与DIGFA及SAT比较三者无统计学意义(P>0.05).结论:应用胶体金免疫层析法(GICA)快速诊断布鲁氏菌病,不仅具有试剂敏感、特异的优点,且血清用量更少(10μl),操作更为简便,更适合于布鲁氏菌病的诊断、流行病学调查及现场应用.     

风疹IgG抗体检测在风疹流行病学调查中的应用

目的应用胶体金固相免疫层析法检测风疹IgG抗体,并探讨其在流行病学分析中的应用价值。方法采用风疹抗原、羊抗人IgG抗体为原料,建立胶体金固相免疫层析法,对患者及健康人群进行检测,对结果与临床诊断意义进行分析。结果风疹IgG抗体检测中,不同年龄组风疹感染儿童IgG抗体阳性率有显著差异,不同月份感染儿童IgG抗体阳性率无显著差异;280例临床样本中,可见随着年龄的增长风疹IgG抗体阳性率也随之升高。结论胶体金固相免疫层析法检测风疹IgG抗体具有操作简便、反应快速、灵敏度高、特异性强、稳定性高,无放射性及毒性危害且临床符合率高等特点,可作为风疹病毒感染诊断和疗效观察的良好指标。     

2种免疫层析技术用于4种传染病及其病原体检测的研究

[目的]寻求能够快速定性,定量检测4种传染病及其病原体的试验方法。[方法]应用双抗体夹心法,建立胶体金免疫层析法、上转磷光(UCP)免疫层析法检测炭疽杆菌芽孢(以下简称炭疽芽孢)、鼠疫杆菌、肠出血性大肠埃希菌O_(157)：H_7(以下简称EHEC O_(157)),评价方法的灵敏性、特异性。通过分别检测模拟掺入3种菌/芽孢的“白色粉末”和检测3种细菌的强毒株,评价在实际环境样品检测中的应用。应用双抗原夹心法,建立胶体金免疫层析法、上转磷光(UCP)免疫层析法检测鼠疫F1抗体、SARS病毒抗体,检测239份青海鼠疫疫区人员血清、1236份新疆鼠疫疫源地鼠血清,检测18份恢复期SARS病人血清和9份健康对照者血清,以及206份出入境健康人员血清,考核2种检测抗体的方法在实际样品检测中的应用。通过比较炭疽杆菌、鼠疫杆菌、大肠埃希菌O_(157)以及鼠疫杆菌抗体、SARS病毒抗体的胶体金免疫层析方法、UCP免疫层析方法,比较我们建立的2套系统与加拿大RAMP系统检测炭疽杆菌的能力。[结果]UCP免疫层析方法能在35min内完成检测,炭疽芽孢检测掺入“白色粉末”的样品灵敏性为1×10~4cfu/ test,炭疽芽孢最低检测限为1×10~5cfu/ml(原溶液芽孢浓度),多种不同的芽孢菌及其它细菌共38种54株检测说明该法特异性良好,仅与腊样芽孢杆菌有交叉反应,特异性为97％；鼠疫杆菌检测灵敏性为5×10~4cfu/ml,最低检测菌数为5×10~3cfu/test,在10~7cfu/ml水平上未发现与30余种细菌有交叉反应,包括最近缘假结核耶尔森菌；EHEC O_(157)检测灵敏性为1×10~3cfu/ml,仅与弗氏枸橼酸杆菌有交叉反应,特异性为98％。胶体金免疫层析方法能在10min内完成检测,炭疽芽孢、鼠疫杆菌、EHEC O_(157)检测灵敏度分别为1×10~6cfu/ml、1×10~5cfu/ml、1×10~5cfu/ml,“白色粉末”等环境样品最低可检测敏感性为1×10~5cfu,1×10~4cfu,1×10~4cfu/test。胶体金免疫层析方法分别应用于炭疽、鼠疫强毒株的检测,检测限为5×10~4cfu/test和7×10~4cfu/test。在实际血清样品检测中,与间接血凝方法对比,鼠疫抗体UCP和胶体金免疫层析方法有更好的敏感性。血清样品检测显示,SARS抗体的胶体金和UCP免疫层析方法均有较好的特异性和敏感性。[结论]2种免疫层析方法都有快速、敏感、特异的特点：上转磷光免疫层析方法可实现定量检测,敏感性优于胶体金免疫层析法；炭疽检测与加拿大RAMP检测系统相当；胶体金免疫层析法具有简便、直观、易行的特点。2种免疫层析方法均适合于炭疽芽孢芽孢、鼠疫杆菌、EHEC O_(157)、鼠疫杆菌抗体、SARS抗体的现场检测和筛查。     

麻疹病毒IgM抗体胶体金免疫层析法的建立

目的 建立检测麻疹病毒IgM抗体的胶体金免疫层析法.方法 用胶体金偶联重组麻疹病毒核蛋白,羊抗人IgM抗体为检测线包被蛋白,通过优化反应条件,建立麻疹病毒IgM抗体胶体金免疫层析法.选取10份麻疹病毒IgM阳性血清和20份健康人血清样本,验证方法的符合率.结果 建立的胶体金免疫层析方法检测阳性血清和健康人血清样本的符合...     

免疫层析法检测乙肝病毒表面抗原和表面抗体结果分析

目的:探讨免疫层析法与酶联免疫法(ELISA)检测乙型肝炎病毒(HBV)表面抗原(HBsAg)和表面抗体(抗-HBs)符合率。方法:分别用免疫层析法和酶联免疫法检测待检儿童血清HBsAg和抗-HBs,将两法检测结果做以分析、比较。结果:400例标本中,胶体金法和ELISA法检测HBsAg结果差异无统计学意义,两法符合率为97.25%;乳胶层析法和ELISA法检测抗-HBs结果差异有统计学意义,两法符合率为79.25%。结论:免疫层析法简便快速,但存在一定假阳性或假阴性率,不能完全替代ELISA法进行乙肝病毒血清标志物的检测,适合在不具备ELISA法检测条件的基层医疗单位和标本初筛使用。     

心肌肌钙蛋白I胶体金免疫层析法的建立

目的 心肌肌钙蛋白I (Cardiac TroponinI cTnI)胶体金免疫层析法(GICA)的建立。方法 从心肌组织中提取心肌肌钙蛋白I作为抗原,免疫新西兰大耳白家兔,制备出抗人心肌肌钙蛋白I抗体,并用胶体金标记cTnI抗体,采用免疫层析技术,建立了cTnI胶体金免疫层析法。结果 心肌肌钙蛋白I抗血清滴度达1:100 000,Ka=2.38×10⁹L/mol;心肌肌钙蛋白I胶体金免疫层析法:灵敏度为5 ng/ml;特异性:与心肌肌钙蛋白T,心肌肌钙蛋白C,激酸磷酸激酶同工酶(CK-MB)均无交叉反应。结论 本方法特异性强、快速、简便,适于急性心肌梗死的早期诊断及科研工作需要,具有广泛应用前景。     

鼠疫监测中胶体金免疫层析法的应用效果评价

目的 了解胶体金免疫层析法在鼠疫监测中的作用及其影响因素.方法 对2006年自广西隆林县、西林县鼠疫监测中收集的鼠脏器、鼠血清以及既往鼠疫阳性病人血清,利用胶体金免疫层析技术进行鼠疫菌F1抗原(脏器)与F1抗体(血清)检测.结果 鼠肝脏120份、鼠脾脏99份,胶体金法检测鼠疫菌F1抗原均为阴性;鼠血清235份胶体金法检测鼠疫菌F1抗体为阴性、既往鼠疫阳性病人27例胶体金检测鼠疫菌F1抗体灭活组阳性2例,阳性率为7.41%(2/27),升汞组均为阴性.结论 升汞对鼠疫菌F1抗体的检测有抑制作用;胶体金免疫层析法具有特异性强、敏感性高、操作简便、快速等优点,在鼠疫监测中具有重要的流行病学意义.     

免疫胶体金快速诊断技术的临床应用与质量控制

目的:免疫胶体金技术(ICGT)是继免疫荧光、放射性免疫和酶联免疫吸附法之后发展起来的固相标记免疫测定技术,了解ICGT在临床快速诊断的应用,提出在此实验过程中的质量控制建议。方法:以胶体金作为示踪标志物,应用于抗原抗体反应中。通过文献检索与归纳,对目前胶体金免疫技术的临床诊断、应用和常见问题进行总结。结果:医学检验中应用的免疫胶体金快速检测技术主要方法——快速斑点免疫金渗滤法(DIGFA)和胶体金免疫层析法(GICA)均以微孔滤膜为载体,该技术具有敏感性和特异性高、操作便捷及可快速判读结果等特点。结论:ICGT因其操作简便、快速诊断的特点,适用于广大基层医疗单位并能在现场进行检测和诊断。     

胶体金免疫层法在鼠疫监测中应用效果评价

目的 了解胶体金免疫层析法在鼠疫监测中的作用及其优劣.同时观察56℃30 min灭活与升汞盐水作用1 min对鼠疫菌F1抗体检测的影响.方法 对2006年从广西隆林县、西林县鼠疫监测中收集的鼠脏器、鼠血清以及既往鼠疫抗体阳性患者血清,利用胶体金免疫层析技术进行鼠疫菌F1抗原(脏器)与F1抗体(血清)检测.结果 鼠肝脏120份、鼠脾脏99份,胶体金法检测鼠疫菌Fl抗原均为阴性;鼠血清235份胶体金法检测鼠疫菌F1抗体为阴性、既往鼠疫阳性病人27例,胶体金检测鼠疫菌Fl抗体灭活组阳性2例,阳性率为7.41%(2/27),升汞组均为阴性.结论 升汞对鼠疫菌F1抗体的检测有抑制作用;胶体金免疫层析法具有特异性强、敏感性高、操作简便、快速等优点,在鼠疫监测中具有重要意义.     

双抗原夹心免疫层析法在新型冠状病毒感染诊断中的应用

目的:探讨双抗原夹心免疫层析法抗体检测在新型冠状病毒(2019-nCoV)感染中的诊断价值。方法:选取在医院就诊的179例新型冠状病毒肺炎(COVID-19)患者为临床诊断阳性病例,另选同期就诊的85例确诊未感染2019-nCoV患者为临床诊断阴性病例。采用基于双抗原夹心法的胶体金免疫层析法和上转发光免疫层析法进行血清总抗体(IgG、IgM和IgA)检测,分析两种方法2019-nCoV总抗体(IgG、IgM和IgA)检测结果与临床诊断的灵敏度、特异度和总符合率。结果:建立针对2019-nCoV抗体检测的双抗原夹心免疫层析方法,胶体金免疫层析法检测血清2019-nCoV总抗体(IgG、IgM和IgA)与临床诊断的灵敏度、特异度和总符合率分别为97.77%、100%和98.48%;上转发光免疫层析法分别为98.88%、100%和99.24%。两种检测方法检测血清2019-nCoV总抗体(IgG、IgM和IgA)的总符合率与临床诊断结果比较,差异有统计学意义(χ²=246.5,χ²=225.0;P<0.05)。结论:双抗原夹心法对于2019-nCoV抗体检测具有重要应用价值。     

3种结核抗体检测方法对结核病诊断价值对比分析

目的分析结核抗体免疫学3种检测方法联合应用对结核病的诊断价值。方法采用斑点免疫胶体金渗滤法(TB-DOT)、免疫层析法(TB-IgG)和酶联免疫法(TB-SA)3种结核抗体联合检测方法(简称:结核3项),对804例肺结核病人,76例非结核病肺部疾病及53例正常健康人进行检测并对其结果进行分析。结果 TB-DOT、TB-IgG和TB-SA3项检测肺结核病人的特异性高于93.00%,敏感性在61.90%以上。结核2项和3项联合检测阳性检出率分别是84.80%和93.30%,结论结核3项联合检测方法由于提高了结核病诊断的特异性,且检测简便、快速、灵敏、价格低廉是一种快速结核病实验室的诊断方法。     

胶体金免疫层析法检测葡萄球菌B型肠毒素

目的通过优化制备中各关键步骤的实验条件,建立快速检测葡萄球菌B型肠毒素的胶体金免疫层析法。方法采用柠檬酸三钠还原氯金酸法制备直径16nm的胶体金溶液,葡萄球菌B型肠毒素多克隆抗体制备免疫胶体金复合物,组装胶体金免疫层析快速检测试纸条。结果用柠檬酸三钠还原法制备的16nm胶体金溶液呈亮红色,其颗粒大小比较均一。胶体金标记抗体蛋白的最低稳定量为15μg／mL,最适稳定量为18μg／mL,标记的最适pH为7．8。此方法检测限为0．2μg/mL,准确度为94．9％。结论制备了葡萄球菌B型肠毒素胶体金免疫试纸条,该方法简便、快速,而且灵敏度高、稳定性强,适用于食品中葡萄球菌B型肠毒素的快速检测。     

人绒毛膜促性腺激素测试条(胶体金免疫层析法)的性能评价

目的:评价人绒毛膜促性腺激素测试条(胶体金免疫层析法)的分析性能。方法:主要从灵敏度,特异性,阴性符合率,阳性符合率,HOOK效应和加速稳定性等六方面来评价7个厂家生产的人绒毛膜促性腺激素测试条(胶体金免疫层析法)。结果:在受检的7个厂家中,7种产品的灵敏度分别为12.5mIU/mL(3/7),20mIU/mL(2/7),5mIU/mL(1/7)和低于1mIU/mL(1/7);特异性检测中,仅有1个厂家显示人黄体生成激素对0mIU/mLHCG的检测有干扰,条带显示为弱阳性;7种产品的阴性符合率和阳性符合率均为100%;HCG在浓度高达100,000mIU/mL时无HOOK效应,结果仍显示为阳性或弱阳性;对于加速稳定性检测,测试条在(37±1)·C放置时,其稳定性时间均能超过21d。结论:在人绒毛膜促性腺激素试条(胶体金免疫层析法)的性能评价中,各厂家在一些重要指标上存在差异,有待于建立行业标准进一步统一使其规范化。     

胶体金法与荧光免疫层析法检测新型冠状病毒特异性IgM和IgG的比较分析

目的 对胶体金法与荧光免疫层析法检测新型冠状病毒(简称新冠病毒)特异性IgM和IgG的结果进行比较分析,探讨抗体产生规律及特征。方法 用胶体金法和荧光免疫层析法两种方法对28例新型冠状病毒肺炎(简称新冠肺炎)患者87份血液样本和对照组42份血液样本(经核酸检测排除感染新冠病毒)同时检测新冠病毒特异性IgM和IgG,并对不同采样时间段抗体检测结果进行统计分析。结果 胶体金法 检测IgM和IgG敏感性分别为54. 02% (47/87)、93. 10%( 81/87) ,特异性为100. 00%(42/42)、97. 62%(41/42),荧光免疫层析法检测IgM和IgG敏感性分别为93. 10% .(81/87) 96. 55%( 84/87) ,特异性均为97. 62% (41/42) ;两种方法均显示IgM和IgG转阳平均时间为3周左右,IgM可持续存在50d不消失;荧光免疫层析法显示IgM和IgG浓度均呈先升后降变化,于5周左右达到峰值。结论 荧光免疫层析法检测IgM敏感性明显高于胶体金法,两种方法检测IgM和IgG特异性无差异,胶体金法和荧光免疫层析法均可用于新冠病毒感染的筛查,作为核酸检测方法的有效补充,荧光免疫层析法还可以动态监测抗体浓度的变化。     

3种β-HCG检测方法的比较评价

目的:比较分析胶体金免疫层析法(GICA)、酶联免疫吸附试验(ELISA)和微粒子酶免疫法(MEIA)检测β-HCG的结果.方法:在相同条件下使用胶体金免疫层析法(GICA)、酶联免疫吸附试验(ELISA)和微粒子酶免疫法(MEIA)分别对100份待测血清标本进行β-HCG平行检测并比较3种方法的测定结果.结果:微粒子酶免疫法(MEIA)检出阳性65例,阴性35例.ELISA法检测出阳性61例,阴性39份,有4份阳性标本没有检出,胶体金免疫层析法(GICA)检测出阳性56份,阴性44份,有9份阳性标本没有检出.若以MEIA法结果作为真值,ELISA法的敏感度为94.2%,特异性为100%,准确率为96%;GICA法敏感度为87.8%,特异性为100%,准确率为91%.结论:胶体金免疫层析法敏感度和准确性最低,但具有操作简便、快速、无需任何仪器等优点,适合于标本量少的基层实验室筛查使用.ELISA法敏感度和准确性较高,既可目测结果又可上机判读,适合广大实验室应用.微粒子酶免疫法(MEIA法)敏感度和准确性最高,但需要特殊仪器设备.     

三种HIV抗体初筛方法的比较

目的比较酶联免疫吸附试验（ELISA法）、胶体金免疫层析法（GICA金标法）和胶体金免疫渗滤法（渗滤法）检测人类免疫缺陷病毒抗体的结果,了解这三种方法的优劣,探讨临床实验室初筛诊断HIV方法的灵敏性和准确性。方法对9725例血液样本用金标层析法、胶体金免疫渗滤法与ELISA法检测其HIV抗体。结果三种方法无1例漏检,其中以金标法假阳性率较高。结论三种方法均可适用于医学检测,金标层析法适合于急诊、流动采血点、基层单位的推广使用,而ELISA法适合于大中型医院HIV抗体筛查和艾滋病流行病学监测等。     

鼠疫菌免疫胶体金快速检测方法的建立

目的利用免疫胶体金技术建立一种简便、快速并适用于基层人员使用的鼠疫菌抗原检测方法。方法将抗鼠疫菌F1抗原的抗体致敏硝酸纤维素膜,用于捕获鼠疫抗原,然后用免疫胶体金颗粒进行标记。结果应用鼠疫菌免疫胶体金快速检测法最低可检出不同鼠疫菌(EV和Evp株)1.56×105CFU/ml,检测鼠疫菌F1抗原最低可检出1ng/ml,与鼠疫反向间接血凝法的检测结果一致;并且不与假结核小肠结肠炎等耶尔森菌以及其他相关细菌发生交叉反应。结论鼠疫菌免疫胶体金快速检测法具有较好的特异性、敏感性和简便快速的特点。     

两种检测乙肝表面抗原方法的比较

目的了解两种检测乙型肝炎方法的优缺点,为实验室提供快速、准确的检验方法。方法先后采用胶体金免疫层析测试条法和做血清学检测乙型肝炎表面抗原,并将资料进行整理、分析。结果胶体金免疫层析法检出阳性250份,阳性率为54．82％;ELISA法检出阳性275份,阳性率为60.31％。两法检测结果的总符合率为94．52%。以ELISA法为常规法验证胶体金免疫层析法的敏感性,敏感性为90．91％,特异性为100％。结论胶体金免疫层析法敏感性较酶联免疫法(ELISA)差,认为检测HBsAg仍然以ELISA法为主。     

近红外免疫层析、胶体金及实时荧光PCR法在A群轮状病毒临床样本检测中的应用

目的评估近红外免疫层析法、胶体金法及实时荧光PCR法在A群轮状病毒临床样本检测中的应用效果。方法采用自主研发的免疫层析试纸条和商品化胶体金及实时荧光PCR试剂盒,检测112份腹泻儿童粪便样本中的A群轮状病毒,比较3种方法的检测结果。结果实时荧光PCR法检测轮状病毒阳性率最高,为77.68%;其次为近红外免疫层析法,阳性率为66.96%;胶体金法阳性率最低,为61.61%。与实时荧光PCR法相比,近红外免疫层析法检测灵敏度为83.91%、特异度为92.00%;胶体金法检测灵敏度为73.56%,特异度为80.00%。在25份实时荧光PCR法检测为阴性样本中,近红外免疫层析法检测出2份阳性,两者符合率为85.71%。结论近红外免疫层析法检测A群轮状病毒的灵敏度高于胶体金法,略低于实时荧光PCR法。     

胶体金免疫层析法快速检测类风湿因子的研究

目的 建立一种能够简便、快速地对类风湿疾病进行诊断的胶体金免疫层析检测方法。方法 对胶体金颗粒,标记抗原的标记浓度和p H值,金标复合物浓缩比和喷涂量及包被抗原的包被浓度和划膜量进行优化并组装检测卡。对收集的70份阳性样本和131份阴性样本进行检测,并与免疫比浊法检测结果进行比较。结果 确定了胶体金免疫层析法的最优工艺参数。与免疫比浊法相比,201份样本阳性一致率为100. 00%,阴性一致率为97. 75%,总一致率为98. 52%。结论 建立了快速、简便且能定量检测类风湿因子的双抗原夹心胶体金免疫层析法。