用重叠延伸聚合酶链反应制备鸭乙型肝炎病毒基因点突变

制备含鸭乙型肝炎病毒前核心区终止密码突变的基因片段，以对此基础突变有关生物学研究。用重叠延伸聚合酶链反应制备含此人工定向点突变的基因片段；用不对称聚合酶链反应制备单链ＤＮＡ模板作测序。凝胶电泳显示ＯＥＰＣＲ产物与克隆ＤＨＢＶ ＤＮＡ酶切片段位置一致，测序证实该点突变存在。     

用PCR技术检测50名HBsAg阴性献血者血清HBV－DNA结果

用ＰＣＲ技术检测５０名ＨＢｓＡｇ阴性献血者血清ＨＢＶ ＤＮＡ结果１２１００１锦州医学院生化教研室赵勇周影ＰＣＲ是ＤＮＡ聚合酶链反应的简称，是一种基因的体外扩增技术。笔者利用该技术对ＥＬＩＳＡ检测显示ＨＢｓＡｇ阴性的５０名献血者的血清进行了ＨＢＶ ＤＮ...     

血液透析患者输血传播病毒感染状况的初步研究

目的：研究血液透析（ＨＤ）患者输血传播病毒（ＴＴＶ）的感染状况和基因型。方法：设计特异性引物,建立工聚合酶链反应,对２０例ＨＤ患者血清标本进行ＴＴＶ－ＤＮＡ的检测。并对阳性ＰＣＲ产物进行荧光法直接测序。结果：经过巢式ＰＣＲ检测,ＨＤ患者ＴＴＶ－ＤＮＡ阳性率为２５％。随机选择ＴＴＶ－ＤＮＡ阳性ＰＣＲ产物进行荧光法直接测序,与国外报道的日本株Ｎ２２比较,核苷酸同源性为９５．８％。     

3型血管性血友病的基因突变与临床研究

目的：研究３型血管性血友病（ｖＷＤ）的分子病理机制。方法：应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）结合变性梯度凝胶电泳（ＤＧＧＥ）筛选了３型ｖＷＤ患者ｖｏｎＷｉｌｅｂｒａｎｄ因子（ｖＷＦ）基因编码区的基因突变，对ＰＣＲ－ＤＧＧＥ行为发生改变的片段直接进行ＤＮＡ序列分析。结果：检测到１例基因突变，在ｖＷＦ基因外显子３第２１２号核苷酸，发生了Ｃ→Ａ的替换，使Ｓｅｒ７１突变为终止密码子。该突变创造了ＸｂａⅠ酶切位点，消除了原有的ＴａｑⅠ位点。结论：ＰＣＲ－ＤＧＧＥ和酶切分析均证实，患者为该突变的纯合子，其父母则均为该突变的携带者。     

一例凝血因子Ⅷ B区错义突变导致重型血友病A

目的：检测一例重型血友病Ａ患者（ＳＨ９）的基因突变。方法：用ＰＣＲ、变性梯度凝胶电泳（ＤＧＧＥ）和ＤＮＡ测序检测因子Ⅷ基因突变。先用Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔｉｎｇ排除内含子２２倒位，然后应用ＰＣＲ对凝血因子Ⅷ基因进行扩增。扩增范围包括所有外显子及其侧翼内含子序列。结果：片段１４２在ＤＧＧＥ中泳动异常。ＤＮＡ测序证实Ｃ２５３５Ａ导致Ｂ区错义突变８２６Ａｓｐ（ＧＡＣ）→Ｇｌｕ（ＧＡＡ）。结论：该突变可能是导致重型血友病Ａ的原因，但有待进一步研究证实。     

聚合酶链反应凝胶呈像技术检测乙型肝炎病毒

目的 建立聚合酶链反应（ＰＣＲ）－凝胶呈像（ｇｅｌｄｏｃｕｍｅｎｔａｔｉｏｎｓｙｓｔｅｍＧＤＳ）技术,并应用于临床检测乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）核酸ＤＮＡ。方法 用凝胶呈像技术对血清ＨＢＶ－ＤＮＡＰＣＲ扩增产物的电泳凝胶进行摄像,分析,并与紫外灯下的肉眼观察结果相比较,对肉眼未判断出阳性而凝胶呈像分析邮阳性的血清标本,用定量ＰＣＲ（ＱＰＣＲ）方法检测ＨＢＶ－ＤＮＡ。结果 通过３８份血清标本的检测,发现     

应用套式聚合酶链反应检测乙型肝炎病毒

为了提高部分乙型肝炎病毒感染者突变株检出率，应用套式聚合酶链反应对１１０例ＡＬＴ升高的传染病科住院病人进行检测。检测结果阳性ＨｂｓＡｇ４２％，ＨＢＶ－ＤＮＡ常规ＰＣＲ６３．６％，套式ＰＣＲ９２．７％。     

乙型肝炎病毒感染性病人及携带者的HBV DNA诊断研究

核酸分子杂交技术，能直接从血清中检出１０－１Ｐｇ的ＨＢＶＤＮＡ，最近发展起来的聚合酶链式反应（ＰＣＲ）技术能检出１０－３Ｐｇ的ＨＢＶＤＮＡ。本文所介绍的ＰＣＲ与染色技术的结合于１９９７年８月检测４１６人ＨＢＶＤＮＡ，并与溴化乙锭（ＥＢ）染色进行对比分...     

双温聚合酶链反应检测EB病毒

应用双温循环ＰＣＲ（聚合酶链反应）方法检测鼻咽癌石蜡包埋组织，活检或冰冻组织，患者鼻咽拭子或血液中的ＥＢ病毒（Ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒｒ ｖｉｒｕｓ）ＤＮＡ。模板ＤＮＡ制备方法简便，无需酚提取步骤，双温ＰＣＲ快速（约需１．５小时）、灵敏、目前已用于临床检验。     

双温聚合酶链反应检测EB病毒

应用双温循环ＰＣＲ（聚合酶链反应）方法检测鼻咽癌石蜡包埋组织、活检或冰冻组织、患者鼻咽拭子或血液中的ＥＢ病毒（Ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒｒｖｉｒｕｓ）ＤＮＡ。模板ＤＮＡ制备方法简便，无需酚提取步骤；双温ＰＣＲ快速（约需１．５小时）、灵敏。目前已用于临床检验。     

双带PCR提高检测血清HBV-DNA质量的意义

应用双带ＰＣＲ方法（ＤＢ－ＰＣＲ）检测了２４０份血清中ＨＢＶ－ＤＮＡ，该方法能直接观察和判断假阴性和假阳性结果，提高了检测的准确性。与国内其它ＰＣＲ试剂比较，符合率分别为９４．０５％（ＤＢ－ＰＣＲ／华美产品），和９５．２８％（ＤＢ－ＰＣＲ／长城产品）。ＨＢｅＡｇ阳性的血清，经ＤＢ－ＰＣＲ检测ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性者达９３．５５％（２９／３１）。ＰＣＲ产物Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ后能与ＨＢＶ－ＤＮＡ探针杂交，证明了该方法的特异性。     

聚合酶链反应检测出血性大肠埃希菌

为建立一种针对出血性大肠埃希菌的特异性聚合酶链反应（ＰＣＲ）诊断方法，根据Ｏ１５７：Ｈ７血清型大肠埃希菌ｈｌｙＡＢ基因的ＤＮＡ序列，设计８个引物，使用３２株Ｏ１５７：Ｈ７血清型。结果表明，引物ＲＨ２８－ＲＨ３０和ＲＨ２６－ＲＨ３１敏感性和特异性好，达１００％。ＲＨ２６－ＲＨ３１产物的分子量较大，为２ｋｂ。ＲＨ２８－ＲＨ３０的产物为３３８ｂｐ，比较适合检验使用。研究还发现，使用煮沸法制备ＰＣＲ模板，方法简便、快速、实用，且对ＰＣＲ反应的特异性和敏感性无影响。ｈｌｙＡＢ基因片段作为出血性大肠埃希菌ＤＮＡ探针的特异性和敏感性是明显的，且实用性好。根据出血性大肠埃希菌独特的ｈｌｙＡＢ基因序列设计的ＰＣＲ引物，在理论和实际应用方面均有其优越性。     

鉴别乙型肝炎病毒野毒株及E阴性突变株的新方法

目的同时检测乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）野毒株及２种ＨＢｅＡｇ阴性突变株（Ｅ阴性突变株）。方法用聚合酶链反应（ＰＣＲ）方法，以人为改变核苷酸序列的２对引物，自乙型肝炎患者血清ＤＮＡ中，同时扩增出１４８ｂｐ及１０２ｂｐ两种产物，根据限制性内切酶Ｂｓｕ３６Ⅰ和ＡｆｌⅢ对ＰＣＲ产物消化后片段长度多态性的分析，鉴别ＨＢＶ野毒株Ｍ０与２种Ｅ阴性突变株Ｍ１、Ｍ２。结果突变株Ｍ１的１０２ｂｐ扩增产物经Ｂｓｕ３６Ⅰ酶切，可产生一８２ｂｐ片段；突变株Ｍ２除１０２ｂｐ产物含Ｂｓｕ３６Ⅰ酶切点外，其１４８ｂｐ产物经ＡｆｌⅢ酶切后，可产生一１１７ｂｐ片段；野毒株Ｍ０的２种产物不含上述酶切点。用该法对３４例ＨＢｅＡｇ阴性患者进行检测，结果与寡核苷酸探针杂交完全一致。结论该方法简便、准确，为ＨＢＶ变异株的检测探索了一条非放射性的新途径。     

PCR—ELISA检测HBV DNA方法学建立及初步临床应用

建立ＰＣＲ－ＥＬＩＳＡ检测ＨＢＶ ＤＮＡ的方法学，探讨其最佳实验条件并初步评价其临床应用价值。常规ＰＣＲ引物用地高辛标记，使扩增产物带有地高辛标记成份，再通过亲合素－生物素系统把生物素标记探针包被在固相聚苯乙烯小孔中，通过固相探针与ＨＢＶＤＮＡ扩增产物进行杂交，与碱性磷酸酶标记的抗地高辛抗体反应，经ＮＰＰ显色，根据其Ａ４０５ｎｍ值大小，推算样品中ＨＢＶ ＤＮＡ模板含量。建立ＰＣＲ－ＥＬＩＳＡ的最     

PCR在检测HBV DNA中的应用

ＰＣＲ在检测ＨＢＶＤＮＡ中的应用汤继光，黄立东，范友谊，李玉强，杨爱民，徐云，周光炎目前，国内文献报道用聚合酶链反应技术（ＰＣＲ）检测乙肝病毒（ＨＢＶ）ＤＮＡ，大多集中在方法学上［１，２］。我们用ＰＣＲ技术和酶联免疫试验（ＥＬＩＳＡ）同时检测了６１２...     

PCR与ELISA法检测300例乙型肝炎病毒标志物的比较

乙型肝炎临床上一般用酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）法检测乙型肝炎病毒感染标志物ＨＢＶＩｇＭ来确定ＨＢＶ的感染状况,笔者结合聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测了３００例,其结果进行比较分析。材料和方法１－标本来源：本院住院患者１５７例,门诊患者１４３例,其中男１８８例,女１１２例,均为肝炎或凝似肝炎患者。２－检测方法：应用北京燕宇生物分子生物学研究所提供的ＨＢＶ－ＤＮＡＰＣＲ试剂盒严格按操作说明书在９８０１－Ｄ型扩增仪进行扩增,扩增产物在ＤＹＹ－Ⅲ２型稳压稳流电泳仪作电泳,然后用天能组合型紫外线仪观察…     

非同位素方法检测卵巢癌组织p53基因的改变

为解决常规ＤＮＡ单链构象多态性分析（ＳＳＣＰ）使用放射性同位素及操作繁杂等问题，应用溴化乙锭（ＥＢ）染色的非同位素检测方法对１６例卵巢癌及５例正常胎盘组织中ｐ５３基因的第５、６外显子（Ｅｘｏｎ５、６）的聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增产物进行了分析，并结合ＤＮＡ测序技术进行验证。正常组织未发现异常，１６例卵巢癌ＳＳＣＰ分析显示３例异常，ＤＮＡ测序证实其中２例为核苷酸突变，１例为核苷酸插入。采用ＥＢ染色的非同位素ＰＣＲ－ＳＳＣＰ，方法简便、省时、准确，具有良好的实用性和广泛的使用价值。     

聚合酶反应检出石蜡包埋肝癌组织的乙型肝炎病毒DNA

传统免疫组织化学方法及分子杂交检测石蜡包埋肝组织乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）ＤＮＡ灵敏度低，聚合酶链反应（ＰＣＲ）方法能否检验到石蜡肝癌组织中的ＨＢＶ ＤＮＡ报道尚不见。为此，采用ＨＢＶ与丙型肝炎病毒二合－ＰＣＲ试剂盒对１７例肝癌患者的石蜡包埋癌组织进行了ＨＢＶ ＤＮＡ检测，结果７例阳性，阳性率为４１％，而８例非肝癌对照患者则均阴性。组织ＨＢＶ ＤＮＡ结果与血清ＨＢｓＡｇ比较显示，该试剂盒有较高的检出率     

PEG沉淀提取法在提取HBV DNA中的应用

血浆ＨＢＶ核酸模板提取质量对ＨＢＶＤＮＡ定量检测起重要作用。本文参照文献[1] 建立了ＰＥＧ沉淀提取制备ＨＢＶ核酸模板方法 ,并用于ＨＢＶＤＮＡ荧光定量ＰＣＲ检测。1　材料与方法1.1　标本　本院门诊及住院乙型肝炎患者 ,用ＰＣＲ专用管收集血液 ,ＥＤＴＡ抗凝 ,分离血浆 ,置 - 2 0℃保存或当日检测。1.2　试剂　沉淀剂由ＰＥＧ 6 0 0 0和氯化钠及水配制而成 ;裂解液由ＮＰ40配制而成 ;ＨＢＶＤＮＡ荧光定量试剂由本科研制 ;磁颗粒核酸提取试剂盒购自Ｒｏｃｈｅ公司。1.3　ＰＥＧ沉淀提取法　取血浆样本 10 0 μｌ加入等量沉淀剂 ,混…     

应用地高辛标记核酸探针检测巨细胞病毒

应用地高辛标记核酸探针检测巨细胞病毒史金阳，刘兰青，吕绳敏，吉耀华，刘庆聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术的应用大大简化了目的基因片段制备程序。我们用ＰＣＲ技术制备地高辛标记巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）ＤＮＡ探针，并用此探针检测肝炎综合征患儿尿中ＨＣＭＶＤＮＡ，现...