PCR-RFLP技术用于鉴别赫坎按蚊复合体近缘种按蚊的研究

目的区别赫坎按蚊种团内近缘种.方法应用聚合酶链式反应连接的限制性片段长度多态性方法(PCR-RFLP)技术,对辽宁省现场捕获的按蚊用特异性ITS2引物进行PCR扩增,限制性内切酶RsaⅠ和HinfⅠ消化,琼脂糖凝胶电泳分析.结果中华按蚊的PCR扩增产物能被限制性内切酶RsaⅠ酶切成350 bp和200 bp两条酶切DNA条带;嗜人按蚊核糖体DNA(rDNA)的PCR扩增产物能被限制性内切酶HinfⅠ酶切成410 bp的酶切DNA条带; 雷氏按蚊的ITS2基因PCR扩增产物能分别被限制性内切酶RsaⅠ和HinfⅠ酶切,分别显示350 bp和400 bp的酶切DNA条带;八代按蚊的PCR扩增产物没有显示明显的限制性内切酶RsaⅠ或HinfⅠ酶切条带.结论依据rDNA的ITS2区段基因特征建立的PCR-RFLP技术可用于鉴别赫坎按蚊种团的中华按蚊、嗜人按蚊、雷氏按蚊和八代按蚊4个近缘种按蚊.     

PCRRFLP单酶切法鉴别赫坎按蚊复合体的研究

目的建立一种新的赫坎按蚊复合体近缘种按蚊基因鉴别技术,应用于现场按蚊样本的鉴别。方法用分子生物学软件Vector NTI 9.0,对赫坎按蚊复合体的嗜人按蚊、雷氏按蚊、中华按蚊、八代按蚊4个近缘种按蚊rDNA基因的ITS2区段序列进行限制性内切酶酶切位点预测分析,选择特异性内切酶,建立一种能同时鉴别4种近缘种按蚊的聚合酶链反应限制性片段长度多态(PCR RFLP)单酶切法鉴别技术,并对现场捕获的452只按蚊样本进行基因鉴别。结果软件预测赫坎按蚊复合体近缘种4种按蚊的rDNA基因的ITS2区段可被限制性内切酶Dde I切成大小易于区分的不同片段,PCR RFLP单酶切实验结果和软件预测结果完全吻合。4个疟疾流行区捕获的452只按蚊样本经PCR RFLP Dde I单酶切法鉴定有20只嗜人按蚊、6只雷氏按蚊、391只中华按蚊、35只八代按蚊,与形态学鉴别结果符合率为93.4%,与PCR RFLP双酶切法结果符合率为100%。结论新建立的PCR RFLP Dde I单酶切法基因鉴别技术可准确鉴别赫坎按蚊复合体,比传统的形态学鉴别更为简便、可靠,适合用于复合媒介地区的媒介监测。     

一种简便的赫坎按蚊复合体近缘种按蚊基因鉴别新技术

目的 建立一种能鉴别赫坎按蚊种团内不同近缘种按蚊的基因鉴别技术。方法 依据赫坎按蚊种团内中华按蚊、嗜人按蚊、雷氏按蚊和八代按蚊4种近缘种按蚊ITS2区段的基因序列特征设计特异性引物，建立一种能鉴别赫坎按蚊种团内中华按蚊、嗜人按蚊、雷氏按蚊和八代按蚊4种近缘种按蚊的简便的PCR基因鉴别技术，并采用传统的形态学分类方法和新建立的基因鉴别技术对从辽宁、河南省以及在朝鲜现场捕获的按蚊分别进行了形态学和基因鉴别及比较。结果与结论 新建立的基因鉴别技术能准确鉴别赫坎按蚊种团内中华按蚊、嗜人按蚊、雷氏按蚊和八代按蚊4种近缘种按蚊。具有比传统的形态学分类方法准确，比已有的PCR-RFLP蚊种基因鉴别技术更简便、价廉和省时的特点。适用于不同的复合媒介地区的疟疾媒介调查和监测。     

嗜人按蚊和中华按蚊的ITS2区段序列分析和比较

目的 分析和比较不同地区中华按蚊和嗜人按蚊的ITS2区段的基因特征。方法 采用特异性ITS2引物对嗜人按蚊和中华按蚊江苏实验株以及从湖北省和越南现场捕获的嗜人按蚊和中华按蚊进行PCR扩增、克隆并对ITS2区段序列进行分析。结果 嗜人按蚊实验株的ITS2区段序列有452bp，与嗜人按蚊现场株的ITS2区段序列相同，中华按蚊实验株的ITS2区段序列有472bp，与中华按蚊现场株的ITS2区段序列也相同；但嗜人按蚊和中华按蚊的ITS2区段基因序列存在明显差异并存在不同的限制性内切酶位点。结论 可依据中华按蚊和嗜人按蚊的ITS2基因序列内限制性内切酶切位点不同的基因特征，采用PCR-RFLP技术建立中华按蚊和嗜人按蚊基因鉴别技术。     

用PCR-RFLP技术鉴别嗜人按蚊和中华按蚊的研究

目的　依据嗜人按蚊和中华按蚊rDNA的ITS2区段基因特征 ,建立一种新的嗜人按蚊和中华按蚊基因鉴别技术。方法　对不同地区的嗜人按蚊、可疑嗜人按蚊和中华按蚊样本通过采用特异性ITS2 引物PCR扩增 ,限制性内切酶RsaI和HinfI消化 ,以及琼脂糖凝胶电泳分析进行PCR -RFLP基因鉴别。 结果　不同地区嗜人按蚊rDNA的ITS2 基因PCR扩增产物能被限制性内切酶HinfI酶切 ,并显示一条 4 5 0bp的酶切DNA条带 ;中华按蚊的ITS2 基因PCR扩增产物则能被限制性内切酶RsaI酶切 ,并显示 4 0 0bp和 2 0 0bp两条酶切DNA条带 ;辽宁可疑嗜人按蚊的PCR -RFLP结果与嗜人按蚊相同而广东珠海可疑嗜人按蚊的PCR -RFLP结果与中华按蚊相同。结论　依据rDNA的ITS2 区段基因特征建立的PCR -RFLP技术可用于嗜人按蚊和中华按蚊的基因鉴别。采用该PCR -RFLP基因鉴别技术发现辽宁可疑嗜人按蚊的基因与中国大陆的嗜人按蚊属同种 ,而广东可疑嗜人按蚊的基因与中华按蚊属同种。     

应用rDNA ITS2区段基因序列分析对浙江省传疟媒介的鉴定

目的 对浙江省传疟媒介种类进行鉴定，以指导疟疾防治工作。方法 针对媒介按蚊核糖体核酸内转录间隔2（rDNAITS2）区段基因特征，应用PCR基因鉴别技术，对浙江省现场捕捉的按蚊与嗜人按蚊、八代按蚊、中华按蚊、雷氏按蚊实验室标本进行基因鉴别和比较。结果 浙江省现场捕捉的按蚊DNA样本的PCR扩增产物均为250bp，与实验室中华按蚊标本一致。结论 中华按蚊目前仍是浙江省的主要传疟媒介，现场调查未发现嗜人按蚊。     

rDNA ITS2区段基因序列分析技术用于江苏省疟疾疫情不稳定地区传疟媒介的鉴定

目的了解江苏省近年来疟疾疫情回升地区媒介按蚊种类。方法采用rDNA ITS2区段基因序列分析技术，对半通宵室外人饵诱捕法和清晨蚊帐内捕蚊法捕获的现场按蚊进行蚊种鉴定。结果经形态学鉴定和PCR基因扩增，并与实验室模式种中华按蚊、嗜人按蚊、八代按蚊、雷氏按蚊DNA基因比较，现场捕获的按蚊均为中华按蚊。结论中华按蚊仍是目前江苏省疟疾疫情回升地区的主要传疟媒介。     

我国雷氏按蚊和嗜人按蚊的分子鉴别和分类地位的探讨

[目的 ]论证我国雷氏按蚊与嗜人按蚊的分类地位。 [方法 ]采用分子鉴别法 (鉴别PCR和rDNA ITS2序列 )检测辽宁及山东两省现场按蚊标本 ,并依据ITS2区序列建立分子系统树。 [结果 ]分子鉴别显示 ,辽宁和山东两省均存在雷氏按蚊和嗜人按蚊。我国雷氏按蚊 (辽宁和山东省 ,n =6 )和嗜人按蚊 (辽宁、云南、河南和四川省 ,n =10 )ITS2序列长度和GC含量分别为 45 1bp、 46 2 % ,44 8bp、 46 0 % ;各地雷氏按蚊和嗜人按蚊序列均无差异 ,但各地嗜人按蚊与对照组江苏的嗜人按蚊相比 ,种内序列差异为 0 88% ;雷氏按蚊与嗜人按蚊种间序列差异为 2 5 7%。分子系统树显示雷氏按蚊与中华按蚊、嗜人按蚊与凉山按蚊亲缘关系较近。 [结论 ]根据分子鉴别 ,确认我国雷氏按蚊与嗜人按蚊为同域分布的 2个独立种     

雷氏按蚊嗜人亚种传疟作用的定量研究

1984年7～9月,在四川省筠连县沐爱乡通过昆虫学和寄生虫学定量调查,比较了雷氏按蚊嗜人亚种与中华按蚊的传疟作用.观察期60天内当地居民发病率为8.51％(全部为间日疟).雷氏按蚊嗜人亚种和中华按蚊的昆虫接种率分别为0.003367和0.000185,按此比例推算当地疟疾病例中,由雷氏按蚊嗜人亚种传播的占94.3％,中华按蚊传播的占5.7％。结果证明,雷氏按蚊嗜人亚种为高效媒介,它的传疟作用相当于中华按蚊的20倍。     

中华按蚊和雷氏按蚊嗜人亚种杂交实验观察

许锦江、冯兰洲(1975)将我国的赫坎按蚊类群(Hyrcanus group)定为9个种,并把小型中华按蚊(冯兰洲等,1958)及小窄甲板型按蚊(马素芳,1964)定为雷氏按蚊嗜人亚种。而马素芳(1980)将我国赫坎按蚊类群改称为中华按蚊种团(Anopheles sinensis group),并将雷氏按蚊嗜人亚种提升为一个独立种,定名为嗜人按蚊(Anopheles anthropophagus)。这里为了便于比较,本文仍用雷氏按蚊嗜人亚种(An lesteri anthropophagus)。     

中华按蚊和嗜人按蚊不同地理株基因组DNA的限制酶...

Total DNA was extracted from three geographical strains of Anopheles sinensis and two geographical strains of Anopheles anthropophagus and digested respectively with three restriction endonucleases (Bgl II, Hae III and Pst I). The restriction fragment length differences (RFLDs) of repetitive DNA detected after agarose gel electrophoretic separation and ethidium bromide staining were compared among the above-mentioned geographical strains of both An. sinensis and An. anthropohagus. The results indicated that the band patterns are species- specific and strain-specific, their main bands being similar while their minor bands being distinctly different. Pst I digestion produced unique fragments for three geographical strains of An. sinensis while Bgl II digestion produced unique fragments for two geographical strains of An. anthropophagus. In view of the variation in repetitive DNA of different geographical strains of both An. sinensis and An. anthropophagus presented, the RFLDs could be used as a means to distinguish various closely related geographical strains of anopheline mosquitoes.     

海南省按蚊物种多样性调查

目的了解海南省按蚊多样性。方法采用牛帐法于2011、2012年的4~6月在海南省11个市县的山区、丘陵及平原三类地形中选取33个村庄进行调查,计算不同市县及不同地形的按蚊多样性指数、均匀度指数、丰富度指数,并用SPSS统计软件进行分析。结果共捕获按蚊17种7 377只,以嵌斑按蚊所占比例最高,为44.76%(3302/7377),其次为中华按蚊,占24.51%(1808/7377)。不同市县、不同地形之间按蚊多样性指数、丰富度指数差异均有统计学意义(P<0.05),但均匀度指数差异无统计学意义(P>0.05)。在陵水、琼海、儋州、五指山、屯昌等市县均捕获微小按蚊,在海口演丰镇捕获嗜人按蚊。结论嵌斑按蚊及中华按蚊是海南省主要按蚊种类。微小按蚊的种群密度可能处于较低水平,分布点也可能在减少,而嗜人按蚊的分布点可能在扩大。按蚊多样性与自然环境条件和人类因素有关。     

辽宁省东港市按蚊多样性和蚊虫种群动态变化研究

目的掌握辽宁省东港市按蚊多样性的本底资料以及蚊虫种群密度动态变化和季节消长的情况。方法对1997年至2005年在东港7个地点采集的按蚊进行形态和PCR分子鉴别,分析1998年至2005年间该地的蚊虫密度和季节消长情况。结果东港市的按蚊有4种,为雷氏按蚊、八代按蚊、Anophelesbelenrae和朝鲜按蚊;其中雷氏按蚊占经分子鉴别的173个样本中的93.6%;An.be-lenrae在中国是首次记录,朝鲜按蚊是辽宁省的新记录种。东港市蚊虫种群密度最高的年份为2001年,最低为1998年;绝大多数年份蚊虫的季节消长基本属单峰型,调查期间每年的7月和8月其密度维持在较高水平。结论辽宁省东港市的蚊虫资料得到了更新和充实。