SOX7基因在胰腺癌细胞株的表达及其启动子区甲基化状态的研究

目的:检测SOX7基因在胰腺癌细胞株中的表达及其启动子区的甲基化状态,初步探讨两者之间的关系?方法:采用RT-PCR检测SOX7基因在胰腺癌细胞株BXPC-3?CFPAC-1?PANC-1和SW1990中的表达水平?重亚硫酸盐测序PCR(bisulfite sequencing PCR,BSP)和结合重亚硫酸盐的限制性内切酶法 (combined bisulfite restriction analysis,COBRA)检测启动子区域甲基化状态?采用去甲基化药物5-氮杂胞苷(5-aza-2-adeoxycytidine,5-aza-dC)处理各细胞株后,检测SOX7基因的mRNA表达和甲基化状态变化?结果:在胰腺癌细胞株BXPC-3?CFPAC-1中SOX7基因的mRNA呈阳性表达,而在PANC-1和SW1990中SOX7基因表达沉默;与BXPC-3?CFPAC-1相比,PANC-1和SW1990中SOX7基因启动子区甲基化率较高?经过去甲基化处理后,PANC-1与SW1990中SOX7启动子区的甲基化率下降,基因重新表达?结论:胰腺癌细胞株PANC-1和SW1990中的SOX7基因表达与启动子区甲基化状态有关,启动子区的高甲基化导致PANC-1? SW1990中SOX7基因的表达沉默?     

食管癌组织Ras相关区域家族1A基因启动子区甲基化检测

目的:检测食管癌和癌旁正常组织Ras相关区域家族1A(RASSF1A)基因启动子区甲基化变化.方法:采用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)检测79例食管鳞癌患者癌组织及对应的20例癌旁正常组织RASSF1A基因启动子区甲基化,并观察食管癌组织RASSF1A基因启动子区甲基化与临床病理变化的关系.结果:79例食管鳞癌组织RASSF1A基因启动子区甲基化阳性率(67%,53/79)明显高于癌旁正常组织(15%,3/20).食管癌组织中不同年龄、分化程度的RASSF1A基因启动子区甲基化阳性率差异有统计学意义(P＜0.05),而淋巴结转移与否、肿瘤分期间甲基化阳性率差异无统计学意义.20例同一个体癌组织甲基化阳性率明显高于癌旁正常组织(50%(10/20)vs 15%(3/20))(P＜0.05),仅3例同时出现甲基化,一致率为15%.结论:RASSF1A基因启动子区甲基化是食管鳞癌频发的分子事件.食管鳞癌组织RASSF1A基因甲基化明显高于癌旁正常组织,并且和年龄、分化程度有关.     

肾细胞癌RASSF1A基因启动子区甲基化状况与表达水平研究

目的 检测19例肾细胞癌患者癌组织及癌旁组织Ras相关区域家族蛋白1A(RASSF1A)基因启动子区甲基化情况并检测其mRNA表达水平,探索两者之间的联系.方法 收集肾细胞癌患者癌组织及相应癌旁组织19份,分别提取其基因组DNA,以甲基化特异性PCR(Methylation special PCR, MSP)法检测RASSF1A基因启动子区甲基化情况,并以QPCR法检测了RASSF1A基因的mRNA表达水平.结果 19例中有10例肾细胞癌患者癌组织存在高甲基化, mRNA表达水平表达降低,二者之间存在显著负相关性(r=-0.8734, P<0.01).结论 肾细胞癌中RASSF1A基因启动子区存在高甲基化,并抑制该基因的表达.     

贲门癌组织Ras相关区域家族1A基因启动子区甲基化检测

目的:探讨贲门腺癌(GCA)发生中Ras相关区域家族1A(RASSF1A)基因启动子区异常甲基化的作用.方法:采用甲基化特异性PCR法检测81例贲门腺癌及其中20例癌旁正常组织RASSF1A基因启动子区甲基化变化特征,并分析RASSF1A基因启动子区甲基化与肿瘤大体分型、分化程度、淋巴结转移、TNM分期等临床病理特征的关系.结果:GCA组织中RASSF1A基因甲基化阳性率(72%,58/81)显著高于癌旁正常组织(5%,1/20)(P＜0.05).GCA组织RASSF1A基因启动子区甲基化与肿瘤大体分型、分化程度、淋巴结转移、TNM分期等临床病理特征无关.结论:RASSF1A基因甲基化是GCA癌变过程中频发的分子事件,可能在GCA发生中起一定作用.     

宫颈癌RAS相关区域家族1A基因启动子甲基化检测及临床意义研究

目的 检测宫颈癌RAS相关区域家族1A(RASSF1A)基因启动子甲基化状态并探讨其在宫颈癌分子诊断与预后评估中的临床意义.方法 应用甲基化特异性PCR和逆转录PCR分别检测我院2008年1月-2009年1月确诊的65例宫颈癌组织和癌旁正常组织RASSF1A基因启动子甲基化状态和mRNA表达,比较两者间的差异与临床病理因素之间的关系.结果 65例宫颈癌组织中有48例检测出甲基化条带(甲基化率73.8%),mRNA表达呈抑制状态,癌旁组织中有4例检测出甲基化条带(甲基化率6.2%),mRNA表达正常;不同年龄的患者RASSF1A基因启动子甲基化率间差异无统计学意义(P＞0.05);肿瘤直径越大,RASSF1A基因启动子甲基化率越高;宫颈鳞状细胞癌、腺癌和腺鳞癌RASSF1A基因启动子甲基化率分别为82.0%、40.0%和60.0%,三者间差异有统计学意义(P＜0.05);宫颈癌RASSF1A基因启动子甲基化率随着临床分期和淋巴结转移增加而增加,甲基化率在不同国际妇产科联盟(FIGO)分期及有无淋巴结转移中的差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 RASSF1A基因启动子甲基化与宫颈癌的发病机制紧密相关,其在宫颈鳞状细胞癌中甲基化发生率明显高于腺癌,可作为宫颈癌的分子诊断和预后评估的生物标志物.     

肾癌组织中RASSF1A和BLU基因的异常甲基化

目的:观察肾癌组织中RASSF1A和BLU基因启动子甲基化状态,探讨二者在肾癌发生中的可能作用.方法:采用甲基化特异性PCR(MSP)技术检测26例肾癌组织和相应癌旁组织中RASSF1A和BLU基因启动子甲基化状态,分析二者检测结果.结果:肾癌组织中17例(65.4%)RASSF1A基因异常甲基化表达,相应癌旁组织中无RASSF1A基因异常甲基化表达;11例(42.3%)肾癌组织中BLU基因高甲基化,相应癌周组织中未发现BLU基因高甲基化.结论:肾癌组织中RASSF1A和BLU基因启动子高度甲基化,表明RASSF1A和BLU基因甲基化可能与肾癌的发生相关.     

启动子甲基化调控胰腺癌他扎罗汀诱导基因1表达的研究

目的 研究他扎罗汀诱导基因1(tazarotene-induced gene-1,TIG1)在胰腺癌中的表达情况及启动子在胰腺癌细胞中的甲基化状态。 方法 收集67组胰腺癌和对应癌旁组织,用SP法进行TIG1蛋白检查并分析TIG1在癌、癌旁组织的表达差异。培养胰腺癌细胞株PANC1、BxPC3和SW1990,提取细胞总DNA,甲基化修饰后亚硫酸盐测序PCR(BSP)分析启动子CpG岛甲基化状态;筛选细胞总RNA,用实时定量PCR(real-time PCR)依次测各细胞株、经5-杂氮-2-脱氧胞嘧啶(5-aza-dC)干预前后TIG1 mRNA的表达差异。 结果 TIG1在癌组织中的表达低于癌旁组织(P<0.05)。TIG1的表达与胰腺癌的大小、分期无相关性,但与部位存在相关性(P<0.05)。TIG1在BxPC3和SW1990细胞中存在高甲基化状态,分别为(92±2)%和(86±2)%,在PANC1细胞甲基化率为(40±2)%。TIG1甲基化的BxPC3和SW1990细胞经5-aza-dC处理后TIG1表达明显上调(P<0.05),而甲基化的PANC1细胞经同样处理后TIG1的表达变化不明显。 结论 癌组织中TIG1的表达显著低于癌旁组织。不同部位胰腺癌TIG1的表达存在差异。TIG1基因在BxPC3和SW1990胰腺癌细胞中的低表达与甲基化有关。TIG1基因甲基化可能是调控胰腺癌细胞TIG1表达的重要分子机制之一。      

食管癌组织RASSF1A的表达及其与基因启动子甲基化的关系

目的探讨RASSF1A表达及其基因启动子甲基化在食管癌发生中的作用。方法取40例食管癌患者肿瘤组织及癌旁组织,用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测RASSF1A的mRNA表达,用甲基化特异性聚合酶链反应（MSP）检测RASSF1A基因启动子的甲基化。结果 RASSF1A mRNA在食管癌组织、癌旁组织表达缺失率分别为77.5%（31/40）、2.5%（1/40）,差异有统计学意义（P〈0.05）。癌旁组织均未发现甲基化,而癌组织中甲基化率为67.5%（27/40）。所有甲基化的食管癌组织RASSF1A mRNA表达缺失。结论食管癌的发生与RASSF1A基因表达缺失有关联,而RASSF1A基因启动子区甲基化是RASSF1A基因表达缺失的原因。     

RASSF 1A基因在卵巢癌组织及腹腔冲洗液中甲基化的研究

目的:探讨卵巢癌组织和腹腔冲洗液中Ras相关区域家族1A (Ras association domain family 1A,RASSF 1A)基因启动子异常甲基化状况及其在卵巢癌诊断中的价值。方法:采用甲基化特异性PCR方法检测42例卵巢癌组织、腹腔冲洗液或腹腔积液、11例正常卵巢组织和19例良性病变卵巢组织中RASSF 1A基因启动子区甲基化状态。结果:42例卵巢癌组织中RASSF 1A基因启动子区甲基化发生率为38.1%,11例正常卵巢组织和19例良性卵巢组织中RASSF 1A基因启动子区无甲基化,差异有统计学意义(P<0.01)。临床分期Ⅲ期和Ⅳ期的卵巢癌组织中RASSF 1A基因启动子区甲基化发生率为54.2%,高于临床Ⅰ期和Ⅱ期者16.6%(P<0.05)。淋巴结阳性者癌组织中RASSF 1A基因启动子区甲基化发生率56.5%,高于淋巴结阴性者15.8%。腹腔冲洗液或腹腔积液细胞学阳性者癌组织中RASSF 1A基因启动子区甲基化发生率为74.1%,高于腹腔冲洗液或腹腔积液细胞学阴性者33.3%(P<0.01)。结论:RASSF 1A基因甲基化在卵巢癌患者中具有较高的发生率,检测卵巢癌组织和腹腔冲洗液或腹腔积液中RASSF 1A基因的甲基化状态对卵巢癌的诊断和判断预后具有一定的价值。     

膀胱癌中GDF15基因启动子区甲基化检测及逆转其甲基化状态对5637膀胱癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响

目的 检测生长分化因子15(GDF15)在膀胱癌中的甲基化状态,探讨其启动子区异常甲基化对于膀胱癌发生发展的作用.方法 应用重亚硫酸盐测序PCR(BSP)联合T-载体PCR产物(TA)克隆检测人膀胱移行细胞癌细胞系5637、HT1376、KU19-19、膀胱癌组织、癌旁组织、正常组织样品中GDF15启动子区甲基化状态,并用甲基化酶抑制剂5-Aza-2-deoxycitydine(5-Aza-dc)处理5637,观察处理前后平均甲基化率的变化情况,Western blot法检测5637处理前后蛋白表达情况,MTT法检测细胞增殖情况,划痕实验检测迁移情况,Transwell法检测侵袭能力.结果 5637、HT1376、KU19-19细胞中GDF15启动子区平均甲基化率为89.29%、10.71%、8.33%,肿瘤组织、癌旁组织及正常组织分别为86.91%、9.52%、5.95%,膀胱癌组织中 GDF15启动子区甲基化率较癌旁组织和正常组织中高,差异有统计学意义(P<0.05);5-Aza-dc可以逆转5637中GDF15的甲基化状态:与处理前相比,处理组5637细胞系GDF15蛋白表达增加,增殖、迁移、侵袭能力下降,差异有统计学意义(P<0.05).结论 膀胱癌中GDF15基因表达与甲基化状态有关,启动子区高甲基化导致基因沉默,逆转甲基化状态可以使基因蛋白表达增加,细胞增殖、迁移、侵袭能力均降低.GDF15基因甲基化异常状态有可能成为膀胱癌诊断的潜在靶点.     

喉鳞状细胞癌中RASSF1A基因启动子区甲基化及蛋白表达

目的：探讨RASSF1A基因启动子区甲基化与喉癌的关系。方法：运用甲基化特异性PCR,检测RASSF1A基因在48例喉癌组织、相对应癌旁组织及48例正常人外周血中的启动子区甲基化情况。用Western blotting方法检测喉癌组织、癌旁组织及正常人外周血中RASSF1A表达情况。结果：在48例喉癌组织、相对应的癌旁组织和48份正常人外周血中,RASSF1A基因启动子区分别有34例（70.83%）、11例（22.92%）和6例（12.50%）发生了甲基化, 喉癌组织甲基化程度明显高于癌旁组织和正常人外周血（P<0.05）。在48例喉癌组织中27例（56.25%）不能正常表达RASSF1A蛋白,而相对应癌旁组织中仅有8例（16.67%）,喉癌组织中RASSF1A蛋白的表达程度明显低于癌旁组织(P<0.01)。启动子区发生甲基化的34例喉癌组织中共有25例（73.53%）呈弱阳性,而7例未发生甲基化的喉癌组织中为1例（14.29%）,两组间比较差异具有显著性(P<0.05)。结论：RASSF1A基因启动子区甲基化与喉癌的发生有关,有望成为喉癌诊断的分子标志。     

大肠癌组织Runx3基因启动子甲基化的研究

目的:检测大肠癌患者肿瘤组织及其相应的癌旁组织中Runx3基因表达和启动子区域甲基化状态,探讨甲基转移酶抑制剂5-aza-dc对结肠癌细胞系中Runx3表达的作用。方法:将手术切除的37例大肠癌组织和对应癌旁组织提取RNA和基因组DNA,采用RT-PCR检测Runx3基因的表达,甲基化特异PCR方法(MSP)检测Runx3基因启动子区域甲基化状态,用5-aza-dC处理结肠癌细胞系后,RT-PCR方法检测Runx3基因的表达。结果:37例大肠癌和对应癌旁组织中Runx3基因表达阳性率分别为100%(37/37),2.7%(1/37)。癌组织中Runx3基因表达明显降低(P<0.01)。MSP检测发现11例(30%)大肠癌标本及1例(3%)癌旁正常组织中Runx3基因呈甲基化状态。癌组织中Runx3基因甲基化明显高于癌旁组织(P<0.05)。结肠癌细胞系HT29 5-aza-dC处理后Runx3基因表达水平增加。结论:Runx3基因启动子甲基化和Runx3基因表达在大肠癌的癌旁组织和原发癌灶间存在显著性差异,可能与结肠癌的发生发展有关。     

DNA甲基化异常对mir-615-5p在胰腺癌细胞株PANC-1中表达影响

目的:描述胰腺癌细胞株中DNA异常高甲基化对ndRNA表达抑制所起的作用.观察DNA甲基转移酶抑制剂对miR-615-5p在胰腺癌细胞株PANC-1中甲基化状态和表达的影响.方法:甲基化芯片筛选出在胰腺癌细胞株PANC-1中存在异常甲基化的miRNA.采用去甲基化药物5-氮杂胞苷(5-aza-2-adeoxycyfid...     

肺癌RASSF1A基因甲基化与cyclin D1的表达

目的探讨肺癌中RASSFIA基因甲基化与cyclinD1表达对肺癌诊断的意义及RASSF1A基因甲基化与cyclinD1表达两者之间有无相关性。方法甲基化特异性PCR检测33例肺癌及10例癌旁组织中RASSFIA基因启动子区甲基化情况;用免疫组织化学S-P法检测cyclinD1在上述组织中的表达情况。分析两者分别与患者年龄、性别、组织分型的关系及与肿瘤分化间的相关性,同时对RASSFIA基因甲基化与cyclinD1表达间的关系进行分析。结果33例肺癌中有18例（54．5％）显示RASSFIA基因已被甲基化,16例（48．5％）肺癌组织显示为cyclinD1表达阳性;而10例癌旁组织RASSFIA基因未甲基化且cyclinD1免疫组化染色显示为阴性。RASSFIA基因甲基化与年龄、性别、组织分型、分化及cyclinD1表达均无关;而cyclinDl表达与肿瘤的分化具有相关性（r=0．418,P〈0．05）,但与年龄、性别、组织分型无关（P〉0．05）。结论RASSFlA基因甲基化与cyclinD1表达在肺癌的发生中具有重要作用,且cyclinD1表达与肿瘤分化有关,检测cyclinD1表达有助于对肺癌恶性程度作出判断。     

RASSFIA基因启动子甲基化与乳腺癌相关性研究

目的:研究抑癌基因RASSF1A在乳癌组织中的表达情况及与RASSF1A基因启动子甲基化的关系。方法:运用RT-PCR方法检测40例乳癌组织和6例乳腺良性肿瘤和5例正常乳腺组织中RASSF1A的表达,运用甲基化特异PCR方法检测这些组织中RASSF1A基因启动子的甲基化情况。结果:RASSF1A基因在40例乳腺癌组织中8例(20%)存在表达缺失,差异无统计学意义(P>0.05)。但其表达量明显低于正常乳腺组织(P<0.05)。乳腺癌组织的RASSF1A基因启动子甲基化频率(65%)明显高于正常乳腺组织(20%)和乳腺良性肿瘤(17%)(P<0.05)。结论:乳腺癌组织中RASSF1A基因启动子的高甲基化是引起RASSF1A基因表达下调的重要原因,在肿瘤的发生和发展中起重要的调控作用。