外源性硫化氢通过抑制SR-A表达减少THP-1源性巨噬细胞内脂质蓄积

目的探索外源性硫化氢对THP-1源性巨噬细胞脂质蓄积的影响及机制。方法以硫氢化钠(NaHS)做为外源性硫化氢的供体,采用油红O染色结合光密度法测细胞内脂质含量,RT-PCR和Westernblot法测SR-A mRNA和蛋白表达。结果氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)显著诱导巨噬细胞内脂质蓄积和SR-A表达,而NaHS呈浓度依赖性降低ox-LDL诱导的细胞内脂质蓄积,并显著下调SR-A mRNA和蛋白水平。结论外源性硫化氢可能通过抑制SR-A表达减少ox-LDL诱导的THP-1源性巨噬细胞脂质蓄积。     

绞股蓝总皂苷调节THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇平衡的作用机制

[目的]通过体外实验研究绞股蓝总皂苷调节THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇平衡的作用机制。[方法]采用体外培养人THP-1巨噬细胞,以氧化低密度脂蛋白(Oxidized low density lipoprotein,ox-LDL)诱导THP-1巨噬细胞泡沫化为模型,用绞股蓝总皂苷进行干预。通过油红O染色观察细胞内脂质堆积情况和酶比色法定量检测细胞内总胆固醇(TC)和胆固醇酯(CE)的变化,并利用RT-PCR方法检测CD36、ABCA1、LXR-α、PPAR-α受体mRNA表达。[结果]与ox-LDL诱导组相比,绞股蓝总皂苷组(GPS组)巨噬细胞的油红O染色阳性细胞数和细胞内脂质含量均显著减少,同时CD36受体mRNA表达明显降低,而ABCA1、LXR-α、PPAR-α受体mRNA表达明显升高。[结论]绞股蓝总皂苷可抑制ox-LDL诱导的THP-1巨噬细胞泡沫化,降低细胞内脂质积累,促进细胞内的脂质向细胞外转运,有利于防止泡沫细胞的形成及动脉粥样硬化的进程。该作用可能与绞股蓝总皂苷下调巨噬细胞CD36受体表达,上调巨噬细胞ABCA1、LXR-α、PPAR-α受体表达从而减弱巨噬细胞对ox-LDL的摄取和促进...     

LncRNA H19在THP-1来源泡沫细胞脂质蓄积中的作用及机制

目的 探讨长链非编码RNA(Long non-coding RNA, LncRNA)H19在人单核细胞THP-1源巨噬细胞脂质蓄积中的作用及可能的分子机制。方法 THP-1细胞经佛波酯(PMA)和氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)孵育诱导成为泡沫细胞，构建体外动脉粥样硬化(泡沫细胞)模型。利用Lipofectamine^TM3000转染试剂，将H19小干扰RNA(siRNA)转染到THP-1细胞以沉默H19基因；油红O染色及异丙醇提取定量的方法检测细胞内脂质蓄积程度；实时荧光定量PCR检测LncRNA H19 mRNA表达水平；Western blot检测过氧化物酶体增殖激活受体(PPAR-α)蛋白表达水平。结果 油红O染色及胆固醇检测结果提示泡沫细胞模型构建成功。RT-PCR检测显示，ox-LDL诱导成功的THP-1源泡沫细胞模型中LncRNA H19 mRNA相对表达量明显增加(P<0.01),而在H19 siRNA沉默后，THP-1源泡沫细胞中脂质含量明显减少(P<0.01)。Western blot检测结果发现，ox-LDL刺激后与对照组相比，P...     

辛伐他汀对THP-1巨噬细胞胆固醇外流及ABCA1、CD36表达影响

目的研究不同剂量辛伐他汀对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的THP-1巨噬细胞胆固醇外流及ATP结合盒受体A1(ABCA1)、CD36表达的影响。方法建立ox-LDL诱导泡沫细胞模型,THP-1巨噬细胞体外培养,用辛伐他汀进行干预,用[3H]标记胆固醇,液体闪烁计数法检测胆固醇外流量,油红O染色观察细胞泡沫化程度,Western Blot、RT-PCR检测细胞内ABCA1及CD36蛋白和mRNA表达。结果辛伐他汀组较ox-LDL诱导组胆固醇外流明显增加,ABCA1受体蛋白及mRNA表达明显增加(P<0.05),同时CD36受体蛋白及mRNA表达明显下调(P<0.05)呈剂量依赖性。结论辛伐他汀可促进ox-LDL诱导的泡沫细胞胆固醇外流,抑制巨噬细胞泡沫化,该作用可能与辛伐他汀上调ABCA1及抑制CD36表达有关。     

氧化低密度脂蛋白对THP-1巨噬细胞CD36表达的影响

目的：观察氧化低密度脂蛋白（oxLDL）对THP—1巨噬细胞CD36表达和细胞胆固醇流人的影响，探讨CD36在巨噬细胞胆固醇流人中的作用？方法：用50mg／LoxLDL分别孵育THP—1巨噬细胞不同时间（0、12、24、36和48h），采用逆转录-聚合酶链式反应（RT—PCR）和Western印迹分别检测CD36 mRNA和蛋白质的表达；用油红O染色观测细胞内脂质蓄积情况；用液体闪烁计数法检测[^3H]胆固醇流人。结果：50mg／L oxLDL孵育THP-1巨噬细胞不同时间（0、12、24、36和48h），THP—1巨噬细胞CD36 mRNA及蛋白质表达上调，油红O染色可见细胞内脂滴逐渐增加，液体闪烁计数发现THP—1巨噬细胞胆固醇流人增加，分别为23．5％、27．8％、39．7％、44．1％和49．7％。结论：oxLDL可使THP-1巨噬细胞CD36表达上调，并使细胞胆固醇流人增加。     

鼠、人源巨噬细胞源性泡沫细胞模型的建立及比较

 目的 建立鼠、人源巨噬细胞源性泡沫细胞模型并比较其生物学特征。方法 体外培养鼠源RAW264.7和人源 THP-1巨噬细胞,经氧化型低密度脂蛋白（oxidized lowdensity lipoprotein,ox-LDL）刺激后,油红O染色,于荧光倒置显微镜下观察泡沫细胞形态及脂质富集情况。采用qRT-PCR技术检测ox-LDL对细胞内炎性因子表达的影响;流式细胞术检测ox-LDL对细胞凋亡的影响;酶标仪分别检测ox-LDL对细胞内脂质过氧化标志物活性氧（reactive oxygen species,ROS）和丙二醛（malondialdehyde,MDA）水平的影响;HPLC检测ox-LDL对鼠、人源巨噬细胞内催化色氨酸沿犬尿氨酸途径（kynurenine pathway,KP）分解代谢的限速酶吲哚胺2,3-双加氧化酶1（indoleamine 2,3 dioxygenase 1,IDO1）活性的影响。结果 鼠源RAW264.7和人源THP-1巨噬细胞经ox-LDL处理后,大量脂质在细胞内富集沉积,形成泡沫细胞。ox-LDL既可诱发巨噬细胞内炎性因子高表达,也会引起ROS和MDA水平显著升高,表明ox-LDL可以诱导鼠源RAW264.7和人源 THP-1巨噬细胞内炎症反应和脂质过氧化产生。ox-LDL更容易引发人源THP-1巨噬细胞的凋亡,而对鼠源RAW264.7巨噬细胞凋亡却无明显影响。ox-LDL在鼠源RAW264.7和人源 THP-1巨噬细胞中均可激活KP。结论 鼠源RAW264.7和人源THP-1巨噬细胞均可通过ox-LDL处理来建立稳定的鼠、人源巨噬细胞源性泡沫细胞模型。     

PDTC对ox-LDL诱导的THP-1巨噬细胞脂质蓄积和胆固醇流出的影响

目的研究核因子-κB(NF-κB)抑制剂二硫代氨基甲酸吡咯烷（PDTC）对THP-1巨噬细胞脂质蓄积和胆固醇流出的影响。方法 60 nmol/L PMA孵育THP-1巨噬细胞24 h后,分为3组：对照组、氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）组（100 μg/mL）和PDTC组（100 μg/mL ox-LDL+50 μmol/L PDTC）。用油红O染色观察细胞内脂质蓄积情况,高效液相色谱分析法检测细胞内胆固醇水平,用液体闪烁计数法观察细胞内胆固醇的流出。 结果 PDTC抑制ox-LDL诱导的THP-1巨噬细胞脂质蓄积,明显降低细胞内总胆固醇、游离胆固醇和胆固醇酯的含量,增加载脂蛋白A-Ⅰ(apoA-Ⅰ)介导的胆固醇流出,但对HDL介导的胆固醇流出无明显影响。结论 PDTC抑制ox-LDL诱导的THP-1巨噬细胞脂质蓄积,促进apoA-Ⅰ介导的胆固醇流出。     

高糖和氧化型低密度脂蛋白对THP-1源性巨噬细胞转化的影响

目的 探讨高糖和氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)对THP-1源性巨噬细胞转化的影响.方法 体外培养人THP-1单核细胞系,由佛波酯作用使其转化为巨噬细胞,并随机分为四组(n=6):对照组、高糖组(30 mmol/L葡萄糖)、ox-LDL组(100μg/mLox-LDL)和高糖/ox-LDL(G-ox-LDL)组(30 mmol/L葡萄糖+100 μg/mL ox-LDL).应用高效液相色谱法检测细胞内总胆固醇和胆固醇酯含量;透射电镜和油红O染色光镜观察细胞内脂质.结果 ox-LDL组和G-ox-LDL组细胞胞质内出现大量的红染颗粒或脂质空泡,总胆固醇和胆固醇酯均较对照组增加,差异有统计学意义(P<0.05);且两组胆固醇酯含量均大于总胆固醇含量的50%.对照组和高糖组细胞胞质内可见少量红染颗粒或脂质空泡,两组细胞内总胆固醇和胆固醇酯比较,差异无统计学意义(P>0.05);两组胆固醇酯含量均小于总胆固醇含量的50%.结论 ox-LDL能使THP-1源性巨噬细胞转化泡沫细胞,而高糖不能使THP-1源性巨噬细胞转化泡沫细胞.提示ox-LDL可能是THP-1源性巨噬细胞转化为泡沫细胞的必要条件.     

慢性肾功能不全患者血清及硫酸吲哚酚对巨噬细胞脂质聚集的影响

目的观察尿毒症apoE-/-小鼠主动脉根部动脉粥样硬化病变,慢性肾功能不全患者血清和尿毒症毒素硫酸吲哚酚对巨噬
细胞胆固醇转运受体的表达及胞内脂质聚集的影响。方法外科手术法建立尿毒症apoE-/-小鼠的动物模型,分别收集尿毒症
apoE-/-小鼠、假手术apoE-/-小鼠、C57BL/6J小鼠的主动脉根部,行冰冻切片油红O染色,计算动脉粥样硬化斑块相对面积。收
集慢性肾功能不全患者及肾功正常者血清,以不同浓度的慢性肾功能不全患者血清或不同浓度的硫酸吲哚酚干预巨噬细胞株
12 h,测定不同干预条件下胆固醇转运受体SR-A1、CD36、ABCA1、ABCG1、SR-B1 mRNA的表达;干预24 h后诱导泡沫细胞,
油红O染色测定不同干预条件下细胞内脂质含量。结果尿毒症apoE-/-小鼠主动脉根部动脉粥样硬化斑块面积较假手术
apoE-/-小鼠明显增大。5%的慢性肾功能不全患者血清及250 μmol/L的硫酸吲哚酚可明显诱导巨噬细胞CD36 mRNA的表达
而不影响其余胆固醇转运受体的表达,同时增加巨噬细胞内脂质的蓄积。结论慢性肾功能不全加速动脉粥样硬化的进展,机
制与慢性肾功能不全血清中蛋白结合性尿毒症毒素硫酸吲哚酚诱导巨噬细胞CD36 mRNA表达上调、促进细胞内的脂质蓄积
有助于巨噬细胞源性泡沫细胞形成有关。
     

PCSK9-siRNA对ox-LDL诱导的THP-1源性巨噬细胞凋亡中Caspase-3表达的影响

目的:研究枯草溶菌素转化酶9 (PCSK9)-siRNA对ox-LDL诱导的THP-1源性巨噬细胞凋亡中Caspase-3蛋白表达的影响.方法:用不同浓度.x-LDL处理THP-1源性巨噬细胞不同时间,Western blot检测Caspase-3蛋白表达变化.应用Li-pofectamine2000分别转染不同浓度P...     

吡格列酮对THP-1源性巨噬细胞胆固醇流出调节蛋白ABCA1,ABCG1及SR-BⅠ表达的影响

目的:探讨吡格列酮对THP-1源性巨噬细胞ATP结合盒转运蛋白A1 (ABCA1)、ATP结合盒转运蛋白G1(ABCG1)及B族Ⅰ型清道夫受体(SR-B Ⅰ)表达的影响及可能作用机制.方法:Real time PCR及Westernblot检测不同浓度吡格列酮(1,10,20,30 μmol/L)作用24 h,THP-1源性巨噬细胞ABCA1,ABCG1及SR-BⅠmRNA和蛋白的表达.使用过氧化物酶体增殖物激活型受体γ(PPARγ)特异性拮抗剂GW9662(2 μmol/L)阻断吡格列酮(10 μmol/L),24 h后检测THP-1源性巨噬细胞ABCA1,ABCG1及SR-B Ⅰ mRNA和蛋白的表达.结果:吡格列酮可浓度依赖性增高24 h THP-1源性巨噬细胞ABCA1,ABCG1及SR-BⅠ mRNA和蛋白的表达,GW9662可显著抑制吡格列酮诱导的THP-1源性巨噬细胞ABCA1,ABCG1及SR-BⅠ mRNA和蛋白表达的增高(P＜0.05).结论:吡格列酮激动PPARγ上调THP-1源性巨噬细胞胆固醇流出调节蛋白ABCA1,ABCG1及SR-BⅠ基因的表达.     

MicroRNA155通过下调清道夫受体表达抑制巨噬细胞泡沫化形成

 探讨microRNA-155(miR-155)对巨噬细胞泡沫化过程的影响及机制。【方法】 实时定量PCR检测miR-155的表达,Western Blot方法检测巨噬细胞A类清道夫受体SR-A和B型清道夫受体CD36的表达,激光共聚焦显微镜观察miR-155对THP-1结合、摄取DiI标记氧化型低密度脂蛋白(DiI-oxLDL)能力的影响。【结果】 80μg/mL的氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)时间依赖性地诱导巨噬细胞miR-155表达上调。过表达miR-155抑制SR-A和CD36的表达,同时巨噬细胞结合、摄取DiI-oxLDL的能力明显降低。而反义-miR-155则明显上调SR-A和CD36的表达,同时巨噬细胞结合、摄取DiI-oxLDL的能力明显增强。【结论】 MiR-155通过降低巨噬细胞SR-A和CD36的表达抑制巨噬泡沫细胞的形成。     

巨噬细胞中ABCA1对炎症因子的调节及其意义

目的研究在8-溴-环磷酸腺苷（8-Br-cAMP）刺激下，巨噬细胞中三磷酸腺苷结合盒转运子（ABCA1）对细胞间黏附分子-l（ICAM-1）、单核细胞化学趋向蛋白-1（MCP-1）及白介素-1β（IL-1β）的调节作用，在细胞水平证实ABCAl在动脉粥样硬化发生巾的作用机制？方法用氟波酯（PMA）刺激THP-1细胞使之转变为巨噬细胞，8-Br-cAMP（0．5mmol／L）刺激3、6、12、24h后，以荧光定量RT-PCR和Western蛋白印迹法及ELISA法检测ABCAl、ICAM-1、MCP-1及IL-1BmRNA和蛋白质表达量；用反义寡核苷酸（100nmol／L）抑制ABCAl的表达，观察Ox-LDL刺激下上述指标的改变。结果予8-Br-cAMP刺激6、12h后，巨噬细胞ABCAl、ICAM-1、MCP-1mRNA和蛋白质水平及IL-1B蛋白质水平均增高：反义寡核甘酸转染巨噬细胞，8．Br—cAMP刺激后3、6h，ABCA1、ICAM-1、MCP．1mRNA的表达降低，刺激后12，24h，ABCA1、ICAM．1、MCP-1及IL-1B蛋白质的表达水平降低。结论在8-Br-cAMP刺激下，巨噬细胞ABCA1可增加炎症因子表达，参与动脉粥样硬化的发生。     

脂肪因子chemerin促进巨噬泡沫细胞形成

目的观察脂肪因子chemerin是否调节巨噬泡沫细胞形成,以及对巨噬泡沫细胞CD36、ATP结合盒转运子A1(ATP-binding cassette transporter A1,ABCA1)表达和炎症因子释放的影响。方法 100nmol/L佛波酯(phorbolmyristate acetate,PMA)诱导THP-1单核细胞分化为巨噬细胞,随机分组,Chemerin不同浓度和作用时间下联合相同浓度(50μg/mL)氧化型低密度脂蛋白与THP-1源性巨噬细胞共孵育。油红O染色观察细胞内脂滴变化,Western blot和实时PCR检测CD36、ABCA1的mRNA和蛋白水平的表达。ELISA法检测培养液中炎症因子———肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor alpha,TNF-α)和白细胞介素10(interleukin-10,IL-10)的浓度,酶法检测细胞内胆固醇含量。结果Chemerin诱导巨噬细胞内脂滴蓄积,下调CD36和ABCA1mRNA及蛋白的表达,增加培养液中促炎因子TNF-α的释放而降低抗炎因子IL-10的释放,提高细胞内胆固醇的含量,且有浓度和时间依赖性。结论 Chemerin通过下调CD36和ABCA1基因的mRNA及蛋白的表达,诱导THP-1巨噬细胞内脂滴蓄积和泡沫细胞形成;ABCA1表达下调可能与促炎因子TNF-α释放增加和抗炎因子IL-10释放减少有关。     

THP1单核细胞分化过程中MMP9表达量的变化

目的研究单核细胞在向巨噬细胞、泡沫细胞分化过程中基质金属蛋白酶-9(MMP-9)基因和蛋白表达的变化。方法体外诱导人单核细胞系(THP-1)细胞株分化为巨噬细胞和泡沫细胞,采用荧光定量聚合酶链式反应和Western blotting分别检测单核细胞向巨噬细胞、泡沫细胞分化过程中MMP-9基因和蛋白表达的变化。结果THP-1单核细胞向巨噬细胞、泡沫细胞分化过程中MMP-9 mRNA表达量分别增加了2.03倍和3.36倍(P<0.05,P<0.01);蛋白表达分别增加了5.86倍和3.68倍(P<0.01,P<0.05)。巨噬细胞和泡沫细胞中的MMP-9 mRNA水平无明显差异(P>0.05),但泡沫细胞中蛋白表达量较巨噬细胞有显著减少(P<0.05)。结论经体外诱导分化成的巨噬细胞和泡沫细胞中MMP-9 mRNA、蛋白水平与单核细胞比较呈显著增加,但单核细胞分化为泡沫细胞后其蛋白表达量呈显著下降。     

不对称二甲基精氨酸对THP-1源性巨噬细胞表达MIF和分泌TNF-α、IL-8的影响(英文)

目的观察不对称二甲基精氨酸(ADMA)对THP-1源性巨噬细胞表达巨噬细胞移动抑制因子(MIF)和分泌TNF-α、IL-8的影响。方法用PMA诱导单核细胞THP-1分化为巨噬细胞。将分化后的THP-1源性巨噬细胞用不同浓度的ADMA作用24 h后,分别采用RT-PCR、Western blot和ELISA方法检测MIF mRNA和蛋白表达水平及培养上清中TNF-α与IL-8的含量。结果 ADMA剂量依赖性的上调了THP-1源性巨噬细胞内MIF mRNA和蛋白表达,15μmol/L ADMA对MIFmRNA和蛋白表达的上调作用最明显。随着ADMA浓度增加,THP-1源性巨噬细胞培养上清中TNF-α和IL-8的水平逐渐升高,在15μmol/LADMA作用时达到峰值。结论 ADMA能够上调巨噬细胞内MIF的表达,促进TNF-α和IL-8的分泌。