脓毒症大鼠肝组织高迁移率族蛋白B1和Toll样受体4基因的表达及相关性

目的 探讨脓毒症大鼠肝组织高迁移率族蛋白B1(HMGB1)和Toll样受体4(TLR4)mRNA的表达变化及其相互关系.方法 采用盲肠结扎穿孔术(CLP)制成脓毒症大鼠模型.将50只Wistar大鼠分成正常对照组(10只)和CLP组(40只),CLP组分别于CLP术后6、12、18、24 h各处死10只大鼠,应用实时聚合酶链反应检测肝脏组织HMGB1和TLR4 mRNA的表达.结果 正常对照组大鼠肝脏组织存在微量的HMGB1、TLR4 mRNA表达.脓毒症组大鼠CLP术后各时间点的HMGB1、TLR4 mRNA表达均显著高于正常对照组(P值均<0.01),CPL术后6 h HMGB1、TLR4 mRNA表达开始升高,至12 h达峰值,18 h后开始下降,各时间点间HMGB1、TLR4 mRNA表达的差异均有统计学意义(P值均<0.05).直线相关分析表明,脓毒症大鼠肝脏组织HMGB1 mRNA与TLR4 mRNA的表达呈正相关(r=0.90,P=0.04).结论 HMGB1可能通过TLR4进一步激活炎性细胞,引起下游炎性因子释放的瀑布效应.     

高迁移率族蛋白B1细胞外释放及信号转导机制

高迁移率族蛋白B1(high mobility group protein B1,HMGB1)为主要存在于细胞核中与DNA结合的一种非组蛋白,具有多种核内功能。近年诸多研究发现,细胞外HMGB1作为一种重要的晚期炎性递质参与炎症免疫反应和肿瘤的生长、浸润、转移。HMGB1通过活化细胞的主动分泌和坏死损伤细胞的被动释放而进入细胞外,细胞外HMGB1可诱导单核/巨噬细胞、中性粒细胞、树突状细胞等表达分泌多种炎性递质。细胞外HMGB1与晚期糖基化终末产物受体、Toll样受体2、Toll样受体4等胞膜受体结合,激活丝裂原活化蛋白激酶、Janus激酶/信号转导和转录激活子、核转录因子-κB等信号转导通路而发挥其生物学效应。HMGB1靶向治疗将可能为炎症、癌症、氧化应激、无菌损伤等疾病开辟一个新的治疗途径。文中就HMGB1的结构和功能、细胞外分泌和释放、信号传导机制的研究进展作一综述。     

高迁移率族蛋白B1在免疫应答中作用的研究进展

高迁移率族蛋白B1(HMGB1)是一种DNA结合蛋白,在细胞外有细胞因子功能,能启动免疫反应,引起细胞炎性效应。生理状态下,HMGB1有核结合蛋白的作用,释放进入细胞间隙后,则表现出晚期炎性因子作用。HMGB1的识别及跨膜信号转导需要一系列分子的参与,其受体主要是晚期糖基化终产物、Toll样受体等。HMGB1作为一个内源性分子,促进免疫反应和组织内稳态。     

高迁移率族蛋白1诱导内皮细胞释放细胞因子的作用及其与脂多糖对白细胞介素6释放的协同效应

目的观察高迁移率族蛋白1(HMGB1)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)释放细胞因子的影响及其对脂多糖(LPS)诱导细胞因子白细胞介素6(IL-6)表达的作用。方法用LiquiChip液相蛋白芯片系统检测重组HMGB1蛋白(15ng/ml)诱导HUVEC11种细胞因子/趋化因子的水平变化;检测不同浓度HMGB1(0~75ng/ml)刺激后不同时间点(0、1、3、6、12和24h)HUVEC分泌IL-6的水平以及HMGB1(15ng/ml)与LPS(10ng/ml)共同刺激对HUVEC分泌IL-6的影响。结果HMGB1刺激后HUVEC分泌粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、干扰素γ(IFN-γ)、IL-6、IL-8和单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)的水平明显升高(均P<0.01),分别是对照(未加刺激)的5.7、4.2、27.8、12.8和5.4倍;HMGB1蛋白以时间和剂量依赖方式诱导IL-6的分泌,在刺激后3~6h,IL-6水平开始增加,在6h时IL-6由对照的32pg/ml±21pg/ml增加到75pg/ml±22pg/ml(P<0.01),12h(453pg/ml±78pg/ml)~24h(901pg/ml±184pg/ml)持续升高(P<0.01);随着HMGB1浓度的增加,IL-6的水平也明显增加,当HMGB1浓度为3、15、75ng/ml时,IL-6分别是155pg/ml±33pg/ml、901pg/ml±184pg/ml、1508pg/ml±378pg/ml,与基础值32pg/ml±21pg/ml相比,差异有统计学意义(P<0.01)。分别用LPS(10ng/ml)和HMGB1(15ng/ml)单独刺激HUVEC时,IL-6的含量从基础的32pg/ml±22pg/ml分别增加至289pg/ml±42pg/ml和901pg/ml±184pg/ml(均P<0.01);如果用二者共同刺激HUVEC,IL-6的生成量大大增加(2361pg/ml±299pg/ml),二者存在协同作用(F=69.405,P<0.01)。结论HMGB1蛋白可诱导HUVEC释放多种炎性细胞因子;HMGB1诱导IL-6的上调具有时效性和量效性关系,并可协同LPS刺激HUVEC释放IL-6,在脓毒症的发生和发展中起重要作用。     

过氧化氢诱导支气管上皮细胞高迁移率族蛋白1主动释放

目的研究过氧化氢(H2O2)对正常人支气管上皮细胞(HBE)HMGB1表达、移位和释放的影响。方法四唑盐(MTT)法检测不同浓度H2O2对支气管上皮细胞活力的影响;蛋白免疫印迹方法分别检测H2O2刺激HBE胞核,胞浆以及细胞培养上清中HMGB1浓度。免疫荧光观察HBE的HMGB1的定位和H2O2刺激后对HBE HMGB1的移位的影响。结果 125μmmol/L刺激对HBE活力无影响,而250μmmol/L会导致细胞活力下降(与对照组组比较,P<0.05),但是不引起细胞死亡,400μmmol/L(与对照组比较,P=0.000)导致HBE死亡。在浓度依赖性实验,与对照组比较12.5、125、250μmmol/L H2O2刺激HBE 24 h后培养上清HMGB1水平显著增加;在时间依赖性实验中与对照组比较,125μmmol/L H2O2刺激HBE 12、24 h后细胞上清中的HMGB1显著升高(P<0.05);12.5μmmol/L H2O2刺激HBE 24 h后,HBE胞浆蛋白明显增加,胞核蛋白减少。而免疫荧光检测示HMGB1高丰度分布正常HBE的细胞核内,少量分布于细胞浆,125μmmol/L H2O2刺激HBE 12 h,HMGB1明显从HBE胞核向胞浆转位;125μmmol/L H2O2刺激HBE 24 h后观察到HMGB1移位分布到胞膜上。结论 H2O2可以显著诱导支气管上皮细胞HMGB1的表达、转位和释放,提示HMGB1可能参与了哮喘,COPD等慢性炎症疾病气道的氧化应激过程。     

高迁移率族蛋白B1在神经系统疾病中的研究进展

高迁移率族蛋白B1是一种在哺乳动物中广泛表达的非组蛋白染色体结合蛋白,并通过晚期糖基化终产物受体和TOLL样受体参与炎症反应过程,而大多数神经系统疾病的发病机制与自身免疫或免疫炎性损伤相关.本文就高迁移率族蛋白B1在神经系统疾病中的研究进展进行综述.     

高迁移率族蛋白B1肿瘤免疫调节作用及其机制

\[摘要\]危险信号相关模式分子(DAMPs)是指能被模式识别受体识别的危险信号分子,从细胞胞内释放到胞外的高迁移率族蛋白B1(HMGB1)是经典的DAMPs,HMGB1的释放提示机体已经受到损伤。已有大量的研究证明HMGB1参与了肿瘤血管形成、凋亡抵抗、生长刺激以及侵袭转移,表明HMGB1能够促进肿瘤的发生进展。而新近有研究报道指出HMGB1具有佐剂样作用,能够增强获得性抗肿瘤免疫反应。种种研究显示HMGB1具有双向的肿瘤免疫调节作用。因此,本文主要对HMGB1的肿瘤免疫调节作用及其机制的研究进展作一综述。     

IL-1β诱导支气管上皮细胞高迁移率族蛋白1主动释放

目的：研究IL‐1β对健康人支气管上皮细胞（HBE）高迁移率族蛋白1（HMGB1）表达和释放的影响。方法培养HBE135‐E6E7,四唑盐（MTT）法检测不同浓度IL‐1β对支气管上皮细胞活力的影响,荧光定量PCR检测IL‐1β刺激HBE后HMGB1mRNA表达,双抗体夹心ELISA法检测细胞上清液中HMGB1水平,蛋白免疫印迹方法检测IL‐1β刺激HBE总蛋白、胞核、胞质HMGB1表达。免疫荧光观察IL‐1β刺激后对HBEHMGB1的移位的影响。结果0．1、1．0、10．0ng／mLIL‐1β刺激HBE24h对其活力无影响。IL‐1β以浓度和时间依赖性方式刺激HBE的HMGB1mRNA水平升高,IL‐1β增加HBE的HMGB1蛋白表达水平。在浓度依赖性实验,与对照组比较,1．0、10．0ng／mLIL‐1β刺激HBE24h后培养上清液HMGB1水平显著增加;在时间依赖性实验中,与对照组比较,10．0ng／mLIL‐1β刺激HBE12h、24h后细胞上清液中的HMGB1显著升高（P＜0．05）;10．0ng／mLIL‐1β刺激HBE24h后,HBE胞质蛋白明显增加,胞核蛋白减少。免疫荧光检测显示,HMGB1主要表达正常HBE的细胞核内,少量分布于细胞质,IL‐1β（10．0ng／mL）刺激HBE24h,HMGB1明显从HBE胞核向胞质转位。结论IL‐1β可以显著诱导支气管上皮细胞HMGB1的表达和主动释放,提示HMGB1可能参与了IL‐1β介导慢性气道炎症过程。     

重组小鼠高迁移率族蛋白B1抗菌活性研究

目的:制备具有功能活性的重组小鼠高迁移率族蛋白B1(recombinant mouse high-mobility group box-1,rmHMGB1)并观察其抗菌活性,为深入研究HMGB1抗菌功能创造条件.方法提取BALB/c小鼠脾脏总RNA,经RT-PCR扩增得到编码小鼠HMGB1的cDNA片段,序列测定正确后,构建于原核表达载体pQE-80L,转化于大肠杆菌DH5α,经IPTG诱导表达目的蛋白,再经Ni2 -NTA亲和层析柱纯化后,通过试管稀释法、琼脂扩散法两种抗菌实验观察并比较rmHMGB1对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌(JM109、ATCC25922、DH5α)、绿脓杆菌抗菌活性的差异.结果RT-PCR扩增得到了约648bp的cDNA片段,序列分析与GenBank中报道的编码小鼠HMGB1的cDNA序列一致,纯化后的rmHMGB1对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌(JM109、ATCC25922、DH5α)有明确的抗菌活性,其抗菌活性强弱依次为金黄色葡萄球菌＞JM109＞ATCC25922＞DH5α,对绿脓杆菌则无抗菌活性.结论利用大肠杆菌可表达重组小鼠HMGB1,所获得纯化产物对部分细菌确有抗菌活性,此研究为进一步探讨HMGB1抗菌功能的机制奠定了基础.     

高迁移率族蛋白 B1 对急性自发性脑出血患者预后的影响

目的 探讨高迁移率族蛋白B1（HMGB1）对急性自发性脑出血（ASICH）患者预后的影响。方法 回顾性分析2010年1月1日～2012年12月31日安康市中心医院神经外科117例ASICH患者的临床资料,ELISA法测定血浆中HMGB1浓度。采用格拉斯哥预后评分（GOS）评价患者出院时的预后评分,分为预后良好组（GOS4～5分）65例和预后不良组（GOS1～3分）52例,采用相关分析法对数据进行分析。结果 117例患者中65例患者预后良好,占总人数的55．6％,52例预后不良,占44．4％。预后不良组初始血浆HMGB1浓度[（14．7±2．6）ng／mL]明显高于预后良好组[（6．7±1．4）ng／mL],差异有高度统计学意义（P〈0．01）。结论 入院时高浓度HMGB1是ASICH患者预后不良的预测因素。     

缺氧诱导肺泡巨噬细胞HMGB1的释放及其可能机制

目的:研究缺氧对肺泡巨噬细胞高迁移率族蛋白B1(high mobility group box1,HMGB1)释放的作用及其信号通路?方法:采用大鼠肺泡巨噬细胞NR8383,观察不同时间缺氧培养对细胞HMGB1 mRNA表达和培养上清液中HMGB1含量的影响,及不同浓度JAK2抑制剂tyrphostin AG 490和STAT1抑制剂氟达拉滨对HMGB1释放的抑制作用?HMGB1含量采用酶联免疫吸附试验检测?结果:培养上清液中HMGB1含量和mRNA表达水平分别于缺氧培养6?12 h后明显升高(P < 0.01),并随缺氧培养时间延长而进一步升高和增强;tyrphostin AG 490和氟达拉滨对缺氧培养肺泡巨噬细胞释放HMGB1有不完全的抑制作用,并呈剂量依赖性?结论:缺氧诱导肺泡巨噬细胞释放HMGB1,JAK/STAT信号通路可能参与其释放过程?     

脂多糖诱导肥大细胞释放HMGB1研究

目的:研究脂多糖(LPS)对肥大细胞高迁移率族蛋白B1(HMGB1)释放的诱导作用及其胞内信号通路?方法:采用小鼠肥大细胞株P815,观察不同剂量LPS诱导后细胞培养上清液中HMGB1含量和细胞HMGB1 mRNA表达水平的变化,及不同剂量丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路抑制剂(SB203580?SB202190?U0126和PD98059)对LPS诱导后HMGB1胞外释放的影响?HMGB1含量采用酶联免疫吸附试验检测?结果:LPS诱导后细胞培养上清液中HMGB1含量明显升高,并与LPS剂量?诱导时间有关;100 μg/L LPS分别诱导8?24?48 h后,HMGB1 mRNA表达水平明显增强(P < 0.01);SB203580和SB202190对LPS诱导HMGB1释放有明显的抑制作用(P < 0.05),但U0126和PD98059不显示抑制作用?结论:LPS诱导肥大细胞释放HMGB1,其释放机制与胞内p38 MAPK信号通路有关?     

高迁移率蛋白B1对血管平滑肌细胞迁移的影响及分子机制研究

目的：探讨高迁移率蛋白B1（HMGB1）对血管平滑肌细胞（VSMCs）迁移的影响及 TLR4依赖的 TLR4／PI3K／Akt信号通路介导的分子机制。方法体外分离培养大鼠胸主动脉VSMCs ,采用不同浓度 HMGB1（0．1～1000．0 ng ／mL）处理,分为对照组（未经任何处理）、HMGB1组、HMGB1＋ TLR4 siRNA转染组、Control siRNA转染组和磷脂酰肌醇3‐激酶（PI3K）抑制剂（LY294002）干预组,观察各组细胞活性及 HMGB1对 VSMCs 迁移的影响;实时定量 RT‐PCR与 Western blot 分别检测TLR4、Akt、p‐Akt、PI3K mRNA和蛋白的表达;ELISA测定PI3K的活性。结果 HMGB1（0．1～1000．0 ng／mL）呈剂量依赖性促进VSMCs迁移（P＜ 0．05）;经细胞活性测定,HMGB1在使用的浓度范围内对 VSMCs未造成细胞毒性作用（P＜ 0．05）;HMGB1（100 ng／mL）处理的 VSMCs细胞组 PI3K 活性及 Akt磷酸化水平明显增加（P＜ 0．05）;经 TLR4 siRNA 转染发现, HMGB1引起的VSMCs迁移明显减弱（P＜0．05）,同样在PI3k抑制剂干预组,PI3K／Akt途径活化和HMGB1介导的VSMCs迁移也被明显抑制（P＜0．05）。结论 HMGB1呈剂量依赖性促进VSMCs迁移,TLR4依赖的 TLR4／PI3K／Akt信号通路参与了此过程,提示以TLR4依赖的PI3K／Akt途径为靶点,可为阻塞性血管疾病的治疗提供新思路。     

脂多糖诱导膀胱癌细胞释放HMGB1及其机制研究

目的研究脂多糖（LPS）对膀胱癌细胞高迁移率族蛋白B1（HMGB1）释放的诱导作用,并探讨其可能的机制。方法采用人膀胱癌细胞株T24,观察100μg/L LPS诱导不同时间对培养上清液中HMGB1含量和细胞HMGB1 mRNA表达水平的变化,及不同浓度的磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B（PI3K/AKT）通路抑制剂LY294002对HMGB1释放的作用。分别使用酶联免疫吸附试验、荧光定量PCR法检测HMGB1含量和HMGB1mRNA表达水平。结果培养上清液中HMGB1含量和细胞HMGB1 mRNA表达水平均于LPS诱导12 h后升高,并随诱导时间延长而进一步升高。LY294002对LPS诱导HMGB1释放有不完全的抑制作用。结论 LPS诱导膀胱癌细胞释放HMGB1,其机制可能与PI3K/AKT信号通路有关。     

姜黄素对铜绿假单胞菌诱导人肺上皮细胞产生细胞因子的影响及其分子机制研究

目的 探讨姜黄素对铜绿假单胞菌（pseudomonas aeruginosa,Pa）感染的肺上皮细胞的体外抗炎效应.方法 体外培养肺上皮细胞系NCI-H292,加入姜黄素和培养的Pa感染不同时间.Western blot检测和实时定量PCR分别检测NCI-H292细胞中红素氧合酶1（Heme oxygenase-1,HO-1）mRNA和蛋白表达情况;ELISA检测IL-1β和IL-8的产生.同时采用RNA干扰HO-1表达后,观察对Pa诱导IL-1β和IL-8产生的影响.结果 Pa感染NCI-H292细胞后,IL-1β和IL-8含量分别为（87.52±7.96）pg/mL和（205.63 ±34.25） pg/mL,50 μg/mL姜黄素孵育8h后,其含量分别降至（15.78±10.74）pg/mL和（49.82±14.28）pg/mL,处理前后差异有统计学意义（P＜0.05）.同时,姜黄素能在转录翻译水平分别调控HO-1 mRNA和蛋白表达,其中50 μg/mL姜黄素能将HO-1 mRNA增高19倍,蛋白表达水平提高4.8倍（P＜0.05）.HO-1 siRNA沉默HO-1表达后,与Pa组相比,IL-1β和IL-8分泌进一步增高.结论 姜黄素可能通过上调HO-1的表达而发挥对肺上皮细胞的抗炎作用.     

LPS刺激对人结肠癌SW480、肺癌A549细胞HMGB1以及HBD-1表达的影响

目的观察脂多糖（LPS）刺激对SW480、A549细胞HMGB1、HBD-1表达的影响。方法以浓度为5、10、50和100ng／μl LPS刺激SW480、A549细胞24h后,提取细胞RNA,并用RT—PCR法检测HMGB1以及HBD-1基因mRNA的表达水平。结果SW480以及A549细胞,HMGB1以及HBD-1均有较高的表达。在SW480细胞中,不同的LPS刺激浓度下,5ng／μl LPS即可上调HMGB1基因mRNA的表达,但其表达量并不随LPS浓度的增高而有所增加;而同样刺激条件下HBD-1基因mRNA表达水平未见明显变化（P〉0．05）。在A549细胞中,不同的LPS刺激浓度下HMGB1以及HBD-1基因mRNA表达量未见明显变化（P〉0．05）。结论HMGB1及HBD-1固有表达于肠道及呼吸道上皮细胞。LPS能上调SW480细胞HMGBl的表达,其表达量无浓度依赖性,但LPS不能上调HBD-1的表达。在A549细胞,LPS不能诱导HMGB1以及HBD-1的表达。     

姜黄素对小鼠肾小管上皮细胞体外再灌注损伤的保护作用及机制

目的研究姜黄素对小鼠肾小管上皮细胞体外再灌注损伤的保护作用及机制。方法采用Percoll溶液密度梯度离心法,分离并培养小鼠肾小管上皮细胞。培养的细胞分为空白对照组、缺氧再灌注组、姜黄素低剂量组(5μmol/L)及高剂量组(25μmol/L)。流式细胞仪分析细胞凋亡率;荧光定量PCR及蛋白质印迹法检测细胞内TLR4表达,蛋白质印迹法检测NF-κB p65磷酸化;荧光定量PCR检测各组细胞内IL-6、IL-1β、TNF-α和MCP-1的mRNA水平,ELISA法检测培养液上清内上述因子的含量。结果分离的肾小管上皮细胞纯度可以达到95%以上,活性高于93%。与缺氧再灌注组相比,姜黄素低剂量及高剂量组细胞凋亡率降低(P<0.01),细胞内TLR4表达降低(P<0.01),p65磷酸化受到抑制,细胞内IL-6、IL-1β、TNF-α、MCP-1的mRNA水平以及培养液上清内上述因子含量降低(P<0.05或P<0.01)。结论姜黄素对小鼠肾小管上皮细胞体外再灌注损伤具有保护作用,其机制可能与抑制细胞内TLR4表达并减轻TLR4所激发的炎性损伤有关。     

放射治疗对肺癌患者NKG2D、HMGB1及DC细胞活性的影响*

目的 分析接受放射治疗（以下简称放疗）肺癌患者在放疗不同阶段外周血细胞因子NKG2D、高迁移率蛋白1（HMGB1）的变化及与树突状细胞（DC细胞）活性的相关性。方法 选取承德医学院附属医院30例肺癌放疗患者,分别在放疗前及放疗后不同时段通过ELISA检测NKG2D、HMGB1,通过免疫磁珠法检测DC细胞。结果 HMGB1、NKG2D的浓度于放疗2?000、4?000及6?000?cGy时逐渐下降（P?<0.05）。DC细胞活性差异无统计学意义（P?<0.05）。DC细胞与HMGB1、NKG2D无相关性（r?=-0.204和0.105,P?= 0.281和0.580）。结论 放射治疗可降低肺癌患者HMGB1、NKG2D的水平,激活免疫功能,但对肺癌患者外周血中DC细胞的活性无影响,外周血中DC细胞活性与HMGB1、NKG2D无相关。     

分离、纯化及鉴定肝细胞和免疫细胞分泌的HMGB1

目的:分离纯化肝细胞HepG2与免疫细胞U937分泌的高迁移率族蛋白1(high mobility group box-1 protein,HMGB1),并加以鉴定.方法:体外培养人肝细胞HepG2与免疫细胞U937,采用400 ng/mL的脂多糖( lipopolysaccharide,LPS)刺激20 h后收集细胞...     

SIRT1对肺炎链球菌感染肺上皮细胞诱导LL-37表达的调控机制

目的研究SIRT1对肺炎链球菌感染肺上皮细胞诱导LL-37表达的调控机制。方法对细胞进行重悬,以(3~4)×10~5/mL密度在6孔板中接种A549细胞,待细胞向30%~50%满皿底面积生长时分为对照组、si-SIRT1序列(1)组、si-SIRT1序列(2)组、阴性对照siRNA(siRNA-NC)组、lipo组五组。结果 si-SIRT1序列(1)组、si-SIRT1序列(2)组的SIRT1 mRNA均显著低于对照组(P0.05),而si-SIRT1序列(2)组的SIRT1 mRNA又显著低于si-SIRT1序列(1)组(P0.05)。si-SIRT1序列(1)组、si-SIRT1序列(2)组的SIRT1/β-actin均显著低于对照组(P0.05),lipo组的SIRT1/β-actin显著高于对照组(P0.05)。SP组、si-SIRT1+SP组的BEAS-2B及A549细胞毒性均显著高于对照组(P0.05),而si-SIRT1+SP组的BEAS-2B及A549细胞毒性又均显著高于SP组(P0.05)。si-SIRT1+SP组的SIRT1 mRNA显著低于SP组(P0.05),LL-37 mRNA显著高于SP组(P0.05);SRT1720+SP组的SIRT1 mRNA显著高于SP组(P0.05),LL-37 mRNA显著低于SP组(P0.05)。结论 SIRT1对肺炎链球菌感染肺上皮细胞诱导LL-37表达起负性调节作用。