PCSK9-siRNA对ox-LDL诱导的THP-1源性巨噬细胞凋亡中Caspase-3表达的影响

目的:研究枯草溶菌素转化酶9 (PCSK9)-siRNA对ox-LDL诱导的THP-1源性巨噬细胞凋亡中Caspase-3蛋白表达的影响.方法:用不同浓度.x-LDL处理THP-1源性巨噬细胞不同时间,Western blot检测Caspase-3蛋白表达变化.应用Li-pofectamine2000分别转染不同浓度P...     

辛伐他汀对THP-1巨噬细胞胆固醇外流及ABCA1、CD36表达影响

目的研究不同剂量辛伐他汀对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的THP-1巨噬细胞胆固醇外流及ATP结合盒受体A1(ABCA1)、CD36表达的影响。方法建立ox-LDL诱导泡沫细胞模型,THP-1巨噬细胞体外培养,用辛伐他汀进行干预,用[3H]标记胆固醇,液体闪烁计数法检测胆固醇外流量,油红O染色观察细胞泡沫化程度,Western Blot、RT-PCR检测细胞内ABCA1及CD36蛋白和mRNA表达。结果辛伐他汀组较ox-LDL诱导组胆固醇外流明显增加,ABCA1受体蛋白及mRNA表达明显增加(P<0.05),同时CD36受体蛋白及mRNA表达明显下调(P<0.05)呈剂量依赖性。结论辛伐他汀可促进ox-LDL诱导的泡沫细胞胆固醇外流,抑制巨噬细胞泡沫化,该作用可能与辛伐他汀上调ABCA1及抑制CD36表达有关。     

PCSK9抑制剂对动脉粥样硬化性脑梗死患者血脂水平影响的临床研究

目的 观察前蛋白转化酶枯草溶菌素9 (PCSK9)抑制剂对动脉粥样硬化性脑梗死（ASCI）患者血脂水平及预后的影响。方法 将2021年1月至2021年12月于湖北孝感市中心医院收治的100例符合纳入标准的ASCI患者随机分为对照组和试验组,每组各50例。对照组予以阿托伐他汀钙片治疗,试验组予以阿托伐他汀钙片+PCSK9抑制剂（瑞百安）治疗,药物干预周期为6个月。比较两组受试者用药前后血清PCSK9浓度、血脂水平、同型半胱氨酸（Hcy）及颈动脉内中膜厚度（IMT）等卒中危险因素,分析血清PCSK9水平与ASCI常见危险因素的相关性。结果 PCSK9抑制剂在阿托伐他汀钙片治疗的基础上可以显著降低ASCI患者血清PCSK9水平和血清低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）水平（P<0.05）;与对照组相比,试验组IMT显著降低（P<0.05）;试验组血清PCSK9水平与血清LDL-C显著相关。结论 PCSK9抑制剂作为新型降脂药物在阿托伐他汀钙片治疗的基础上可以降低受试者的LDL-C水平,改善患者的预后,降低动脉硬化性脑梗死的发生率。     

老年慢性心力衰竭患者血清TRPC1和PCSK9的表达及临床意义

目的 探讨老年慢性心力衰竭患者血清瞬时受体电位通道1(TRPC1)和前蛋白转化酶枯草溶菌素9(PCSK9)的表达及临床意义。方法 选取2020年10月至2022年6月期间诊治的老年慢性心力衰竭患者共计80例为观察组,另选取同期健康体检者共计50例为对照组。对比观察组与对照组以及不同心功能分级患者各项生化指标水平,并分析各生化指标之间的相关性,采用多因素logistic回归分析老年慢性心力衰竭患者死亡的危险因素。比较未发生不良心血管事件组和发生不良心血管事件组患者血清TRPC1、PCSK9水平。结果 观察组血清TRPC1、PCSK9、脑钠肽N端前体蛋白、左心室舒张末期内径均高于对照组,左心室射血分数低于对照组(P<0.05)。心功能Ⅳ级患者血清TRPC1、PCSK9、脑钠肽N端前体蛋白、左心室舒张末期内径均高于心功能Ⅲ级和心功能Ⅱ级患者,且心功能Ⅲ级患者各项指标高于心功能Ⅱ级患者(P<0.05),心功能Ⅳ级患者左心室射血分数低于心功能Ⅲ级和心功能Ⅱ级患者,且心功能Ⅲ级患者低于心功能Ⅱ级患者(P<0.05)。老年慢性心力衰竭患者血清TRPC1和PCSK9与脑钠肽N端前体蛋...     

氧化低密度脂蛋白对THP-1巨噬细胞CD36表达的影响

目的：观察氧化低密度脂蛋白（oxLDL）对THP—1巨噬细胞CD36表达和细胞胆固醇流人的影响，探讨CD36在巨噬细胞胆固醇流人中的作用？方法：用50mg／LoxLDL分别孵育THP—1巨噬细胞不同时间（0、12、24、36和48h），采用逆转录-聚合酶链式反应（RT—PCR）和Western印迹分别检测CD36 mRNA和蛋白质的表达；用油红O染色观测细胞内脂质蓄积情况；用液体闪烁计数法检测[^3H]胆固醇流人。结果：50mg／L oxLDL孵育THP-1巨噬细胞不同时间（0、12、24、36和48h），THP—1巨噬细胞CD36 mRNA及蛋白质表达上调，油红O染色可见细胞内脂滴逐渐增加，液体闪烁计数发现THP—1巨噬细胞胆固醇流人增加，分别为23．5％、27．8％、39．7％、44．1％和49．7％。结论：oxLDL可使THP-1巨噬细胞CD36表达上调，并使细胞胆固醇流人增加。     

抑制PCSK9对人主动脉内皮细胞钙化的保护作用

目的 探讨抑制前蛋白转化酶枯草溶菌素9(PCSK9)对地塞米松联合L-抗坏血酸和β甘油磷酸诱导的入主动脉内皮细胞(HAEC)钙化的影响.方法 使用不同浓度(0、10、30、50 mmol/L)β甘油磷酸+50 μg/ml L-抗坏血酸+ 100 nmol/L地塞米松刺激HAEC,筛选出诱导细胞钙化的最佳浓度,并验证HA...     

体检人群血清PCSK9与代谢综合征的相关性分析

目的：探讨体检人群中前蛋白转化酶枯草溶菌素9（proprotein convertase subtilisin/kexin 9,PCSK9）水平与代谢综合征（metabolism syndrome,MS）及其影响因素的相关性。方法：以南京医科大学第一附属医院1 442例体检人群为研究对象进行横断面研究,对入选者进行问卷调查、体格检查及代谢相关指标测定,用酶联免疫吸附实验（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）方法检测血清样本PCSK9水平,并统计分析PCSK9水平与代谢综合征及其组分的相关性。结果：代谢综合征组的年龄、男性比例、体重指数（body mass index,BMI）、收缩压（systolic blood pressure,SBP）、舒张压（diastolic blood pressure,DBP）、空腹血糖（fasting blood glucose,FBG）、甘油三酯（triglyceride,TG）、总胆固醇（total cholesterol,TC）、低密度脂蛋白胆固醇（low?density lipoprotein cholesterol,LDL?C）、尿酸（uric acid,UA）、PCSK9明显高于健康对照组,高密度脂蛋白胆固醇（high?density lipoprotein cholesterol,HDL?C）明显低于健康对照组（P < 0.05）。随着MS异常组分数目的增加,血清PCSK9水平逐渐升高（P趋势<0.05）。多因素Logistic回归分析结果显示,年龄、BMI、SBP、FBG、TG、TC、LDL?C、HDL?C是MS的危险因素,PCSK9与MS无明显相关性。结论：PCSK9与MS及多种代谢指标存在相关性,但受多种混杂因素影响,并不能证实PCSK9是MS的独立危险因子。     

PCSK9与动脉粥样硬化的研究进展

动脉粥样硬化是一种累及动脉壁的炎症性疾病,其主要特征是脂质和炎症细胞在大动脉内膜下聚积.前蛋白转化酶枯草溶菌素9(PCSK9)抑制剂目前是临床上常用的降血脂药之一,虽然临床试验已证实PCSK9是降低血脂和预防及治疗动脉粥样硬化进展的生物靶点,但其生理作用尚未被完全阐明.目前多项证据表明,PCSK9可以通过调控脂蛋白代谢...     

PPARγ反义寡核苷酸对THP-1巨噬细胞CD36表达的影响

目的观察过氧化体增殖物激活型受体1（PPARγ）反义寡核苷酸对THP-1巨噬细胞CD36表达及细胞胆固醇流入的影响,探讨PPAR7的作用及机制。方法用50mg／L氧化型低密度脂蛋白（OX—LDL）分别与不同浓度PPARγ的反义寡核苷酸（400nmol／L）、错义寡核苷酸（400nmol／L）或15μmol／LPPARγ激动剂ciglita-zone共同孵育THP—l巨噬细胞24h后,采用逆转录-聚合酶链反应和Western印迹分析分别检测CD36的表达,采用液体闪烁计数法检测[3H]胆固醇流入。,结果与OX—LDL组比较,PPARγ反义寡核苷酸下调巨噬细胞CD36的表达,且细胞胆固醇流入率下降（OX—LDL组为28．1％、反义寡核苷酸组为22．5％）。而ciglitazone则使巨噬细胞CD36的表达上调,胆固醇流入率明显增加（36．8％）。结论抑制PPARγ表达,可抑制THP-1巨噬细胞CD36的表达,并减少细胞胆固醇流入。     

高脂饮食诱导ApoE/CD36/SR-A三敲除小鼠肾脏损害及其机制

目的 探讨低密度脂蛋白受体相关蛋白(low density lipoprotein receptor-related protein ,LRP1)、清道夫受体CD36、SR-A在脂质诱导肾脏损伤中的作用.方法 雄性ApoE/CD36/SR-A三敲除小鼠12只,按随机数字表法分为普通组和高脂组.检测血清淀粉样蛋白(serum amyloid A protein,SAA),IL-6、脂质水平及尿蛋白.油红"O"染色及酶法检测肾组织内脂质沉积情况.HE、过碘酸-希夫(periodic acid Schiff reaction,PAS)、马松(Masson)方法 观察肾脏形态学改变,定量PCR技术,Western blot与免疫组化技术检测肾组织相关因子水平.结果 高脂组脂质水平[TC(51.96±5.60)、LDL(16 79±4.80)mmol/L]显著高于普通组[TC(18.11±3.07)、LDL(3.27±1.79) mmol/L](P<0.05).肾脏脂质的沉积明显升高,高脂组尿蛋白[(2.90±0.50)mg/ml]显著高于普通组[(1.85±0.18)mg/ml] (P<0.05),肾脏病理改变显著,进一步检测发现高脂组上调了LRP1(增高2.23倍)、肾脏Ⅰ型胶原蛋白、转化生长因子(TGF-β)、纤维连接蛋白(Fibronectin)mRNA与蛋白的表达.结论 LRP1可能参与肾脏泡沫细胞的形成及肾脏的损伤,SR-A,CD36不能解释泡沫细胞形成的全部机制.     

动脉粥样硬化与VCAM-1及CD36关系的实验研究

目的:探讨动脉粥样硬化(AS)时血脂成分与VCAM-1及CD36蛋白在兔AS发生中的作用及其机制。方法:采用HE、免疫组化染色,光镜观察AS病变,并应用CMIAS真彩色医学图像分析系统,检测40只食饵性AS新西兰兔,15周处死,观察其血脂成分及血管壁的病理变化、VCAM-1及CD36蛋白的表达情况。结果:实验兔最终血TC升高约43倍,最终血LDL升高约37倍。主动脉内壁可见脂质条纹形成。检测主动脉AS病变VCAM-1、CD36蛋白表达定量A值,分别为:0.19±0.02、0.20±0.04,显著高于对照组:0.07±0.01、0.03±0.02的定量表达(P<0.05)。结论:明确了高血脂症是AS发病的基础,提示VCAM-1及CD36蛋白表达增多可能是致AS的机制之一。     

Vaspin对巨噬细胞THP-1向泡沫细胞转变的抑制作用

目的 腹腔脂肪型丝氨酸蛋白酶抑制剂(visceral adipose tissue-derived serine protease inhibitor, vaspin)是新发现的脂肪因子,对代谢性疾病具有改善作用。该研究旨在研究vaspin对体外培养的THP-1细胞泡沫化的影响。方法 100nM佛波酯孵育THP-1巨噬细胞48h后分为对照组,氧化低密度脂蛋白组(ox-LDL浓度50μg/ml,48h),vaspin干预组(vaspin终浓度100ng/ml,预孵24h);采用油红0染色法检测vaspin对THP-1细胞泡沫化的影响;Real-time PCR和Western blot法检测vaspin对THP-1细胞中酰基辅酶A胆固醇酰基转移酶-1(acy1-coenzyme A:cholesterol acyltrasferase-1,ACAT-1)、ATP结合盒转运体A1(ATP binding casstte transporterA1,ABCA1)及细胞清道夫受体-A1(scavenger receptor-A1, SR-A1)mRNA及蛋白表达水平的影响。结果 与ox-LDL组比较,ox-LDL+vaspin组巨噬细胞泡沫化程度明显下降(P＜0.05);ox-LDL+vaspin组ACAT-1和SR-A1 mRNA及蛋白表达水平明显降低(P＜0.05),而ABCA1 mRNA及蛋白表达水平明显升高(P＜0.05)。结论 vaspin能够抑制巨噬细胞向泡沫细胞的转化,发挥抗动脉粥样硬化(atherosclerosis, As)的作用。     

血凝素样氧化低密度脂蛋白受体1对THP-1单核巨噬细胞源泡沫细胞MMP-9表达的影响及辛伐他汀的干预作用

目的 探讨血凝素样氧化低密度脂蛋白受体1（LOX-1）对氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）诱导的THP-1单核/巨噬细胞源泡沫细胞(THP-1 monocyte derived macrophages)基质金属蛋白酶-9（MMP-9）基因表达的影响及辛伐他汀的干预作用。 方法 利用不同浓度的ox-LDL（10、20、50、100?mg/L）诱导THP-1单核/巨噬细胞源泡沫细胞,然后分别用LOX-1受体阻断剂多聚肌苷酸（ Poly I）及辛伐他汀（simvastatin）进行干预,逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）技术检测LOX-1、MMP-9mRNA的表达水平。 结果 THP-1单核/巨噬细胞经ox-LDL诱导后LOX-1、MMP 9mRNA表达显著增加,与对照组比较差异具有统计学意义（P<0.05）,并与ox-LDL在10～50?mg/L浓度范围内呈现剂量-效应关系（P<0．05）。100?mg/L　ox LDL与细胞共同培养时LOX-1、MMP-9mRNA表达下降可能与高浓度ox LDL对细胞的毒性作用有关。预先用Poly I封闭细胞表面部分LOX-1,再加入50mg/L　ox-LDL培养, 与未加阻断剂组比较, LOX-1、MMP 9mRNA表达均减少,差异具有统计学意义（P<0.05）。100μmol/L辛伐他汀加入50mg/L ox LDL共同进行细胞培养, LOX-1、MMP-9mRNA表达与未干预组比较显著下调,差异具有统计学意义（P<0.05）。结论 ox-LDL上调THP-1单核/巨噬细胞LOX-1、MMP-9mRNA表达。LOX-1作为ox-LDL的特异性受体,可介导ox-LDL致巨噬细胞源泡沫细胞MMP-9mRNA表达增加,使动脉粥样硬化斑块中细胞外基质的降解增强,斑块趋于不稳定。辛伐他汀可以通过下调细胞LOX-1 mRNA的表达减少MMP-9 mRNA的分泌,这或许是他汀类药物发挥非调脂抗炎作用稳定斑块的机制之一。     

罗格列酮对2型糖尿病患者外周血单核细胞CD36表达的影响

目的:观察2型糖尿病患者外周血单核细胞CD36的表达及罗格列酮对其表达的影响,探讨其可能的作用机制。方法:采用流式细胞仪测定2型糖尿病患者外周血单核细胞CD36的表达,并观察罗格列酮治疗后的变化;分析CD36与2型糖尿病各临床指标间的关系。结果:2型糖尿病组患者单核细胞CD36表达明显高于正常对照组(745.9±281.3 vs 406.3±80.2,P<0.01);动脉粥样硬化组CD36表达明显高于无动脉粥样硬化组(878.2±296.1 vs 584.2±148.3,P<0.01)。罗格列酮治疗后,患者单核细胞CD36表达、空腹血糖(FBG)、餐后血糖(PBG)、HbA1c、空腹胰岛素(FIN)、餐后胰岛素(PIN)、胰岛素抵抗程度(HOMA-IR)均降低,与治疗前、安慰剂组均有统计学差异(P<0.05或P<0.01)。糖尿病患者单核细胞CD36表达与FBG(r=0.55,P<0.05)、HbA1c(r=0.62,P<0.01)、HOMA-IR(r=0.64,P<0.01)正相关,与PBG、FIN、PIN无明显相关。结论:罗格列酮可能通过有效控制血糖、降低胰岛素抵抗等途径来降低2型糖尿病患者外周血单核细胞CD36的表达。     

CD36基因缺失通过上调PTP1B基因表达降低小鼠肌肉胰岛素敏感性

目的 探讨在正常饮食状态下,CD36基因缺失对小鼠肌肉胰岛素信号通路的影响及作用机制。方法 野生型小鼠（WT）和CD36基因敲除小鼠（CD36-/-）给予正常饮食喂养14周（n=12）。小鼠禁食4 h,腹腔注射胰岛素（1 U/kg）进行胰岛素耐量实验。Real-time PCR检测小鼠肌肉胰岛素受体(IR)、胰岛素受体底物1/2（IRS1/2）、蛋白酪氨酸磷酸酶1B（PTP1B）基因表达。Western blot检测小鼠肌肉蛋白激酶B(AKT)、IR、IRS1/2和PTP1B的蛋白表达。免疫共沉淀（Co-IP）检测肌肉IR和IRS1的酪氨酸磷酸化程度。染色质免疫共沉淀（ChIP）技术检测肌肉PTP1B启动子组蛋白乙酰化水平。结果 在正常饮食状态下,与WT小鼠相比,CD36-/-小鼠的胰岛素耐量显著增强（P<0.05）,血清胰岛素浓度升高（P<0.01）,胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)升高（P<0.05）。在肌肉组织中,CD36-/-小鼠与WT小鼠相比,p-AKT/AKT蛋白表达比值显著降低（P<0.01）。Real-time PCR和Western blot结果表明,肌肉组织IR,IRS1,IRS2的mRNA和蛋白水平在WT和CD36-/-小鼠间无显著差异（P>0.05）。Co-IP实验显示IR和IRS1的酪氨酸磷酸化水平在CD36-/-小鼠中显著降低（P<0.05）。CD36-/-小鼠肌肉中PTP1B mRNA和蛋白表达均高于WT小鼠（P<0.05）,ChIP实验显示PTP1B基因启动子的组蛋白乙酰化水平显著升高（P<0.01）。腹腔注射PTP1B的抑制剂可改善CD36-/-小鼠的胰岛素敏感性。结论 在正常饮食条件下,CD36基因对于维持生理肌肉胰岛素敏感性十分重要,小鼠CD36基因缺失通过上调PTP1B基因表达,诱导IR、IRS1去酪氨酸磷酸化而使肌肉胰岛素信号传导受损。     

结核分枝杆菌感染对THP-1细胞CD14表达的影响

目的:探讨结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)感染THP-1细胞后对细胞表面白细胞分化抗原14(CD14)表达的影响.方法:Mtb以10:1感染佛波醇酯(PMA)分化的THP-1细胞,建立Mtb感染THP-1细胞的模型.采用流式细胞术检测THP-1细胞、PMA分化的THP-1细胞及Mtb感染THP-1细胞CD14的表达.结果:THP-1细胞和PMA分化的THP-1细胞表面表达CD14的阳性率分别为5.5%和21.6%,对Mtb的吞噬率分别为7.7%和93.0%;Mtb感染的THP-1细胞表面表达CD14的阳性率为27.5%.结论:PMA分化后的THP-1细胞表面CD14的表达增加,Mtb感染后CD14的表达进一步增加,对Mtb的吞噬率增加.     

siRNA沉默PCSK6基因对胶原诱导性关节炎的影响

目的 探讨siRNA沉默PCSK6基因对胶原诱导性关节炎(CIA)成纤维样滑膜细胞(FLS)生物学行为的影响。方法 采用牛Ⅱ型胶原诱导大鼠CIA模型,取膝关节滑膜组织原代培养FLS;采用人工合成的siRNA oligo-433干扰剂、siRNA oligo-688干扰剂、siRNA oligo-2506干扰剂特异性抑制PCSK6在CIA FLS中的表达,阴性siRNA为阴性对照组,瞬时转染24、36 h后,采用RT-qPCR法检测抑制效率,同时检测PCSK6基因沉默后各相关基因的表达;采用MTT、Transwell、细胞划痕、流式细胞术、ELISA等方法检测干扰PCSK6表达后对细胞增殖、侵袭、迁移、细胞周期和相关炎性因子分泌的影响。结果 转染特异性siRNA-PCSK6后,各干扰组与阴性对照组相比,siRNA oligo-2506干扰剂转染24 h时,PCSK6 mRNA水平抑制效果显著(P<0.001),CIA FLS的增殖受到抑制(P<0.001),细胞的侵袭和迁移能力下降(P<0.001),肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)分泌降低(P<0.001),G₀/G₁期的细胞数目增多(P<0.05),PCSK6下游基因CXCL9、MMP2、MMP9、NOSTRIN、HIF-1α、MPZL2、IGF2、PADI4表达均明显下降(P<0.05)。结论 PCSK6基因沉默对CIA FLS的生物学行为具有一定作用,为进一步研究CIA发病机制奠定基础。